实验7 土壤硝态氮的紫外分光光度法

实验土壤硝态氮的紫外分光光度法
根层土壤中硝态氮的含量与植物生长发育有着密切的关系，其测定结果可为合理施肥，肥料规划和估产提供依据。

一.目的要求
了解紫外/可见分光光度计的基本结构，掌握用波长选择消除干扰组分的测定技术，用校正因数法测定土壤硝态氮的含量。

二.方法原理
用氯化钠溶液提取土壤硝态氮，于紫外分光光度计上分别测量其210和275纳米的吸光度，前者是硝酸根和以有机质为主的杂质的吸收值，后者是以有机质为主的杂质的吸收。

因为275纳米处硝酸根已无吸收，而有机质在275纳米处的吸收值是210纳米处的f倍，故可将A275校正为有机质在210纳米处的干扰吸收，从A210中减去，即得硝酸根在210纳米处得真实吸收值，再利用标准曲线法求得土壤中硝态氮得含量。

三.器皿与试剂
1.紫外、可见分光光度计和xx比色皿。

2. 50毫升容量瓶10个，100和250毫升锥形瓶各4个，漏斗4个，普通试管4支，50毫升胖肚吸管1支，
5、10毫升和2毫升刻度吸管各一只，滴管2支。

3.氯化钠溶液1mol/L:
称取氯化钠58.44克溶于400毫升水中，转入1升容量瓶中，稀释至刻度。

4.硝态氮标准溶液100µg/ml:
称取于105℃烘制2小时得硝酸钾0.3609克溶于水，转移至500毫升容量瓶中，用水定容。

临用时再稀释至20µg/ml。

5.硫酸溶液，10％（V/V）
四.测定步骤
1.待测液制备
称取10.00克风干土样于250毫升锥形瓶中，加入50毫升1 mol/L的氯化钠溶液，加塞振荡30分钟，过滤于干净干燥的100毫升锥形瓶中，初液弃去。

同时做试剂空白。

2.标准曲线绘制与测定
吸取20µg/ml硝态氮标准溶液0.
00、0.
50、1.
00、2.
00、3.
00、4.00毫升分别置入50毫升容量瓶中，用水定容至刻度后，再加入2毫升10％硫酸溶液，摇匀。

浓度分别为0.
00、
0.
20、0.
40、0.
80、1.20和1.60µg/ml。

以零浓度标液作参比，于210米处测定标准系列的吸光度，绘制标准曲线或建立回归方程。

去土壤浸体液和试剂空白液各10毫升入试管中，加入0.8毫升10％硫酸，摇匀。

以试剂空白作参比，分别于210纳米和275纳米处测定吸光度，不要每
测一个样品改变一次波长，以避免逐次改变波长而引入波长重现性误差。

若土壤浸体液吸光度太大，可用氯化钠溶液稀释，但应按比例加入硫酸溶液。

测定时，向比色皿中加入待测液不要超过容积。

3.结果计算
根据测得A210和A275，按下式计算硝态氮的吸光度△A
△A=A210-f×A275
由△A从工作曲线上查得相应浓度，乘以液土比和稀释倍数，即为土壤硝态氮含量。

式中f为校正因数，本实验取值为3.6。

五.问题讨论
1.为什么标准曲线溶液不加入试剂空白？标准定容后，再加2毫升10％硫酸溶液，对测定结果有没有影响？。