一种简单快速植物组织冰冻切片方法

一种简单快速植物组织冰冻切片方法( ) 热带亚热带植物学报 2008, 16 4: 386,389

Jou rna l of Trop ica l and Sub trop ica l Bo tany

一种简单快速植物组织冰冻切片方法

3 宁代锋 , 尹增芳 , 张菁 , 孙海燕

()南京林业大学森林资源与环境学院 , 南京 210037

摘要 : 比较不同冷冻方法对植物细胞超微结构的影响 , 结果表明 : 直接包

埋法处理的植物细胞超微结构保存较

好 , 而液氮冷冻处理的植物细胞内膜系统损伤严重。建立了一种直接包埋冷冻和适当回温相结合的方法 , 不仅

可以制作出植物细胞基本结构保存完整的组织切片 , 而且避免了使用冰冻保

护剂的弊端。其操作程序是 : 样品

固定 ?冰冻与包埋 ?适当回温 ?快速切片 ?展片 ?染色。此法制作的切片可

进行不同的染色和组织细胞化学测

定 , 具有操作简便 , 易于推广的特点。

关键词 : 冰冻切片 ; 直接包埋法 ; 液氮冷冻 ; 回温 ; 超微结构

( ) 文章编号 : 1005 - 3395 2008 04 - 0386 - 04 中图分类号 : Q94 - 336 文献标识码 : A

A S im ple and Rap id Cryo2section ing M ethod in Plan t T issue

3ZHAN G J ing, SUN H a i2yan N IN G D a i2feng, Y IN Zeng2fang,

( )Co llege of Fo re st R e sou rce and Environm en t, N an jing Fo re stry U n ive rsity, N an jing 210037 , Ch ina A b stra c t: The effec ts of d iffe ren t freezing trea tm en ts on u ltra struc tu re of p lan

t ce lls du ring c ryo2sec tion ing w e re comp a red. The re su lts show n tha t the ce ll u ltra struc tu re w a s we ll p re se rved w ith d irec t c ryoem bed m e thod, w h ile the endom em b rane system in the ce ll w a s in ju red seve re ly w ith liqu id n itrogen c ryop re se rva tion. W e p ropo sed a m e thod com b in ing w ith c ryoem bed and mode st thaw ing, by w h ich no t on ly cou ld ge t in tegra ted sec

tion s w ith the ba sic struc tu re p re se rved, bu t a lso cou ld avo id the abu se of u sing cyro 2p ro tec ted reagen t. The p rocedu re con sisted of seve ra l step s a s fo llow s: fixing ? refrige ra tion and em bedd ing ? mode st thaw ing ? rap id sec tion ing ? sec tion fla

tting ? sta in ing. The sec tion s m ade by d irec t c ryoem bed w ith mode st thaw ing cou ld be sta ined and chem ica l de te rm ined in d iffe ren t ways. B e side s, the cha rac te ristic of th is p rocedu re is simp le and ea sy to be p romo ted.

Key word s: C ryo sec tion ing; C ryoem bed; L iqu id n itrogen c ryop re se rva tion; Thaw ing; U ltra struc tu re

植物组织冰冻切片作为一种快速、简便、高效、损伤细胞的内膜系统 ,

影响其在植物细胞学研究

中的应用。为了解决上述植物冰冻切片中存在的易操作的技术 , 可以缩短

常规石蜡切片缓慢而复

问题 , 本文采用直接包埋冷冻和适当回温相结合杂的处理过程 , 减少对样

品组织结构的损伤。在

的方法 , 取得了较好的切片效果。细胞免疫化学和原位杂交等研究中 , 冰冻切片能

更好地保存细胞内生物分子的活性 , 显示出独特 1 材料和方法作用。冰冻切片技术在动物和人体的组织研究中

[ 1- 3 ] 1. 1 材料已广泛应用 , 但由于植物细胞含水量大 , 在低

实验材料选取南京林业大学校园苗圃内南林 95温冰冻过程中容易形成冰晶 , 硬度变大 , 难以切出

( ) 杨Pop u lu s ×eu ram e ricana‘N an lin95π1 a生茎。结构完整的组织切片 , 而且细胞内产生的冰晶会

收稿日期 : 2007 - 08 - 13 接受日期 : 2007 - 11 - 23

( ) ()基金项目 : 国家自然科学基金项目 30671657 ; 江苏省自然科学基金项目 B K2005132 资助 3 通讯作者 Co rre spond ing au tho r

1. 2 植物材料的冰冻处理方法埋剂 , 切片即刻附着在解剖针上 , 随后用解剖

直接包埋法启动切片机降温开关 , 使箱温切片转移到机箱外的载玻片上展片。

染色, 一般不需待切片完全展开时降低并维持在 - 20?, 冰冻台的温度降低到 - 20?。

殊处理就可以直接在切片上进行染色或组织将经过预处理的材料包埋 , 然后转入冰冻切片机内

分析。如图版 ?: 1 所示 , 杨树茎横切面结的样品台上 , 使材料迅速冷却并固着在样品台上。整 , 未出现细胞结构破损的现象。图版 ?: 2 液氮冷冻法液氮冷冻法是将材料经常规杨树茎细胞壁自发荧光的冰冻切片图像 , 杨方法固定和清洗后 , 先用包埋剂包裹在适当大小导管、木纤维细胞、韧皮纤维细胞及髓部薄壁的盒内 , 再用液氮迅速冷冻。冷冻时间约为 20 s, 结构清晰。