铁皮石斛 组培

灭菌 1培养基灭菌 1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全 阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防 事故发生； 2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均 匀地扭紧螺丝； 3）打开电源和排气阀，调节电压至220V； 4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后，关闭排气阀； 5）当温度上升到121℃后，调节电压至135V，保持 20min； 6）关闭电源，使之自动降温至0℃。10min后，打开排 气阀和锅盖； 7）5—10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。
市场现状： 全国中药资源普查显示， 铁皮石斛鲜品的市场年需求 量在万吨左右，且每年递增 15%。鲜品收购价每公斤在 1000元以上，加工成铁皮枫 斗后每公斤销售价达18000元， 是石斛属植物中最名贵的物 种。但铁皮石斛自然繁殖能 力极低，疯狂的采挖导致野 生资源日见稀少，被国家列 为二级濒危保护植物。目前， 人工繁育种植技术趋于成熟， 但主要集中在少数企业运作， 投资成本高，种植面积少， 其产量难以满足市场需求， 混淆品充斥市场。
从1年生铁皮石斛植株上选择生长健壮的茎段，摘去叶片和膜质叶 鞘，剪成约2 cm长带节的小段，用洗洁剂清洗后置流水下冲洗 20~30 min。在超净工作台上用 75%的酒精消毒 30 s，0.1% HgCl2 灭菌 5 min后，用无菌水冲洗5~6次，放入垫有干无菌滤纸的培养皿 中，以吸去多余水分，茎段两端各切去0.2~0.3 cm，插入备好的无 菌诱导培养基中，每瓶培养基插1个外植体。
（1）外植体诱导培养基。
培养基：MS+BA 0.0~2.0 mg/L（单位下同）+NAA 0.1~2.0 mg/L； 培养基：MS+BA 0.0~2.0 mg/L+IBA 0.1~2.0 mg/L；
培养基：MS+BA 0.0~2.0 mg/L+IAA 0.1~2.0 mg/L。
（2）增殖培养基。 培养基：MS+BA 0.2~2.0 +NAA 0.1~2.5+土豆汁10%~50%。
铁 皮 石 斛 的 组 织 培 养
班级：农学121 学号：1251506104
姓名：陈旺有
铁皮石斛
• • • • • • • • 铁皮石斛简介 铁皮石斛的用途 铁皮石斛市场现状及经济效益分析 铁皮石斛的组织培养部位 培养基质的选择与配置 材料的灭菌与接种 组培苗的炼苗与移栽 工厂化培养
铁皮石斛(Dendrobium officinale)是兰科(Orchidaceae)石斛属 (DendrobiumSw．)多年生草本植物。铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁 绿色而得名。铁皮石斛是传统名贵中药材，有生津益胃、清热养阴和清咽利 嗓等功效，主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。铁皮石斛蒴果成熟时 易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低。为了保护和有效利用铁皮石斛，通 过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。
移栽时不同基质选择的效果
2外植体灭菌 ①原材料清洗 选择生长旺盛、无病害的铁皮石斛健康植株，每2 节为 一段放入500ml 的烧杯中，加入少量洗衣粉，用纱布单 层棚扎杯口，然后用工程线扎紧，放在自来水龙头下冲 洗30min，冲水量调整到能使铁皮石斛茎段在水中漂动 为好。 主要作用是洗去外表尘土和大颗粒菌落、菌丝等。 ②材料二次消毒灭菌 将上述完成后的材料带到无菌室超净工作台上，进行二 次消毒灭菌: 将茎段腋芽的苞叶拨去。70% 的酒精速浸 25s， 用0.1%的升汞溶液浸泡10min 用无菌水冲洗5 次， 灭菌过程中不断摇动烧杯使灭菌更加彻底，以去掉表面 药物残留。
转接 2.1转接前准备 1）培养皿、镊子、剪刀等转接用具的灭菌（可以在培养基灭菌 时附带）； 2）检查超净台内各种用具，及时补充酒精灯的酒精，确保用具 齐全； 3）放置待转接材料和待接入培养基，以“方便操作为宜”而陈 列； 2.2转接 1）揭去防尘膜，打开电源、通风和紫外灯，灭菌15—20min； 2）关掉紫外，打开白炽灯，用75%酒精仔细擦拭手指、指甲、 材料瓶瓶盖及盖边缘、工作区等处，确保“消毒”彻底； 3）点燃酒精灯，用无菌镊子把材料夹取于无菌培养皿内，挑选 生命力旺盛的植株用于转接； 4）用无菌剪刀修去多余的根系，“双镊子”法将材料转接于新 的培养基中； 5）标注相关日期和品系，转至培养室培养。
铁皮石斛的用途： 铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo），为 兰科石斛属多年生草本植物，分布于气候温润的南方山区， 附生在半山腰阴湿岩缝、老树表皮，生存温度为–5℃～36℃， 生长温度为15～30℃。其茎枝富含石斛多糖、甘露糖、氨基 酸、微量元素、菲类化合物等成分，具有提高免疫、增强记 忆、延缓衰老、防治眼病、保护嗓子、降压降糖、防癌抗癌、 抑制血栓形成等作用。铁皮石斛口感清香、淡甜、细滑，耐 人寻味，人们往往直接嚼食、泡茶饮用、烹调美味滋补药膳。 现阶段被制成口服液、颗粒剂、软胶囊等服食。铁皮石斛枝 叶奇特、花型秀美，极具观赏价值。道家经典《道藏》把铁 皮石斛、天山雪莲、三两重人参、百二十年首乌、花甲之茯 苓、苁蓉、深山灵芝、海底珍珠、冬虫夏草列为中华九大仙 草，而铁皮石斛被冠以九大仙草之首，因而成为历代宫廷贡 品，为历年版《中华人民共和国药典》所收载。
注意事项 ①操作时，所有用具均不能从“核心工作区”和开启的培养瓶上面晃过，防 止细菌落入而导致污染； ②在打开材料瓶和培养瓶后，其盖均在酒精灯外焰灼烧3-5s，瓶口灼烧5-10s； 盖瓶盖时，亦如此操作； ③转接时，确保手一直在超净台内，以免带入外界细菌。
培养 石斛组培常用的温度为(26±1) ℃ 光强1 600～2 000 lx 日照光8~12h/d （1）组培苗在光照度为2000lx ，温度以22 ℃ 为宜。 (2) 在20 一22 ℃ 时丛生芽增殖较好，温度超过25 ℃ 丛生芽就开始分化成苗。 待增殖芽数量较多时，将高1～2cm、带有2～3片叶的小芽切下转入生根培养基上 进行生根培养。培养30天左ຫໍສະໝຸດ Baidu，基部开始出现2～3条约1cm长的白色根，随后逐渐 伸长，生根率达到90％以上。
铁皮石斛瓶苗
移栽 1基质选择 栽培的基质为火山岩1+椰衣2+木炭1的基质配比石斛兰长势最好，椰衣1+水苔1 和块状椰衣的基质配比稍微次之。 多数树皮中含有较多的酚类物质，这对于植物是有害的，而且树皮的C/N比值都 较高，直接使用会引起微生物对速效氮的竞争作用，造成N素缺乏，树皮保水性能 差。 2移栽技术要求 将已经灭菌地石斛茎段，在无菌条件下切成至少带有一个茎节地茎段，接种于事先 准备好的诱导芽培养基中诱导出芽。从茎尖或茎段培养得到的小苗，大多数是无根 小苗，需转入1／2MS加马铃薯进行生根和壮苗培养，才能出管移栽。 铁皮石斛不宜深植，种植时根系向四周均匀展开，将基质填充根部、基部必须露出， 否则易造成烂根。移栽后隔5天再浇水效果较好。30天内每隔1天喷雾1次，水量不 宜过多，期间勿施肥，待小苗恢复正常生长后才开始常规的水肥管理。 3移栽后期管理 营养生长期施用氮肥较高的花多多复合肥（N:P:K=30:10:10），花芽分化期开始 施偏重磷钾肥（N:P:K=10:30:20），其余时期施（N:P:K=15:20:25）以促进假鳞茎 的生长，采用“薄肥多施”的原则，施肥频率为1次／1周，浓度为0.1%叶面喷施， 雨天不施肥。 石斛生长季节应注意追肥，每年可追肥两次,第一次在春季,以促进石斛生长,第 二次在秋末,既可使石斛储蓄养分,又可使石斛保温过冬。可用腐熟的花生鼓、菜籽 饼、过磷酸钙等加入河泥等混合物撒在根部，此外尚可用0.05—0.1%磷酸二氢钾 进行根外追肥。
组培材料及方法
一是铁皮石斛成熟种子，二是1年生铁皮石斛植株茎段。
取铁皮石斛成熟蒴果，在超净工作台上用刀片将其剥开，将种子 倒在无菌滤纸上并用无菌镊将其包好，放在无菌瓶中用75%的酒精 消毒30 s，0.1%的 HgCl2消毒3~4 min后，用无菌水冲洗5~6次，用 镊子把滤纸夹出，打开，把种子播在无菌培养基表面。约20天后， 发芽而又未被污染的小苗，即为建立的无菌系，用于进一步进行试 验。
不同阶段培养基备注
愈伤组织（原球茎）的诱导MS+2.0mg/L
6-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8
原球茎的增殖MS+20%马铃薯+3%蔗糖+0.8%琼 脂pH =5.8 原球茎的分化MS+20%马铃薯+2.0mg/LNAA+3% 蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8
幼株的生根壮苗MS+10%香蕉+2.0mg/LNAA+3% 蔗糖+0.8%琼脂pH=5.4-5.6
培养基：MS+BA 0.2~2.0 +NAA 0.1~2.5+香蕉汁10%~50%。
（3）生根培养基。 培养基：1/2MS+NAA0.0~2.5+土豆汁10%~50%+活性碳 0~10‰；
培养基：1/2MS+NAA0.0~2.5 mg/L+香蕉汁20%+活性碳 0~10‰
（4）其他培养条件。 所有培养基中添加蔗糖3%，卡拉胶6.8 g/L，pH值5.2~5.6。培养温度 23~25℃，光照强度2000 lx，光照时间10 h/d。
种植经济效益分析：
100平方米种植18个月经济效益分析
种植数 100米2×100株/米2=10000株 成活数10000株×成活率90%=9000株 可采株9000株×2（分蘖株）/种株＝18000分蘖株 总产量18000株×9克/株＝162000克÷1公斤/1000克 ＝162公斤 总产值800元／公斤×162公斤＝129600元 总成本种苗8000元、水电400元、人工2000元、基质 12000元、设施8000元 总利润总产值129600元 -总成本30400元＝99200元
炼苗 3.1炼苗目的 炼苗的主要目的是使组培苗适应外界的环境——温差，湿度差以及微生物环境。 3.2炼苗方法 1）将待炼苗的材料放置于欲移栽的环境，不开盖保持4-5天； 2）半开盖保持1-2天后，全开盖再炼苗2-3天； 方法（整个过程：适应期，半开瓶期，开瓶期，出瓶，洗根，浸泡，移栽或框炼并移 栽）。