抗菌药物敏感性试验流程

抗菌药物敏感性试验流程

1. 目的：抗菌药物敏感性试验（药敏试验）的主要目的是检出细菌的耐药性，预测抗菌药物的临床治疗效果，并为临床医生针对某一特定的临床感染问题选用药物提供依据。

2. 适用范围

微生物实验室所有标本，环境。

3. 职责范围

微生物实验室各工作人员。

4. 药敏试验的一般规则

4.1 对任何感染的可疑病原菌，若不能从该菌的种属特征可靠地推知其对抗菌药物的敏感性，就需要进行药敏试验。如果感染是由公认的对某一高效药物敏感的微生物引起，常规不需要进行药敏试验，见附录6[技术说明（1）]。

4.2 同一患者连续分离培养出的同一种细菌，若最初药敏试验显示为敏感株，随后临床出现可疑的耐药表现，需重复进行药敏试验，见附录6 [技术说明（2）]。

4.3 进行细菌耐药性调查和抗生素疗效评估时需进行药敏试验。

4.4 除临床急症细菌学检查标本，并经直接涂片染色证实为单一致病菌外，一般不主张用临床标本直接做药敏试验。直接标本做药敏试验后，必须按标准方法重做一次。

4.5 当感染的性质不清楚、标本内含数种混合生长的细菌或正常菌群，而且这些细菌与感染的关系很小时，通常不必做药敏试验。

5. 常规药敏试验药物选择原则

5.1 选择适合的药物进行药敏试验一般应由临床微生物检验医师与感染科医师、药剂科、医院药事委员会和医院感染委员会成员共同协商作出决定。在选择抗菌药物时应考虑以下因素：

5.1.1 一般情况下，药敏试验所选用的抗菌药物应包含于本单位的处方手册中。

5.1.2 临床微生物实验室所服务的医疗机构的类型、规模及患者的构成不同，其所分离细菌的耐药谱不同，药敏试验的药物选择不同。

5.1.3 菌种类型不同，药敏试验的药物选择不同。

5.2 我国目前主要依照美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）/临床实验室标准化研究所（CLSI）所制定的药敏试验执行标准作为选药指南（见附录1～2）。该指南针对每一菌群所推荐的药物都具有确切的临床疗效，其体外试验结果也可以接受。在附录1～2表内小格中的列出个小框中列出的一群类似药物，由于它们的解释结果和临床效力都很相似，因此不必每个都进行试验。另外，用“或”字表示的一群相关的药物，其抗菌谱和结果解释几乎完全相同，其交叉耐药性和交叉敏感性也几乎完全相同。因此，通常每个小框(组或相关的群)中只选择一种药物进行试验。

5.3 NCCLS文件每年都有补充和更新，为了保证药敏试验的正确性和对临床的指导性，进行药敏试验时应依照最新版本（本规范中提供的是2005年修订的第十五版）。

6. 药敏试验方法

6.1 纸片扩散法

6.1.1 抗菌药物纸片：一般应购买合格的商品化的药敏纸片进行试验，药敏纸片的贮存见附录6[技术说明（3）]。

6.1.2 琼脂培养基非苛养菌的常规药敏试验使用MH（Mueller-Hinton）琼脂，其制备、贮存和使用方法见附录6[技术说明（4）]。

6.1.3 菌悬液的浊度标准使用0.5麦氏（McFarland）标准管，见附录6[技术说明（5）]。

6.1.4 纸片扩散法的操作

6.1.4.1 接种物的制备

6.1.4.1.1 生长法：从琼脂平板上选取至少3～5个形态特征一致的菌落，用接种环接触每个菌落顶部后将细菌转移到含4～5 ml适宜的肉汤培养管（如胰酶消化大豆肉汤）中，将此肉汤培养物置35℃孵育至其浊度等于或超过0.5麦氏标准（通常需2～6小时）。用无菌盐水或肉汤将旺盛生长的肉汤培养基的浊度调整到相当于0.5麦氏标准，细菌数约为1～2×108 CFU/ ml。

6.1.4.1.2 直接菌悬液法：从孵育18～24h的非选择性培养基（如血琼脂）平板上，挑取单个菌落，直接用肉汤或盐水制成悬液作为接种物，然后将浊度调整至0.5麦氏标准。此法是检测苛养菌（如嗜血杆菌属、淋病奈瑟菌和链球菌）和潜在的对甲氧西林耐药的葡萄球菌的推荐方法，见附录6[技术说明（6）]。

6.1.4.2 接种

应在菌悬液制备后15分钟内接种MH琼脂平板。用无菌棉拭蘸取菌液，在管内壁液面上方旋转紧压，将多余菌液挤去，然后在琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度以确保接种菌的均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。

6.1.4.3 贴药敏纸片

接种好的平板可敞开盖子倒置在室温下干燥3～5min，在15min之内用纸片分配器或无菌镊子将纸片贴于琼脂表面并轻压，使纸片与琼脂表面完全接触。各纸片中心相距应大于24mm，通常直径150 mm平板至多贴12个纸片，直径90～100 mm平板至多贴6-7个纸片。某些药物在纸片贴于琼脂平板后几乎立即扩散，一旦纸片贴上后就不能再移动，若要重新放置，可用一个新的纸片贴在平板的另一位置。

6.1.4.4 孵育：纸片贴好后，15min内将平板倒置放入35℃孵箱（苛养菌药敏平板应放置于5％CO2环境中）16～18h后读取结果，见附录6[技术说明（7）]。葡萄球菌和肠球菌必须孵育整24h以检测对苯唑西林和万古霉素的耐药性。

6.1.4.5 结果判读：抑菌圈呈透明圆环状，菌苔生长的平面应该是均匀连续的，如出现明显的单个菌落生长说明接种菌的浓度太低，应重新进行试验。抑菌圈的直径（包含纸片的直径），以毫米数报告（取整数），见附录6[技术说明（8）]。

对某些细菌抑菌圈的判读有特殊要求

6.1.4.5.1 检测苯唑西林和万古霉素对葡萄球菌或肠球菌的抑菌圈需要用透射光（将平板对着光线）。抑菌圈的边缘应不见细菌的明显生长，若只有用放大镜才可发现的微弱生长的细小菌落则可以忽略。）检测葡萄球菌或肠球菌时，在苯唑西林纸片（葡萄球菌）或万古霉素纸片（肠球菌）周围的抑菌圈内有任何可辨的菌落或生长薄膜（包括针尖样菌落）则提示耐药。

6.1.4.5.2 对其他细菌，若在清楚的抑菌圈内有独立的菌落生长，则提示可能接种的菌种不