花粉活力染色液(TTC法)
花粉生活力测定
解决办法：通过多媒体结合案例讲解后学生动手操作，教师指导。
教学方法及手段
演示、学做
教学准备
多媒体课件、植物花粉、载玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、干燥器、TTC
教学过程及内容
讲解花粉生活力测定的原理和方法
实际操作蔗糖琼脂培养法和染色法
教学过程
教师活动
学生活动
教案设计说明
（2）发芽床的设置和播撒花粉：在盖玻片上滴一滴培养基，用棉耳棒蘸上花粉少许，均匀撒于培养基表面，但应防止花粉埋入培养基中而影响花粉发芽。播撒花粉后，要在显微镜下检查花粉是否分布均匀，再将载玻片置入用湿纱布或湿滤纸垫底以保湿的大培养皿中，盖上皿盖。在各载玻片上贴上标签，注明花粉种类、采集时间、蔗糖浓度、播粉时间和操作者，然后置于25～28℃的温箱中。
时间分配
教学内容
讲解实训原理演示实训过程，布置实训任务
观看多媒体
结合实训过程讲解
20min
教学内容
指导实训
蔗糖琼脂培养法
学生练习思考
90min
教学内容
指导实训
染色法
学生练习思考
45min
教学内容
检查实训内容的掌握
记录实训结果完成实训报告
25min
教学反思
湖北生物科技职业学院教案附页
一、花粉生活力测定的意义
②试液的配制
Ⅰ.磷酸盐缓冲液。在100ml的蒸馏水中，溶解0.832g的Na2HPO4·2H2O和0.273g的KH2PO4，调整pH值为7.17。
Ⅱ.TTC溶液。称取0.02～0.05g的TTC，溶解在10ml的磷酸盐缓冲溶液中，放入棕色滴瓶内，置于暗处。TTC为有毒性物质，操作时应注意安全。
花粉活力测定
TTC法[2,4]又称氯化三苯基四氮唑染色法(2 3, 5一triphenyl tetrazoliun chloride)。
氯化三苯基四氮唑即红四氮唑,作为非萌发分析花粉生话力的方法,速度快也比较精确地反映花粉的活力红四氮唑是标准的氧化还原色素,水溶液无色,遇到活细胞里的脱氢酶接受氯离子,还原后变红生成不溶于水的三苯甲赝,呈红色。
I-IK染色测定法：此法常用于鉴定不含淀粉的不育花粉,凡染成蓝紫色的为发育好、活力强的花粉,呈黄褐色的为发育不良的花粉。
过氧化物酶测定法具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶,此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色,依据颜色可知花粉的活性强弱。
过氧化物酶测定法
具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶,此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色,依据颜色可知花粉的活性强弱［13］。
醋酸洋红法测定花粉活力[14]
取少量花粉置于载玻片上,然后滴加1滴1%的醋酸洋红溶液。
室温下静置5 min观察。
统计染成红色的花粉粒所占比率。
[13]赵鸿杰，乔龙巴图，殷爱华等．3种山茶属植物花粉活力测定方法的比较（Ｎ）．中南林业科技大学学报．2010，30（3）．
[14] 盖伟玲，盖树鹏，郑国生．牡丹新鲜花粉活力的快速测定(J)．育苗科技Seedling Cultivation．2011(5)。
花粉TTC染色试验方法
花粉TTC染色试验方法花粉TTC染色试验方法通过花粉活力的测定，可以了解花粉的可育性，并掌握不育花粉的形态和生理特征。
在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力鉴定。
掌握花粉活力的快速测定方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
Ⅰ、碘-碘化钾染色法多数植物正常花粉呈规则形状，如圆球形或椭球形、多面体等，并积累淀粉较多，通常I2-KI 可将其染成蓝色。
发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，用I2-KI染色，往往呈现黄褐色。
因此，可用I2-KI溶液染色法测定花粉活力。
一、仪器、药品与材料（一）实验材料各种着生花芽的植物枝条，花芽要充分发育并已含苞待放。
（二）仪器与用品显微镜，恒温箱，镊子，载玻片，盖玻片。
（三）试剂I2-KI溶液：取2 g KI 溶于5~10 mL蒸馏水中，然后加入1 g I2，待全部溶解后，再加蒸馏水定容至300 mL。
贮于棕色瓶中备用。
二、实验步骤1．花粉采集：取充分成熟将要开花的花蕾，剥除花被片等，取出花药。
2．镜检：取一花药置于载玻片上，加1 滴蒸馏水，用镊子将花药充分捣碎，使花粉粒释放，再加1~2 滴I2- KI溶液，盖上盖玻片，于低倍显微镜下观察。
凡被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。
观察2~3 张装片，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。
注：此法不能准确表示花粉的活力，也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响。
因为核期退化的花粉已有淀粉积累，遇I2-KI呈蓝色反应。
另外，含有淀粉而被杀死的花粒遇I2-KI 也呈蓝色。
Ⅱ、氯化三苯基四氮唑法（TTC法）TTC（2，3，5－三苯基氯化四氮唑）的氧化态是无色的，可被氢还原成不溶性的红色三苯甲潛（TTF）。
用TTC的水溶液浸泡花粉，使之渗入花粉内，如果花粉具有生命力，其中的脱氢酶就可以将TTC 作为受氢体使之还原成为红色的TTF；如果花粉死亡便不能染色；花粉生命力衰退或部分丧失生活力则染色较浅或局部被染色。
花粉生活力测定方法研究进展
花粉生活力测定方法研究进展摘要：总结了花粉活力测定的染色法、离体萌发法以及田间授粉法等的原理和应用并分析了各种方法的优缺点。
关键词：花粉花粉活力测定方法花粉是高等植物的雄性配子体，在有性繁殖过程中起到传递雄性亲本的遗传信息。
花粉不仅是植物遗传、育种、进化、生殖的重要研究对象，也是孢粉分析、蜂群培育、药物制造、医疗及生理实验的重要材料。
花粉活力是花粉具有生长、萌发、或发育的能力。
在农业生产及农业常规杂交育种的中，研究花粉的生活力和育性是不可缺少的基础性工作。
农业生产和育种工作通常会遇到花期不一致带来的困难，为解决这一难题，保存花粉的活力成为重要手段，而在贮藏花粉之前必须先检测花粉的活力。
不同种类植物花粉的自然寿命、适宜的贮藏方式及花粉活力适宜的测定方法不同。
因此，掌握花粉活力的检测方法对提高育种效率有较高的作用和意义。
综合前人的研究结果，花粉生活力的检测方法可以分为四大类：①染色法；②萌发测定法；③田间授粉检测法；④形态测定法、无机酸检测法。
1染色法1.1TTC染色法TTC即2,3,5-氯代三苯基四氮唑，它是一种氧化还原染料，水溶液无色。
基本原理是[1]：当TTC渗入细胞后，遇到活细胞里的脱氢酶接受氢离子，由无色的氧化型变成红色还原型不溶于水的化合物，由此来判断花粉的生活力。
具体操作步骤：①配制PH为7.17的磷酸缓冲液。
称取0.832克磷酸氢二钠和0.273克的磷酸二氢钾溶于100ml的蒸馏水中，调整pH为7.17。
②TTC溶液配制。
依据不同植物称取0.02～1.0g的TTC溶于100ml的磷酸缓冲液中，于棕色瓶中黑暗处保存。
③染色。
取少量花粉置于载玻片上，加上一滴TTC溶液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，然后放置于35℃的恒温箱中染色15～20min。
④镜检。
于10×10倍镜下观察，凡具有活力的花粉被染成红色，部分丧失活力的呈现粉红色，无色的是的或不育的花粉粒。
凌春英,肖恩等的研究[2]得出常温、黑暗条件下用TTC染色12h可达到较好的观察效果，并认为TTC法是大花蕙兰和墨兰花粉活力测定便捷、有效的方法。
ttc比色法
TTC（Triphenyltetrazolium chloride）比色法是一种常用的细菌活性检测方法，用于评估细菌的代谢活力。
TTC是一种化学试剂，它能够被还原为可溶于有机溶剂的有色产物。
细菌的代谢活力会导致TTC的还原，形成红色的产物，因此可以通过观察产物的颜色深浅来判断细菌的活性。
以下是使用TTC比色法的基本步骤：步骤：1.培养细菌：在适当的培养基上培养待测细菌，确保细菌处于对应的生长阶段。
2.制备TTC溶液：准备TTC溶液，通常是1% TTC的生理盐水溶液。
这个溶液是无色的。
3.混合TTC溶液和细菌悬液：取一定量的待测细菌悬液，与TTC溶液混合均匀。
4.孵育：将混合溶液在适当的条件下孵育一段时间，通常是几小时。
5.观察颜色变化：活性细菌将TTC还原为有色产物，通常是红色的。
通过颜色的深浅可以初步判断细菌的代谢活力，活性细菌产生的颜色较深。
6.停止反应：可以加入适当的溶剂或停止液，停止TTC的还原反应。
7.测定吸光度：可以将混合液离心分离，取上清液，测定其吸光度。
吸光度的值与产生的有色产物的浓度相关，可用于更精确的活性测定。
注意事项：•控制对照组：通常需要设置对照组，例如一个未加入TTC的对照组，以便比较活性细菌和无活性细菌之间的颜色变化。
•温度和时间：反应的温度和时间是影响TTC比色法结果的关键因素，需要根据具体实验要求进行调整。
•使用无菌技术：在操作过程中要保持无菌，以防止其他微生物的干扰。
TTC比色法适用于不同类型的细菌，特别是对于肠道菌属于革兰氏阴性菌的检测。
这种方法被广泛应用于食品工业、环境监测和临床实验室等领域。
2实验二、花粉生活力测定
前 言
花粉生活力测定在育种 力 2．雄性不育系的鉴定
实验目的：
学习并初步掌握作物花粉生 活力测定的常用方法
测定方法:
（一）I-KI染色鉴定
（二）TTC染色鉴定
（三）花粉粒发芽鉴定
实验方法 I-KI染色鉴定：
正常的成熟花粉粒体积较大， 并含有大量的淀粉粒，遇I-KI 呈紫黑色，不正常的花粉粒体 系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。
实验方法 TTC染色鉴定：
具有生活力的花粉中含有 脱氢酶，它能催化引物使脱下 的氢与TTC结合，生成红色化 合物甲替。凡有生活力的花粉 呈红色，生活力弱的呈浅红色， 无生活力的不显色或成黄色。
实验方法
花粉粒发芽鉴定：
在人工培养基上进 行发芽试验，可以比较 准确地判断花粉的生活 力。
实验步骤
I-KI染色鉴定：
2 ．准备 TTC 染色和发芽试验的材料， 置培养箱保温； 3．调试显微镜，I-KI染色鉴定； 4．TTC染色鉴定、发芽率调查。
作业
实验三、作物花粉生活力测定 1．测定方法和原理： （一）I-KI染色鉴定：正常的成熟花粉粒体积较大，并含有大量的淀粉 粒，遇I-KI呈紫黑色，不正常的花粉粒体系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。 （二）TTC染色鉴定：具有生活力的花粉中含有脱氢酶，它能催化底物 使脱下的氢与TTC（氯化三苯基四氮唑）结合，生成红色化合物甲替。 凡有生活力的花粉呈红色，生活力弱的呈浅红色，无生活力的不显色或 成黄色。 （三）花粉粒发芽鉴定：在人工培养基上进行发芽试验，可以比较准确 地判断花粉的生活力。 2．实验结果： 材料 I-IK染色率% TTC染色率% 发芽率%
用镊子夹一个花药于载玻片 上滴上一滴1%I-KI溶液 用镊子将花药夹碎并把碎片 去干净盖上盖玻片置显微 镜下观察。
花粉生活力
（一）直接检验法
（二）染色鉴定法（TTC法） （三）发芽测定法（培养基培养法） （四）形态鉴定法
二、实验原理：
所以，可根据花粉染不染成红色来
2、3、5-氯化三苯基四氮唑(TTC)
判断花粉有无生命力，从而测定花 的氧化状态是无色的，被氢还原时
粉生活力。
成红色的TTF。
三苯基四唑有毒，操作时要注意安全。
3．用具：显微镜、载玻片、盖玻片等。
四、操作步骤： （1）取少量花粉放在载玻片上，并在花粉上 滴上1～2滴配制液，用解剖针混合后盖上 盖玻片。 （2）置 35 ℃恒温箱中,20～25min 后镜检。 （3）在显微镜（10×10）下观察：凡具有 生活力的花粉呈红色，部分丧失生活力的 呈淡红色，无色的是死的和不育的花粉粒。
TTC+H＋＝TTF
三、试材及用具
1．Байду номын сангаас料：2种不同处理油菜花粉；
2．试剂：配制好的0.2％TTC染液；
1）磷酸缓冲液（100ml）， PH值为7.17
0.832克 磷酸氢二钠
0.273克
磷酸二氢钾，
2）TTC溶液：称取0.2gTTC溶解在100ml的磷
酸缓冲液中，溶液配好后装入棕色滴瓶内。氯化
油菜花粉生活力测定
蒲至恩
1．外地采集来的花粉或杂交时父本花期早
于母本时都要将花粉进行短暂贮藏；
2．自交或远缘杂交时，为了分析结实率或
不结实原因时；
3．为了鉴定雄性不育系时；
4．了解某些杂交技术时，如测定花粉的刺
激等作用，测定受精选择性等。
一、实验目的：
学习花粉生活力测定的方法，学习如
何判断花粉生活力的有无，进而探索
ttc法根系活力标准曲线
ttc法根系活力标准曲线
ttc法（氯化三苯基四氮唑法）是一种测定植物根系活力的方法。
标准曲线是实验中用于计算根系活力的基础，它通过测定不同浓度的ttc 溶液与植物根系的还原反应，得出一个标准曲线，从而推算出植物根系的活力。
以下是ttc法根系活力标准曲线的一个示例：
1. 配制不同浓度的ttc溶液，如0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%等。
2. 取植物根系样品，分别放入不同浓度的TTC溶液中，保持在适当的温度和光照条件下。
3. 经过一定时间后（如1小时），取出根系样品，用滤纸吸干表面水分。
4. 测定根系样品在485nm波长下的吸光度，记录下各浓度点的吸光度值。
5. 将吸光度值与ttc浓度绘制在坐标轴上，得到标准曲线。
总结，通过绘制标准曲线，可以找出植物根系活力与ttc浓度之间的关系，从而更准确地计算植物根系的活力。
在实际操作中，可以根据实验需要适当调整ttc溶液的浓度范围和实验时间。
拟南芥花粉活力的测定及其在花粉发育研究中的应用
植物学通报Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ Ｂｏｔａｎｙ ２００８， ２５ （３）： ２６８−２７５， ｗｗｗ．ｃｈｉｎｂｕｌｌｂｏｔａｎｙ．ｃｏｍ收稿日期： ２００７－０３－２２； 接受日期： ２００７－０５－１０基金项目： 国家自然科学基金（Ｎｏ．３０５７０９９３）和河北省科技攻关计划项目（Ｎｏ．２００５１１１）＊ 通讯作者。
Ｅ－ｍａｉｌ： ｐｙｙｃｅｌｌ＠１６３．ｃｏｍ．综述．拟南芥花粉活力的测定及其在花粉发育研究中的应用孙春丽， 潘延云＊河北农业大学生命科学学院， 保定０７１０００摘要 花粉发育是植物生活周期中一个重要且复杂的过程， 需要多种基因的参与。
花粉发育是否完善可以根据花粉形态特征， 并通过检测花粉的生活力、萌发力、可育性和受精能力等生理特征来判断。
以拟南芥候选基因突变体为材料， 通过对花粉的这些生理特征的检测， 可以初步推测候选基因参与花粉发育的功能和作用机制。
本文介绍了用于花粉活力测定的几种技术的原理和方法， 以及应用这些方法进行花粉发育研究的进展。
关键词 拟南芥， 花粉， 研究方法孙春丽， 潘延云 （２００８）． 拟南芥花粉活力的测定及其在花粉发育研究中的应用． 植物学通报 ２５， ２６８−２７５．花粉作为植物的雄配子体， 在有性生殖中发挥着重要作用。
花粉发育及花粉管的萌发和生长是植物有性生殖过程中的重要事件， 也是研究植物细胞极性生长、分化以及信号转导的重要体系（Ｓｐｉｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．， １９９７；Ｔｗｅｌｌ， ２００２）。
拟南芥基因组测序工作完成后， 人们推测花粉表达的基因有数万个， 花粉组织特异的基因也有数千个， 占基因总数的１０％（Ｂｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００３； Ｈｏｎｙｓａｎｄ Ｔｗｅｌｌ， ２００３）。
花粉发育相关基因的功能研究迅速展开（Ｃａｒｙｌ ｅｔ ａｌ．， ２００３）。
目前， 通过Ｔ－ＤＮＡ转座插入序列和ＥＭＳ诱变得到的突变体库已超过９０万种， 为研究提供了大量的材料（Ｒｅｌｓｅｒ ａｎｄ Ｆｉｓｃｈｅｒ， １９９３；Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ ＭｃＣｏｒｍｉｃｋ， ２００１）， 使我们可以运用反向遗传学的方法研究基因的功能。
卵叶海桑花粉活力测定方法的比较研究
卵叶海桑花粉活力测定方法的比较研究任飞艳，陈 显，王士泉(热带岛屿生态学教育部重点实验室，海南省热带动植物生态学重点实验室,海南师范大学生命科学学院,海口 571158)摘 要：为探讨适合快速检测卵叶海桑花粉活力的方法，采用TTC 染色法、MTT 染色法、亚历山大染色法、I-KI 染色法、红墨水染色法和离体萌发法对卵叶海桑花粉活力进行了测定。
结果表明，卵叶海桑的花粉活力较高，不同方法测定 的花粉活力平均值为83.2%〜89.5% (TTC 染色法除外)。
红墨水染色法与离体萌发法的结果，在1%水平上差异极 显著。
MTT 染色法、亚历山大染色法、I-KI 染色法与萌发法的结果差异都不显著。
亚历山大染色法和I-KI 染色法能快速、准确地测定卵叶海桑的花粉活力，是判断花粉活力的简便方法，为进行传粉、繁育系统研究和杂交育种提供了理论 依据。
关键词：卵叶海桑；花粉活力；测定方法DOI ：10.16590/ki. 1001-4 705.302 1.03.035中图分类号：S 722.+ 9 文献标志码：A文章编号：1001-4705(2021)03-0035-05Comparative Study on the Determination Methods of PollenViability of Sonneratia ovataREN Feiyan , CHEN Xian , WANG Shiquan(Ministry of Education Key laboratory for Ecology of Tropical Islands?Key laboratory ofTropical Animal and Plant. Ecology of Hainan Province ,College of Life Sciences ,Hainan Normal University? Haikou 5711 58 ,China)Abstract ： In order to explore the suitable method for rapid detection of pollen viability of Sonneratiaovata , TTC staining , MTT staining , Alexander staining , I 2-KI staining , red ink staining and in vit.rogermination method were used to determine the pollen viability of S . ovata . The results showed that,the pollen viability of S . ovata was higher , and the average pollen viability measured by different,methods ranged from 83.22% to 89.35% (except. TTC staining method). The results of red ink stai ning and in vit.ro germination were extremely significant, at 1 % level , while the results of MTT stai ning ,Alexander staining , I -KI staining and germination method were not. significantly different.Alexander staining and I 2-KI staining could quickly and accurately determine the pollen viability of S . ovata ,whichboth weresimplemethodtodeterminethepo l enviability ,anditcouldprovideatheo-reticalbasisforthestudyofpo l ination ,breedingandcrossbreeding.Key words : Sonneratia ovata Backer ； pollen viability ； determination methods卵叶海桑(Sonneratia ovata Backer)隶属于海桑 科海桑属，生长于热带、亚热带海岸潮间带，主要分布 于泰国、越南、马来西亚、印度尼西亚以及巴布亚新几内亚等地［-3］。
种子活力染色液(TTC法)
种子活力染色液(TTC 法)简介：种子生活力(简称种子活力)是指种子能够萌发得潜在能力或种胚具有的生命力。
种子生活力得高低决定了种子品质和实用价值大小，关系到播种时的用种量，测定种子活力常用发芽实验法，即在适宜条件下让种子吸水萌发，在规定天数内统计发芽的种子占供试种子数的百分比。
TTC 是标准氧化电位为80mV 的氧化还原色素，溶于水中形成无色溶液，还原后生成红色不溶于水的三本甲腙，该物质比较稳定，不易被氧化，所以TTC 被广泛用于酶实验的氢受体，TTC 还原量能表示脱氢酶活性，进而判断小麦、绿豆、水稻、油菜、花生等植物种子活力。
当Leagene TTC 染色液渗入种胚的细胞内，被染成红色；当种胚活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性下降，胚的颜色变化不明显；当种胚无活力时，不着色，故可以由染色的程度推知种子的生命力强弱。
组成：自备材料：1、 材料：小麦、绿豆、水稻、油菜、花生等植物种子2、 恒温箱3、 培养皿4、 单面刀片操作步骤(仅供参考)：1、配制TTC 染色液：取TTC 完全溶解于TTC stain buffer ，即为TTC 染色液。
避光保存，1个月有效。
对于花生、甜菜、大麻、向日葵、水稻、高粱、玉米及麦类作物等，可用蒸馏水稀释TTC 染色液5倍，即为0.2×TTC 染色液后使用。
不同样本染色差异见附表。
2、将待测种子用温水浸泡2-6h ，使种子充分吸胀。
3、随机取100粒吸胀种子，沿种胚中央准确切开，每粒种子的一半备用。
4、将切好的种子放在培养皿中，加入适量TTC 染色液，以浸没种子为度。
5、放入恒温箱内保温30min ，也可在室温下放置40-60min 。
编号 名称DP0201Storage试剂(A): TTC 1支 RT 试剂(B): TTC stain buffer 100mlRT 避光使用说明书1份6、保温后顷出染液，用自来水冲洗2-3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力。
番茄花粉活力测定实验设计书
番茄花粉活力测定实验设计书测定花粉生活力，通常用染色法，常用的染色剂有0.5％氯化三苯基四氮唑(TTC)，1％碘－碘化钾，1％醋酸洋红。
本实验采用0.5％氯化三苯基四氮唑为染色剂，根据着色的深浅，测定花粉的生活力。
1.材料：番茄盛开的花2.用具：分析天平、托盘天平、载玻片、盖玻片、烧杯、镊子、电炉、石棉网、玻棒、试剂瓶(含棕色瓶)、标签、量筒、冰箱、干燥器、玻璃杯(直径1cm、高0.5cm)。
凹玻片、指形管。
3.番茄花粉发芽最适宜的蔗糖浓度约为8%4.花粉的采集与贮藏4.1花粉的采集在授粉前1－2天，对父本花进行套袋，并对母本去雄处理。
4.2花粉的贮藏将收集的花粉阴干，以不粘为度，除去杂质，分别装入指形管或小瓶内(以容器的1/5为宜)，用双层纱布扎封瓶口，并在容器贴上标签，注明品种采集地点和时间，然后将容器放于（盛有无水氯化钙等吸水剂）干燥器内，置阴凉处或0-2℃冰箱内贮存，可以较长时间地保持生活力。
5.花粉生活力测定5.1原理具有生活力的花粉的脱氢酶，在催化去氢的过程中，把氢转移到其它的物质上去，使T.T.C与催化过程中产生的氢相结合，使具有生活力的花粉变红。
5.2配药A.磷酸盐缓冲液：在100毫升的蒸馏水中，溶解0.832克的磷酸氢二钠(Na2HPO4·2H2O)和0.273克的磷酸二氢钾(KH2PO4)，pH值为7.17。
B T.T.C溶液：称取0.02－0.05克的T.T.C溶液在10毫升的磷酸盐缓冲液中，溶液配好后，装入棕色滴瓶内置于暗处备用。
5.3操作步骤：A.取少量花粉放在载玻片上，并在花粉上滴上1－2滴T.T.C溶液，用镊子尖端搅拌液滴使花粉均匀散开，盖上盖玻片。
B.将此载玻片放入35－40℃的恒温箱中加热，时间大约15－20分钟。
C.在显微镜下(10×10)观察：凡具有生活力的花粉粒呈红色，部分失去生活力的呈淡红色，不染色的为死的和不育的花粉粒。
每片观察三个视野花粉粒总数，至少应在500粒左右，并统计出具有生活力的花粉百分率，填入下表：6.花粉发芽试验6.1培养基的配制盛100ml蒸馏水的烧杯中加入1克琼脂，蔗糖(因园艺植物种类而异)，然后加热煮沸使其充分溶解。
植物根系活力的测定（ttc法）
实验概要植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水平。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
实验原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲瓒，生成的三苯甲瓒比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
主要试剂1.乙酸乙酯（分析纯）。
2. 次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。
3. 1％TTC溶液准确称取TTC1.0g，溶于少量水中，定容到100ml。
用时稀释至各需要的浓度。
4. 磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。
5. 1mol/L硫酸用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。
6. 0.4mol/L琥珀酸称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。
主要设备1. 分光光度计；2. 分析天平（感量0.1mg）；3. 电子顶载天平（感量0.1g）；4. 温箱；5. 研钵；6. 三角瓶50ml；7. 漏斗；8. 量筒100ml；9. 吸量管10ml；10. 刻度试管10ml；11. 试管架；12. 容量瓶10ml；13. 药勺；14. 石英砂适量；15. 烧杯10ml、1000ml。
实验材料水培小麦根系。
实验步骤1. 定性测定1）配制反应液把1％TTC 溶液、0.4 mol／L 的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4 比例混合。
2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。
将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1～3h ，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
2% TTC染色液使用说明书
2%TTC染色液使用说明书
货号：G3005
规格：100mL/500mL
保存：2-8℃避光保存，有效期1年。
产品说明：
2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)是脂溶性光敏感复合物，常用于检测种子的生存能力以及检测哺乳动物组织的缺血梗塞。
它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，能与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色。
正常脑组织和有活力种子胚组织活细胞中的脱氢酶可以将TTC还原成不溶性的红色稳定的三苯基甲臢(TTF)，如果脑组织细胞或胚种细胞死亡或生活力衰退，则不能染色或染色较浅。
因此可以根据染色部位和染色深浅程度来鉴定脑组织或者种子的活力。
操作说明：（仅供参考）
1.按照实验设计自行制作组织模型，切片。
2.染色：取组织或者切片浸泡于TTC染液中，放入30-37℃的恒温箱内保温15min-30min。
3.染色后用清水清洗，可用福尔马林或者多聚甲醛固定液固定。
4.观察染色情况，拍照记录。
结果判断：
正常组织被染成红色，脑梗死区不被染色。
注意事项：
1.TTC溶液若变成红色则不可再用。
2.显色时要使组织切片全部浸入TTC染色液中。
3.TCC染色后应立即观察，不可久放。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
用显微镜进行花粉活力的测定
用显微镜进行花粉活力的测定用显微镜进行花粉活力的测定用显微镜进行花粉活力的测定实验类型：基础内容：一、实验目的1.学习用碘-碘化钾染色测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。
2.学习用过氧化物酶测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。
3.学习用氯...内容：1.学习用碘-碘化钾染色测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。
2.学习用过氧化物酶测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。
3.学习用氯化三苯基四氮唑法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。
（一）碘一碘化钾染色测定法水稻正常花粉呈圆球形，并积累淀粉较多，通常可用I-KI染成蓝色；发育不良的花粉常呈畸形，不积累淀粉，用I-KI染色，不呈蓝色，而呈黄褐色。
具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。
此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉有无活性。
（三）氯化三苯基四氮唑法(TTC法)2、3、5-氯化三苯基四氮唑(TTC)的氧化状态是无色的，被氢还原时成红色的TTF。
具有生命力的种子，由于呼吸作用产生的氢能使TTC还原成TTF，因此胚部便染成红色；而无生命的种子没有呼吸代谢活力，TTC不被还原，因而胚部不着色。
所以，可根据种子胚部染不染成红色来判断种子有无生命力，从而测定种子发芽率。
2. 试剂:(1)I-KI溶液(2) 0.5％联苯胺：将0.5g联苯胺溶于100m150％乙醇中。
(3)0.5％a一萘酚：将0.5ga一萘酚溶于100ml 50％乙醇中。
(4)0.25％碳酸钠：将0.25g碳酸钠溶于100ml水中。
(5)0.3％过氧化氢，即试剂Ⅱ。
(6)试剂I：由0.5％联苯胺、0.5％a一萘酚和0.25％碳酸钠溶液各10ml混合配成。
(7)0.5％TTC溶液。
3.器材：、载玻片、盖玻片、镊子、恒温箱。
1.花粉采集、置载玻片上、滴加试剂3.计算1、四氮唑液最好现配现用，如要贮存必须放在棕色瓶中，并放在阴凉黑暗处。
花粉活力测定实验报告
一、实验目的1. 了解花粉活力测定的原理和方法。
2. 掌握花粉采集、处理和观察的基本技能。
3. 通过实验，了解不同条件下花粉活力的变化规律。
二、实验原理花粉活力是指花粉在正常条件下萌发的能力，是植物杂交、育种和生产的重要指标。
花粉活力测定方法主要有染色法和萌发法。
本实验采用萌发法测定花粉活力。
三、实验材料1. 植物材料：番茄、小麦、玉米等。
2. 试剂：TTC染色液、盐酸、蒸馏水等。
3. 仪器：显微镜、培养皿、移液器、酒精灯等。
四、实验步骤1. 花粉采集在植物开花期，选择花药饱满、颜色鲜亮的植株，用镊子轻轻取出花药，放入培养皿中。
2. 花粉处理将花药置于酒精灯火焰附近，用镊子轻轻敲打花药，使花粉散落。
用移液器将花粉收集到盛有盐酸的试管中，置于酒精灯上加热，使花粉与盐酸混合均匀。
3. 花粉染色将处理好的花粉溶液滴加到载玻片上，用移液器滴加TTC染色液，使花粉染色。
将载玻片置于显微镜下观察。
4. 花粉萌发将染色后的花粉载玻片置于适宜温度和湿度的培养箱中，观察花粉萌发情况。
以花粉管长度超过花粉粒直径为标准，记录萌发花粉的数量。
5. 数据处理计算萌发花粉的百分比，分析不同条件下花粉活力的变化规律。
五、实验结果与分析1. 不同植物花粉活力比较实验结果表明，不同植物花粉活力存在差异。
例如，番茄花粉活力较高，小麦花粉活力较低。
2. 不同处理方法对花粉活力的影响实验结果表明，加热处理、盐酸处理等对花粉活力有一定影响。
加热处理可以使花粉活力降低，盐酸处理可以使花粉活力提高。
3. 不同条件下花粉活力的变化规律实验结果表明，温度、湿度等因素对花粉活力有显著影响。
在一定范围内，温度升高，花粉活力降低；湿度增加，花粉活力提高。
六、实验结论1. 本实验通过萌发法测定了不同植物花粉的活力，了解了不同条件下花粉活力的变化规律。
2. 实验结果表明，不同植物花粉活力存在差异，加热处理、盐酸处理等对花粉活力有显著影响。
3. 温度、湿度等因素对花粉活力有显著影响，在一定范围内，温度升高，花粉活力降低；湿度增加，花粉活力提高。
植物根系活力定性检测液(TTC法)
1、 配制 TTC Assay buffer 工作液：取 1 支 0.1g TTC，按 TTC：TTC Assay buffer：琥珀 酸缓冲液=的比例混合，即为 TTC Assay buffer 工作液。即配即用，4℃避光保存，3 天有效。
2、 准备样品：取 0.5g 植物须根系洗净，浸没于 TTC Assay buffer 工作液(以完全浸没为 准)，37℃避光孵育。
北京雷根生物技术有限公司
植物根系活力定性检测液(TTC 法)
简介：
植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和代谢水平即根系活力直接影 响植物地上部的生长和营养状况以及最终产量，是植物生长的重要生理指标之一。TTC(2， 3，5-氯化三苯基四氮唑)是一种氧化还原物质，是标准氧化电位为 80mV 的氧化还原色素， 溶解于水为无色，可以检测根系活力。
相关：
编号 DC0032 DF0135 NR0001 PS0013 TC1167
产品名称 Masson 三色染色液 多聚甲醛溶液(4% PFA) DEPC 处理水(0.1%) RIPA 裂解液(强) 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)
3、 观察着色情况，新根尖几毫米以及细侧根都有较为明显的变成红色，表明该处有脱氢酶 存在。
注意事项：
1、 配制好的 TTC Assay buffer 工作液应避光保存，如果见光会变红，影响实验结果。 2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
花粉活力染色液(TTC法)
花粉活力染色液(TTC 法)简介：花粉活力的大小直接影响授粉、受精过程，与植物的产量密切相关，通过花粉活力的测定，可了解花粉的可育行，并掌握不育花粉的形态、生理特征。
TTC 是标准氧化电位为80mV 的氧化复原色素，溶于水中形成无色溶液，复原后生成红色不溶于水的三本甲腙，该物质比较稳定，不易被氧化，所以TTC 被广泛用于酶实验的氢受体。
TTC 复原量能表示脱氢酶活性，进而判断植物根系或花粉活力。
组成：自备材料：1、 载玻片2、 盖玻片3、 恒温箱4、 显微镜操作步骤(仅供参考)：1、配制TTC 染色液：取1支TTC 完全溶解于TTC stain buffer ，即为TTC 染色液。
4℃避光保存，1个月有效。
2、取成熟将要开放的新鲜花朵，小心去除花瓣和雌蕊。
染色结果：活力强红色 活力弱淡红色 无活力或不育 无色计算：观察统计100粒花粉，计算有活力花粉的百分数。
其公式为：花粉活力百分数(%)=有活力花粉数/100×100%编号 名称 DP0101 DP0101 Storage 试剂(A): TTC 1支 1支 RT 试剂(B): TTC stain buffer 10ml 50ml RT 避光本卷须知：1、染完色后，应立即显微镜下观察，放久会褪色。
2、TTC染色液开盖后尽快使用，否那么效率会下降，如果变成红色应弃用。
3、染色时需要将花粉完全浸没于染色液中。
4、染色温度一般以25-35℃为宜。
5、为了您的平安和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关：编号名称CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032 Masson三色染色液DC0041 天狼星红染色液DG0005 糖原PAS染色液DM0002 姬姆萨染色液(1:9)PS0013 RIPA裂解液(强)PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)。
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活力强 活力弱 无活力或丌育
红色 淡红色 无色
计算：
观察统计 100 粒花粉，计算有活力花粉的百分数。其公式为： 花粉活力百分数(%)=有活力花粉数/100×100%
注意事项：
北京雷根生物技术有限公司
1、 染完色后，应立即显微镜下观察。 2、 染色时需要将花粉完全浸没于染色液中。 3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
组成：
名称 TTC Stain 使用说明书
自备材料：
1、 载玻片、盖玻片 2、 恒温箱或水浴锅 3、 光学显微镜
编号 DP0101 DP0101 Storage
10ml
50ml 1份
RT 避光
操作步骤(仅供参考)：
1、取成熟将要开放的新鲜花朵，小心去除花瓣和雌蕊。 2、将花粉物质置于载玻片，滴加 1－2 滴 TTC Stain，盖上盖玻片。 3、35℃恒温箱放置，低倍显微镜下观察，每片取 5 个视野。
北京雷根生物技术有限公司
花粉活力染色液(TTC 法)
简介：
花粉活力的大小直接影响授粉、受精过程，不植物的产量密切相关，通过花粉活力 的测定，可了解花粉的可育行，并掌握丌育花粉的形态、生理特征。TTC 是标准氧化电位 为 80mV 的氧化还原色素，溶于水中形成无色溶液，还原后生成红色丌溶于水的三本甲腙， 该物质比较稳定，丌易被氧化，所以 TTC 被广泛用于酶实验的氢受体。TTC 还原量能表示 脱氢酶活性，进而判断植物根系或花粉活力。