脂质体的应用与制备演示教学
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脂质体应ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ及其制备
卢铭辉 20110006015
脂质体—结构
英国科学家庞汉姆等在 1965 年进行生物膜 研究时，发现磷脂分子在水中分散后能够自 发的形成一种囊泡体，这种囊泡体具有类似 于细胞膜的双分子层结构，他将这种囊泡体 称为脂质体。
20世纪70年代初用脂质体作为药物载体包 埋淀粉葡萄糖苷酶治疗糖原沉积病首次获 得成功后, 脂质体便引起了广泛关注。
， 得到 W/O/W 乳化液，再通过减压蒸发除去有机溶剂，即得到脂质体 悬液。 （3）逆相蒸发法 将磷脂等脂溶性成分溶于有机溶剂，再按一定比 例与含药的缓冲液混合、乳化，然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂 质体。该法适合于水溶性药物、大分子活性物质，如胰岛素等的脂 质体制备，可提高包封率。
脂质体包封率的测定 评价脂质体质量的指标有粒径、粒径分布和包封率等。 其中脂质体的包封率是衡量脂质体内在质量的一个重要指标。
传统上，人们采用最多的方法是“被动载药”法。“被动载药”即 首先将药物溶于水相或有机相(脂溶性药物)中，然后按所选择的脂质体 制备方法制备含药脂质体。
对于脂溶性的、与磷脂膜亲和力高的药物，“被动载药”法较为适 用。
而对于两亲性药物，其两相分配系数受介质的pH值和离子强度的影 响较大，包封条件的较小变化，就有可能使包封率有较大的变化，首选 “主动载药” 方法。
团。将适量的磷脂加至水或缓冲溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水 基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此相对缔和为双分子层，构成脂 质体。
用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如大豆卵磷脂、蛋黄卵 磷脂等；合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱等。 常用的附加剂为胆固醇。胆固醇也是两亲性物质，与磷脂混合使用， 可制得稳定的脂质体，其作用是调节双分子层的流动性，降低脂质体 膜的通透性。
√直径小于100nm 的小单层脂质体(SUV) √直径大于100nm 的大单层脂质体(LUV) √多层同心的多层脂质体(MLV) √非同心多囊泡脂质体(MVL)
脂质体—分类应用
作用：脂质体的囊泡结构能够充当药物分子或其他物质等的载体。
亲脂性的药物可以储存在磷脂双分子层中，亲水性的药物可以存储在脂 质体的内囊中。
其他附加剂有十八胺、磷脂酸等，这些附加剂能改变脂质体 表面的电荷性质，从而改变脂质体的包封率、体内外稳定性、体内分 布等其他相关参数。
2.实验方法
在制备含药脂质体时，根据药物装载的机理不同，可分为“主动载 药”与“被动载药”两大类。
所谓“主动载药”，即通过脂质体内外水相的不同离子或化合物梯 度进行载药，主要有K+-Na+梯度和H+梯度(即pH梯度)等。
下图是“主动载药”中pH梯度法载药原理示意图。
oudside neutral pH
DH+ H+
D
inside acid pH
DH+ H+
D
被动载药 (1)薄膜分散法 将磷脂溶解于适量的氯仿或乙醚等有机溶剂中，在 旋转蒸发仪上旋转蒸发使磷脂干燥，使磷脂在瓶壁上形成一层脂质 薄膜。使用合适的溶液来水化已干燥的脂质薄膜，并根据磷脂的浓 度，通过振摇、超声或涡旋震荡等方式进行处理，得到的主要是大 多室脂质体的混悬液。 (2)复乳法 先将脂质体的膜材和脂溶性药物溶于适量有机溶剂中， 按比例加入少量水相溶液，通过超声或震荡等方法进行处理以得到 状态稳定的 W/O 乳化液，再加入大量水相溶液进行第二次乳化处理
磷脂分子具有一个亲水的极性头部和一个 疏水的非极性尾部，因此在组成脂质体时
， 磷脂的亲水极性头部位于脂质体双分子层 的外部，疏水的非极性尾部朝向脂质体双 分子层的中间。
脂质体( liposome)是单层或多层脂质双分 子膜以同心圆的形式包封而成,类似细胞膜 的微球体。
脂质体按照不同的直径大小以及内囊数目可分为以下几种类 型：
PEG可以在脂质体的表面产生空间位阻层，以使长循环脂质体不被内 皮网状系统（RES）吞噬，进而延长药物作用时间。
√热敏脂质体
热敏脂质体又叫温度敏感脂质体，其所使用的磷脂具有比人体体温 稍高的相变温度，在当环境温度达到相变温度时，脂质体双分子层会由 “胶晶态”转变为膜流动性更强的“液晶态”，从而促使脂质体所包封 药物的释放率加大。
√长循环脂质体
长循环脂质体是指经过修饰作用的具有一定空间稳定性的脂质体， 常见的修饰物有聚乙二醇（PEG）、神经节苷脂（GM1）等。因其具有空 间稳定性，所以长循环脂质体可在体内长时间驻留，进而使药物的作用 时间得到延长，发挥出长效作用。
GM1能够增强脂质体膜的刚性，减少单核吞噬细胞系统（MPS）对长 循环脂质体的吞噬率。
当脂质体处于中性pH 环境时,DOPE的羧基离子可提供有效静电进行 排斥,使脂质体保持稳定, 当pH改变时, 双层脂质体可转变成六角相, 引 发脂质体膜不稳定、聚集、融合、释放内容物。从而将包封物导入细胞 质并主动靶向到病变组织,提高药物的靶向性。
√免疫脂质体
脂质体的表面连接上抗体或受体，则可通过特异性结合作用，使脂 质体的移动具有靶向性，这样的脂质体叫做免疫脂质体。由于其具有运 载量大、靶向性强和毒副作用小等优点，也被学者研究来用于肿瘤靶向 治疗。
在研究中，有学者提出将肿瘤等病灶部位升温，使局部温度能够高 于热敏脂质体的相变温度，可以使抗肿瘤药物在肿瘤病灶部位快速释放
， 来提高脂质体的靶向治疗作用。
热敏脂质体已被广泛的应用于核酸、抗生素和抗肿瘤药物等的载体 研究，尤其在抗肿瘤药物载体方向的研究已经取得了较深入的成果。
√pH 敏感脂质体
pH 敏感脂质体是基于肿瘤间质处的pH 值比正常组织低的特点而设 计的一种具有细胞内靶向和控制药物释放作用的脂质体。目前常用的PH 敏感脂质体为二油酰磷脂酰乙醇胺( DOPE )。
√磁性脂质体
磁性脂质体是在脂质体中掺入铁磁性物质制成, 在体外磁场的作用 下,把抗肿瘤药物选择性地输送和定位于靶细胞, 从而降低药量, 减少毒 性，提高疗效。
在交变磁场作用下, 到达靶区的磁场粒子能迅速升温至有效治疗温 度, 导致肿瘤组织坏死, 而无磁性脂质体的正常组织则不受损伤。
脂质体—制备
√实验原理 常见的磷脂分子结构中有两条较长的疏水烃链和一个亲水基
卢铭辉 20110006015
脂质体—结构
英国科学家庞汉姆等在 1965 年进行生物膜 研究时，发现磷脂分子在水中分散后能够自 发的形成一种囊泡体，这种囊泡体具有类似 于细胞膜的双分子层结构，他将这种囊泡体 称为脂质体。
20世纪70年代初用脂质体作为药物载体包 埋淀粉葡萄糖苷酶治疗糖原沉积病首次获 得成功后, 脂质体便引起了广泛关注。
， 得到 W/O/W 乳化液，再通过减压蒸发除去有机溶剂，即得到脂质体 悬液。 （3）逆相蒸发法 将磷脂等脂溶性成分溶于有机溶剂，再按一定比 例与含药的缓冲液混合、乳化，然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂 质体。该法适合于水溶性药物、大分子活性物质，如胰岛素等的脂 质体制备，可提高包封率。
脂质体包封率的测定 评价脂质体质量的指标有粒径、粒径分布和包封率等。 其中脂质体的包封率是衡量脂质体内在质量的一个重要指标。
传统上，人们采用最多的方法是“被动载药”法。“被动载药”即 首先将药物溶于水相或有机相(脂溶性药物)中，然后按所选择的脂质体 制备方法制备含药脂质体。
对于脂溶性的、与磷脂膜亲和力高的药物，“被动载药”法较为适 用。
而对于两亲性药物，其两相分配系数受介质的pH值和离子强度的影 响较大，包封条件的较小变化，就有可能使包封率有较大的变化，首选 “主动载药” 方法。
团。将适量的磷脂加至水或缓冲溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水 基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此相对缔和为双分子层，构成脂 质体。
用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如大豆卵磷脂、蛋黄卵 磷脂等；合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱等。 常用的附加剂为胆固醇。胆固醇也是两亲性物质，与磷脂混合使用， 可制得稳定的脂质体，其作用是调节双分子层的流动性，降低脂质体 膜的通透性。
√直径小于100nm 的小单层脂质体(SUV) √直径大于100nm 的大单层脂质体(LUV) √多层同心的多层脂质体(MLV) √非同心多囊泡脂质体(MVL)
脂质体—分类应用
作用：脂质体的囊泡结构能够充当药物分子或其他物质等的载体。
亲脂性的药物可以储存在磷脂双分子层中，亲水性的药物可以存储在脂 质体的内囊中。
其他附加剂有十八胺、磷脂酸等，这些附加剂能改变脂质体 表面的电荷性质，从而改变脂质体的包封率、体内外稳定性、体内分 布等其他相关参数。
2.实验方法
在制备含药脂质体时，根据药物装载的机理不同，可分为“主动载 药”与“被动载药”两大类。
所谓“主动载药”，即通过脂质体内外水相的不同离子或化合物梯 度进行载药，主要有K+-Na+梯度和H+梯度(即pH梯度)等。
下图是“主动载药”中pH梯度法载药原理示意图。
oudside neutral pH
DH+ H+
D
inside acid pH
DH+ H+
D
被动载药 (1)薄膜分散法 将磷脂溶解于适量的氯仿或乙醚等有机溶剂中，在 旋转蒸发仪上旋转蒸发使磷脂干燥，使磷脂在瓶壁上形成一层脂质 薄膜。使用合适的溶液来水化已干燥的脂质薄膜，并根据磷脂的浓 度，通过振摇、超声或涡旋震荡等方式进行处理，得到的主要是大 多室脂质体的混悬液。 (2)复乳法 先将脂质体的膜材和脂溶性药物溶于适量有机溶剂中， 按比例加入少量水相溶液，通过超声或震荡等方法进行处理以得到 状态稳定的 W/O 乳化液，再加入大量水相溶液进行第二次乳化处理
磷脂分子具有一个亲水的极性头部和一个 疏水的非极性尾部，因此在组成脂质体时
， 磷脂的亲水极性头部位于脂质体双分子层 的外部，疏水的非极性尾部朝向脂质体双 分子层的中间。
脂质体( liposome)是单层或多层脂质双分 子膜以同心圆的形式包封而成,类似细胞膜 的微球体。
脂质体按照不同的直径大小以及内囊数目可分为以下几种类 型：
PEG可以在脂质体的表面产生空间位阻层，以使长循环脂质体不被内 皮网状系统（RES）吞噬，进而延长药物作用时间。
√热敏脂质体
热敏脂质体又叫温度敏感脂质体，其所使用的磷脂具有比人体体温 稍高的相变温度，在当环境温度达到相变温度时，脂质体双分子层会由 “胶晶态”转变为膜流动性更强的“液晶态”，从而促使脂质体所包封 药物的释放率加大。
√长循环脂质体
长循环脂质体是指经过修饰作用的具有一定空间稳定性的脂质体， 常见的修饰物有聚乙二醇（PEG）、神经节苷脂（GM1）等。因其具有空 间稳定性，所以长循环脂质体可在体内长时间驻留，进而使药物的作用 时间得到延长，发挥出长效作用。
GM1能够增强脂质体膜的刚性，减少单核吞噬细胞系统（MPS）对长 循环脂质体的吞噬率。
当脂质体处于中性pH 环境时,DOPE的羧基离子可提供有效静电进行 排斥,使脂质体保持稳定, 当pH改变时, 双层脂质体可转变成六角相, 引 发脂质体膜不稳定、聚集、融合、释放内容物。从而将包封物导入细胞 质并主动靶向到病变组织,提高药物的靶向性。
√免疫脂质体
脂质体的表面连接上抗体或受体，则可通过特异性结合作用，使脂 质体的移动具有靶向性，这样的脂质体叫做免疫脂质体。由于其具有运 载量大、靶向性强和毒副作用小等优点，也被学者研究来用于肿瘤靶向 治疗。
在研究中，有学者提出将肿瘤等病灶部位升温，使局部温度能够高 于热敏脂质体的相变温度，可以使抗肿瘤药物在肿瘤病灶部位快速释放
， 来提高脂质体的靶向治疗作用。
热敏脂质体已被广泛的应用于核酸、抗生素和抗肿瘤药物等的载体 研究，尤其在抗肿瘤药物载体方向的研究已经取得了较深入的成果。
√pH 敏感脂质体
pH 敏感脂质体是基于肿瘤间质处的pH 值比正常组织低的特点而设 计的一种具有细胞内靶向和控制药物释放作用的脂质体。目前常用的PH 敏感脂质体为二油酰磷脂酰乙醇胺( DOPE )。
√磁性脂质体
磁性脂质体是在脂质体中掺入铁磁性物质制成, 在体外磁场的作用 下,把抗肿瘤药物选择性地输送和定位于靶细胞, 从而降低药量, 减少毒 性，提高疗效。
在交变磁场作用下, 到达靶区的磁场粒子能迅速升温至有效治疗温 度, 导致肿瘤组织坏死, 而无磁性脂质体的正常组织则不受损伤。
脂质体—制备
√实验原理 常见的磷脂分子结构中有两条较长的疏水烃链和一个亲水基