纯度鉴定

茶叶多糖纯度鉴定及结构分析的研究进展

1茶叶多糖的纯度鉴定和相对分子量的测定

1．1茶叶多糖的纯度鉴定

多糖类复合物等生物大分子的理化性质、生物活性与其相对分子质量有很大关系，因此，在多糖类复合物的研究及其产品质量控制中，相对分子质量是一个重要指标。要测定多糖类复合物的相对分子质量，首先要求鉴定其纯度，但是与小分子化合物的判断标准不同，茶叶多糖是高分子化合物，它的纯品实质上是一定相对分子质量范围的相对均一组分，只代表相似链长的平均分布。目前，国内外多糖类复合物纯度的鉴定方法主要有：比旋度法、超离心法、电泳法和凝胶色谱法。一般来说，纯度必须经过两种方法以上鉴定，结果才能肯定。

这几种方法的主要应用如表1所示。

在大多数文献中，茶叶多糖的纯度鉴定一般都是采用高效凝胶液相色谱和示差检测器检测的方法。也有利用茶叶多糖蛋白在280 nm处有吸收，通过紫外检测器来检测茶叶多糖的纯度。

红毛菜多糖的分离纯化及纯度鉴定

2.4 纯度鉴定

2.4.1 紫外光谱鉴定

将洗脱的多糖用Du640蛋白核酸分析仪（美国贝克曼库尔特公司）在190-450nm范围的测定其紫外光谱

2.4.2 多糖的纸色谱

在滤纸上距底端1cm处以PY1 PY21的水溶液点样，展开剂为正丁醇、浓氨水、水的混合物40 ：50：5 混合后放置2小时以上。室温展开6 小时取出后吹干置于碘蒸汽中吸附约14 小时后观察其结果

2.4.3 红外光谱测定

将过柱后的糖旋转蒸干后取1-2mg用KBr压片用Nicolet A V ATAR FT-IR360型红外光谱仪测定红外光谱。

3 结果与讨论

3.3 纯度的鉴定

3.3.1 紫外光谱

洗脱后组分的紫外光谱如图3 4所示PY1和PY2只有在190nm有最大吸收在280nm吸收很小说明蛋白质的含量很少且没有别的杂峰说明杂质含量较少。

从PY1 PY2 的红外光谱图如图 5 6 可以看

出在3400 2800cm-1、1400 1200cm-1处有多糖的特征性吸收峰存在此外还有一些特殊基团吸收峰1076cm- 1和930cm-1处的峰提示3,6 内醚桥的存在表明此多糖中含有3, 6 内醚半乳糖1234cm- 1处的吸收峰表明该多糖含有硫酸基且并无杂峰存在说明都是单一

组分

荔枝多糖分离纯化及纯度鉴定

荔枝多糖纯度鉴定：经sephadex G-25层析柱分级纯化后用以下3种方法分别对A2组分的多糖进行纯度鉴定

聚丙烯酰胺凝胶柱P-100鉴定:柱参数：柱体积：直径0.4cm*100cm;柱床体积:直径0.4*60cm;平衡流速:0.1ml\min,洗脱液为0.2mol\L 氯化钠溶液与醋酸的混合液.从其洗脱图谱

图(3)可知,为一个单峰,说明A2具有较高纯度.

聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定:缓冲液pH=8.9的为硼砂-KOH缓冲液显色剂80%为硫酸和20%乙醇混合液对A2进行电泳，电泳时间3h,结果如图4所示为单一色斑,说明所得多糖A2为纯品

醋酸纤维薄膜电泳鉴定:缓冲液为pH=9.2的硼砂-KOH缓冲液显色剂为碘-氯仿,电泳时间为1h电泳后的色带为一斑点,说明所得多糖A2为单一成分.

乳酸菌胞外多糖的研究

2．3 EPs的纯度鉴定

多糖的纯度只代表相似链长的多糖分子的平均分布。通常所谓的多糖纯品实际上是一定分子量范围的多糖的均一组分。目前常用于多糖纯度鉴定的方法有凝胶层析法、高压电泳法、超速离心法、旋光测定法和毛细管电泳法等。多糖纯度鉴定中应用最多的是凝胶层析法。凝胶层析得到一对称洗脱峰，则证明该多糖是均一组分，它的优点是准确度高。高压电泳法电泳结果显色后，如皇单一色斑，则表示该活性多糖为均一组分。高压电泳法鉴定多糖纯度早期用的较多，现在大多不再使用，原因是灵敏度不高。超速离心法是将多糖溶液进行密度梯度离心，待转速达到60 000r\min以上后，问隔照相，如得到的结果是单一峰，则证明该活性多糖为均一组分。旋光鉴定法利用不同分子量的多糖在不同浓度低级醇中溶解度差别进行的，如果在不同浓度低级醇中得到的多糖的比旋光度相同，则证明多糖为均～组分.

天然植物多糖及复合多糖的研究进展

2．2植物多糖的纯度鉴定

多糖的纯度与普通化合物的纯度标准不同，因为即便是多糖纯度品，其微观也并非均一的，仅代表相似链长的多糖分子的平均分布。通常所渭的多糖纯品也只是一定相对分子量范围的均一组分．目前纯度鉴定的常用方法有：比旋度法、超离心法、色谱法、高压电泳法、凝胶过滤法等．杨娟等将水提醇沉后脱完蛋白的粗多糖，经DEAE一纤维素柱及纤维素凝胶柱层析分离纯化后得到三个级分，经聚丙烯酰胺凝胶电泳和Sepharose CL一6B柱层析鉴定为分子量分布均一的鬣白多糖．杨晓彤等瞄将香菇藩丝体热求没提、乙醇沉淀，在经DEAE 一纾维素柱及Sepharose G一100柱层析纯化后，经醋酸纤维薄膜电泳和HPLC检测得均一

成分多糖．

制何首乌多糖的纯度鉴定和理化性质研究

2．1 制首乌多糖PRPM—l，PRPM-2和PRPM-3的纯度鉴定笔者从制何首乌中用水提醇沉法提取得到制何首乌粗多糖，经精制后得到制何首乌多糖各亚组分PRPM一1；PRPM-2和PRPM-3的干燥粉末，为了确定纯度，进行以下研究。目前常用于多糖纯度鉴定的方法有：凝胶过滤法、高压电泳法、超离心法、旋光测定法、毛细管电泳法和高效液相色谱(HPLC)法等。要确定某一多糖的均一性，通常必须采用2种以上的鉴定方法。本实验采用凝胶过滤法和紫外光谱检测法鉴定其纯度。

2．1．1 紫外光谱检测法鉴定纯度将多糖各亚组分PRPM一1，PRPM．2，PRPM．3配成1 ms／ml的水溶液在紫外分光光度计200～400 nm波长处扫描。结果见下图。

由图1～图3紫外光谱图可见，PRPMB一1，PRPMB-2，PRPMB-3在280nm和260nm 处基本无吸收，表明它不含蛋白、多肽及核酸。

2．1．2凝胶柱SephadexG．100鉴定将溶胀好的Sephadex G．100装柱，用蒸馏水平衡一夜。称取经过纤维素和凝胶柱层析纯化后的多糖亚组分M-l，PRPM-2，PRPM-3适量分别配制成多糖水溶液，上样，上样量为柱体积的2％一3％。以蒸馏水溶液洗脱，洗脱液流速为0．4 ml／min，每4 ml收集1管，采用苯酚-硫酸法在490 nm处测定吸光度，以试管号为横坐标，吸光度为纵坐标，分别绘制洗脱曲线，结果见图。

PRPM—l，PRPM-2，PRPM一3经葡聚糖凝胶G一100柱层析，洗脱曲线均呈单一对称峰形，结合其紫外扫描图，可证明各多糖亚组分为均一多糖。

香菇多糖的分离纯化方法研究进展

3 香菇多糖的纯度鉴定

对纯化后的香菇多糖进行纯度鉴定可以采用: 凝胶柱层析法: 根据多糖分子量范围, 选择所用凝胶型, 通过检测洗脱液是否存在单一对称峰来判断; 聚丙烯酰胺电泳法: 多糖纯度鉴定较为直观, 纯多糖为单一带, 则为纯多糖; 高效液相色谱法; 超离心法; 比旋度法; 醋酸纤维薄膜电泳[ 8]。

缪建等人用比旋度法和Se pha r ose 4B 柱层析进行纯度鉴定, 将分离得到的2 种多糖分别用水溶解, 加乙醇至醇体积分数为40% 析出沉淀, 继续加乙醇至醇体积分数为7 0% 时析出沉淀, 将2 次沉淀干燥后测定其相同条件下水溶液的比旋度, 如比旋度相同, 证明该多糖为均一组分。结果显示: 多糖组分Le n1- A、Le n2- A 溶于水后分别在乙醇体积分数为30% 、 6 0% 的溶液中沉淀, 将两次沉淀干燥后测定其相同条件下水溶液的