用鸡胚实验在体观察血管发育

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在体观察血管发育的模式生物
模式生物：通常指人们研究生命现象过程中长期、 模式生物：通常指人们研究生命现象过程中长期、 反复作为研究材料的物种， 反复作为研究材料的物种，如，果蝇、线虫、斑马鱼、 果蝇、线虫、斑马鱼、 鸡胚、拟南芥等。人们在对这些物种的形态、解剖、 鸡胚、拟南芥等。人们在对这些物种的形态、解剖、生 理、生化、细胞及遗传进行全面分析和归纳的基础上， 生化、细胞及遗传进行全面分析和归纳的基础上， 把它们作为典范，将对其研究得出的规律， 把它们作为典范，将对其研究得出的规律，推演到相关 的生物物种中，从而加快了对其他各种生物的研究。 的生物物种中，从而加快了对其他各种生物的研究。
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鸡胚绒毛尿囊膜模型
I. 鸡胚的生物学构造 尿囊
卵黄囊
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鸡胚模型的意义
I. 生理情况下．新生血管形成主要发生在胚胎发育 和女性月经周期内膜修复过程：在某些病理情况 下。如损伤修复、炎症等也常伴发血管生成。特 别是肿瘤生长和转移与血管生成密切相关。早在 1912年，鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型首次成功用于 肿瘤研究。 II. 鸡胚对抑制血管生成的药物较敏感．是一种较理 想的研究抗血管形成药物的筛选模型．是研究血 管形成和抗血管形成的最佳体内模型之一。
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注意事项
药物加入时间选择： 鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成大约经历早期、中期 和晚期3个阶段。早期胚胎的第5～7天，毛细血管网 以出芽的方式形成新生血管；中期胚胎发育的第8～ 12天，套叠生长是主要的生长方式；而晚期胚胎的第 l3～l4天，血管结构已经基本成熟，此时的血管形成 主要以毛细血管网的膨胀方式进。 因此，选择胚胎4～10天进行抗血管形成试验， 此时血管形成以出芽和套叠的方式进行，处于血管生 长高峰阶段，便于结果的观察。
开放性实验
溶菌酶对鸡胚尿囊膜血管发育抑制观察
人体机能学试验中心
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血管生成抑制药物在临床肿瘤治 疗中的意义
恶性肿瘤在全球范围内已成为常见病、多发病，据世 界卫生组织报告，全球50多亿人口中，每年新诊断的肿瘤 患者约为900万人，因肿瘤而死亡者达700万人，占总病死 率的近20%。 传统的肿瘤治疗方法如手术、放疗和化疗虽有一定的 进展，但都有它们本身的局限性。
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小心把对照组和实验组放回温箱， 37℃，55％相对 空气湿度，3%CO2浓度继续孵育，但不再翻动 孵育至第8～10天，连续观察结果并拍照记录。
对照组
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高浓度药物实验组
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对照组
低浓度药物实验组
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中浓度药物实验组
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高浓度药物实验组
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解剖显微镜下以相同放大倍数计数血管，以实验部位 边缘(即徽孔滤膜载体边缘) 1mm范围内为一级血管， 5mm范围内为二级血管．凡属趋向性生长的血管，即以 载体为中心发出，与滤膜半径的夹角小于45°者均计数 ，而穿行，绕行的血管则不计算在内．一、二级血管分 别观察计数，然后对一、二级血管数分别进行统计学分 析和拍照记录。
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操作过程
I. 获取种蛋，于37℃，55％相对空气湿度下孵育，每天 翻动3次； II. 孵育至第七天，无菌条件下加药： 确定气室及胚头位置 75%酒精清洗卵壳，无菌眼科镊、剪在气室处开窗， 直径为2.0cm左右，小心移去蛋壳及其内侧的壳膜， 观察绒毛膜尿囊血管生成情况 设置对照组和实验组：对照组加生理盐水，实验组按 照预先设定的药物浓度分别加药，药物加在无菌滤纸 薄片上，置薄片于血管较细、密度较小部位
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鸡胚模型的应用
CAM模型用在肿瘤研究、子宫内膜异位症发病研究 CAM模型用在肿瘤研究、子宫内膜异位症发病研究 目前，抑制肿瘤血管形成已被公认为一种崭新的抗 癌战略，以肿瘤血管生成为靶点，开发血管生成抑制 剂在抗肿瘤研究中是一个新的活跃研究领域。抗血管 生成治疗的研究现已推广到新生儿血管瘤病、类风湿 性关节炎、银屑病、糖尿病性视网膜病变等疾病的治 疗；而促血管生成对心血管疾病、胃肠道消化性溃疡 等疾病的治疗也有一定的意义。
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药物载体的选择： 在CAM 法中，固态待测物可直接加入，液态物质 需要适宜载体，使药物在局部缓释起效及定位．常用 的药物戴体有 (1)明胶海绵，(2)中速定性滤纸，(3) 快速定性滤纸，(4)混合纤维素滤膜，(5)双蒸水配制 浓度为0.5％ 的M-450甲基纤维素溶液。高温高压灭， 150ｕl甲基纤维素溶液分6次加入直径为5mm 的半圆 形模具中，60℃ 烤箱烘干成盘状，80℃烤箱中烘烤 60min消毒，备用．前四种载体制成直径5mm的圆片， 湿热灭菌，4℃冰箱保存备用。
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模式生物的发展
早在20世纪最初的20年中，甚至更早到20世纪的 “上世纪”，人们就发现，如果把关注的焦点集中在相 对简单的生物上则发育的现象难题可以得到部分解答 （细胞数量更少，分布相对单一，变化也较好观察；由 于进化的原因，细胞生命在发育的基本模式方面具有相 当大的同一性）所以利用位于生物复杂性阶梯较低级位 置上的物种来研究发育共通规律是可能的。尤其是当在 有不同发育特点的生物中发现共同形态形成和变化特征 时，发育的普遍原理也就得以建立。因为对这些生物的 研究具有帮助我们理解生命世界一般规律的意义，所以 它们被称为“模式生物”。
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上世纪70年代，美国科学家、哈佛大学医学院教授Judah Folkman 提出了著名的“饿死肿瘤疗法”，即通过阻断肿瘤新生血管生成， 切断肿瘤营养供给，从而达到抑制和治疗癌症的目的，为癌症治疗 指出了一条新的途径。
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罗永章
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海洋低温溶菌酶
Marine low-temperature lysozyme（MLTL） 通过生物发酵方法从一种海洋微生物中提取纯 化 。20℃下将菌株振荡培养发酵40h，低温离心获 ℃下将菌株振荡培养发酵 ， 取上清后经浓缩、透析、 取上清后经浓缩、透析、层析及色谱分别纯化后即 可得到纯酶，相对分子量为 可得到纯酶，相对分子量为39KD，纯度 ，纯度>98%。 。
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“饿死肿瘤”疗法的优点 饿死肿瘤”
与传统的肿瘤治疗方法相比，抗血管生成治疗 具有高效性、特异性强、不易产生耐药性、毒副作 用小和可治疗多种肿瘤等优点。 抗血管生成治疗是当今肿瘤生物靶向治疗领域 的研究前沿和临床关注热点,是肿瘤控制治疗新策 略的组成部分。
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2001年，中国医学科学院肿瘤医院联 合全国24家临床医院，对恩度进行了近500 例的大规模临床实验。2005年9月12日，恩 度获得国家新药证书，成为拥有自主知识 产权的国家一类新药。
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模式生物的特点
I. 生理特征能够代表生物界的某一大类群 II. 容易获得并易于在实验室中饲养繁殖 III.容易进行实验操作 III.容易进行实验操作
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在体观察血管发育的模式生物 斑马鱼、 斑马鱼、鸡胚
斑马鱼作为模式生物的特点： I. 斑马鱼 斑马鱼基因与人类基因的相似度达到87％，这意味 与人类基因的相似度达到87％，这意味 着在其身上做药物实验所得到的结果在多数情况下 也适用于人体，因此它受到生物学家的重视 ； II. 斑马鱼的 斑马鱼的胚胎是透明的，所以生物学家很容易观察 是透明的，所以生物学家很容易观察 到药物对其体内器官的影响 ; III.雌性斑马鱼可产卵200枚，胚胎在 III.雌性斑马鱼可产卵200枚，胚胎在24小时内就可发 内就可发 育成形，这使得生物学家可以在同一代鱼身上进行 不同的实验，进而研究病理演化过程并找到病因
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前期实验结果显示MLTL可抑制体外培养的牛 可抑制体外培养的牛 前期实验结果显示 主动脉内皮细胞增殖， 主动脉内皮细胞增殖，在动物模型中抑制肿瘤生长 和血管生成， 和血管生成，但对体外培养的肿瘤细胞没有明显作 用。这些结果表明MLTL有可能通过抗血管生成进而 这些结果表明 有可能通过抗血管生成进而 抑制肿瘤生长。 抑制肿瘤生长。