第二节石蜡切片制作

❖ 配制方法： ❖ 1.将铝化钾或硫酸铝钾溶于蒸馏水中（加热
至40~45℃）； ❖ 2.将苏木精溶于无水乙醇中，再加入冰乙酸、
温热的铝化钾或硫酸铝钾溶液，最后加入甘 油； ❖ 3.配置完成后，置于温热和阳光充足处，成 熟3个月，即可使用。
伊红溶液的配制
❖ 1.伊红酒精溶液的配制： ❖ 伊红Y（0.5-1.0g）+95%无水乙醇（100ml），
以稍长（注意：70%以上的酒精要回收利用）。
❖ 脱水之后，将组织块放入100%的酒精+二甲苯溶液 （1：1）再放入二甲苯溶液直到组织块透明为止， 透明需要半小时到一小时左右。
第四步：浸蜡包埋
❖ 由二甲苯透明的组织块经过二甲苯+石蜡 后，即可进入纯蜡中，一般浸蜡在温箱 中进行，温度稍高于石蜡的温度，蜡质 由于冬夏的温度不同而进行选择。
过滤。混合即可使用。
❖ 2.伊红水溶液的配制： ❖ 伊红Y（0.5-1.0g）+100ml蒸馏水，溶解至溶
液中无伊红沉淀，过滤即可使用。
0.5%~1%盐酸酒精溶液的配制
❖ 浓盐酸（0.5~1ml）+70%~90%酒精溶液 100ml，混合均匀即可。
❖ 注意事项：因为浓盐酸对皮肤具有强烈的腐 蚀作用及对呼吸道具有刺激作用，因此在配 置的过程中一定要注意自身的安全。
整个石蜡切片的完成过程
各种药品的配制及器材准备
❖染色液的配制
❖固定液的配制
❖梯度酒精的配制
❖采样器材的准备
染色液的配制
❖ Ehrlich氏苏木精 ❖ 苏木精：2g; ❖ 无水乙醇：100ml； ❖ 冰醋酸：10ml； ❖ 铝化钾或硫酸铝钾：10g； ❖ 蒸馏水：100ml； ❖ 甘油：100ml。
❖ 注意：熔蜡及浸蜡温度保持在65℃左右。 ❖ 经过浸蜡之后的组织，必须包埋好才能
切片。
第六步：切片
❖ 切片之前必须修整好蜡块，并且固定在木块 之上，再将四周多余的残蜡用刀片削去，否 则不易于切片和展片。
❖ 切片使用旋转切片机时，应固定好木块；调 整好切片刀与蜡块的距离与角度，一般刀的 倾斜度为4-6度；根据切片的厚度不同调节厚
度标志器，在操作的பைடு நூலகம்程中还应注意自身 的安全。
石蜡块的固着与整修
❖ 在包埋以后，就可进行切片。包埋好的石蜡块装上 切片机进行切片前还须进行固着和整修。
❖ 固着：一般旋转式切片机上都附有可固着石蜡块的 金属小盘，这也可用同样大小的台木替代。用加热 的蜡铲将包埋块粘贴于固着物上，并使组织块朝外， 便于以后迅速切出所需的片子。整修：用加热的蜡 铲或刀片将固着的包埋块四周修平，使上下两面修 成平行面，常保留组织周围附着宽2～3mm的石蜡， 而修好的蜡块呈长方形。还可削去一角以便于在蜡 带上识别切片。
❖ 方法是：右手转动转轮，左手持毛笔在刀口稍下端 接隹切好的片子，并托住切下的蜡带，待蜡带形成 一定长度后，右手停止转动，持另一枝毛笔轻轻将 蜡带挑起，平放于衬有黑纸的纸盒内，注意切片速 度不宜太快，摇动转轮用力应均匀，防止切片机震 动厉害引起切片厚薄不均匀，还应注意转动的方向， 以防标本台后移而切不到片子。切片完毕，应及时 用氯仿将切片机的有关部分擦净。
实验室切片机结构
切片机和切片刀
❖ 切片机是用来作各种组织切片的一种专门设计的精 密机械，常用的是旋转式切片机，它的夹物部分是 上下移动前后推进的，而夹刀部分则固定不动。主 要部件是安装切片刀的刀台、安装包埋块的标本台 和控制切片厚度的微动装置。切片时切片刀固定不 动，转动转轮，标本台上下运动并按调好的切片厚 度向前推进一定的距离，组织块上下运动一次，便 在刀片上得到一张合乎厚度要求的切片。
的刀剪，不可用钝刀，更
不可用力压、揉、挤等，
以免损坏组织。
第二步：固定
无论何种器官、组织，要制成切片，首先需要固定。目 的在于保存组织原有的形态，同时使之易于染色。固定要求：
1：能迅速使蛋白质变性，使细胞维持原来的形态，既 不收缩又不变形。
2：固定剂必须也是保存剂，使组织在其中不易腐烂。 3：固定剂应有较强的通透能力，以保证组织块的内部
固定液的配置
❖ 10%福尔马林（甲醛）溶液：100ml甲醛溶液+900ml蒸馏水 。
❖ 10%缓冲中性福尔马林（甲醛）溶液：100ml甲醛溶液 +900ml蒸馏水+4g磷酸二氢钠+6.5g磷酸氢二钠。
❖ 10%中性福尔马林（甲醛）溶液：100ml甲醛+900ml水+碳 酸钙加至饱和充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。
也能被及时的固定。 4：固定后的组织应软硬适宜，便于切片。 5:固定后的组织应容易被染料着色。 ！注意:不同固定剂固定时间不一样。具体问题具体分
析。
第三步：冲洗、脱水、透明。
❖ 冲洗的目的在于弃去组织中过剩的固定剂，以免固 定剂沉淀于组织之中影响切片的质量。
❖ 脱水的过程就是用梯度酒精逐步取代水的过程，组 织脱水一般由70%——80%——90%—— 95%——100%梯度酒精完成。在95%的时间可
切片方法
❖ 切片前，选择刀口平整无缺刻的部分来进行切削。 将所要切的包埋块固定在标本台上，使包埋块外切 面与标本夹截面平行，并让包埋块稍露出一截。将 刀台推至外缘后松开刀片夹的螺旋，上好刀片，使 切片刀平面与组织切面间呈15°左右的夹角，包埋 块上下边与刀口平行。在微动装置上调节切片要求 的厚度，调节时应注意指针不可在两个刻度之间， 否则容易损伤切片机，将刀台移至近标本台处，让 刀口与组织切面稍稍接触，这时就可以开始切片了。
❖ 仪器：石蜡切片机、恒温蜡箱、载玻片、盖 玻片、镊子、手术刀。
❖ 材料：小鼠的组织（小鼠肝脏）。
❖ 试剂：乙醚、无水乙醇、甲醛、冰醋酸、苦 味酸、、锇酸、正丁醇、二甲苯、石蜡、甘 油、中性树胶。
第一步：取材
❖ 一般根据观察目的选取动物 或人体组织，取材要迅速，
组织块不宜太大，一般 为组织学观察，取黄豆 大小为宜。取材要用锋利
❖ 4%多聚甲醛-磷酸盐缓冲液：4g多聚甲醛+100ml磷酸盐缓冲 液（适用于免疫组化学技术）。
不同浓度梯度酒精配制
梯度酒精的作用： 将组织中的水分经过梯度酒精的作用，置换出 来，以达到组织脱水的目的。
配制：例如70%的酒精配制，70ml（100%纯 酒精）+30ml蒸馏水混匀即可。
石蜡切片所需的实验器材