标准曲线的绘制(精)

《畜产品检测技术》技能实训指导书
实训项目名称标准曲线的绘制学时4学时
实训目的1.熟练掌握标准曲线的测定与绘制方法。

2.了解绘制标准曲线的原理和注意事项。

一、标准品吸光度值的测定
分别吸取0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL亚硝酸钠标准使用液（相当于0.0μg 、1.0μg、2.0μg、3.0μg、4.0μg、5.0μg、7.5μg、10.0μg、12.5μg 亚硝酸钠），置于50mL带塞比色管中。

分别加入2mL 4g/L 对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3min~5min后各加入1mL 2g/L 盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15min，用1cm比色皿，以零管调节零点，于波长538nm 处测吸光度，并记录吸光度。

二、标准曲线的绘制
以亚硝酸盐标准溶液的浓度C为标准曲线的横坐标(X)，以不同浓度亚硝酸盐标准溶液对应测得的吸光度值A为标准曲线的纵坐标(Y)，按回归方程式计算结果绘制标准曲线。

或当标准溶液的浓度(X)取值为C1、C2、……C n时，对应分光光度计测得的吸光度值分别为A1、A2……Yn。

将这些测量点描绘在坐标系中，用直尺绘出一条表示X与Y之间的直线线性关系，这就是常标准曲线。

用作绘制标准曲线的标准物质，它的含量范围应包括试祥中被测物质的含量，标准曲线不能任意延长。

用作绘制标准曲线的绘图纸的横坐标和纵坐标的标度以及实验点的大小均不能太大或太小，应能近似地反映测量的精度。

图1 亚硝酸盐测定标准曲线的绘制
三、绘制标准曲线的注意事项
1.设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。

2.最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。

3.检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。

4.标准曲线的标准品数为9个点，但至少要保证有5个点。

5.做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.99，甚至是0.999。