1抗氧化能力分析

1.3.5.3 抗氧化活性分析

（1） DPPH 清除力

1,1-二苯基-2-苦基肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ，DPPH ）是一种稳定自由基，在可见光区有特征吸收，利用其在可见光区吸光值的变化可以有效评价物质的抗氧化活性。本实验分别取0.005 mL 、0.01 mL 、0.02 mL 、0.03 mL 、0.04 mL 的样品，加入蒸馏水稀释到0.2 mL ，加入3 mL 0.06 mM 的DPPH （溶于无水乙醇中），手动混匀，室温下避光反应0.5 h ，然后在517 nm 处测定其吸光值，设定无水乙醇为空白对照组，0.5 g/L BHA 为阳性对照。DPPH 清除率计算如下：

DPPH 清除率（%）=（1-A 样品/A 空白）×100%

式中：A 样品——样品吸光值，A 空白——为对照组吸光值

（2）还原力

物质还原能力即以该物质将Fe 3+还原为Fe 2+的能力为衡量指标，该能力与抗氧化活性有关。分别取0.05 mL 、0.1 mL 、0.2 mL 、0.3mL 、0.4 mL 、0.5 mL 的样品，用蒸馏水稀释至0.5 mL ，加入2.5 mL 磷酸盐缓冲溶液（0.2 M ，pH 6.6）和

2.5 mL 1%（w/v ）铁氰化钾溶液，将混合物在50o C 反应20 min ，再加入10% 三氯乙酸（w/v ），4000 r/min ，离心10 min ，取上清2.5 mL 加入2.5 mL 蒸馏水和0.5 mL 0.1%铁氰化钾反应10 min ，在700 nm 处测定其吸光值，蒸馏水为空白对照，0.5 g/L BHA 为阳性对照。

（3）螯合力

过渡金属离子Fe 2+可以催化活性氧自由基的形成及促进脂质的过氧化作用，从而对细胞和组织造成损伤，如果将这些金属离子耦合即可消除其催化作用，提高抗氧化活性。分别取0.03 mL 、0.05 mL 、0.07 mL 、0.09 mL 、0.1 mL 样品用蒸馏水稀释至2.5 mL ，然后加入0.05 mL 2 mM Fe S O 4，0.1 mL 5mM 菲啰嗪溶液，反应10 min ，在562 nm 处测定吸光值，蒸馏水作为对照组，0.28 g/mL 的柠檬酸作为阳性对照。Fe 2+螯合力计算公式如下：

Fe 2+螯合力（%）=（1-A 样品/A 空白）×100%

式中：A 样品——样品吸光值，A 空白——为对照组吸光值