临检--血红蛋白测定 图文

血红蛋白测定
【检测原理】
1.氰化高铁血红蛋白HiCN测定法：除SHb外
ICSH推荐参考方法，具有操作简单、显色快、结果稳定可靠、读取吸光度后可直接定值等优点。

致命的弱点是氰化钾（KCN）试剂有剧毒，使用管理不当可造成公害。

氰化高铁血红蛋白测定法操作
（1）直接测定法
①加转化液：试管内加5ml HiCN转化液
②采血与转化：取全血20μl，加到盛有转化液的试管底部，用上清液反复冲洗吸管3次，充分混合，静置5min
③测定：以符合WH0标准的分光光度计，波长540nm处，光径（比色杯内径）1.000cm，HiCN转化液或蒸馏水调零，测定吸光度（A）
④计算：根据样本的吸光度（A）直接计算出血红蛋白浓度（g/L）
（A为测定管吸光度，44为毫摩尔消光系数，64458/1000为1mol/L Hb溶液中所含Hb 克数，251为稀释倍数）
（2）HiCN标准液比色法测定
①标准曲线绘制和K值计算
HiCN参考液（50g/L、100g/L、150g/L、200g/L），分别测得540nm处的吸光度，以参考液血红蛋白含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线或求出K值。

②样本吸光度（A）
③通过标准曲线查出样本血红蛋白浓度，或用K值计算，血红蛋白浓度Hb（g/L）＝K ×A
注意事项
（1）标本：异常血浆蛋白质、高脂血症、白细胞数超过30×109/L、脂滴等可产生浊度，干扰Hb测定。

（2）HiCN转化液是一种低离子强度、pH近中性的溶液（7.2±0.2）。

样本中白细胞过高或球蛋白异常增高时，HiCN比色液会出现浑浊。

解决方法：白细胞过高引起的浑浊，可离心后取上清液比色；球蛋白异常增高（如肝硬化者）引起的浑浊，可向比色液中加入少许固体氯化钠或碳酸钾，混匀后溶液澄清再比色。

（3）氰化钾试剂是剧毒品，测定后的废液应收集于广口容器中，首先以水稀释废液（1:1），再按每升上述稀释液加次氯酸钠35ml，充分混匀，敞开容器，放置15h以上，使CN一氧化成C02和N2挥发，或水解成C032-和NH4＋，再排入下水道。

废液不能直接与酸性溶液混合，因为氰化钾遇酸可产生剧毒的氰氢酸气体。

HiCN转化液应贮存在棕色有塞玻璃瓶中，不能贮存在塑料瓶中，否则会使CN-丢失，测定结果偏低。

HiCN转化液在4℃保存一般可数月，不能在0℃以下保存，因为结冰可使高铁氰化钾还原，试剂失效。

2.十二烷基硫酸钠血红蛋白SDS测定法：
具有操作简单、呈色稳定、准确性和精确性符合要求、无公害等优点。

但由于摩尔消光系数尚未最后确认，不能直接用吸光度计算Hb浓度，而且SDS试剂本身质量差异较大，会影响检测结果。

3.HiN3最大吸收峰542nm，显色快，结果稳定。

碱羟血红蛋白（AHD575）测定法：该法试剂简单，呈色稳定，无公害，吸收峰在575nm，可用氯化血红素作为标准品。

但仪器多采用540nm左右滤光板，限制了此法使用。

CTAB血红蛋白测定法：该法试剂溶血性强又不破坏白细胞，适用于仪器自动检测Hb和白细胞。

缺点是测定结果的准确度和精密度不佳。

多参数血细胞分析仪：优点是操作简单、快速，同时可获得多项红细胞参数，血红蛋白测定原理与手工法相似，仪器法测定精度（CV）约为1%。

【参考值】
成年男性：120～170g/L
成年女性：110～150g/L
新生儿：170～200g/L
【临床意义】
生理变化
（1）年龄：随年龄增长，Hb可增高或减低，和红细胞变化相似。

（2）时间：红细胞和血红蛋白量有日内波动，上午7时达高峰，随后下降。

Hb的临床意义与红细胞计数相似，但判断贫血程度优于红细胞计数。

（1）某些疾病，血红蛋白和红细胞浓度不一定能正确反映全身红细胞的总容量。

如大量失血时，在补充液体前，虽循环血容量缩小，但血液浓度很少变化，从血红蛋白浓度来看，很难反映出存在贫血。

如水潴留时，血浆容量增大，即使红细胞容量正常，但血液浓度减低，从血红蛋白浓度来看，已存在贫血。

失水时，血浆容量缩小，即使血液浓度增高，但红细胞容量减少，从血红蛋白浓度来看，贫血不明显。

（2）发生大细胞性贫血或小细胞低色素性贫血时，红细胞计数与血红蛋白浓度不成比例。

大细胞性贫血的血红蛋白浓度相对偏高，小细胞低色素贫血的血红蛋白减低，但红细胞计数可正常。