5种不同石斛的多糖与氨基酸及甘露糖的含量比较_鲁芹飞

X － 0. 074（ r = 0. 999 2） ，在 2. 48 ～ 17. 36 mg·L － 1 线
性良好。另 取 2. 1. 1 项 下 制 备 的 供 试 品 溶 液 1. 0
mL，自“加水至 2. 0 mL 开始”，依法测定其吸光度，
计算多糖的的含量（ 以葡萄糖计） ，结果见表 1。
表 1 5 种石斛的多糖和氨基酸含量
［Key words］ Dendrobii Caulis； polysaccharide； amino acid； mannose
中药石斛为兰科植物石斛属 Dendrobium 多种 药用植物的 总 称，始 载 于《神 农 本 草 经 》，具 有 养 胃 生津、滋阴清热、明目的功能，用于阴伤津亏，口干烦
渴，食少干呕，病后虚热，目暗不明等症状［1］。现代 药理研究证明石斛具有抗衰老、抗肿瘤、降低血糖的 作用，在治疗胃肠道疾病和治疗白内障方面也有很 好疗效［2-8］。石 斛 属 植 物 中 化 学 成 分 类 型 不 尽 相
［收稿日期］ 20130712（ 002） ［基金项目］ 广东省科 技 计 划 项 目 （ 2008A030101009 ） ； 广 东 省 教 育 部 产 学 研 结 合 项 目 （ 2010B090400474 ） ； 广 东 省 科 技 计 划 项 目
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2. 0 mL，精密加入 5% 苯酚溶液 1. 0 mL，摇匀，加硫
酸 5. 0 mL，摇匀，置沸水浴中加热 20 min，取出，置
冰浴中冷却 5 min，以相应试剂为空白，在 488 nm 的
波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，萄糖质量浓
度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程 Y = 0. 060
( 1. 广州中医药大学，广州 510006; 2. 东莞广州中医药大学中医药数理工程研究院，广东 东莞 523808)
［摘要］ 目的： 比较不同种石斛部分化学成分的差别。方法： 采用苯酚-硫酸法测定样品中多糖含量，茚三酮显色法测定 样品中氨基酸的含量，内标法测定样品中甘露糖的含量，通过定量测定，比较 5 种石斛中总多糖、氨基酸和甘露糖的含量差异。 结果： 5 种不同种类的石斛中多糖、氨基酸、甘露糖的含量存在较大的差异。多糖含量，细茎石斛、金钗石斛、马鞭石斛相近，其 中铁皮石斛明显高于其余 4 种石斛，鼓槌石斛明显低于其余的 4 种石斛； 氨基酸含量，马鞭石斛高于其他 4 种石斛； 甘露糖含 量，铁皮石斛明显高于其余 4 种石斛。结论： 5 种不同石斛的总多糖、氨基酸和甘露糖的含量存在较大的差异，但就所含的相 同化学成分总体而言铁皮石斛的质量好于其他 4 种石斛。
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药材 细茎石斛 金钗石斛 鼓槌石斛 马鞭石斛 铁皮石斛
多糖 14. 01 13. 96 6. 84 15. 53 29. 75
氨基酸 0. 89 0. 62 0. 80 1. 21 0. 70
2. 1. 3 精密度、重复性、稳定性考察 依法测定试 验方法的精密度、重复性、稳定性，其 ＲSD 依次为 1. 37% ，1. 52% ，0. 45% ，180 min 内稳定性良好。 2. 1. 4 回收率 精密称取已知多糖含量的石斛鲜 品样品的 6 份，加入相同量葡萄糖对照品，按 2. 1. 1 项下的方法制备供试品溶液，依法测定，结果回收率 为 97. 6% ，ＲSD 2. 43% 。 2. 2 氨基酸的含量测定 2. 2. 1 2% 茚三酮溶液的配制 称取水合茚三酮 2. 0 g，加水 50 mL、氯化亚锡 0. 080 g 搅拌溶解，于 暗处静置过夜，过滤后，加水定容至 100 mL。 2. 2. 2 供试品溶液的制备 取样品粉末（ 过 3 号 筛） 约 1. 0 g，精密称定，置 250 mL 圆底烧瓶中，加 70% 乙醇 40 mL 加热回流提取 2 次，每次 1 h，合并 滤液，转移至 100 mL 量瓶中，定容，摇匀。 2. 2. 3 氨基酸含量测定及标准曲线的绘制 精密 称取天冬氨酸对照品 10 mg，置于 100 mL 量瓶中， 加水稀释至刻度，摇匀。精密吸取对照品标准溶液 1. 0，1. 5，2. 0，2. 5，3. 0，3. 5，4. 0 mL，于 25 mL 量瓶 中，加 水 补 足 至 4. 0 mL，再 精 密 加 入 pH 6. 5 的 CH3 COONa 缓冲盐溶液 1. 0 mL，2% 的茚三酮溶液 1. 5 mL，摇匀，置沸水浴中加热 30 min，取出，放冷 15 min，加水定容。以相 应 溶 剂 为 空 白，在 波 长 为 568 nm 处测定吸光度，以吸光度作纵坐标，以天冬 氨酸溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程 Y = 0. 111 9X － 0. 128 0 （ r = 0. 999 7） 。在 2. 022 ～ 12. 132 mg·L － 1 线性良好。另取 2. 2. 2 项下制备的
［关键词］ 石斛； 多糖； 氨基酸； 甘露糖 ［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903（ 2014） 02-0059-04
［doi］ 10． 11653 / syfj2014020059
Determination of Polysaccharide，Amino Acid and Mannose Content in Five Kinds of Dendrobii Caulis
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第 20 卷第 2 期 2014 年 1 月
中国实验方剂学杂志 Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 2 Jan． ，2014
同，含量也存在差异［9-15］。本文对铁皮石斛、金钗石 斛、细茎石斛、鼓槌石斛和马鞭石斛的多糖、氨基酸、 甘露糖的含量进行了测定和比较，旨在从化学成分 含量方面比较不同品种石斛的差异，使得各种石斛 得到更好的综合应用。 1 材料 1. 1 药材 5 种石斛均由广州中医药大学新药研 究开发中心黄松老师提供，经广州中医药大学新药 开发研 究 中 心 陈 建 南 研 究 员 鉴 定 为 兰 科 石 斛 属 植物。 1. 2 仪器 UV mini 紫外分光度计 （ 日本岛津） ， Sartorius BP110S 型 电 子 天 平 （ 德 国 ） ，Sartorius CP225D 型电子天平（ 德国） ，Aquapro 艾科浦 u 系列 纯水机，HWS24 型电热恒温水浴锅（ 上海一恒科技 有限公司） ； SHIMADZU 型高效液相色谱仪（ 日本岛 津公司） ，SPD-20A 型紫外-可见光检测器，Diamonsil 色谱柱（ 4. 6 mm × 250 mm，5 μm） 。 1. 3 试剂 天冬氨酸对照品（ 中国药品生物制品 检定所，批号 624-200104） ，无水葡萄糖（ 中国药品 生物制品检定所提供，批号 0833-9501） ，甘露糖（ 中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所 提 供， 批 号 140651200602） ，盐酸氨基葡萄糖（ 中国药品生物制品检定 所提供，批号 140649-201103） ； 苯酚、硫酸、乙醇、茚 三酮、氯化亚锡、无 水 乙 酸 钠、PMP （ 1-苯 基-甲 基-5 吡唑啉酮） ，乙腈为色谱纯，甲醇，三氯甲烷，乙酸铵 等均为分析纯。 2 方法与结果 2. 1 总多糖的含量测定 2. 1. 1 供试品溶液的制备 铁皮石斛的多糖供试 品溶液参照 2010 年版《中国药典》铁皮石斛项下多 糖含测方法。其余 4 种石斛的多糖供试品溶液的制 备方法如下： 取样品粉末（ 过 3 号筛） 约 0. 3 g，精密 称定，置 250 mL 圆底烧瓶中，加水 200 mL 加热回流 2 h，抽滤，滤液转移至 250 mL 量瓶中，加水至刻度， 摇匀。从 250 mL 量瓶中精密移取溶液 10 mL，置 100 mL 离心管中，精密加入无水乙醇 50 mL，摇匀，冷藏 1 h，取出，离心 20 min，弃去上清液，沉淀加 80% 乙醇洗 涤两次，每次 40 mL，离心，弃上清液，沉淀加热水溶 解，转移至 25 mL 量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀。 2. 1. 2 多糖含量测定及标准曲线的绘制 精密称 定 105 ℃ 干燥至恒重的葡萄糖对照品 10 mg，置于 100 mL 量瓶中，加水适量使溶解，稀释至刻度，摇 匀。精密移取对照品溶液 0. 2，0. 4，0. 6，0. 8，1. 0， 1. 4 mL，分 别 置 于 10 mL 具 塞 试 管 中，各 加 水 至
LU Qin-fei1 ，HUANG Song1，2* ，LIN Pei 1 ，LV Shu-jian 1 ，XIE Jian-feng1 （ 1. Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China； 2. Dongguan Institution for Mathematics and Theoretics Engineering Ｒesearch，Dongguan 523808，China）
［Abstract］ Objective： To compare the chemical compositions in the five kinds of Dendrobii Caulis． Method： Polysaccharide，mannose and amino acid in the five kinds of Dendrobii Caulis were determined and compared． Ｒesult： The polysaccharide contents， the amino acid contents and the mannose contents are remarkably different in the five kinds of Dendrobii Caulis． The content of polysaccharide in the Dendrobii Caulis officinnle is highedest in the five kinds of Dendrobii Caulis； the content of amino acid in the Dendrobii Caulis finbristun is higher than other four kinds of Dendrobii Caulis； the mannose contents of Dendrobii Caulis officinnle is much more higher than other kinds． Conclusion： The quantity and contents of polysaccharide，amino acid and the mannose are remarkably different in the five kinds of Dendrobii Caulis． However，Dendrobii Caulis officinnle has a higher quality than other four kinds of Dendrobii Caulis in terms of the same chemical compositions1.
（ 2011A030100011） ［第一作者］ 鲁芹飞，在读硕士研究生，从事中药新药研究开发研究，Tel： 020-39359731，E-mail： jiayouluqinfei@ 163． com ［通讯作者］ * 黄松，博士，副教授，硕士生导师，从事中药新药研究开发研究，Tel： 020-32503212，E-mail： hsl318@ yahoo． com． cn
第 20 卷第 2 期 2014 年 1 月
中国实验方剂学杂志 Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 2 Jan． ，2014
5 种不同石斛的多糖与氨基酸及甘露糖的含量比较
鲁芹飞1 ，黄松1，2 * ，林培1 ，吕书剑1 ，谢剑锋1