流式细胞仪介绍

如何看流式图
散点图
密度图
二维等高图
直方图
图 报告中常见的几种流式细胞图
流式细胞术的应用
• 流式细胞术在细胞生物学中的应用
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染色体核型分析 在分子遗传学领域中的应用 用于性别的预选择 在微生物学中的应用 在细胞周期研究中的应用
流式细胞术在医学中的应用
在免疫学中的应用 流式细胞术在肿瘤学上的应用 在血液学研究中的应用
MACSQuant流式细胞仪独有特征：
自动标记
MACS微型载样器上的试剂架，可最多放 置4支染色试剂，如：
PI / 7-AAD 荧光素标记的抗体 抗体混合物 (如MACS MC Cocktails)
全系列试剂 (抗体 和试剂盒),如:
MACS 对照抗体混合物:
MC CD14 Monocyte Cocktail, human MC CD19 B Cell Cocktail, human MC CD34/CD133 Cocktail, human MC CD34 Cocktail, human MC CD4 T Cell Cocktail, mouse MC CD90 Pan T Cell Cocktail, mouse MC CD19 B Cell Cocktail, mouse …
胞计数仪，可以完全代替细胞计数仪。 自动标记，自动进样，自动清洗，节省时间。
自动补偿，对多色分析自动生成补偿数值
小巧的台式机设计,低噪，低热 非加压系统进样
(25)
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仪器的竞争分析
BD的各种机型（一）
calibur Aria
LSR II
BD的各种机型（二）
•
Canto II
Influx
MACSQuant流式细胞仪独有特征：
完全自动化的仪器设置
全自动的仪器校准 (使用 MACS Calibration Beads) 7x7 矩阵补偿 自动补偿，对多色分析自动生成补偿 值 手动补偿
MACSQuant™ Analyzer
结构：
数字化 分析速率> 10,000 events /秒 流速: 25 / 50 / 100 µL/min
Milipore公司的Guava
EasyCyte Mini/EasyCyte Plus无鞘液毛细管细胞分析仪
Accuri 的c6-流式细胞仪
一种全功能、二激光、六探测器分析流式细胞仪系统
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MACSQuant® Analyzer– ―add-ons‖ ������ MACS® MiniSampler ������ Chill Racks (Chill 5, 15, 50 or 96 well adapter) ������ MACSQuant® Columns ������ Additional years of Service ������ Fluorochromes, MACS® Control Cocktails and Microbeads ������ Instrument Training ������ MACSQuant® Calibration Beads ������ MACSQuant® Starting Buffer kit ������ Individual Buffer/Solution boxes
流式细胞仪产品介绍
杨海霞 德国美天旎生物技术公司 (仅供内部培训)
主要内容
• 流式细胞仪基本原理 • MACSQuant流式的性能 • 流式的竞争分析
流式细胞仪基本原理
流式细胞术的概念
流式细胞术（FCM）： 就是对在高速流动的鞘液包括下的细胞、粒子进 行分析和分选的技术，这种细胞或粒子是经过特异荧 光标记的。其特点是测量速度快，每秒钟能测数千个 乃至上万个细胞，且可进行多参数测量。
仪器操作简单、易行:
溶液瓶 (1.5L) 附着在仪器两侧 (通过瓶子上不同的指示灯来显示 机器状态)
用户友好的仪器操作
自动化的仪器设置
自动校准仪器（使用MACS校准微珠） 自动补偿 7X7自动矩阵补偿 自动清洗
自动化进样和抗体标记 带有清洗工作站（washing station）的进样针
签名：
审核者：
日期：
MACSQuant™ Analyzer
A new milestone in cell analysis
竞争优势:
预富集功能，高敏感性检测罕见细胞，比如临床最常用的
造血干细胞、肿瘤干细胞、pDC等。
非常节省细胞，对于科研珍贵标本尤为重要！
绝对的细胞计数，无需计数微珠，细胞培养后往往需要细
Beckman的各种仪器（一）
EPICS XL-ADC Cytomics FC500
EPICS XL-Altra Quanta
Gallios
Moflo
Partec公司各种机型（适合植物学研究）
Amnis公司的ImageStreamX图像流式细胞仪
被评为2008年 度生命科学十 大创新产品之 一，是流式细 胞仪上的新突 破.
集成，台式数字化流式细胞仪强大并且直观的 软件 多参数：3激光，9个参数（FSC,SSC,FL1-7) 12寸触摸屏（内置） 不同用户登录模式，可用密码进行保护 2种不同的模式（针对有丰富经验和无流式经验 的人员） 分析速度可达10000个细胞/秒,无需计数微珠进 行绝对计数 不同的流速控制：25/50/100uL/分钟 自动化处理样本，自动进样，自动清洁，自动 补偿,自动标记 矩阵补偿和脱机补偿 小巧（60X35X40cm）、低噪、低热。
• MACSQuant® Analyzers in the World
• • • • • • • • • • • • • • • ������ ������ ������ ������ ������ ������ ������ ������ ������ ������ ������ ������ ������ ������ ������ Belgium Canada China France Germany Iceland Ireland Italy Japan Russia South Korea Syria United Kingdom United States Coming soon to the list is: Australia
流式细胞仪潜在客户
• 医院：血液科，检验科，风湿免疫病科， 肿瘤科，细胞治疗科,开展移植（肝肾）的 科室。 • 科研院所及大专院校：免疫系或免疫实验 室，中心实验室，分子生物学室，肿瘤研 究所，血液病研究所。
MACSQuant流式细胞仪
——细胞分析的里程碑
多参数细胞分析
三激光
紫色 蓝色 红色 (405 nm) (488 nm) (635 nm) 40 mW 25 mW 20 mW
• 细胞内部颗粒性
– 侧向角散射 (SSC)
相对荧光强度（FL） (需探针标记)
是细胞或细胞上的荧光染料被激光激发后发射出 的荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。 区分阴阳性：通过荧光强度可将同一个细胞群体 中的有荧光标记的细胞与无荧光标记的细胞区分 开来。 区分阳性强弱：也可以将阳性细胞中的高FL的 细胞与低FL的细胞区分开来。
9个光学参数 FSC/SSC + 7 个荧光通道 MACSQuant光学参数
Excitation (nm)
405 nm
Optical channel
FL1
Filters
450/50
Fluorochromes
VioBlue™/PacificBlue ™
488 nm
FL2 FL3
FL4 FL5
525/50 585/40
Байду номын сангаас• • • •
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了解在不同情况下体内免疫功能状态 辅助临床疾病的诊断 探索疾病的发病机理、病程、预后 监测、指导临床治疗方案
免疫系统疾病 免疫缺陷病，AIDS 移植病人排斥反应或移植物抗宿主反应的检测 肿瘤病人化疗后免疫力检测
流式细胞仪的科研应用
树突细胞研究 干细胞研究 癌症病人的多药耐药性 细胞周期和细胞凋亡 流式细胞术与分子生物学研究 细胞系的鉴定 细胞内蛋白的分析 细胞膜电位测定 细胞内钙离子测定
MACSQuant™ Analyzer
• A new milestone in cell analysis
MACSQuant™ Analyzer
• A new milestone in cell analysis
MACSQuant™ Analyzer
• A new milestone in cell analysis
655-730 750(LP) 655-730 750(LP)
FITC PE
PI/7-AAD/PE-Cy5.5/PerCP PE-Cy7 APC APC-Cy7
635 nm
FL6 FL7
488 nm
SSC/FSC
488/10
FSC/SSC
MACSQuant光路系统
流式细胞仪基本特征
MACSQuant流式细胞仪的创新特性：
流式细胞术发展趋势
• • • • • 单纯到复杂 检测荧光参数 定量 手动到自动 荧光试剂
流式细胞检测原理
电子计算机 检测器
流动 室 层流 激光
鞘液
鞘液注射口
细胞样本
液流
光源
细胞可被检测的参数(无探针标记)
散射光信号: 细胞内在的结构参数 • 细胞大小
– 前向角散射 (FSC)
Inciden t Light Source Forward Light Detector Cell Surface Area
-FCS格式-FCS3.0 -与其它流式软件兼容
软件基本特征
简捷的数据处理:
个人用户登录 数据自动保存在对应的用户文件夹中 MQD – 文件 (内部格式) 数据 储存/备用: 可用硬盘驱动器 / DVD RW 驱动器, USB 接口, 以太网络连接
软件简单易操作:
键盘在显示屏上 (触摸式显示屏) USB接口 – 可用来连接外设的鼠标、键盘 条形码读码器
MACSQuant流式细胞仪独有特征：
自动进样
自动化的多样本处理： 使用 MACS® MiniSampler 和 MACS® 冷冻试管架 灵活性高，可使用不同的试管
—— 5 mL tubes ——15 mL tubes ——50 mL tubes
通量高(从Chill 96 rack 到 96孔板)
流式相关抗体
针对流式检测的全系列抗体。。。。
-FITC -PE -APC
-Vioblue
-… …
北京大学人民医院血液病研究所 流式细胞仪检测报告
姓名：
病历：
性别：
诊断：
年龄：
标本：
编号：
淋巴细胞占有核细胞 % CD3+细胞占有核细胞 % CD4+细胞占有核细胞 % CD8+细胞占有核细胞 % CD14+细胞占有核细胞 %
自动化进样针臂（y,z方向移动） 无加压系统
溶液瓶附着在仪器上
仪器状态能够通过溶液瓶的不同颜色来指示
软件基本特征
12‗‘触摸屏（内嵌） Live support 远程网络服务，德国工程师进 行远程在线检修机器 VGA 接口 (连接第二个显示器或者代替的显示 器)
功能强大、易于操作
——直观的操作界面 (用于仪器控制, 数据获取和数据 分析) ——不同的用户模式 ——拖拉式安装 ——含预设程序 ——在个人电脑上进行独立数据分析 ——MACSQuant 数据（MQD)文件
A new milestone in cell analysis
MACSQuant™ 分析仪
功能强大、操作简单的多参数细胞分析的理想工具
(高端仪器 – 操作简单 – 多种自动化选择)
细胞富集系统 绝对计数，无需微珠 自动补偿 自动进样 自动标记
MACSQuant流式细胞仪独有特征：
高灵敏度地分析稀有细胞
MACS® 富集系统
使用MACS微珠磁性富集细胞 细胞被富集后再进行流式细胞术分析
预富集的应用：
内皮祖细胞检测
——频率:每 105 PBMCs 中有1个细胞(如 CD34的预富 集)
肿瘤细胞检测
——频率: 每 107 PBMCs 中有1个细胞 (如 EpCAM的预富集)
抗原特异性T细胞检测
• 流式细胞术新的应用
流式细胞仪的临床应用
HIV免疫分型，CD4绝对计数 白血病和淋巴瘤的免疫分型 肿瘤的细胞周期和倍体分析 网织红细胞计数 细胞移植的交叉配型和免疫状态监测 干细胞计数 残量白血病细胞检查 HLA-B27检查 血小板功能及相关疾病
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临床意义
——(如 CD154的预富集)
成分检测
可以只检测富集后组分或者同时检测原始标本、 阴性组分和阳性组分
MACSQuant流式细胞仪独有特征：
绝对细胞计数(容积型)
每次反应后，自动计算每 µL体积中的细胞数 ——无须计数磁珠，细胞培养后往往需要细胞计数，可以完全替代 细胞计数仪 CD4绝对计数用于辅助HIV监测治疗 CD34绝对细胞计数用于干细胞移植