第7章_细菌感染的检测方法与防治原则

自动微生物鉴 定及药敏分析 系统
性能特点
自动化程度较高、检测速度 快、可鉴定细菌种类及药敏 试验种类多、数据处理软件 功能强大、结果准确可靠
18
（三）细菌抗原的检测
凝集试验
用已知抗体检测待检标本中未知的颗粒性抗原。
协同凝集试验
IgG的Fc段与金葡菌的SPA结合，Fab段与细菌抗原 结合后，可使金葡菌发生肉眼可见的凝集现象。 用已知的荧光抗体检测待检标本中的未知抗原，借 助荧光显微镜观察。
采用人工主动免疫方法通常称为预防接种 （prophylactic inoculation）或疫苗接种（vaccination）。
特异性预防
疫苗
类毒素
26
疫苗的种类
– – – – – – 死疫苗：伤寒疫苗、霍乱疫苗 活疫苗（减毒活疫苗）：卡介苗（BCG） 亚单位疫苗：肺炎链球菌荚膜多糖 基因工程疫苗 载体疫苗 核酸疫苗
• 按照药物的抗菌作用特点及其体内过程特点选 择用药； • 抗菌药物治疗方案应综合患者病情、病原菌种 类及抗菌药物特点制订。
34
复习思考题
1. 取脑脊液进行细菌感染的检查，用什么免疫学方法可以进 行快速诊断？ 2. 检查病原菌抗原和血清中的特异性抗体选用的免疫学方法 相同吗？为什么？
3. 自动微生物鉴定和药敏分析系统的原理和特点是什么？
27
活疫苗与死疫苗的比较
区别点 活疫苗 死疫苗
制品特点
制备方法 接种次数和接种量 接种反应 免疫的类型 免疫效果 毒力回升与安全性 疫苗的稳定性 保存
减毒或无毒的疫苗
通过非正常培养减毒株 1次，量小 可在体内增殖，类似轻型 感染或隐性感染 体液免疫和细胞免疫 1～5年 有可能，对免疫缺陷者有 危险 相对不稳定 不易保存，4℃存活2周， 真空冻干可长期保存
– 能够完全抑制培养基中细菌生长的最低药物浓度
• 最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration, MBC）
– 能够杀死培养基中细菌的最低药物浓度
13
纸片扩散法
含有定量抗生素的纸片贴在已接种待检病原菌
的琼脂平板上，纸片上的抗生素向周围琼脂中扩散，
形成了逐渐减小的药物浓度梯度。由于致病菌对各
16S rRNA 基因序列 分析
基因芯片 技术
20
（五）生物芯片技术
将核酸片段、蛋白质或酶、抗原或抗体、
细胞及组织等生物样品有序地固定于硅片、尼 龙膜等固相支持物上，在一定的条件下进行生 化反应。用化学荧光法、酶标法或同位素法显 示反应结果，通过特定的仪器读取与收集数据， 并用软件进行数据分析，从而判断样品中靶分 子的种类和数量。
利用双向琼脂扩散与电泳技术相结合的方法。由于电泳 和电渗作用，抗原向正极移动，抗体向负极移动，在比 例合适处形成肉眼可见的沉淀线。
免疫荧光技术
对流免疫电泳
酶免疫技术
用酶标记的抗体检测特异性可溶性抗原的实验技术。
19
（四）细菌核酸的检测
PCR（含RTPCR、real time PCR等）
核酸杂交 技术
种抗生素的敏感程度不同，在药物纸片周围便出现
抑制病原菌生长而形成的大小不同的抑菌环。根据
抑菌环的有无和大小来判定试验菌对该抗菌药物耐
药或敏感。
14
Fra Baidu bibliotek
稀释法
• 以一定浓度的抗菌药物与含有待检细菌的 培养基进行一系列不同倍数稀释（通常为 双倍稀释），经培养后观察其最低抑菌浓 度。 • 稀释法
– 琼脂稀释法——使用琼脂培养基 – 肉汤稀释法——使用肉汤培养基
自然免疫 主动免疫：隐 性或显性感染 被动免疫：获 得母体的Ab(胎 盘/初乳) 人工免疫 主动免疫：疫 苗或类毒素等 被动免疫：抗 毒素或丙种球蛋 白等
25
一、人工主动免疫
人工主动免疫（artificial active immunization）是 将疫苗或类毒素接种于人体，刺激机体免疫系统产生特 异性免疫应答，机体主动产生获得性免疫力的一种防治 微生物感染的措施，主要用于特异性预防。
死菌，仍保持免疫原性
通过物理化学方法使病原体失 活 2～3次，量大 在体内不增殖，可出现发热、 全身或局部肿痛等反应 体液免疫 0.5～1年 不可能，安全性好 相对稳定 易保存，4℃可保存1年以上
28
新型疫苗
亚单位疫苗
基因工程疫苗 重组载体疫苗 核酸疫苗
29
二、人工被动免疫
人工被动免疫（artificial passive immunization）是输入含有特异性抗体的 免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体或细胞因 子等免疫制剂，使机体立即获得特异性免 疫力的过程，可用于某些急性传染病的紧 急预防和治疗。
21
三、细菌感染的血清学诊断

用已知的细菌或其特异性抗原检测病人血清 或其他体液中的抗体及其效价的变化，可以 作为感染性疾病的辅助诊断。 由于本实验多采取病人血清检测抗体，故常 称为血清学诊断（serological diagnosis）。 一般适用于抗原性较强的细菌，以及病程较 长的感染性疾病。也可用于调查人群对某病 原菌的免疫应答水平以及检测疫苗接种后的 预防效果。
摘自 《临床微生物检验》（第五版）人民卫生出版社
17
自动微生物鉴定及药敏分析系统
微生物数码鉴定原理
计算并比较数据库内每 个细菌条目对系统中每 个生化反应出现的频率 总和 药敏检测原理 微型化的肉汤稀释试验 根据CLSI标准得到相 应敏感度：敏感、中度 敏感和耐药 系统组成 测试卡（板）、菌液 接种器、培养和监测 系统、数据管理系统
4. 若检测细菌核酸，可选择的实验方法有哪些？其原理与特
点是什么？
5. 紧急预防细菌感染时应采用的方法是什么？为什么？
35
15
抗生素连续梯度法（E-test法）
将稀释法和扩散法的原理相结合，使用预先设
定的稳定且连续的抗菌药物浓度梯度，采用琼脂培 养基培养以确定不同抗菌药物对微生物的最低抑菌 浓度（MIC）。
16
自动微生物鉴定及药敏分析系统
将培养基上分离的可疑致病菌配制成纯菌液，放入自动微 生物鉴定及药敏分析系统中，通过计算机自动扫描、读数、 分析、最后报告鉴定及药敏结果。
• 抗菌药物一般是指具有杀菌或抑菌活性的药物
以及由微生物合成的抗生素类药物。
• 正确合理应用抗菌药物是提高疗效、降低不良
反应发生率以及减少或减缓细菌耐药性发生的
关键。
33
抗菌药物治疗性应用的基本原则
• 诊断为细菌性感染者，方有指征应用抗菌药物；
• 尽早查明感染病原，根据病原种类及细菌药物
敏感试验结果选用抗菌药物；
22


细菌性感染的血清学诊断
血清学试验 直接凝集反应 乳胶凝集试验 疾病举例 肥达试验、外斐试验 脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌
沉淀试验 间接免疫荧光技术
补体结合试验 中和试验 酶联免疫吸附试验
梅毒 各类微生物感染
Q热 风湿热（抗O试验） 各类微生物感染
23
第二节 细菌感染的特异性预防
24
机体获得特异性免疫力的方式
30
两种人工免疫方法的比较
区别点
免疫物质 接种次数 免疫出现时间 免疫维持时间 用途
人工主动免疫
抗原 1～3次
人工被动免疫
抗体或细胞因子等 1次
慢（注射后2～4w） 快（注射后立即出现） 长（数月～数年） 多用于预防 短（2～3w） 多用于治疗或紧急预防
31
第三节 细菌感染的治疗原则
32
• 主要采用抗菌药物来治疗细菌感染。
第七章 细菌感染的检测方法与 防治原则
1
本章重点与难点
• 细菌感染性标本的采集原则 • 细菌感染的实验室检验程序 • 常用的血清学诊断方法
• 适应性免疫的获得方式
• 人工免疫的概念和常用的免疫制剂 • 细菌感染的治疗原则
2
第一节 细菌感染的实验诊断
3
细菌感染的实验室检验方法
形态学检查
细菌培养、形态学检查
在血平板上的肺炎链球菌菌落
10
生化试验
肠道感染细菌在含铁双糖培养基上的生化反应
11
血清学鉴定
• 利用已知的特异性抗体检查未知的纯培养细菌 • 对细菌进行种、群、型的鉴定
沙门菌血清学鉴定
摘自 《临床微生物检验》（第五版）人民卫生出版社
12
药物敏感试验
• 纸片扩散法、稀释法、E-test法…… • 最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）
4
一.临床标本的采集与运送原则
标本采集
标本运送
早期采集 无菌操作 选感染部位 最佳时间采集 双份血清
5
做好标记
置于密闭容器内 尽快送检
二、细菌的检测 （一）细菌的形态学检查
暗视野 显微镜 相差 显微镜
不染色 标本
主要用于检查在生活状态下 细菌的动力及其运动情况
革兰 染色 抗酸 染色
荧光金胺 O染色 其他 特殊染色
含菌 标本
生物试验、血清学鉴定
细菌分离培 养与鉴定 抗原 检测
动物试验、药物敏感试验
凝集试验、免疫荧光技术 酶免疫技术、免疫印迹试验等
可疑细菌 感染
细菌成 分检测
核酸杂交、PCR
核酸 检测
16S rRNA基因序列分析 基因芯片等
直接凝集试验
血清（双 份）标本
特异性抗 体检测
乳胶凝集试验
补体结合试验 ELISA等
细菌的染色
7
革兰染色
葡萄球菌（革兰染色阳性）
大肠埃希菌（革兰染色阴性）
8
(二) 细菌分离培养与鉴定
细菌检查的一般程序
脓/ 痰/ 尿 涂片、染色、镜检 生化反应 血清学鉴定 药敏试验 动物实验
标本
分离培养
纯培养
血、脑 脊液等
增菌
9
细菌的分离培养
• • • • • 培养基的成分 pH 培养时间 温度 气体环境