生物抗氧化剂清除自由基活性的研究

510nm 处的吸光度升高，这种变化反映了抗氧化剂的抗羟基自
【第一作者】徐超（1982-），女，广西柳州人，助理工程师，研究方向：产品质量监督。
15
由基氧化作用。
2.2.2 实验试剂与设备
2.2.2.1 实验试剂
（1）磷酸盐缓冲液
称取量 NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4 ⋅ 12H2O 3.63g，KH2PO4
16
自由基清除率（%） 自由基清除率（%）
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0 1
5
10
15
20
25
葛根提取物浓度（mg/mL）
图 3 葛根提取物清除自由基活性的研究
3.2.2 邻二氮菲-Fe2+还原法 分别配制了不同的浓度的葛根提取物溶液，当葛根提取物
浓度分别 1mg/mL、5 mg/mL、10 mg/mL、15 mg/mL、20 mg/mL、 25 mg/mL 时，测量的吸光度及相应的清除率如图 4。
（2）磷 酸 盐 缓 冲 液（PBS）：称 取 量 NaCl 8g、KCl 0.2g、
Na2HPO4⋅ 12H2O 3.63g、KH2PO4 0.24g，用 900mL 双蒸水溶解，加
盐酸调 pH 值至 7.4，加水定容至 1L，常温保存备用。
2.1.2.2 实验设备
分光光度计。
2.1.3 实验方法
从图 2 可以看出，邻二氮菲-Fe2+还原法测定的清除率与红景 天浓度的关系，红景天提取物浓度在 0.1mg/mL 至 0.6mg/mL 清除率呈正相关，并且在 0.2mg/mL 至 0.6mg/mL 的浓度范围内 有比较好的线性关系。当红景天提取物溶液浓度大时，样品的 吸收效应使背景加深影响测定，使在这个浓度区间测量的灵敏 度和准确度都不高，但是当清除率小于 25%测定结果的绝对误 差大，据此活性测定浓度范围在 0.4mg/mL 至 0.6mg/mL，清除率 在 36%至 72%。
网络出版时间：2015-06-11 16:28 网络出版地址：/kcms/detail/45.1165.TS.20150611.1628.007.html
2015 年 6 月 第 6 期（总第 199 期）
轻工科技
LIGHT INDUSTRY SCIENCE AND TECHNOLOGY
食品与生物
生物抗氧化剂清除自由基活性的研究
徐超
（广西玉林市质量技术监督局，广西 玉林 537000）
【摘 要】 人体内自由基的产生与上百种疾病有着密切的联系，除正常代谢外，生存环境与生活方式中有大量促自由基产生
的因素，可导致脂质、蛋白质和 DNA 的氧化性退化、激活致癌原、抑制胞内抗氧化防御系统等。因此，有必要寻找安全有效的生物抗
0.24g，用 900mL 双蒸水溶解，加盐酸调 pH 值至 7.4，加水定容至
1L，常温保存备用。
（2）邻二氮菲，硫酸亚铁，去离子水，双氧水。
2.2.2.2 实验设备
分光光度计，保温箱。
2.2.3 实验方法
（1）吸取 1.5mL 的 5mM 邻二氮菲，加入 4.0mL 的 150mM，
pH=7.4 的磷酸盐缓冲液，充分混匀后再加入 1.0mL 的 7.5mM 硫
从图 4 可以看出，邻二氮菲-Fe2+还原法测量的清除率与葛根 浓度的关系，葛根提取物浓度在 1mg/mL 至 25mg/mL 与清除率 呈正相关，并且在 1mg/mL 至 20mg/mL 的浓度范围内有比较好 的线性关系。超过 20mg/mL 后，即使葛根提取物浓度溶液的浓
度增加，清除率提高不大，而且当葛根提取物溶液浓度大时，样
率的计算：DPPH·清除率/%=（1-
A
- A 样品
对照
A空白
）。
2.2 邻二氮菲 -Fe2+ 还原法
2.2.1 实验原理
过氧化氢产生的羟基自由基将邻二氮菲-Fe2+溶液氧化为邻
二氮菲-Fe3+后，它在 510nm 处最大吸收峰消失；加入抗氧化剂溶
液后，因为抗氧化剂溶液具有消除羟基自由基的作用，所以使在
（1）DPPH：1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-Diphenyl-2-pic-
rylhydrazyl radical 2，2-Diphenyl-1-（2，4，6-trinitrophenyl）hydra-
zyl）分子式：C18H12N5O6 分子量：394.32 暗紫色大棱柱形晶体。
mp127～129 度（分解）。一般试剂含量不小于 98％。
10 mg/mL、15 mg/mL 葡萄籽提取物溶液。
3 结果与分析
3.1 红景天提取物清除自由基活性的研究 3.1.1 DPPH·法
分别配制了不同的浓度的红景天提取物溶液，当红景天提 取物浓度分别为 0.1mg/mL、0.2 mg/mL、0.3 mg/mL、0.4 mg/mL、 0.5 mg/mL、0.6 mg/mL 时，测量的吸光度及相应的清除率如图 1。
从图 1 可以看出清除率与红景天浓度的关系，红景天提取物 浓度在 0.1mg/mL 至 0.6mg/mL 与清除率呈正相关，并且在 0.1mg/ mL 至 0.5mg/mL 的 浓 度 范 围 内 有 比 较 好 的 线 性 关 系 。 超 过 0.5mg/mL 后，即使红景天提取物浓度溶液的浓度增加，清除率提 高不大，而且当红景天提取物溶液浓度大时，样品的吸收效应使 背景加深影响测定，使在这个浓度区间测量的灵敏度和准确度 都不高，但是当清除率小于 25%测定结果的绝对误差大，据此活 性 测 定 浓 度 范 围 在 0.2mg/mL 至 0.5mg/mL，清 除 率 在 38% 至
从图 3 可以看出，DPPH·法测量的清除率与葛根浓度的关 系，葛根提取物浓度在 1mg/mL 至 25mg/mL 与清除率呈正相关， 并且在 5mg/mL 至 20mg/mL 的浓度范围内有比较好的线性关 系。超过 20mg/mL 后，即使葛根提取物浓度溶液的浓度增加，清 除率提高不大，而且当红景天提取物溶液浓度大时，样品的吸收 效应使背景加深影响测定，使在这个浓度区间测量的灵敏度和 准确度都不高，但是当清除率小于 25%测定结果的绝对误差大， 据此活性测定浓度范围在 5mg/mL 至 20mg/mL，清除率在 32%至 79%。
氧化剂补充人体从食物中所摄取的抗氧化维生素的不足。此次研究分别用 DPPH ⋅ 法、邻二氮菲-Fe2+还原法测定红景天提取物、葛根
提取物、葡萄籽提取物的清除自由基和抗氧化活性，研究发现 DPPH ⋅ 法、邻二氮菲-Fe2+还原法均可以用于红景天提取物、葛根提取
物、葡萄籽提取物抗氧化性能力的测定。在一定的浓度范围内，随着样品提取物溶液浓度的提高，其抗氧化性、清除自由基的能力也
酸亚铁，立即混匀后加入 2.5mL 的去离子水，最后加入 1%双氧
水 1.0mL。至于 37 ℃ 的保温箱种 60 分钟后取出，在 536nm 波长
处测定吸光度为 A1。
（2）吸取 1.5mL 的 5mM 邻二氮菲，加入 4.0mL 的 150mM，
pH=7.4 的磷酸盐缓冲液，充分混匀后再加入 1.0mL 的 7.5mM 硫
酸亚铁，立即混匀后加入 3.5mL 的去离子水。至于 37 ℃ 的保温
箱种 60 分钟后取出，在 536nm 波长处测定吸光度为 A3。
2.2.4 清除率的计算[4]
清除率/%=
A2 - A1 A3 - A1
× 100
2.3 生物抗氧化剂的配制
量取 50%乙醇，分别溶解样品提取物[5（] 红景天提取物、葛根
83%。
自由基清除率（%）
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
红景天浓度（mg/mL）
图 1 红景天提取物清除自由基活性的研究
3.1.2 邻二氮菲-Fe2+还原法 分别配制了不同的浓度的红景天提取物溶液，当红景天提
取物浓度分别为 0.1mg/mL、0.2 mg/mL、0.3 mg/mL、0.4 mg/mL、 0.5 mg/mL、0.6 mg/mL 时，测量的吸光度及相应的清除率如图 2。
2 实验方法
2.1 DPPH·法清除自由基活性的方法 2.1.1 实验原理
DPPH·法操作非常简单，不用复杂的检测仪器，是用反应体 系颜色的改变来评价试样抗氧化，DPPH·法被很多实验室用作 抗氧化剂的抗氧化能力评价方法。DPPH·是一种比较稳定的自 由基。DPPH·反应可能是 ET 机制[2]，也可能是 HAT 机制[3]，或者 是两者共同作用的结果。空间位阻效应是决定 DPPH·反应的重 要因素，DPPH·反应比较难与空间位阻大的抗氧化剂发生反应， 与空间位阻小的抗氧化性的反应机制可能不同，反应达到平衡 所用的时间也比较长。自由基因为异常的活泼，并且寿命比较 短，所以一般实验方法产生的自由基基本上不可以被精准的量 化测量，但是如果根据自由基产生的后果，例如说氧化还原产物
提取物、葡萄籽提取物），分别配制成 0.1mg/mL、0.2 mg/mL、0.3
mg/mL、0.4 mg/mL、0.5 mg/mL、0.6 mg/mL 的 红 景 天 提 取 物 溶
液，1mg/mL、5 mg/mL、10 mg/mL、15 mg/mL、20 mg/mL、25 mg/
mL 的葛根提取物溶液，0.1mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL、
相应提高。
【关键词】
DPPH
⋅
；邻二氮菲
-F
2 e
+
；红景天提取物；葛根提取物；葡萄籽提取物
【中图分类号】 Q617