抗氧化活性研究方法 PPT
抗氧化物活性测定方法总结
抗氧化物活性测定方法总结抗氧化物活性测定方法是通过对样品中的抗氧化物质含量和抗氧化活性进行定量分析，评估其对自由基的清除能力和抗氧化能力。
随着抗氧化研究的不断深入，测定方法也逐渐完善。
以下是对常见的抗氧化物活性测定方法的总结。
1. ORAC法（氧化应激反应活性测定法）：该方法通过测定样品清除自由基的能力来评估其抗氧化活性。
实验中，将样品与荧光试剂（如2,2'-azobis(2,4-dimethylvaleronitrile)）共同作用，观察其清除自由基的能力，并通过建立标准曲线计算样品的ORAC值。
2.DPPH法（1,1-二苯基-2-苦味基-苦味酸磷）：该方法是一种常用的快速测定抗氧化活性的方法。
实验中，将样品与DPPH稳定自由基共同作用，通过比色反应观察DPPH自由基被样品清除的程度，从而评估抗氧化活性。
3.ABTS法（2,2'-联氮双5-苯砜酸）：该方法通过ABTS离子自由基的生成和清除反应来测定样品的抗氧化活性。
实验中，ABTS与过氧化氢反应生成ABTS离子自由基，通过观察样品对其的清除能力来评估抗氧化活性。
4.FRAP法（亚铁离子还原能力）：该方法基于样品对人造抗坏血酸（Fe3+）的还原能力，通过测量还原后的Fe2+离子的生成量来评估抗氧化活性。
实验中，将样品与Fe3+离子反应生成Fe2+离子，通过比色反应来测定Fe2+的含量。
5. 碘标法（Iodine value）：该方法用于测定油脂、脂肪等样品的抗氧化活性。
实验中，将已知量的碘与样品中的不饱和化合物反应，在光反应下观察反应终点的颜色变化，并根据标准曲线计算样品的抗氧化活性。
6. 硝酸盐法（Nitrite method）：该方法用于测定样品中亚硝酸盐的含量，从而评估其抗氧化活性。
实验中，样品经过还原反应生成亚硝酸盐，然后与DANO（N-乙基-N-（2-苯基乙基）-对硝基苯胺）反应生成稳定的偶氮染料，通过比色测定反应终点的吸光度来计算样品中亚硝酸盐的含量。
《NADH氧化酶》课件
NADH氧化酶是生物体内能量代谢的关键酶之一，它参与了 多种能量代谢过程，如糖酵解、三羧酸循环等。此外， NADH氧化酶还参与了细胞信号转导过程，可以通过调节其 活性来影响细胞的生长、分化等生物学过程。
NADH氧化酶的分类
要点一
总结词
NADH氧化酶可以分为两大类，即线粒体NADH氧化酶和 细胞质NADH氧化酶。
新催化机制的发现
01
随着对NADH氧化酶研究的深入，未来可能会发现新的催化机
制和调控方式。
药物设计与发现
02
NADH氧化酶作为生物体内重要的代谢酶，未来可能在药物设
计与发现方面发挥重要作用。
生物工程应用
03
利用NADH氧化酶在生物能源、生物材料等方面的应用，开发
出更加高效、环保的生物工程技术。
THANKS
关重要。
NADH氧化酶在抗氧化应激中的作用
总结词
NADH氧化酶具有抗氧化应激的作用，能够 清除活性氧自由基，保护细胞免受氧化损伤 。
详细描述
NADH氧化酶能够催化NADH的氧化，生成 NAD+，同时产生大量的活性氧自由基。这 些自由基能够清除细胞内的有害物质，如超 氧阴离子和氢氧根离子等，从而保护细胞免 受氧化损伤。
详细描述
NADH氧化酶是一种生物酶，其主要功能是将NADH氧化成NAD+。在生物体 的能量代谢过程中，NADH是重要的中间产物，而NADH氧化酶则负责将 NADH进行氧化，使其参与到其他代谢过程中。
NADH氧化酶的生物学功能
总结词
NADH氧化酶在生物体的能量代谢、细胞信号转导等方面具 有重要作用。
《NADH氧化酶》PPT课件
• NADH氧化酶的概述 • NADH氧化酶的结构与性质 • NADH氧化酶的生物合成与调控 • NADH氧化酶在生物体内的应用 • NADH氧化酶的研究进展与展望
食品成品中抗氧化活性的检测方法研究
食品成品中抗氧化活性的检测方法研究引言食品中的抗氧化活性是食品质量和营养价值的一个重要指标。
抗氧化活性不仅可以延缓食品的衰老和品质变化，还可以对抗自由基的损害，减少慢性疾病的发生风险。
因此，对食品抗氧化活性进行准确的检测具有重要意义。
本文将介绍常用的食品成品中抗氧化活性的检测方法，并对其优缺点进行分析。
一、化学法化学法是一种常见的食品抗氧化活性检测方法，常用的化学法有DPPH法、抗坏血酸法和总酚法等。
这些方法主要通过与氧化剂反应产生颜色变化或电子转移来评估食品中的抗氧化能力。
其中，DPPH法是一种简单易行的方法，通过检测食品成品中抗氧化剂与DPPH自由基发生反应时产生的颜色变化程度来判断样品的抗氧化活性。
抗坏血酸法则是通过检测食品样品中抗坏血酸的含量来评估其抗氧化活性。
总酚法是通过测量食品中的总酚含量来确定其抗氧化能力。
这些方法简便易行，且成本较低，是常用的食品抗氧化活性检测方法。
然而，化学法也存在一些局限性。
首先，这些方法只能评估样品中某一种抗氧化剂的抗氧化活性，不能全面评估样品的整体抗氧化能力。
其次，由于食品中存在多种复杂的化合物，这些方法往往无法准确区分其中的抗氧化剂。
因此，在实际应用中需要结合其他方法进行综合分析。
二、生物法生物法是近年来新兴的食品抗氧化活性检测方法，涉及到生物学方面的研究。
生物法的一种常见方法是细胞实验法，利用细胞对氧化应激的响应来评估食品中的抗氧化活性。
这种方法可以模拟人体内的环境，较好地反映食品对于人体健康的实际影响。
例如，使用人体肝细胞株进行细胞实验，通过测量细胞存活率、ROS产生水平等指标来评估样品的抗氧化能力。
生物法的主要优势在于可以全面评估样品的整体抗氧化能力，且具有较好的生物学意义。
然而，生物法也存在一些限制。
首先，该方法在实验操作上较为繁琐，需要较长的实验时间。
其次，细胞实验法所涉及的细胞株选择和实验条件的控制都会对结果产生影响，需要进行更多的标准化工作。
抗氧化活性检测方法的研究进展
抗氧化活性检测方法的研究进展抗氧化活性是指抵抗自由基或氧化物对生物体细胞的损害能力，具有重要的生物学和医学意义。
因此，研究抗氧化活性的检测方法对于评价抗氧化剂的活性和开发新的抗氧化剂具有重要意义。
随着科技的发展，研究人员不断提出新的抗氧化活性检测方法，以满足不同的需求。
本文将对抗氧化活性检测方法的研究进展进行综述。
目前，常用的抗氧化活性检测方法主要包括化学法、生物学法和电化学法。
化学法是最早发展的抗氧化活性检测方法之一，其原理是通过测定抗氧化剂与氧自由基或氧化物的反应程度来评估其抗氧化活性。
常用的化学法包括DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）自由基法、ABTS（2,2'-联氨基二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸))自由基法和Folin-Ciocalteu法。
DPPH 自由基法是一种简单、快速的测定方法，但其对抗氧化剂的浓度敏感，且不能区分氧化还原反应和酸碱中和反应。
ABTS自由基法是一种灵敏度较高的测定方法，但其对抗氧化剂的浓度也很敏感。
Folin-Ciocalteu法是一种测定总抗氧化能力的方法，但其结果可能受到样品的颜色和浊度的影响。
生物学法是通过测定抗氧化剂对生物体内氧自由基或氧化物的清除能力来评估其抗氧化活性。
常用的生物学法包括超氧化物歧化酶（SOD）活性测定法、还原力测定法和DNA损伤抑制法。
SOD活性测定法是一种常用的测定方法，其原理是通过测定抗氧化剂对超氧阴离子的清除能力来评估其抗氧化活性。
还原力测定法是一种简单、快速的测定方法，其原理是通过测定抗氧化剂对还原剂的还原能力来评估其抗氧化活性。
DNA损伤抑制法是一种测定抗氧化剂对DNA氧化损伤的抑制能力的方法，但其结果受到DNA浓度和pH值的影响。
电化学法是一种新兴的抗氧化活性检测方法，其原理是通过测定抗氧化剂在电化学系统中的电化学反应来评估其抗氧化活性。
常用的电化学法包括循环伏安法、方波伏安法和差分脉冲伏安法。
循环伏安法是一种常用的测定方法，其原理是通过测定抗氧化剂在电极上的氧化还原过程来评估其抗氧化活性。
抗氧活性的测定
园艺科学研究方法——园艺植物育种研究Ⅱ抗氧活性的测定 一、实验目的：1、掌握FRAP 法测抗氧化活力的方法；2、常见水果、蔬菜的抗氧化能力比较。
二、实验原理：Ferric-tripyridyltriazine(Fe3+-TPTZ)三、仪器、耗材：离心机、离心管、离心管，移液器、分光光度计、水浴锅、塑料比色杯、试剂瓶，吸水纸，枪头、量筒、大研钵； 苹果、青椒、葡萄、胡萝卜、番茄、芒果。
四、实验内容：1.不同果、蔬抗氧化物质的提取用自来水、蒸馏水反复冲洗干净后，分离果肉称取1～5 g ，在研钵内按1：9比例加入蒸馏水，研磨成匀浆液，10 000 r ／min 离心10 min ，取上清按下述FRAP 法测定抗氧化活性，每份样品重复测定5次。
2.FRAP 测定方法操作Fe2+-TPTZ 样品中总抗氧化能力抗氧化剂antioxidant 593nm 测定取适量样品上清(必要时稀释)，加入FRAP试剂，混匀后37℃反应10 min，593 nm 测定吸光度，以1.0 mM FeSO4为标准．样品抗氧化活性以达到同样吸光度所需的FeSO4的毫摩尔数表示。
（1）FRAP试剂准备100 ml醋酸缓冲液+ 10 ml TPTZ溶液+ 10 ml三氯化铁溶液+ 12 ml双蒸水，混匀，37℃保温。
（1）2 ml FRAP试剂+双蒸水1 ml，4 min后593 nm调零。
（2）2 ml FRAP试剂+100 ul 提取液+双蒸水900 ul，4 min后593nm 测量。
五、数据整理：三次重复的不同浓度Fe2+对应的吸光度Fe2+浓度（mM）吸光度(A) 平均值（A）第一次第二次第三次1.0 1.181 1.182 1.177 1.180 0.8 1.198 1.196 1.185 1.193 0.6 1.195 1.192 1.185 1.191 0.4 1.167 1.168 1.163 1.166 0.2 1.006 1.021 1.009 1.012 0.1 0.631 0.620 0.623 0.625 各种材料FRAP法抗氧化活性的测定重测量值一测量值二测量值三平均值（A) 抗氧化活性种类青椒 1.170 1.294 1.257 1.240 ＞1.00胡萝卜0.266 0.366 0.456 0.363 0.04苹果0.912 1.039 1.011 0.987 0.16葡萄0.739 0.703 0.729 0.724 0.12番茄 1.021 1.012 1.034 1.022 0.21芒果 1.071 1.069 1.067 1.069 0.23六、结果分析由表格得，胡萝卜的抗氧化活性最低，青椒的抗氧化活性最高。
抗氧化活性测定方法
抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定方法在食品、药物、化妆品以及生物学研究中具有重要的应用价值。
抗氧化活性是指物质对自由基的清除能力，其测定方法可以评估物质的抗氧化性能和保护细胞免受氧化损伤的能力。
本文将介绍一些常用的抗氧化活性测定方法。
一、DPPH自由基清除法DPPH自由基清除法是目前应用最广泛的抗氧化活性测定方法之一、该方法基于DPPH自由基的紫色溶液，在受到氧化损伤时会褪色。
通过测定样品对DPPH自由基的清除能力，可以评估其抗氧化活性。
实验步骤：1.准备0.1mM的DPPH溶液。
2.取一定量的样品，加入适量的溶剂溶解。
3.取不同浓度的样品溶液，加入相同量的DPPH溶液。
4.静置反应一定时间后，通过测量溶液的吸光度变化，计算出样品的抗氧化活性。
二、还原能力测定法还原能力测定法是一种常用的抗氧化活性测定方法。
该方法基于物质对氧化剂的还原能力，通过测定还原剂浓度与吸光度之间的关系，评估样品的抗氧化活性。
实验步骤：1.准备一系列不同浓度的还原剂溶液。
2.取一定量的还原剂溶液，加入适量的氧化剂溶液。
3.静置反应一定时间后，通过测量溶液的吸光度变化，计算出还原剂的浓度与吸光度之间的关系。
4.根据吸光度与还原剂浓度的关系，评估样品的抗氧化活性。
三、总抗氧化能力测定法总抗氧化能力测定法是一种综合评估样品抗氧化活性的方法。
该方法基于样品的抗氧化剂含量和抗氧化活性，通过测定样品对氧自由基的清除能力，评估其总抗氧化能力。
实验步骤：1.准备一定浓度的氧自由基溶液。
2.取一定量的样品，加入适量的溶剂溶解。
3.取不同浓度的样品溶液，加入相同量的氧自由基溶液。
4.静置反应一定时间后，通过测量溶液的吸光度变化，计算出样品的抗氧化活性。
以上是常用的抗氧化活性测定方法，还有其他一些方法如ORAC法、TEAC法等也被广泛应用。
不同的方法适用于不同的样品和测定目的，选择适合的方法进行测定可以更准确地评估样品的抗氧化活性。
3种抗氧化活性测定方法
3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定方法是评估化合物或材料抗氧化性能的一种重要手段。
随着抗氧化活性的研究日益深入，目前已经发展出很多种测定方法。
以下将介绍三种常用的抗氧化活性测定方法：DPPH自由基清除法、Fe2+/Fe3+还原能力法和ABTS自由基清除法。
1.DPPH自由基清除法：DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）是一种紫色的自由基，常用于评估化合物或材料的抗氧化活性。
该方法基于DPPH自由基与抗氧化物质发生反应后，颜色由紫色变为淡黄色或无色。
测定方法简单，操作方便。
其原理是待测样品与DPPH混合后，通过电子或氢的转移反应，DPPH自由基将被清除，溶液颜色由紫色转变为淡黄色。
根据吸光度变化可以计算出自由基清除率，进而评估抗氧化活性。
2.Fe2+/Fe3+还原能力法：该方法基于还原能力测定抗氧化物质对Fe3+离子的还原能力。
常用的试剂是FeCl3溶液和TPTZ（2,4,6-三聚吡啶甲酸）、酸性pH缓冲液。
其原理是待测样品能够还原Fe3+离子为Fe2+离子，Fe2+离子与TPTZ反应生成有颜色的络合物，通过分光光度计测定络合物的吸光度变化，进而计算出还原能力。
较高的吸光度变化表示较高的抗氧化活性。
3.ABTS自由基清除法：ABTS（2,2'-联氨基双(3-乙基苯并噻唑啉-6磺酸)）自由基是一种蓝绿色自由基，其浓度在紫外可见光区域有最大吸收。
该方法基于ABTS自由基清除率来评估抗氧化物质的抗氧化活性。
该方法较DPPH法和还原能力法更为灵敏。
其原理是待测样品与ABTS自由基反应后，ABTS自由基将被清除，溶液颜色由蓝绿色变为无色或浅黄色。
通过测定吸光度的变化，可以计算出自由基清除率，进而评估抗氧化活性。
除了上述常用的抗氧化活性测定方法外，还有很多其它方法也被广泛应用于抗氧化活性的评估，如氧化还原测定法、Fenton反应法、还原剂抑制能力法等。
每一种测定方法都有其独特的原理和适用范围，研究人员可以根据具体的研究目的和样品性质选择合适的测定方法。
多糖抗氧化活性研究
多糖抗氧化活性研究引言：近年来，抗氧化活性成为了食品、保健品和医药领域研究关注的焦点之一、氧化过程会导致细胞膜的损伤、DNA的断裂及功能性蛋白质的氧化，进而导致各种疾病的发生。
因此，发现和开发具有抗氧化活性的天然产物成为了研究者们的目标之一多糖作为一种具有广泛生物活性的天然产物，在抗氧化活性方面表现出了巨大的潜力。
多糖具有特殊的结构和化学性质，因此被认为是一种重要的天然抗氧化剂。
材料与方法：在本次研究中，我们从植物中提取了多糖，并对其抗氧化活性进行了评估。
提取多糖的方法是首先将植物切碎，然后使用特定溶剂进行提取。
提取得到的多糖溶液经过浓缩和干燥，最终得到多糖粉末。
抗氧化活性的评估主要采用了自由基清除能力和铁离子螯合能力这两种方法。
自由基清除能力的测定使用了DPPH（2,2-二苯基-1-苦基肼）自由基清除实验，原理是通过测定多糖对自由基DPPH的清除能力来评估其抗氧化活性。
铁离子螯合能力的测定使用了FER（铁离子还原力）方法，通过观察多糖对Fe3+的还原能力来评估其抗氧化活性。
结果与讨论：我们发现，提取得到的多糖具有较强的抗氧化活性。
在DPPH自由基清除实验中，多糖对DPPH的清除率在100μg/mL浓度下达到了80%以上。
在铁离子还原力实验中，多糖对Fe3+的还原能力也较强，对不同浓度的Fe3+产生了不同程度的还原作用。
多糖的抗氧化活性可能与其特殊的结构和化学性质有关。
多糖中富含的羟基、羟乙基和酚羟基等官能团可以与自由基发生反应，抑制自由基的活性。
此外，多糖还具有一定的金属螯合能力，可以与金属离子发生配位反应，从而减少金属离子对氧自由基的促进作用。
结论：本研究表明，从植物中提取得到的多糖具有较强的抗氧化活性。
多糖可能通过清除自由基和螯合金属离子等机制发挥其抗氧化活性。
多糖的抗氧化活性为其在食品、保健品和医药领域的应用提供了新的理论基础。
然而，还有许多方面需要进一步研究。
首先，需要进一步探究多糖的抗氧化活性与其结构和化学性质之间的关系。
抗氧化活性研究方法
抗氧化活性研究方法引言：氧化反应是指分子或原子失去电子，而还原反应是指分子或原子获得电子。
由于氧化反应产生的自由基具有高度活性，能够对细胞结构和功能造成损害，导致多种疾病的发生。
因此，研究抗氧化活性及其机制对于预防和治疗这些疾病具有重要意义。
本文将介绍几种常用的抗氧化活性研究方法。
一、DPPH自由基清除能力测定法DPPH自由基清除能力测定法是一种常用的抗氧化活性测定方法。
DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）是一种紫色自由基，其颜色随着氧化程度的增加而减弱。
在该方法中，将待测样品与DPPH溶液混合，通过测定混合液的吸光度变化来评估样品的抗氧化活性。
抗氧化活性强的样品能够清除DPPH自由基，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降。
二、还原能力测定法还原能力测定法是通过测定待测样品对还原剂的还原能力来评估其抗氧化活性。
常用的还原剂包括铁离子、铜离子等。
在该方法中，将待测样品与还原剂混合，通过测定混合液的吸光度变化或还原剂浓度的变化来评估样品的抗氧化活性。
抗氧化活性强的样品能够还原还原剂，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降或还原剂浓度的降低。
三、氧化脂质抑制能力测定法氧化脂质抑制能力测定法是通过测定待测样品对氧化脂质的抑制能力来评估其抗氧化活性。
常用的氧化脂质包括脂肪酸、脂肪油等。
在该方法中，将待测样品与氧化脂质混合，通过测定混合液中脂质的氧化程度来评估样品的抗氧化活性。
抗氧化活性强的样品能够有效抑制氧化脂质的形成。
四、超氧阴离子清除能力测定法超氧阴离子是一种常见的自由基，具有较高的活性。
超氧阴离子清除能力测定法是通过测定待测样品对超氧阴离子的清除能力来评估其抗氧化活性。
常用的超氧阴离子产生体系包括NBT（硝基蓝盐）-NADH（尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸）体系、XTT（二苯基四唑盐）体系等。
在该方法中，将待测样品与超氧阴离子产生体系混合，通过测定混合液的吸光度变化来评估样品的抗氧化活性。
抗氧化活性强的样品能够有效清除超氧阴离子，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降。
食品抗氧化剂作用机理及天然抗氧化剂PPT
03
天然抗氧化剂的种类和来源
植物来源的天然抗氧化剂
维生素C
主要存在于柑橘类水果、草莓、番茄 等水果和蔬菜中，具有很强的还原性 ，可以清除自由基，抑制氧化反应。
类胡萝卜素
如番茄红素、叶黄素等，主要存在于 胡萝卜、番茄、南瓜等蔬菜和水果中 ，具有很强的抗氧化性能，可以保护 细胞免受氧化损伤。
动物来源的天然抗氧化剂
延长食品保质期
抗氧化剂可以延缓食品氧化变质的过程，从而延长食 品的保质期。
保护食品营养成分
抗氧化剂可以防止食品中的营养成分被氧化破坏，保 持食品的营养价值。
提高食品感官品质
抗氧化剂可以改善食品的感官品质，如色泽、口感、 气味等。
02
食品抗氧化剂的作用机理
抗氧化剂的作用原理
抗氧化剂通过抑制或消除自由基 的产生，从而减缓或阻止氧化反 应的进行，保护食品免受氧化损
伤。
抗氧化剂可以与自由基结合，使 其失去活性，从而中断氧化链式
反应，达到抗氧化的效果。
抗氧化剂可以抑制或降低氧化酶 的活性，从而减少氧化反应的发
生。
抗氧化剂对人体的益处
01
抗氧化剂可以帮助人体抵抗疾病，如心血管疾病、癌症等，因 为它们可以清除体内的自由基，减少氧化应激反应。
02
抗氧化剂可以延缓衰老，因为氧化反应是导致细胞衰老的主要
功能性复合抗氧化剂的开发
将不同种类的天然抗氧化剂进行复配，开发具有协同效应的功能性复合抗氧化剂，提高抗 氧化效果。
生物技术在天然抗氧化剂生产中的应用
利用生物技术手段改良和优化天然抗氧化剂的生产工艺，降低生产成本，提高产量和品质 。
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原因之一，抗氧化剂可以保护细胞免受氧化损伤。
艾叶中总黄酮的提取及其抗氧化活性研究
艾叶中总黄酮的提取及其抗氧化活性研究艾叶是常用的中药材之一，其具有多种药理活性，如抗氧化、抗肿瘤、治疗高血压等。
其中，艾叶中的总黄酮是一种重要的活性成分，具有较强的抗氧化活性。
因此，提取艾叶中的总黄酮，并研究其抗氧化活性，对于探索艾叶的药理作用具有重要意义。
一、艾叶中总黄酮的提取方法1. Sohxlet提取法将粉碎的艾叶样品放入芦笼中，加入乙醇和水的混合溶液，进行Sohxlet提取，直至提取液中没有可见的黄色物质为止。
然后进行浓缩和溶剂去除，得到艾叶总黄酮。
2. 超声波提取法将粉碎的艾叶样品放入贝克瓶中，加入乙醇和水的混合溶液，进行超声波提取，直至提取液中没有可见的黄色物质为止。
然后进行浓缩和溶剂去除，得到艾叶总黄酮。
二、艾叶中总黄酮的抗氧化活性研究方法1. DPPH自由基清除法将一定量的DPPH溶液与一定量的样品溶液混合，放置一段时间后，测量混合液的吸光度，并将其与DPPH自由基的吸光度进行比较，计算出样品对DPPH自由基的清除率，从而评估其抗氧化活性。
2. 过氧化氢清除法将一定量的过氧化氢溶液与一定量的样品溶液混合，放置一段时间后，测量混合液的吸光度，并将其与过氧化氢的吸光度进行比较，计算出样品对过氧化氢的清除率，从而评估其抗氧化活性。
三、艾叶中总黄酮的研究结果通过Sohxlet提取法和超声波提取法分别提取艾叶中的总黄酮，并将两种提取方法得到的总黄酮进行比较，结果表明超声波提取法的提取效率更高，提取得到的总黄酮含量也更高。
通过DPPH自由基清除法和过氧化氢清除法对艾叶总黄酮的抗氧化活性进行了研究，结果表明艾叶总黄酮具有较强的抗氧化活性，可以清除自由基并保护细胞免受氧化损伤。
综上所述，艾叶中的总黄酮是一种重要的抗氧化成分，具有良好的应用前景。
本研究通过比较不同提取方法和不同抗氧化活性测定方法，为深入探索艾叶的药理作用提供了一定的基础。
抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法抗氧化酶是生物体内重要的防御系统，它们通过清除自由基来保护细胞免受氧化损伤。
其中，超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）是三种主要的抗氧化酶。
测定这些酶的活性对于评估生物体的抗氧化能力具有重要意义。
本文将介绍几种常用的抗氧化酶活性测定方法。
1. 超氧化物歧化酶（SOD）活性测定方法SOD是一种能够催化超氧阴离子自由基（O2）歧化为氧气（O2）和过氧化氢（H2O2）的酶。
常用的SOD活性测定方法包括：氮蓝四唑（NBT）法：利用NBT在超氧阴离子自由基存在下被还原成蓝色化合物的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算SOD活性。
羟胺法：利用羟胺与超氧阴离子自由基反应硝酸盐，通过测定硝酸盐的量来计算SOD活性。
2. 过氧化物酶（POD）活性测定方法POD是一种能够催化过氧化氢（H2O2）分解为水和氧气的酶。
常用的POD活性测定方法包括：愈创木酚法：利用愈创木酚在过氧化物酶存在下被氧化红色化合物的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算POD活性。
邻苯三酚法：利用邻苯三酚在过氧化物酶存在下被氧化紫色化合物的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算POD活性。
3. 过氧化氢酶（CAT）活性测定方法CAT是一种能够催化过氧化氢（H2O2）分解为水和氧气的酶。
常用的CAT活性测定方法包括：紫外分光光度法：利用过氧化氢在紫外光下具有吸收的特性，通过测定反应液的吸光度变化来计算CAT活性。
酶偶联法：利用过氧化氢在过氧化物酶存在下被氧化水的特性，通过测定水的量来计算CAT活性。
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定的实验步骤与注意事项实验步骤1. 样品准备提取酶：根据实验目的，选择合适的组织或细胞提取酶。
常用的提取缓冲液包括磷酸盐缓冲液、TrisHCl缓冲液等。
离心：将提取液离心，分离上清液和沉淀物。
上清液中含有目标酶，沉淀物则含有杂质。
蛋白质定量：使用 Bradford 法或 Lowry 法等蛋白质定量方法测定上清液中的蛋白质浓度。
海带多糖的体外抗氧化活性研究
海带多糖的体外抗氧化活性研究背景介绍海带是一种常见的海藻，由于其营养价值和药用价值逐渐被人们所重视。
海带中含有丰富的多糖，其中的海带多糖已被证明具有很好的生物活性效应，如免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗菌和抗氧化等等。
本文将着重研究海带多糖的体外抗氧化活性。
研究方法实验材料我们从市场上购买到的海带多糖作为研究对象。
评价抗氧化活性的实验药剂参照倍半葡萄糖酸抗氧化实验设计（Bacchetti等，2002）并且进行了多糖调整。
根据不同的实验要求，选择了下面的实验药剂：•海带多糖溶液（2 mg/mL）•三氯乙酸/丙酮/异丙醇（TCA/AA/IPA）混合液•二苯基二(苯基甲酮丙烯酸)（DPPH）溶液•L-抗坏血酸酸钠测定海带多糖的还原能力测定海带多糖的还原能力本研究采用TCA/AA/IPA混合液作为反应液。
经pipette移取500ul的海带多糖溶液，加入1.5 mL TCA/AA/IPA混合液中混合均匀，用BoernerE以120r/min切圆模拟平板轨道振动混合反应液。
离心15分钟，去上清液，加入400μL去离子水混合后的FeCl3/NaOH体系中。
获得的深蓝色复合物的吸光度以700 nm进行分光光度计读数。
测定自由基清除能力测定海带多糖的自由基清除能力用DPPH自由基清除实验来评价。
评估海带多糖溶液的清除能力，并用VC作为阳性对照。
我们取得DPPH溶液，用乙醇稀释成一个浓度为1 mM的溶液。
每次取1 mL的DPPH溶液，加入1 mL的海带多糖溶液不同浓度的样品混匀。
混合后，将其在黑暗中静置30分钟，观察表现为卡其色深青色到淡黄色反应液的吸光度，并以0.1 mM L-VC中的100%抑制计算样品中的DPPH自由基清除能力。
其他实验操作为了确定样品中阻止Fe2+/H2O2体系中羟基自由基形成的能力，评估样品中阻止Fe2+/H2O2系统形成羟自由基的能力。
在不同浓度的海带多糖溶液中，每个样品与0.05mM FeSO4的混合溶液和0.03%的H2O2的混合溶液混合均匀。
DPPH法评价抗氧化活性研究进展
DPPH法评价抗氧化活性研究进展一、本文概述随着人们对健康生活的追求和对疾病预防的重视，抗氧化剂的研究和应用逐渐成为科学研究的热点。
DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）法作为一种简便、快速、高效的抗氧化活性评价方法，在抗氧化剂筛选、食品营养评价、药物研发等领域得到了广泛应用。
本文旨在综述DPPH法在评价抗氧化活性方面的研究进展，包括其基本原理、实验操作、影响因素以及应用实例等方面，以期为该领域的研究者提供全面的参考和借鉴。
通过本文的阐述，读者可以深入了解DPPH法的优势与局限性，进一步推动抗氧化活性评价方法的优化与创新。
二、DPPH法的基本原理DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）法是一种常用的体外抗氧化活性评价方法，其基本原理基于DPPH自由基的稳定性和颜色变化。
DPPH 自由基是一种紫色的有机自由基，其溶液在517nm处具有强吸收峰。
当抗氧化物质存在时，它们可以通过提供氢原子或电子来与DPPH自由基发生反应，从而使其颜色由紫色变为黄色，最大吸收峰也随之降低。
这种颜色变化与DPPH自由基被清除的程度成正比，因此可以通过测定反应前后溶液吸光度的变化来评价抗氧化物质的活性。
DPPH法具有操作简便、快速、灵敏度高和重现性好等优点，因此在抗氧化活性评价中被广泛应用。
DPPH自由基是一种脂溶性的自由基，可以模拟生物体内多种自由基的反应，因此DPPH法也具有一定的生理意义。
然而，需要注意的是，DPPH法仅是一种体外评价方法，其结果并不能完全代表抗氧化物质在生物体内的实际抗氧化效果。
因此，在评价抗氧化物质的活性时，还需要结合其他方法进行综合分析。
以上内容仅为简要介绍，如需更深入了解DPPH法的基本原理和应用，建议查阅相关文献或咨询专业人士。
三、DPPH法在抗氧化活性评价中的应用DPPH法作为一种简便、快速、灵敏且可重复性强的方法，已被广泛应用于抗氧化活性的评价中。
该方法基于DPPH自由基的稳定性和其在可见光区具有的特征吸收峰，通过测定待测物与DPPH自由基反应后吸光度的变化，可以推算出待测物的抗氧化活性。
天然药物抗氧化活性研究
安徽农学通报，Anhui Agri，Sci，Bull，2020，26（17）天然药物抗氧化活性研究权春梅1，2张兴3丁瑞苹1黄力1（1亳州职业技术学院，安徽亳州236800；2安徽中医药科学院亳州中医药研究所，安徽亳州236800；3阜阳师范大学，安徽阜阳236037）摘要：该文介绍了抗氧化机制及研究天然药物抗氧化活性的必要性，阐述了体外抗氧化活性及体内抗氧化活性的研究方法，旨在为天然药物抗氧化研究及开发利用提供参考。
关键词：天然药物；抗氧化活性；研究方法中图分类号R282.7文献标识码A文章编号1007-7731（2020）17-0036-03Study on Antioxidant Activity of Natural MedicineQUAN Chunmei1，2et al.（1Bozhou Vocational and Technical College，Bozhou236800，China；2Bozhou Institute of the Anhui Academy of Chi⁃nese Medicine，Bozhou236800，China）Abstract：This paper introduced the antioxidant mechanism and the necessity of studying the antioxidant activity of natural medicine，and detailed the research methods of antioxidant activity in vitro and in vivo，in order to provide reference for the research，development and utilization of natural medicine。
Key words：Natural medicine；Antioxidant activity；Research methods天然药物来源于植物、动物、矿物、微生物和海洋生物，我国天然药物主要是指中草药。
抗氧化活性
1. 徐春兰,钦传光,尚晓娅,牛卫宁. Enterobacter CloacaeZ0206细菌胞外富硒多糖的抗氧化活性.化学研究，2010，21（2:）64-68.CHEMICAL RESEARCH多糖是自然界中与人类生活紧密相关的一类天然生物高分子,具有免疫调节、抗氧化等多种生物学功能.国内外近年来对于多糖的抗氧化作用进行了广泛的研究[1,2],并有人据此解释了多糖抗衰老功效的药理机理.1.3 E.cloacaeZ0206富硒多糖的制备取出冷藏的E.cloacaeZ0206菌种,室温放置1 h后,在PDA培养基上2次活化后,接种到基础发酵培养基中进行试管发酵培养,30℃往复振荡培养,培养时间10 h,得到摇瓶发酵种子液. 2 000 mL摇瓶内加入500 mL基础发酵培养基,121℃蒸汽灭菌20 min,接种种子液,于摇床中30℃、220 r/min往复振荡培养,在培养的第6 h加入一定浓度的已过滤除菌的Na2SeO3溶液(使其终浓度为25 mg/L),发酵时间48 h,得到含有E.cloacaeZ0206富硒多糖的发酵液.发酵液于50℃浓缩为原体积的1/10, 90℃水浴1 h,5 000 r/min离心20 min,收集上清液,加入3~5倍体积预冷的95%乙醇,4℃静置24 h后, 5 000 r/min离心20 min,沉淀真空干燥,即得到粗多糖粉末.将其溶于适量蒸馏水,Sevag法除蛋白,反复进行多次至无蛋白层,然后用自来水和蒸馏水各透析24 h,透析液中加无水乙醇,置4℃冰箱中醇沉过夜,再离心分离,沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚各洗涤2次,真空干燥,即得到E.cloacaeZ0206富硒多糖.E.cloacaeZ0206富硒多糖中多糖的测定采用苯酚-硫酸法,蛋白质含量的测定用考马斯亮蓝法,硒含量的测定采用紫外分光光度法.1.4清除DPPH自由基试验准确地将E.cloacaeZ0206富硒多糖配成5.0 g/L,用超纯水将该溶液稀释成6种浓度:0.16、0.31、0.625、1.25、2.5、5 g/L.以维生素C(Vc)为对照品.称取20 mg的DPPH用无水乙醇溶解定容至500 mL.试验分为样品组和空白对照组:取2 mL 40 mg/L的DPPH溶液加入10 mL 具塞的试管中,再加入2 mL样品溶液,空白对照组以超纯水代替样品溶液,充分混匀,室温下避光反应30 min后,在517 nm处测定吸光度.E.cloacaeZ0206富硒多糖清除DPPH自由基的能力由下式计算:DPPH自由基清除率=(A0-A1)/A0×100%,式中A0为空白对照的平均吸光度值,A1为试样的平均吸光度值.1.5清除羟自由基试验由Fenton法产生·OH.将E.cloacaeZ0206富硒多糖用双蒸水配制成质量浓度为5 g/L的多糖溶液,并稀释成6个不同浓度:0.16、0.31、0.625、1.25、2.5、5 g/L.各取2 mL上述浓度的多糖溶液,依次加入6mmol/L的FeSO4溶液2 mL,混匀,6 mmol/L的H2O2溶液2 mL,混匀,静置30 min后于510 nm处测其吸光度值.空白对照组以双蒸水代替多糖溶液,以维生素C(Vc)做对照,临用前以双蒸水配制.羟自由基的清除率以下式计算:羟自由基清除率=(A0-A1)/A0×100%,式中A0为空白对照的平均吸光度值,A1为试样的平均吸光度值.1.6清除超氧阴离子自由基试验采用邻苯三酚自氧化法产生O-2进行试验.将E.cloacaeZ0206富硒多糖用双蒸水配制成质量浓度为5g/L的多糖溶液,并稀释成6个不同浓度:0.16、0.31、0.625、1.25、2.5、5 g/L.取0.05 mol/L Tris-HCl缓冲溶液(pH=8.2)4.5 mL,置于25℃水浴中预热25 min,分别加入1 mL不同浓度的多糖溶液和0.4 mL25 mmol/L邻苯三酚溶液,空白对照组以双蒸水代替多糖溶液,混匀后在25℃水浴中反应5 min,加入1mL 8 mol/L的HCl终止反应,于299 nm处测吸光度.超氧阴离子的清除率以下式计算:超氧阴离子的清除率=(A0-A1)/A0×100%,式中A0为空白对照的平均吸光度值,A1为试样的平均吸光度值.1.7还原能力的测定将E.cloacaeZ0206富硒多糖用双蒸水配制成质量浓度为5 g/L的多糖溶液,并稀释成6个不同浓度:0.16、0.31、0.625、1.25、2.5、5 g/L,各取1 mL上述浓度的多糖溶液,加入pH 6.6的磷酸盐缓冲液2.5mL、1%铁氰化钾2.5 mL,混合均匀后于50℃水浴中保温20 min,再加入10%的三氯乙酸2.5 mL,混匀,以3 000 r/min离心10 min,移取上清液2.5 mL于试管中,加蒸馏水2.5 mL和0.1% FeCl30.5 mL,常温反应5 min后于700 nm处测定吸光度值,OD700 nm值越大说明测试样的还原能力越强,实验中选用Vc做对照.2.谢辉,李莉,吴鸣谦,陈双林*1株杜仲内生真菌的抗氧化活性分析和菌种鉴定.安徽农业科学,Journal ofAnhui ,37(1):230-232Harper等的研究表明,植物内生真菌具有抗氧化活性或可产生天然的抗氧化活性产物[3-4]。
抗氧化酶SODPODCAT活性测定方法
抗氧化酶SODPODCAT活性测定方法抗氧化酶SOD（超氧化物歧化酶）、POD（过氧化物酶）和CAT（过氧化氢酶）是植物体内重要的抗氧化酶，在植物的抗逆境应对中起着重要的作用。
因此，对这些抗氧化酶的活性进行测定和分析是研究植物生理生化过程的重要方面之一测定抗氧化酶活性的方法一般分为两类：直接法和间接法。
直接法是通过测定一些特定底物的降解速率来反映酶的活性；间接法是通过测定酶催化底物形成的产物的生成速率来间接反映酶的活性。
下面将分别介绍抗氧化酶SOD、POD和CAT活性的测定方法。
1.SOD活性测定方法：SOD活性测定方法主要分为NBT法和EPX法两种。
（1）NBT法：这是一种直接法，其基本原理是SOD将还原型的NBT 还原成穆尔蓝染色形成具有最大吸收峰值的NBT离子。
实验步骤如下：a.首先准备SOD底物溶液，其组成为：50mM磷酸缓冲液（pH7.8）+13mML-甲硫氨酸+75μM硝基蓝硝酸盐（NBT）。
b.将样品加入上述的SOD底物溶液中，混匀。
c.加入适量的酶抑制剂，使停止酶的活性，并将其放在冰上。
d.使上述反应在37℃下进行10分钟。
e.加入已经冷却的硝酸亚铁和磷酸以停止反应，并将其放在冰上10分钟。
f. 测定变色液的吸收光谱在560 nm波长处的吸光度。
（2）EPX法：这也是一种直接法，其基本原理是SOD将乙酸型形成的4-无水乙烯甲基-3-硝基噻吩染色。
实验步骤如下：a. 首先在试管中加入1 ml乙酸型测定液。
b.分别加入适量的SOD样品。
c.在30分钟内使试管中乙酸型完全消除。
d. 测定出试管中产生的4-乙烯基-3-硝基-5-硝基噻吩的吸收光谱在260 nm波长处的吸光度。
2.POD活性测定方法：POD活性测定方法可分为直接法和间接法。
（1）直接法：这种方法基于过氧化反应的特点，利用dianisidine 与过氧化氢在催化剂POD作用下形成有色产物的现象来测定POD的活性。
实验步骤如下：a.在试管中加入0.1M磷酸盐缓冲液（pH6.0）。
抗氧化研究方法
抗氧化研究方法氧化损伤的产生线粒体呼吸链中，由于发生电子漏，导致氧分子经单电子转移反应，生成了超氧阴离子。
某些氧化酶催化氧化底物时，释放出活性氧，如黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶体系放出超氧阴离子、葡萄糖/葡萄糖氧化酶体系放出过氧化氢。
巨噬细胞受刺激后呼吸爆发产生活性氧。
体内自由基的产生e e2H eHO2 O2－. H2O2 .OH H2O 主要自由基简介单线态氧超氧阴离子过氧化氢脂质过氧自由基碳中心自由基氧的状态2p2p2p2pssss Ground singlet O2 Superoxide Peroxide ion state O2 O2- O22- 氧自由基的反应超氧阴离子歧化2O2-. 2H H2O2 O2过氧化氢的反应：Mn H2O2 . M n1 OH OH- 铁催化的羟自由基产生－Fenton Reaction and Harber-Weiss Reaction Fenton Reaction: Fe2 H2O2 Fe3 .OH OH- Weiss Reaction: Fe3 O2-. Fe2 O2 1 Fe2 H2O2 Fe3 .OH OH- 2 Net O2-. H2O2 O2.OH OH- 3 脂质过氧化Initiation: －CH2－.OH －. CH2－H2O CH. O2 CHO2.Propagation: CHO2. CH2 CHO2H CH.Termination: CH. CH. －CH－CH －抗氧化研究内容清除自由基抑制脂质过氧化总抗氧化活力测定抑制氧化导致的细胞损伤缺血再灌注损伤及炎症1、清除自由基 a. 清除羟自由基b. 清除超氧阴离子 c. 清除单线态氧d. 清除DPPH自由基 e. 清除碳中心自由基电子顺磁共振法Electronic ParamagneticResonance EPR 以DMPO 捕获剂，测定羟自由基Hydroxyl radical和超氧阴离子自由基以TEMP为捕获剂，测定单线态氧Singlet oxygen 直接测定DPPH自由基以4－POBN为捕获剂，测定碳中心自由基典型的羟自由基－DMPO加合物图谱典型的超氧阴离子自由基－DMPO加合物图谱典型的单线态氧－TEMP加合物图谱典型的碳中心自由基－4-POBN加合物图谱典型的DPPH自由基图谱化学法Hydroxyl radical Drug effects were tested on deoxyribose oxidation induced by 60 min incubation at 37C with nonchelated Fe2 namely 20 M FeSO4 with or without 1.42 mM H2O2 in PPB pH7.4. The TBA-test which detects aldehydic products such as malondialdehyde MDA resulting from deoxyribose or lipid oxidation was then carried out adding to 0.5 mL of sample 1.0 mL of 2.8 trichloroacetic acid and 1.0 mL of 0.6 aqueous solution of TBA tubes were heated at 95 C for30 min to develop the color and successively cooled in ice. The red chromogen expression of the TBA:MDA adduct formation was extrtacted with n-butanol kept at 4C after a brief centrifugation to favor organic phase separation the upper n-butanol layer was removed and read spectrophotometrically at 532 nm against an appropriate blank. Results were caculated as nmol TBARS per mL using a molar extinction coefficient of 154000 at 532nm.Superoxide anion To a mixture of tested compound 50 M xanthine oxidase 25munit/ml and nitro blue tetrazolium 50 M in Tris buffer 0.1 M pH 7.4 and aliquot of 10l hypoxanthine 3.5 mM was added the total volume of the mixture was 1 ml. The absorbance of the reaction mixture was monitored spectrophotometrically at 560 nm for 10 min using a UV-VS spectrum meter.Total antioxidant status TAS assay ABTS was dissolved in water to a 7 mM concentration. ABTS radical cation ABTS was produced by first adding MnO2 powder in the solution and keeping in the dark at room temperature for more than 12 h then filtrated with syringe filter and kept in dark for another 6 hours. The obtained radical was stable in this form for more than two days when stored in the dark at room temperature. Stock solution of ABTS was diluted with PBS pH 7.4 to an absorbance of 0.70 0.02 at 734 nm and equilibrated at 30°C. After adding 1.0 ml of diluted ABTS to 10 l of serum or tissue homogenate supernate the absorbance reading was taken at 30°C exactly 2 min after initial mixing. The total antioxidant capacityconcentration was compared to equivalent antioxidant capacity of Trolox and is expressed in mols of Trolox/g of tissue.Quenching DPPH radical DPPH dissolved in ethanol to a concentration of 90M tested compounds dissolved in ethanol or distilled water to 120 M solution to 2.5 ml DPPH solution the suitable amount of tested compound solution was added the total volume was adjusted to 3 ml with ethanol and mixed thoroughly the absorbency was recorded at 517 nm exactly at 10 min.。
从山楂叶中提取黄酮类化合物PPT课件
07
参考文献
参考文献
参考文献1
山楂叶中黄酮类化合物的提取工艺研究。该文献详细介绍了山楂叶中黄酮类化合物的提取方法，包括提取溶剂的选择 、提取温度和时间的控制等，为后续实验提供了理论依据。
参考文献2
黄酮类化合物在山楂叶中的含量测定。该文献通过高效液相色谱法等手段，对山楂叶中黄酮类化合物的含量进行了测 定，为实验提供了数据支持。
实验结果分析
提取率
纯度分析
通过对比不同提取方法的提取率，确定最 佳提取条件。
对分离纯化后的黄酮进行纯度分析，确保 其纯度满足要求。
结构鉴定
生物活性测试
结合色谱、光谱等分析结果，对黄酮的化 学结构进行鉴定。
对提取的黄酮进行生物活性测试，如抗氧 化、抗炎等，评估其生物活性。
结果展示与讨论
结果展示
通过图表、数据等形式展示实验结果。
05
实验过程与结果分析
实验步骤
准备山楂叶
选取新鲜、无病虫害的山楂叶，洗净 晾干。
提取黄酮
将山楂叶粉碎后，用有机溶剂进行提 取，提取液经过滤、浓缩等步骤得到 黄酮类化合物。
分离纯化
通过柱层析、重结晶等方法对黄酮类 化合物进行分离纯化。
检测与鉴定
采用色谱、光谱等技术对提取的黄酮 进行定性和定量分析，确定其化学结 构。
这些化合物具有不同的化学结 构和生物活性，如抗氧化、抗 炎、抗肿瘤等。
山楂叶中黄酮类化合物的含量 和种类因产地、品种、生长环 境等因素而异。
山楂叶中黄酮类化合物的生物活性
山楂叶中黄酮类化合物具有抗氧化作用，能够清除自由基，保护细胞免受氧化损伤。
这些化合物还具有抗炎作用，能够抑制炎症反应，减轻炎症症状。
深入研究生物活性
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酶标法优势
3、酶标法优势
抗氧化微孔板实验方法的优势:①耗材量少,试剂量以微升 计;②试剂种类少,部分试剂配制可交互使用;③方法简便, 耗时短;④可重复性强,能够广泛应用于药物筛选,特不是 高通量药物筛选研究。
五、ABTS法
实验步骤
2、实验步骤
❖ 将样品用甲醇配制成一系列浓度,取0、15mL样品加入2、 85mLABTS自由基工作液,混合,放置10min后,在734nm处测 定吸光度。每份样品平行操作3次。
❖ 计％算公式为:清除率(％)=[A(溶剂)- A(样品)] /A(溶剂)× 100 ❖ A度度(溶,。A剂()样为品2)、为825、8m5LmALBATBST溶S液溶与液与0、01、51m5Lm甲L醇样混品合混后合的后吸的吸光
映被测物的抗氧化活性;(DPPH自由基的清除) ❖ (3)在特定条件下,测定样品的还原能力反映被测物的抗氧
化活性。(还原Fe3+)
四、DPPH法
1、原理
DPPH(二苯代苦味酰基自由基) 是一种以氮为中心的稳 定自由基。 特点:醇溶液呈紫色,波长为517nm下具有最大吸收。 具有单一电子,故能接受一个电子或氢离子,有自由基清 除剂存在时,DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅,在最 大光吸收波长处的吸光值下降,吸光度水平的降低表明 抗氧化性的增加,从而以评价试验样品的抗氧化能力。 此抗氧化能力用抑制率来表示,抑制率越大,抗氧化性越 强。
七、铁离子还原能力(FRAP)
原理
FRAP的原理是基于氧化还原反应的比色法。在酸性条件下 ,Fe3+一TPTA(Fe3+—三吡啶三嗪)被抗氧化剂还原成Fe2+一 TPTZF,溶液变成深蓝色,同时在593nm处有强吸收。FRAP法 具有快速、简便、重复性好等优点。该法不仅用于检测食 物及饮料的抗氧化活性。也可用于检测纯天然抗氧化剂的 活性。
VitE清除DPPH自由基抗氧化量效曲线
(相关系数)
反应时间t为30min的量效曲线
实验步骤
(2)一般方法——紫外分光光度计法 将样品用甲醇配制成一系列浓度,取0、1mL样品加入3、5 mL DPPH甲醇溶液(0、06 mmol/L),混合30min后测定515 nm处吸光度。每份样品平行操作3次。
抗氧化活性研究方法
目录
❖ 一、检测抗氧化活性的缘故
❖ 二、自由基的产生及抗氧化的重要性
❖ 三、检测方法 ❖ 四、DPPH法(原理,一般方法,酶标法) ❖ 五、ABTS法 ❖ 六、TBARS法 ❖ 七、铁离子还原能力(FRAP)
一、检测抗氧化活性的缘故
1、天然植物中许多化学物质具有抗氧化活性 2、抗氧化剂有延缓衰老等功效,越来越受到人们关注 3、据文献记齐墩果酸型三萜有较好的抗氧化活性 4、抗氧化活性测试简单,快捷,经济
❖ 计算公式为:清除率(％)=[A(溶剂)- A(样品)]/A(溶剂)x100％
VitE清除DPPH自由基 作用时间的延长 VitE抗DPPH作用增 强,但在3、9- 31、 2μmol·L- 1范围内 ,各时间点的药效变 化不明显,62、5500μmol·L-1浓度 范围,随着浓度增加, 各时间点的药物作 用曲线逐渐分离,并 在500μmol·L-1,各 时间点量效趋于平 稳。从图中能够看 出,在这些时间点中 ,30min的量效曲线 基本呈斜线上升。
实验步骤
2、实验步骤
(1)酶标法检测——酶标仪 ❖ 取96孔细胞培养板,各孔分不加入150μmol·L- 1的DPPH溶
液180μL,各浓度梯度样品溶液20μL,终浓度分不为3、9 ~500μmol·L- 1,反应总体积200μL,以溶剂作对比。加样 后,振荡混匀。封板胶封板后,室温下避光静置。分不在 10~120min时间范围内于517nm处测定各孔吸光度值。观察 样品抗DPPH的时效量效变化过程,确定实验的稳定性与最 佳实验反应时间。
1、原理
以水溶性的ABTS+自由基引发剂为显色剂。 特点:ABTS与过硫酸钾反应生成稳定的蓝/绿色阳离子自由 基ABTS+,最大吸光波长为734nm。 向ABTS+其中加入被测物质,假如该物质中存在抗氧化成分, 则该物质会与ABTS+发生反应而使反应体系褪色,然后在 ABTS+这种自由基的734nm吸光波长下检测吸光度的变化来 反映物质的抗氧化能力。
二、自由基的产生及抗氧化的重要性
自由基对人体造成的伤害 抗氧化剂
天然植物
三、检测方法
❖ 目前常用的抗氧化活性检测方法主要基于以下机理: ❖ (1)在特定条件下,样品对检测体系中脂类物质的氧化抑制
能力反映被测物的抗氧化活性;(TBARS法) ❖ (2)在特定条件下,样品对检测体系中自由基的清除能力反
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ABTS法优缺点
3、优缺点
简便,快速,适合于大量样品的检测。 ABTS在与氢原子供体的反应中选择性差是此法的一个不足 ,它可与任何羟基化的芳香族化合物反应,这与它们的实际 抗氧化能力关,因此,TEAC值也包括对抗氧化不起作用的羟 基。
六、TBARS法
简介
脂质体系中氧化反应抑制或中止的判断主要通过测量被氧 化物的浓度,氧的去除或氧化产物的形成。因此,反应物( 不饱与脂肪酸,自由基等)的消失,氧化产物的定量估计是 判断氧化时期的最合适方法。通过直截了当或者间接检测 氧的消失与自由基的电子自旋光谱,适用于氧化过程的初 始时期。通常采纳TBARS法来评价脂质的过氧化、