4T1小鼠乳腺癌细胞
4T1、CT26.WT细胞培养
CT26.WT小鼠结肠癌细胞形态: 成纤维细胞培养基和添加剂: RPMI-1640(GIBCO,货号添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%,1%的双抗(青霉素,链霉素)。
气相:空气,95%;二氧化碳,5%。
温度:37摄度。
4T1小鼠乳腺癌细胞形态:上皮细胞培养基和添加剂:RPMI-1640(GIBCO,货号添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%,1%的双抗。
(青霉素,链霉素)气相:空气,95%;二氧化碳,(三)坏补体(1、2、3、(四)/mL。
(五)(六)传代(或,晃动菌培养瓶内,加入完全培养基后继续培养或实验。
悬浮细胞:一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度可先离心1000rpm,5min后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。
(七)冻存将贴壁细胞消化后离心收集,悬浮细胞直接离心收集,以完全培养基或胎牛血清重悬细胞至终浓度约106/ml。
加入10%的DMSO。
以每管1~2ml分装至冻存管中。
用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻过夜。
次日保存到液氮中。
(八)注意事项玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上;无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净,紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上;培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内,用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天,肉眼见无浑浊或沉淀等异物。
分装后置4度保存;消化液(pH7.8)或其它加入液,应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌,分装成支置-20度保存;培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上,如有高温灭菌的应按程序来菌)。
萝卜硫素对小鼠乳腺癌4T1细胞上皮-间质转化、增殖和迁移的影响研究
605欢迎关注本刊公众号·论 著·《中国癌症杂志》2021年第31卷第7期CHINA ONCOLOGY 2021 Vol.31 No.7基金资助:国家自然科学基金面上项目(81772833)。
通信作者:黄晓飞 E-mail: hxiaofei@萝卜硫素对小鼠乳腺癌4T1细胞上皮-间质 转化、增殖和迁移的影响研究谢金芳1,2,曹春雨1,2,任 雪1,2,田家俊1,2,吕亚丰1,2,黄晓飞1,21.三峡大学医学院生物化学与分子生物学系,湖北 宜昌 443002;2.三峡大学肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室,湖北 宜昌 443002[摘要] 背景与目的:组蛋白去乙酰化酶5(histone deacetylase 5,HDAC5)在乳腺癌组织中异常高表达,其与赖氨酸特异性去甲基化酶1(lysine specific demethylase ,LSD1)协同促进乳腺癌细胞增殖和迁移。
通过萝卜硫素(sulforaphane ,SFN )下调HDAC5表达,观察其对小鼠乳腺癌4T1细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition ,EMT )、增殖和迁移的影响。
方法:采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法分析SFN 对4T1细胞增殖的影响。
采用乳酸脱氢酶释放实验检测SFN 的细胞毒性。
采用pcDNA3.1(+)-FLAG-HDAC5质粒转染4T1细胞,通过G418筛选获得单个细胞克隆,再以蛋白质印迹法(Western blot )鉴定HDAC5蛋白稳定高表达的单克隆细胞系。
采用划痕实验和transwell 法分析过表达HDAC5以及SFN 处理对4T1细胞迁移和侵袭的影响。
采用Western blot 检测SFN 处理对4T1细胞EMT 标志物上皮钙黏着蛋白(E-cadherin )、神经钙黏着蛋白(N-cadherin )、波形蛋白(vimentin )和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响。
金纳米棒对小鼠乳腺癌细胞光热光动力协同治疗的研究
山东农业大学学报(自然科学版),2021,52(2):247-251VOL.52NO.22021 Journal of Shandong Agricultural University(Ntural Science Edition)doi:10.3969/j.issn.1000-2324.2021.02.015金纳米棒对小鼠乳腺癌细胞光热/光动力协同治疗的研究胡雅晴,武云云,李兵,李奚*长春工业大学化学与生命科学学院,吉林长春130012摘要:为研究金纳米棒(Au NRs)对小鼠乳腺癌细胞(4T1)光热/光动力协同治疗的影响。
首先,通过调节硝酸银溶液(AgNO3)的加入量,制备6种不同长径比、不同表面电荷的Au NRs1~6。
然后,通过光热升温实验和细胞内/外ROS生成实验对Au NRs的光热和光动力性质评估,并对光诱导细胞损伤分子机制探究。
结果表明,在NIR激光的照射下,Au NRs具有相似的温度升高水平,并显示出良好的光热性能。
关于光动力学性质,细胞毒性评估表明,Au NRs在不同表面电荷的影响下对4T1细胞具有不同的杀伤效果。
表面电荷的强度使Au NRs具有不同程度的细胞内在化和ROS生成能力,从而引起细胞损伤。
因此,Au NRs对癌细胞具有光热/光动力协同治疗的作用,在癌细胞的光治疗方面,显示出巨大的潜力。
关键词:金纳米棒;乳腺癌;协同治疗中图法分类号:Q599文献标识码:A文章编号:1000-2324(2021)02-0247-05Study on the Photothermal/Photodynamic Synergistic Therapy for Breast Cancer Cells from Mice by Gold NanorodsHU Ya-qing,WU Yun-yun,LI Bing,LI Xi*School of Chemistry and Life Science/Changchun University of Technology,Changchun130012,ChinaAbstract:To study the effect of gold nanorods(Au NRs)on the photothermal/photodynamic synergistic treatment of mouse breast cancer(4T1)cells.First,six Au NRs with different aspect ratios and surface charges were prepared by adjusting the amount of silver nitrate solution(AgNO3).Secondly,the photothermal and photodynamic properties of Au NRs were evaluated through the photothermal heating experiment and the intracellular/extracellular ROS generation experiment,and the molecular mechanism of light-induced cell damage was explored.The results show that under the irradiation of NIR laser, Au NRs have a similar temperature rise level and show good photothermal performance.Regarding the photodynamic properties,the cytotoxicity evaluations show that Au NRs have different killing effects on4T1cells under the influence of different surface charges.The strength of the surface charge makes Au NRs have varying degrees of cell internalization and ROS generation capabilities,which can cause cells prehensive analysis shows that Au NRs has a photothermal/photodynamic synergistic therapy effect on cancer cells,and shows great potential in the phototherapy of cancer cells.Keywords:Gold nanorods;breast cancer;synergistic therapy癌症已成为世界面临的最严重的公共卫生问题之一。
4t1细胞
4T1细胞的生物学功能及其机制
4T1细胞的生物学功能包括抗肿瘤和免疫调节
• 抗肿瘤:4T1细胞能够识别和清除肿 瘤细胞,抑制肿瘤的发生和发展 • 免疫调节:4T1细胞能够产生免疫分 子,调节免疫应答,维持免疫稳态
4T1细胞的生物学功能机制包括细胞因 子产生和细胞间相互作用
• 细胞因子产生:4T1细胞能够产生细 胞因子,如干扰素-γ、白介素-2等,发 挥免疫调节作用 • 细胞间相互作用:4T1细胞与其他免 疫细胞相互作用,如与CD8+ T细胞协 同作用,清除肿瘤细胞
4T1细胞研究对医学 发展的意义
• 4T1细胞研究对医学发展的意义包括理论基础和临床应用 • 理论基础:研究4T1细胞有助于揭示免疫系统与疾病之间的关 系,丰富医学理论 • 临床应用:研究4T1细胞为疾病治疗提供新的思路和策略,推 动医学发展
• 通过4T1细胞研究,有望为疾病治疗和医学发展带来新的突破与 创新
04
T1细胞与疾病关系的研究
4T1细胞与肿瘤发生发展的关系
研究4T1细胞与肿瘤发生发展的关系有助于揭示肿瘤免疫逃逸机制
• 通过研究4T1细胞与肿瘤细胞之间的相互作用,有助于揭示肿瘤免疫逃逸的机制 • 为肿瘤免疫治疗提供新的思路和策略
4T1细胞与肿瘤发生发展的关系包括促进和抑制
• 促进:4T1细胞具有侵袭性和转移性,能促进肿瘤的发生和发展 • 抑制:4T1细胞具有免疫调节功能,能抑制肿瘤的生长和扩散
4T1细胞研究面临的 挑战与问题
• 4T1细胞研究面临的挑战与问题包括实验技术和临床应用 • 实验技术:研究4T1细胞需要先进的实验技术,如基因编辑、 细胞培养等 • 临床应用:4T1细胞治疗需要克服安全性、有效性等问题,实 现临床转化
• 通过克服4T1细胞研究面临的挑战与问题,有望为医学发展作出 贡献
抗癌防移片对4T1小鼠乳腺癌影响的研究
抗癌防移片对4T1小鼠乳腺癌影响的研究侯超;胡志希;曾柏荣;李琳;陈龙娇【摘要】目的观察抗癌防移片对4T1小鼠乳腺癌的影响.方法建立4T1乳腺癌小鼠模型,随机分为空白对照组、模型组、环磷酰胺组和抗癌防移片组,分别给予药物或生理盐水,动态观察给药期间小鼠生活状况.给药4周后处死小鼠,测定小鼠体质量增加百分数,测量剥离瘤体积,计算瘤体积抑制率以及计数肺转移瘤灶个数.结果与模型组比较,抗癌防移片组小鼠肿瘤生长缓慢,肺转移瘤灶数量明显减少(P<0.05);与环磷酰胺组比较,抗癌防移片组药物毒副作用小(P<0.05),生活质量高,但其抑瘤防转移作用不及环磷酰胺(P<0.05).结论抗癌防移片能抑制4T1小鼠乳腺癌生长与转移,改善小鼠生存质量.【期刊名称】《湖南中医药大学学报》【年(卷),期】2014(034)004【总页数】4页(P6-9)【关键词】抗癌防移片;4T1小鼠乳腺癌;肿瘤体积;瘤体积抑制率;肺转移瘤灶数【作者】侯超;胡志希;曾柏荣;李琳;陈龙娇【作者单位】湖南中医药大学,湖南长沙410208;湖南中医药大学,湖南长沙410208;湖南中医药大学第一附属医院,湖南长沙410007;湖南中医药大学,湖南长沙410208;广州中医药大学,广东广州510000【正文语种】中文【中图分类】R285.5;R737.9乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,复发与转移是导致女性患者死亡的主要原因。
研究证实,25%以上的乳腺癌一开始即发生血行远处转移,而通过淋巴道转移途径的机会则更多[1]。
目前临床上防治乳腺癌复发与转移,主要采用化疗与内分泌治疗,但由于药物的毒副反应和耐药性,严重影响了治疗的效果。
而抗肿瘤中药由于作用的多靶向性、毒副作用低且价廉,越来越受到患者的欢迎。
抗癌防移片系曾柏荣教授有效验方,以扶正祛邪为基本治则,调补肝脾、行气活血、祛痰化湿为治疗大法,用于临床防治乳腺癌术后复发与转移,收效明显[2]。
为了证实该复方制剂的疗效并为其临床应用提供实验依据,我们观察了抗癌防移片对BALB/c小鼠4T1乳腺癌移植瘤模型的抑瘤防移效果及其毒副作用,现将方法与结果报道如下。
鞘内注射天麻素对小鼠皮肤癌痛的影响解析
痛行为学观察于接种肿瘤细胞后观察左后趾 外观变化。于小鼠接种前、鞘内注射前30 min、鞘内 注射后15、30、60、90、120和150 rain时测定热缩足
万方数据
590
组别
接种前
鞘内注射前————
主堡盎竖堂盘查!!!!堡!旦箜!!鲞笠!塑
表1四组小鼠各时点TwL的比较(S,n=8,i±s)
15 30 60 loss
Fund gsu
GASTRODIN;Skin
neoplasms;Pain;Injections,spinal Project
of Social Development in
program:Science
and Technology Support
Zhenjiang City,Jian—
Province(SH2014078)
Methods
4
Objective
To
investigate the effect of intrathecal gastrodin
on
skin
cancer
pain in
mice.
Thirty.two female Balb/c mice,aged 8 weeks,weighing
a
20—25 g,were randomly divided into
time point after intrathecal
injection,and
the
ex。
of
ASIC.3 mRNA in the spinal dorsal horn
was
significantly down・regulated in group
G(P<O.05),
4t1细胞
4t1细胞
4T1(4T1.2)细胞是一种一直被广泛研究的小鼠乳腺癌细胞株。
这种细胞株最
初来自Balb/c小鼠的乳腺实体瘤。
它具有高度的异质性不仅在细胞形态学上,在
生长速率、转移特性和抗药性等方面也表现出明显的异质性。
这使得4T1细胞成
为研究乳腺癌的良好模型。
1. 细胞特性
4T1细胞具有多种特性,包括但不限于: - 高度异质性 - 能够在小鼠体内形成
高度侵袭性的实体瘤 - 显示高转移性,可在体内形成肺转移 - 耐受药物治疗 - 能够
在体内复制多个人乳腺癌的特点,例如HER2过表达和雌激素受体阴性等
2. 应用领域
4T1细胞在乳腺癌研究领域有着广泛的应用。
研究人员通常利用这种模型来研
究乳腺癌的生长、转移机制,以及筛选抗癌药物等。
由于其高度转移性的特点,
4T1细胞也被广泛用于研究抗转移治疗方法。
此外,4T1细胞还被用于评估潜在
的免疫治疗策略,例如免疫检查点抑制剂的疗效评估。
3. 研究现状
目前,许多研究团队正在利用4T1细胞模型开展多项研究。
他们希望通过深入了解4T1细胞的特性和行为,探索乳腺癌生长和转移的机制,以及寻找更有效的
治疗方法。
一些最新的研究还试图通过基因编辑技术修改4T1细胞,以便更好地
模拟人类乳腺癌的特点,并推动相关治疗方法的发展。
4. 结语
总的来说,4T1细胞是一个重要的乳腺癌研究模型,具有高度转移性和异质性。
通过对这种细胞的研究,科学家们可以更好地理解乳腺癌的发展机制,并寻找更有效的治疗方法,为乳腺癌患者带来希望。
不同接种量荧光素酶标记小鼠乳腺癌细胞4T1在小鼠体内生长及肺转移的比较
[ 金 项 目 ] 生 部 项 目 , 验 动 物 和人 类 疾 病 动 物 模 型 资 源 扩 展 ( 0 82 3 ) 十 一 五 新 药 专 项 支持 ( 08 X 90  ̄0 ) 基 卫 实 2 00 0 6 和 20 Z 0 35 1 。 [ 者 简 介 ] 小 颖 ( 9 1一) 女 , 习研 究 员 。E—ma : ay“h bi 1 3 cm 作 李 18 , 实 i 1 0igee@ 6 .o l 【 信 作 者 ] 连 峰 。 E—m i h nl nl .r 通 张 al a g @c isog :z f a
21 0 2年 2月
中 国实 验 动 物 学 报
AC A T LAB ORAT ORI UM ANI MAL S S ENT A S NI A I CI I I C
F bu r 2 2 e r a y, 01 V0 _ O N0 1 l2 .
第2 0卷
第 1期
也
Decorin提升小鼠脾脏细胞对乳腺癌细胞系4T1的免疫响应性
Decorin提升小鼠脾脏细胞对乳腺癌细胞系4T1的免疫响应性赵慧强; 刘超; 胡泽斌; 戴诗云; 王华【期刊名称】《《中国医药生物技术》》【年(卷),期】2019(014)006【总页数】6页(P481-486)【关键词】核心蛋白聚糖; 乳腺肿瘤; 基因;MHCII类; 脾细胞; 4T1细胞系【作者】赵慧强; 刘超; 胡泽斌; 戴诗云; 王华【作者单位】100850 北京军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所; 100048北京中国人民解放军总医院第六医学中心干部保健科; 264003 山东滨州医学院临床医学院; 100050 北京中国食品药品检定研究院体外诊断试剂所【正文语种】中文目的评价高表达核心蛋白聚糖(Decorin)的小鼠乳腺癌细胞系 4T1 对正常小鼠脾细胞的免疫激活效应,明确 Decorin 对抗肿瘤免疫的调节作用。
方法采用携带Decorin 基因的复制缺陷型重组腺病毒 Ad.DCN 感染小鼠乳腺癌细胞系 4T1。
与小鼠脾细胞共培养 3 d 后,通过流式细胞术检测小鼠脾细胞的CD4+T 细胞、CD8+T 细胞、T 记忆细胞(Tm)和T 调节细胞(Treg)的百分比;利用实时定量 PCR(qPCR)技术检测 Th1 类细胞因子IL-2、IL-12、TNF-α和IFN-γ 的表达,Th2 类细胞因子IL-4、IL-6、IL-10 和转化生长因子β(TGF-β)的表达,以及与杀伤相关基因穿孔素与颗粒酶 B 的表达。
结果与小鼠乳腺癌细胞系 4T1 共培养后,小鼠脾细胞 CD4+T 淋巴细胞、CD8+T 淋巴细胞、Treg 细胞比例无明显改变,但Tm 细胞比例显著升高;同时,细胞因子、穿孔素和颗粒酶 B 表达下调。
但是,病毒感染的 4T1 细胞,特别是Ad.DCN 感染的 4T1 细胞可显著抑制 Treg 细胞,并部分逆转细胞因子表达的下调。
结论 Decorin 高表达可增强正常小鼠脾脏细胞对乳腺癌细胞系 4T1 的免疫响应性,从而激活抗肿瘤免疫反应。
4T1炎性乳腺癌细胞接种联合皮质酮注射诱导乳腺癌并发抑郁症小鼠模型的研究
4T1炎性乳腺癌细胞接种联合皮质酮注射诱导乳腺癌并发抑郁症小鼠模型的研究杨蕙;孟盼;杨琴;韩远山;凌佳;杜青;赵洪庆;王宇红【摘要】目的研究4T1炎性乳腺癌细胞接种联合皮质酮注射所致BABL/c小鼠病理行为和核心标志物的变化.方法采用4T1炎性乳腺癌细胞接种的方法建立乳腺癌小鼠模型,并随机分为2组,乳腺癌组和乳腺癌皮质酮组;另将未接种乳腺癌细胞的小鼠也随机分为2组,正常对照组和抑郁症组.随后给予抑郁症组和乳腺癌皮质酮组21 d皮质酮注射(30 mg/kg).实验结束后,采用糖水消耗实验、旷场实验、新奇摄食实验观察各组小鼠的抑郁样行为.小鼠断头处死后,测量各组小鼠乳腺肿瘤瘤重和瘤体积,采用ELISA法检测小鼠肿瘤标志物肿瘤抗原CA153、糖类抗原CA125、癌胚抗原(CEA)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)的含量.结果乳腺癌皮质酮组小鼠瘤重和瘤体积明显增大,血浆CA153、CA125和CEA水平显著升高,糖水偏嗜度明显降低,对环境的好奇探索欲望减弱,体内5-HT、DA、NE含量显著降低.结论乳腺癌小鼠在接受慢性皮质酮注射后,可表现出明显的抑郁样行为、神经递质和乳腺癌标志物以及肿瘤瘤体变化,可为乳腺癌并发抑郁症动物实验提供模型参考.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2018(028)011【总页数】6页(P21-26)【关键词】乳腺癌并发抑郁症;肿瘤标志物;单胺神经递质;动物行为学;小鼠【作者】杨蕙;孟盼;杨琴;韩远山;凌佳;杜青;赵洪庆;王宇红【作者单位】湖南中医药大学第一附属医院中心实验室,长沙 410007;湖南中医药大学中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地,长沙 410208;湖南中医药大学中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地,长沙 410208;湖南中医药大学第一附属医院中心实验室,长沙 410007;湖南中医药大学中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地,长沙 410208;湖南省中医药研究院,长沙 410006;湖南中医药大学中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地,长沙 410208;湖南中医药大学中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地,长沙 410208【正文语种】中文【中图分类】R-33乳腺癌是世界范围内最常见的女性恶性肿瘤[1],且比其他类型的癌症更加能影响患者的精神与情绪[2]。
bmscs来源的外泌体对小鼠乳腺癌细胞4t1增殖、侵袭的影响及机制探讨
BMSCs来源的外泌体对小鼠乳腺癌细胞4T1增殖、侵袭的影响及机制探讨王丹丹,陈建中,亢春彦(郑州大学第二附属医院,郑州450014) 摘要:目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的外泌体(exosome)对小鼠乳腺癌细胞4T1增殖、侵袭的影响,并探讨其可能机制。
方法 将小鼠乳腺癌细胞4T1随机分为3组,4T1+vehicle组仅加入400μL无血清培养基,4T1+exosome组加入400μL由无血清培养基配置的exosome,4T1+exosome+磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号通路阻断剂(Y294002)组加入400μL终浓度为5μmol/mLY294002及400μg/mLexosome的培养基。
分别采用MTT法、细胞划痕实验、Westernblotting法检测各组细胞增殖、迁移和侵袭能力以及PI3K/Akt信号通路相关蛋白。
结果 4T1+exosome组、4T1+vehicle组、4T1+exosome+Y294002组细胞增殖抑制率分别为0.713%±0.050%、0.401%±0.030%、0.459%±0.800%,4T1+exosome组分别与4T1+vehicle组、4T1+exosome+Y294002组比较,P均<0.05。
4T1+exosome组、4T1+vehicle组、4T1+exosome+Y294002组细胞迁移距离分别为(388.0±36.1)、(295.0±34.2)、(275.0±63.5)μm,4T1+exosome组分别与4T1+vehicle组、4T1+exosome+Y294002组比较,P均<0.05。
4T1+exosome组p-AKT、β-cateninOD值分别为0.30±0.11、0.30±0.08,4T1+vehicle组分别为1.10±0.41、0.70±0.08,4T1+exosome+Y294002组分别为0.40±0.13、0.30±0.07,4T1+exosome组分别与4T1+vehicle组、4T1+exosome+Y294002组比较,P均<0.05。
活体生物发光示踪术观察中国被毛孢抑制小鼠4T1-luc乳腺癌肺转移作用
况。【 蚀果 J 、 鼠灌 胃给予 1 . 0 g ・ k g - 1 、 2 . 0 g ・ k g HS M后 , 原住肿 瘤体积和 重量 明显 降低( P < 0 . 0 5 , P < O . 0 1 ) , 原位肿瘤抑瘤率分别为 2 2 . 9 2 % 和3 2 . 5 0 %;
给予 2 . O g ・ k g - H S M 的小鼠乳腺癌肺转移明显减少( P < 0 . 0 1 ) , 乳腺癌肺转移的抑制率为 5 1 . 7 7 % 。[ 结论】 中国被毛孢 茵丝体具有较好 的抑制 小鼠乳
腺 癌肺转移作用。
关键词 : 中国 被毛孢 菌丝体 ; 4 T 1 一 l u c 乳腺癌 ; 肺转移; 生物发 光示踪术
中图分类号: R2 2 1 文献标识码: A 文章编号 : 1 0 0 5 - 5 5 0 9 ( 2 0 1 3 ) 0 2 - 0 1 2 1 — 0 4
Ef fe c t o f Hi r s u t e l l a S i ne n s i s My c e l i u m I nh i b i t i n g Lu n g Me t as t a s i s b y Bi ol m i n e s c e n t I ma g i ng i n t h e 4 T1 -l u c Mo us e Br e a s t Ca nc e r Mo de l Fu
f o u r g r o u p s , mo d e l ro g u p , l o w—d o s e ro g u p ( 1 . 0 g 。 k g ~ HS M) , h i g h — d o s e ro g u p ( 2 . 0 g ’ k g HS M) a n d p o s i i t v e g r o u p ( 2 0 mg ‘ k g —CT X) , t e n ic m e f o r e a c h
Qualityard 4T1 小鼠乳腺癌细胞说明书及注意事项
4T1小鼠乳腺癌细胞说明书及注意事项1.简介:4T1小鼠乳腺癌细胞是从410.4瘤株中未经诱变筛得的6-硫鸟嘌噙抗性细胞株。
当注射到BALB/c 小鼠中时,4T1自发产生高转移肿瘤,可转移到肺,肝,淋巴结和大脑,同时在注射部位形成始发灶。
诱导转移时不需要摘除始发灶。
4T1细胞在BALB/c小鼠中的生长与转移特性与人体中的乳腺癌十分相近。
这种肿瘤是人VI期乳腺癌的动物模型。
4T1-诱导的肿瘤在手术后及未手术情况下转移的动力学相近,可以用作手术后及未手术模型。
跟其他肿瘤模型相比,由于4T1的抗6-硫鸟嘌噙特性,微小的转移细胞团(少到仅仅1个)也可以在许多远端器官中检测到。
没必要数淋巴结或称重器官。
在本库通过支原体检测。
所有肿瘤细胞和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,操作者需注意自身防护。
基本培养条件:培养基:90%RPMI-1640+10%胎牛血清温度:37℃气相:95%空气,5%二氧化碳2.细胞运输:本细胞为贴壁细胞,常规运输方式是将细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满新鲜的完全培养液并封好瓶口进行运输。
根据气温的高低及运输距离的远近,我们可能采取以下两种方式运输。
活细胞胰酶消化离心后血清发货;冻存管发货。
3.客户收到细胞后请严格按照以下要求进行操作。
3.1培养前的注意事项:A. 细胞出库前都是生长良好,我们会对出库细胞进行拍照留档(建议用户在收到细胞时拍照片,细胞拍照时请用100X 、200X倍数各拍上2~3张照片留存,可用作细胞状态的对比,拍摄的照片应当清晰)。
B. 用户在收到细胞后,先观察培养瓶是否完好,培养液是否外渗,培养液是否浑浊。
3.2新购细胞的初步培养:客户收到细胞后在未开封前,先用75%酒精将培养瓶外表擦拭干净,镜检细胞贴壁情况。
将细胞置于培养箱中进行1-2小时的缓冲,待细胞恢复基本生长状态后,进行后续细胞实验。
细胞恢复基本生长状态后,倒置显微镜下观察整个细胞生长情况:A. 细胞密度未达85%时,用75%酒精喷洒培养瓶后放在生物操作台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸取剩余培养液,只留6~8ml培养液继续培养。
4T1-LUC(小鼠乳腺癌细胞-荧光素酶标记)操作说明书
小鼠乳腺癌细胞4T1-Luc产品基本信息细胞名称:4T1-Luc,小鼠乳腺癌细胞+Luc种属来源:小鼠组织来源:乳房细胞形态:上皮细胞样生长特性:贴壁生长培养基:90%DMEM+10%FBS+PS生长条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃传代方法:1:2至1:3,每周3次冻存条件:无血清冻存液,液氮储存支原体检测:无注:该细胞puro药筛浓度为1.0ug/ml,培养过程中可不用再添加puro,如若担心抗性随着传代时间降低,可定期用0.5ug/ml浓度puro维持。
细胞培养操作1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4mL培养基混合均匀。
在1000rpm条件下离心3min,弃去上清液,加1-2mL培养基后吹匀。
然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中,加入约4mL 培养基,培养过夜)。
第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。
轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000rpm离心5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例;a、收集细胞,装入无菌离心管中,1000rpm条件下离心4min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
小鼠乳腺癌细胞4T1对不同品系小鼠乳腺癌模型的影响
小鼠乳腺癌细胞4T1对不同品系小鼠乳腺癌模型的影响王硕【摘要】目的:将小鼠乳腺癌细胞4T1接种到两种不同品系的小鼠脂肪垫,观察植瘤小鼠的生物学状态、成瘤大小、转移情况以及生存周期等指标,为建立不同品系小鼠的乳腺癌模型提供参考.方法:将小鼠乳腺癌细胞4T1胰酶消化去除上清,用PBS洗两遍,最后用生理盐水调整细胞数量为1×106个,分别接种到裸鼠和BABL/c 小鼠的脂肪垫.比较各组老鼠的成瘤率、成瘤时间以及生存期等实验指标.结果:原位注射1×106个4T1细胞时两组均能成瘤,但是裸鼠的成瘤率高于BABUc小鼠;裸鼠的成瘤大小明显大于BABL/c小鼠;裸鼠的生存期明显短于BABL/c小鼠;裸鼠出现肺转移结节明显多于BABL/c小鼠.结论:不同免疫能力的小鼠对接种相同数量的细胞数可能会产生不同的实验结果,在选择构建小鼠乳腺癌模型的时候一定要综合考虑所选用品系的小鼠是否会对实验结果带来影响.【期刊名称】《天津医科大学学报》【年(卷),期】2018(024)004【总页数】3页(P281-283)【关键词】4T1细胞;乳腺癌;成瘤;生存;转移;小鼠【作者】王硕【作者单位】天津医科大学肿瘤医院生物化学与分子生物学研究室,国家肿瘤临床医学研究中心,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市“肿瘤防治”重点实验室,天津市恶性肿瘤临床医学研究中心,天津300060【正文语种】中文【中图分类】R73在女性人群中乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤,每年将近有160万患者被确诊为乳腺癌,其中30%~40%的乳腺癌患者会发生转移,而超过90%死亡患者发生乳腺癌转移[1]。
我国女性乳腺癌的发病率和死亡率在世界范围内处于中低水平,但是乳腺癌仍然是我国女性最常见的癌症之一,发病仅次于肺癌[2]。
近年来乳腺癌的发病呈现年轻化的趋势,因此对于乳腺癌的研究也越来越多。
在研究乳腺癌的过程中动物模型的构建是研究的关键所在。
肿瘤细胞与小鼠品系的选择也是建立乳腺癌动物模型的基础所在,这些选择都会对小鼠的生物学活性、成瘤率、生存期、肿瘤的恶化情况起着决定性的作用[3]。
4T1小鼠细胞-CELL CULTURE
ATCC ® Number:CRL-2539™Price: $279.00 Designations:4T1 Depositors: BA Pulaski Biosafety Level:1 Shipped:frozen Medium & Serum:See Propagation GrowthProperties:adherent Organism: Mus musculus deposited as mouseMorphology: epithelialSource: Organ: mammary glandStrain: BALB/cfC3HDisease: tumor Permits/Forms: In addition to the MTA mentioned above, other ATCC and/or regulatory permits may be required for the transfer of this ATCC material. Anyone purchasing ATCCmaterial is ultimately responsible for obtaining the permits. Please click here forinformation regarding the specific requirements for shipment to your location.Tumorigenic: Yes Comments: 4T1 is a 6-thioguanine resistant cell line selected from the 410.4 tumor withoutmutagen treatment.When injected into BALB/c mice, 4T1 spontaneously produces highly metastatictumors that can metastasize to the lung, liver, lymph nodes and brain while theprimary tumor is growing in situ.The primary tumor does not have to be removed to induce metastatic growth.The tumor growth and metastatic spread of 4T1 cells in BALB/c mice veryclosely mimic human breast cancer. This tumor is an animal model for stage IV human breast cancer.4T1-induced tumors can be used as a post-operative model as well as a non-surgical model because the 4T1-induced tumor metastasizes spontaneously inboth models with similar kinetics.Because 4T1 is resistant to 6-thioquanine, micro-metastatic cells (as few as 1)can be detected in many distant site organs with better accuracy that mosttumor models. There is no need to count nodules or weight target organs.Propagation: ATCC complete growth medium: The base medium for this cell line is ATCC-formulated RPMI-1640 Medium, Catalog No. 30-2001. To make the completegrowth medium, add the following components to the base medium: fetal bovineserum to a final concentration of 10%. Temperature: 37.0°CAtmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%Preservation: Freeze medium: Complete growth medium 95%; DMSO, 5%Storage temperature: liquid nitrogen vapor temperatureReferences: 49687: Pulaski BA, et al. Immunotherapy with vaccines combining MHC class II/CD80+ tumor cells with interleukin-12 reduces established metastatic diseaseand stimulates immune effectors and monokine induced by interferon gamma.Cancer Immunol. Immunother. 49: 34-45, 2000. PubMed: 1078286449688: Pulaski BA, Ostrand-Rosenberg S. Reduction of established spontaneousmammary carcinoma metastases following immunotherapy with majorhistocompatibility complex class II and B7.1 cell-based tumor vaccines. CancerRes. 58: 1486-1493, 1998. PubMed: 953725249689: Pulaski BA, et al. Cooperativity of Staphylococcal aureus enterotoxin Bsuperantigen, major histocompatibility complex class II, and CD80 forimmunotherapy of advanced spontaneous metastases in a clinically relevantpostoperative mouse breast cancer model. Cancer Res. 60: 2710-2715, 2000.PubMed: 1082514549690: Aslakson CJ, Miller FR. Selective events in the metastatic processdefined by analysis of the sequential dissemination of subpopulations of a mousemammary tumor. Cancer Res. 52: 1399-1405, 1992. PubMed: 1540948ATCC®号码:CRL-2539™价格: $279.00名称:4T1储户:BA普拉斯基生物安全级别:1出货:冻结中等及血清:见传播生长特性:贴生物:小家鼠沉积鼠标形态:上皮资料来源:器官:乳腺株:BALB / cfC3H疾病:肿瘤证/表格:除了在MTA上面提到的,其它ATCC和/或可能需要此ATCC材料的传送管制许可证。
顺铂诱导三阴性乳腺癌4T1耐药小鼠模型的建立
顺铂诱导三阴性乳腺癌4T1耐药小鼠模型的建立盛佳钰;陈红风【摘要】Objective To establish a cisplatin-resistant 4T1 mouse model of triple negative breast cancer .Meth-ods A drug resistant mice model was established with cisplatin ( DDP ) induction and in-vivo/in-vitro tumorigenic ap-proach.Its resistance characteristics were identified by MTT assay .Changes of drug resistance gene ( MDR1, BCRP, MMP7, GST-π) and protein ( P-gp, BCRP, MMP7) expression, and phosphorate-Akt and total-Akt protein expression were evaluated by real-time PCR, immunohistochemistry and western blot method , respectively.Small animal live imaging technology was applied to detect tumorgrowth .Results Resistance fold (RF) of cisplatin-resistant 4T1 mouse model was 12.84.The expression of MDR1, BCRP, MMP 7, GST-πmRNA and P-gp, BCRP, MMP 7 proteins in the resistant mice were higher than that in the non-resistant mice .The result of western blot showed that a statistically higher expression of p-Akt in resistant mice than that in non-resistant mice at protein levels (P<0.01).No significant difference of tumor growth rate was observed between non-resistant and resistant mice ( P>0.05 ) .Given same dose of DDP , resistant mice showed lower sensitivity than non-resistant mice significantly (P<0.01).Conclusions We have successfully established a cis-platin-resistant triple negative breast cancer model in mice , which provides a new platform for further study on chemoresis-tant reversal strategy and individualized clinical treatment of this disease .%目的建立一种耐药性稳定的三阴性乳腺癌4 T1耐药小鼠模型,为研究体内肿瘤耐药机制和逆转药物的筛选奠定实验基础. 方法采用顺铂( DDP)低剂量诱导及体内外交叉致瘤结合的方法建立三阴性乳腺癌耐药小鼠模型;MTT法检测细胞耐药特性;实时荧光定量PCR法分析耐药相关基因MDR1、BCRP、MMP7及 GST-π表达差异;免疫组化分析耐药相关蛋白P-gp、BCRP、MMP7表达差异;蛋白印迹法检测磷酸化Akt(phosphorate-Akt, p-Akt)和总Akt( total-Akt,t-Akt)蛋白表达;小动物成像检测观察肿瘤生长情况. 结果 MTT显示建立的三阴性乳腺癌耐药4T1小鼠模型的耐药指数为12.84;耐药小鼠肿瘤组织中MDR1、BCRP、MMP7、GST-π基因mRNA 的表达量及P-gp、BCRP、MMP7蛋白的表达量均高于非耐药小鼠(P<0.01);Western blot显示,耐药小鼠肿瘤组织的p-Akt蛋白表达明显高于非耐药小鼠,t-Akt蛋白表达没有差异. 非耐药小鼠与耐药小鼠肿瘤组织生长速度未见明显区别(P>0.05). 分别给予这两种模型小鼠相同剂量的DDP治疗后,耐药小鼠对DDP的敏感性明显低于非耐药小鼠(P<0.01). 结论初步建立了三阴性乳腺癌耐药4T1小鼠模型,为三阴性乳腺癌临床个体化治疗及耐药逆转研究等提供了良好的实验动物平台.【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2015(023)005【总页数】8页(P466-473)【关键词】三阴性乳腺癌;肿瘤抗药性;顺铂;动物模型;小鼠【作者】盛佳钰;陈红风【作者单位】上海中医药大学附属龙华医院乳腺科,上海 200032;上海中医药大学附属龙华医院乳腺科,上海 200032【正文语种】中文【中图分类】Q95-33目前认为乳腺癌是一种高度异质性肿瘤,不同的病理特点和分子特征导致其对治疗的反应和预后明显不同。
乳腺癌4T1细胞中过表达鼠白介素-10对宿主抗肿瘤免疫应答的影响
山西医科大学学报,2021年5月,第52卷第5期-559-乳腺癌4T1细胞中过表达鼠白介素-10对宿主抗肿瘤免疫应答的影响王晓倩5李丹丹4,王丹4,王孟影4,贺龙梅2,,王晓琴5马运峰4,*(西安交通大学第一附属医院检验科,西安714061;5西安交通大学基础医学院病原生物学与免疫学系;陕西省中医医院检验科;4西安交通大学转化医学研究院感染免疫研究所;*通讯作者,E-mail:mayynfexg@.co)摘要:目的研究鼠白介素-14(mA-14)对BALB/b小鼠三阴性乳腺癌4T1细胞生长以及荷瘤小鼠抗肿瘤免疫应答的影响。
方法将重组质粒pLexO-PMV-mAD4-GFP-2ure以及p L/ODMVDFP du/分别与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,收集病毒上清感染4T1细胞,从而获得过表达mA-14的细胞株即4T1/mA-14(实验组)以及4T1/GFP(对照组);酶联免疫吸附试验(exzymc linked immuuosorUex-assay,ELISA)以及流式细胞术(Cow cytometera,FCM)检测感染效率及细胞中mIL-14的表达水平;细胞计数检测细胞的增殖能力;应用FCM检测细胞表面CD86、主要组织相容性复合体II类抗原(MHC II)、程序性死亡配体1(p/v/mmed cell death ligand1,PDL1)的表达。
将4T1/GFP、4T1/mAD4细胞分别皮下注射至BALB/p小鼠,建立小鼠乳腺癌皮下移植瘤模型即未治疗组和mA-14治疗组,观察肿瘤生长情况,绘制生长曲线,并使用流式细胞仪检测肿瘤组织中T细胞的变化。
结果成功构建过表达mA-14的4T1细胞,ELAA以及FCM检测结果表明,与对照组比较,实验组的mA-14表达水平显著增加(P<4.45) o与对照组比较,实验组细胞的增殖以及表面分子CD86.MHC I分子、PDL1的表达无显著差异(P>4.25)。
颗粒蛋白前体(PGRN)促进小鼠乳腺癌4T1细胞上皮间质转化与侵袭和迁移
细胞与分子免疫学杂志(Chin J Cell Mol Immunol)2021, 37(2)125.论著.文章编号:1007-8738(2021 )024125"07颗粒蛋白前体(PGRN)促进小鼠乳腺癌4T I细胞上皮间质转化与侵袭和迁移方文丽,岳姝君,甘德露,张典,石翯,姚梦俐,钱胡孙,周婷,陈婷梅*(重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆400016)[摘要]目的探讨颗粒蛋白前体(PGRN)对小鼠乳腺癌4T1细胞侵袭和迁移的影响及其机制。
方法采用1pg/m L PGRN 处理乳腺癌4T1细胞24 h,通过TmnsweU™侵袭实验检测4T1细胞的侵袭能力、划痕实验检测细胞的迁移能力,实时荧光定量 PC R检测4T1细胞上皮转黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的m RN A水平,Western b lo t法检测4T1细胞E-cadherin、vimentin、细胞外信号调节激酶l/2(ERKl/2)、磷酸化的ERKl/2(p-ERKl/2)蛋白水平。
采用1pg/m L PG RN与ERK1/2信号 通路抑制剂U0126(10 jtm d/L)同时处理4T1细胞后,前述方法检测4T1细胞侵袭及迁移能力及E-cadherin、vim entin与p-ERK 蛋白表达的变化。
结果乳腺癌4T1细胞经PGRN处理后,其侵袭及迁移能力明显增强;E-cadherin表达下降,vimentin表达升 高,p-ERKl/2的表达增强;抑制ERK1/2信号通路后,PG RN促进乳腺癌4T1细胞侵袭、迁移及上皮间质转化(EMT)的能力被 明显抑制。
结论PG R N可通过促进EM T及激活ERK1/2通路促进乳腺癌4T1细胞的侵袭及迁移。
[关键词]乳腺癌;颗粒蛋白前体(PGRN); 4T1细胞;细胞侵袭;细胞迁移;上皮间质转化(EMT)[中图分类号]R965, Q279, R737.9, R392-33, R364.5 [文献标志码]AProgranulin (PGRN) promotes invasion and migration of mouse breast cancer 4T1 cells by promoting epithelial-mesenchymal transition of cancer cells and activating ERK1/2 pathwayFANG W enli,YUE Shujun,GAN Delu,ZHANG Dian,SH I He,YAO M engli,QIAN H usun,ZH O U Ting, CHEN Tingm ei*Ministry-of-Education Key Laboratory of Laboratory Medical Diagnostics, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China* Corresponding author, E-m ail:tingmeichen@ cqmu. edu. cn[A b stra ct] Objective To investigate the effect of progranulin (PGRN) on the invasion and migration of mouse breast cancer 4T1 cells and its mechanism. Methods After treated with PGRN (1 pg/mL) for 24 hours, the invasion ability of breast cancer4T1 cells was detected by Transwell™ invasion assay, the migration ability was detected by scratch test, and the epithelial cadherin ( E-cadherin), vimentin mRNA expression was detected by rea卜time fluorescent quantitative PCR. Western blot assay was used to detect the expression of E-cadherin, vimentin, extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) and phosphorylated ERK1/2 (p-E R K l/2). After treated with 1pg/mL PGRN and ERK1/2 signaling pathway inhibitor U0126 (10 pmol/L) simultaneously, the migration and invasion ability of 4T1 cells and the changes in the expression of E-cadherin, vimentin and p-ERK proteins were detected again. Results After treated with PGRN, the migration and invasion capabilities of breast cancer 4T1 cells were significantly enhanced;E-cadherin expression decreased;vimentin and p-ERKl/2 expression increased. After treated with ERK1/2 signaling pathway inhibitor, the ability of PGRN to promote breast cancer 4T1 cell migration, invasion and epithelial-mesenchymal transition (EMT) was significantly inhibited. Conclusion PGRN can promote the migration and invasion of breast cancer 4T1 cells by promoting EMT and activating the ERK1/2 pathway.[Key words] breast cancer;progranulin;4T1 cells;cell invasion;cell migration;epithelial-mesenchymal transition(EMT)收稿日期:2020*08-28;接受日期:2020-11 ~04基金项目:国家自然科学基金(81772844);重庆市研究生科研创新项目(CYS19206)作者简介:方文丽(1996-),女,湖南娄底人,硕士研究生Tel: 023>68485555; E-mail: wenlifl2@* 通讯作者,陈碎梅,E-mail: tingm eichen@cqm 126细胞与分子免疫学杂志(Chin J Cell M ol Immun〇l)2021, 37(2)乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,也是导致 女性癌症死亡的主要原因,目前其发病率仍呈上升趋 势。
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4T1 小鼠乳腺癌细胞
Cat Number:KG338 For Research Use Only
一、组成:
二、客户自备试剂:
1、PBS (凯基货号:KGB5001)
2、Complete growth medium (凯基货号:KGM 12800-500)
3、0.25% (W/V) Trypsin-0.53mM EDTA (凯基货号:KGY0012)
三、细胞简介:
四、常见问题及解决方案:
1、培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。
2、细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。
次日观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞
活力正常,剩余漂浮的细胞可以离心去掉,留10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。
客户收到细胞后请务必仔细阅读细胞注意事项,确保细胞的培养条件一致,如果由于培养条件不一致导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。
由于运输的情况,所以极个别细胞会出现不稳定,客户收到细胞后务必第一时间和我们联系,告知细胞具体情况,以便我们技术人员能及时有效的和老师沟通,不胜感谢!。