饲料中真蛋白的测定方法

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农作物籽实中蛋白质测定方法

农作物籽实中蛋白质测定方法
农作物籽实中蛋白质的测定方法主要有以下步骤：
1. 样品消煮：称取一定量的烘干样品（过0.25mm筛子），放入开氏瓶或消煮管中，加入混合催化剂18g，加几滴水湿润后，加入5mL 浓H2SO4，小心轻摇后加塞放置过夜。

盖上小漏斗，将消煮管放置在消煮炉或电炉上，开始时用小火加热，当消煮液呈棕色时，提高温度，消煮至溶液呈清亮带浅蓝色时，再加热约10min，取下冷却至温热。

将消煮液无损地转入100mL容量瓶中，冷却至室温后定容并放置澄清。

2. 氮的测定：用移液管吸取澄清待测液5.00mL或10.00mL放入半微量定氮仪中进行定氮（以下操作同土壤全氮的测定）。

同时作空白试验，校正试剂和滴定误差，并做核对试验。

3. 结果计算：粗蛋白质（干基）(%)=（V-V。

）×c×14×10-3×分取倍数×k×100/m。

以上是农作物籽实中蛋白质的测定方法，供您参考。

实际操作中请根据具体设备和条件进行调整。

同时请注意，由于消煮过程会涉及到浓硫酸等强酸和高温操作，请务必在专业人员的指导下进行，注意安全。

饲料原料掺假检验

饲料原料掺假检验1.鱼粉掺假检测及真蛋白质的测定1物理方法：1.1感官检查法根据鱼粉成分的形状、结构、颜色、质地、光泽度、透明度、颗粒度等特征来检查。

①标准鱼粉一般为颗粒大小均匀一致、稍显油腻的粉状物，可见到大量疏松呈粉末的鱼肌纤维及少量的骨刺、鱼鳞、鱼眼等物；颜色均一，呈浅黄、黄棕或黄褐色；手握有疏松感，不结块，不发粘，不成团；有浓郁的烤鱼味，略有鱼腥味。

②鱼粉色泽随鱼种而异，墨罕敦鱼粉呈淡黄色或淡褐色，沙丁鱼粉呈红褐色，白鱼粉为淡黄或灰白色。

加热过度或含油脂高者，颜色加深。

如果鱼粉色深偏黑红，外观失去光泽，闻之有焦糊味，为储藏不当引起自燃的烧焦鱼粉。

如果鱼粉表面深褐色，有油臭味，是脂肪氧化的结果。

如果鱼粉有氨臭味，可能是贮藏中脂肪变性。

如果色泽灰白或灰黄，腥味较浓，光泽不强，纤维状物较多，粗看似灰渣，易结块，粉状颗粒较细且多成小团，触摸易粉碎，不见或少见鱼肌纤维，则为掺假鱼粉，需要进一步检。

1.2漂浮法取少许样品放入洁净的玻璃杯子中，加入１０倍体积的水，剧烈搅拌后静置。

观察水面漂浮物和水底沉淀物，如果水面有羽毛碎片或植物性物质（稻壳粉、花生壳粉、麦麸等）或水底有沙石等矿物质，说明鱼粉中掺入该类物质。

1.3气味测试法根据样品燃烧时产生的气味判别是否掺入植物性物质。

真品燃烧时是毛发燃烧的气味，如果出现谷物干炒的芳香味，说明掺入植物性物质。

另外还可以根据气味辨别是否掺入尿素。

只需取样品20克放入小烧瓶中，加20克生大豆粉和适量水，加塞后加热15--20分钟，去掉塞子后如果能闻到氨气味，说明掺入尿素。

1.4气泡鉴别法取少量样品放入烧杯中，加入适量稀盐酸或白醋，如果出现大量气泡并发出吱吱声，说明掺有石粉、贝壳粉、蟹壳粉等物。

1.5显微镜检法显微镜检法是最常用的一种方法，可以识别出大多数掺假物，但因为需要使用立体显微镜，故一般常用于大中型饲料企业或养殖物。

使用显微镜检法需要熟悉一些常见掺假物的典型显微特征。

饲料营养成分的测定

饲料营养成分的测定1、饲料中水分的测定饲料中的水分存在形式有两种，一是游离水（又叫初水），二是吸附水。

因此水分的测定一般包括初水和吸附水的测定，总水的计算。

有些饲料如子实、糠麸类饲料和秸杆、干草等都处于风干状态，因此只测吸附水（也就是总水），不测初水和计算总水分的含量。

1.1 初水分的测定1.1.1 仪器设备工业天秤，电热式恒温烘箱，剪刀，粉碎机，样本瓶，药匙，培养皿，筛子。

1.1.2 测定原理含水分高的新鲜饲料在60-65℃烘箱中烘干至恒重，逸失的重量即为初水。

1.1.3 测定步骤取平均样品200-300g，置于已知重量的培养皿中，先在80℃条件下，烘15min，然后放在60-65℃的烘箱中，进行干燥，干燥到样品容易磨碎（5-6h）。

将烘干的样品放在室内自然的条件下冷却4-6h（不少于2h），便成为风干状态。

称重：重复上述操作，直到两次称重之差不超过0.5g为止。

初水分=烘干前后重量之差/鲜样品重*100%1.2 吸附水分测定（干物质测定）1.2.1 测定原理在105℃±2烘箱内，在大气压下烘干，直至恒重，逸失的重量为试样吸附水分。

在该温度下干燥，不仅饲料中的吸附水被蒸发，同时一部分胶体水分也被蒸发，另外还有少量挥发油挥发。

1.2.2 仪器设备称量瓶，烘箱，药匙，干燥器（用氯化钙或变色硅胶作干燥剂），分析天平，坩埚钳，小毛刷。

1.2.3 测定步骤洁净的称量瓶，在105℃烘箱中烘1h，取出，在干燥器中冷却30min ，称重，准确至0.0002g。

重复以上动作，直至两次重量之差小于0.0005g为恒重。

在已知重量的称量瓶中称取两份平行试样，每份2-5g（含水重0.1g以上，样厚4mm以下），准确至0.0002g，称量瓶不盖盖，在105℃烘箱中烘3h（温度到达105℃开始计时），取出，盖好称量瓶盖，在干燥器中冷却30min，称重，再同样烘干1h，冷却，称重，直到两次重量差小于0.0002g。

饲料真蛋白的测定方法

饲料中纯蛋白质（真蛋白）的测定
一、测定原理
饲料蛋白质经沸水提取并在碱性溶液中被硫酸铜沉淀。

过滤和洗涤后，可将纯蛋白质和非蛋白质含氮物分离，再用凯氏定氮法测定沉淀物中的蛋白质含量。

二、仪器设备
（1）烧杯：200ml
（2）定型滤纸
（3）其他设备与粗蛋白质测定法相同
三、试剂与配制
（1）100g.L-1硫酸铜溶液；分析纯硫酸铜（5水硫酸铜）10g溶于100ml水中
（2）25g.L-1氢氧化钠溶液：将2.5g分析纯氢氧化钠溶于100ml水中
（3）10g.L-1氯化钡溶液：1g氯化钡溶于100ml水中
（4）2mol.L盐酸溶液
（5）其他试剂与粗蛋白质测定法相同
四、测定步骤
准确称取试样1g左右（精确至0.0001g）置于200ml烧杯中，加50ml水中，加热至沸。

加入20ml硫酸铜溶液，20ml氢氧化钠溶液，用玻璃棒充分搅拌，放置1h以
上。

用定性滤纸过滤，然后用60~80摄氏度热水洗涤沉淀5或6次，用氯化钡溶液5滴和盐酸溶液1滴检查滤纸，直至不生成白色硫酸钡沉淀为止。

将沉淀和滤纸放在65摄氏度烘箱干燥2h，然后全部转移到凯氏烧瓶中，按半微量凯氏定氮法进行氮的测定。

计算公式同粗蛋白！。

饲料中粗蛋白检测

聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同种类的蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。饲料中的蛋白质含有许多种类，会在凝胶上出现多条区带，需要分别计算每条区带所表达的蛋白质含量，然后统计分析出蛋白含量，其过程复杂且技术含量极高。爱德使用的方法只是初步的判断蛋白质种类和含量的多少，并不能计算出准确的含量。

反刍动物饲料中的粗蛋白包括两个部分：真蛋白：即上述提到的由肽链构成的蛋白质。也称为纯蛋白。主要由饲料原料中的饼粕类提供。非蛋白氮：(Nonprotein Nitrogen NPN) 非蛋白氮是指除真蛋白 (多肽)以外的其他所有含氮物质化合物，主要是一些有机非蛋白氮化合物如氨、酰胺、胺、氨基酸和无机氮化合物如铵盐类。作为非蛋白氮补充饲料的一般为氨的衍生物：尿素、双缩脲、氨、铵盐及其它合成的简单含氮化合物。作为简单的纯化合物质，NPN对动物不能提供能量，其作用只是供给瘤胃微生物合成蛋白质所需的氮源，以节省饲料蛋白质。

凯氏定氮法质谱分析法（MS）双缩脲法（Biuret法）福林—酚试剂法（Lowry法，Folin-酚法）考马斯亮蓝法（Bradford法）电泳法

凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法也是国家对饲料检测的标准方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准碱滴定，就可计算出样品中的氮量。然后乘上蛋白质常数，就得出了样品中蛋白质含量。凯氏定氮法测定的是含氮量，即饲料中包括 NPN的总蛋白（粗蛋白含量）。特点是结果准确，重复性好。缺点是操作复杂，耗时耗试剂。

第二节饲料真蛋白质

第二节饲料真蛋白质（TP）的测定方法一、适用范围本方法适用于饲料中真蛋白质的测定。

二、原理蛋白质在一定碱性条件下，能与重金属盐类发生盐析作用而析出沉淀，此沉淀物不溶于热水，而非蛋白氮则易溶于水。

用热水洗沉淀，将水溶性含氮物洗去，剩下的沉淀物再用定氮法测定，得出真蛋白质的含量，再用真蛋白质与粗蛋白质含量之比，可判断出饲料中是否掺入水溶性非蛋白含氮物质。

三、仪器与设备1、实验室用样品粉碎机。

2、分样筛：直径0.45mm（40目）。

3、分析天平：感量0.0001g。

4、烧杯：200ml。

5、玻璃棒。

6、玻璃漏斗：直径10cm。

7、定性滤纸：中速，直径15cm。

8、表面皿：直径10 cm。

9、干燥箱：可控温度65～70℃。

10、消化管。

11、消煮炉。

12、半微量凯氏定氮仪或KDN-2C型定氮仪13、容量瓶：100ml（半微量凯氏定氮仪用）。

14、锥形瓶：150ml（半微量凯氏定氮仪用）。

15、锥形瓶：250ml（KDN-2C型定氮仪用）。

16、酸式滴定管。

四、试剂与溶液本方法除特殊注明外，试剂均为分析纯，水均为蒸馏水。

1、硫酸。

2、硫酸铜溶液：60g/L。

建议每次配制200～500ml臵试剂瓶中备用。

3、混合催化剂：硫酸铜（5个结晶水）：硫酸钾＝1：15粉碎过40目混匀。

（同粗蛋白质的测定）4、氢氧化钠：12.5g/L。

建议每次配制200～00ml臵塑料瓶中备用。

5、硼酸：20g/L。

6、混合指示剂：甲基红0.025 g/25mL乙醇溶液；溴甲酚绿0.125 g/25mL乙醇溶液。

两溶液等体积混合，在阴凉处保存期一个月。

（同粗蛋白质的测定）7、硼酸吸收液：按1000ml浓度为20g/L的硼酸溶液，加入6ml的混合指示剂的比例混合，现用现配。

8、盐酸标准溶液：（1）半微量凯氏定氮仪用：0.05mol/L盐酸标准溶液：取4.2ml浓盐酸，用蒸馏水定容至1000 ml。

标定后备用。

（2）KDN-2C型定氮仪用：0.07mol/L盐酸标准溶液：取6.0ml浓盐酸，用蒸馏水定容至1000 ml。

真蛋白的测定

真蛋白的测定
方法一，盐析法
①试剂
1．硫酸铜溶液：10%，称取50.00g硫酸铜加水溶解，并稀释至500ml 2．氢氧化钠溶液：2.5%，称取12.50g氢氧化钠，加水溶解，并稀释至500ml 3．盐酸标准溶液：0.05mol/L
②真蛋白测定
精确称取样品1g左右，置于250ml烧杯中，加50ml蒸馏水，于电炉上加热煮沸，加入20ml10%硫酸铜溶液，再在搅拌下缓缓加入20ml2.5%氢氧化钠溶液，摇匀。

从电炉取下，室温放置2小时。

沉淀物用中速定性滤纸倾泻法过滤。

并用少量70℃以上热水多次洗涤烧杯和沉淀物，直至滤液无so2+4离子（用5%BaCl2溶液检验无沉淀），连沉淀物一起放入80℃干燥箱中烘至略潮，和入凯氏定氮烧瓶中，消化，测定其中的蛋白质含量（同粗蛋白的测定），同时进行空白测定。

另取样品0.5g进行粗蛋白的测定。

方法二：测非蛋白氮（NP）法
①NP的测定
称取15g左右样品（精确到0.1mg）,准确加入100ml5% 三氯乙酸溶液，浸泡振荡2h ,静置过滤，精确量取10－20ml滤液定氮（消化时可加2－3滴正辛醇作消泡剂），同时做空白实验。

②NP的计算
同粗蛋白质（CP）的计算
③真蛋白质（TP）的计算
TP%＝CP%－NP%
真蛋白质的比率＝TP%/CP%*100%
一般来讲，真蛋白质的比率应符合下列数值：
进口鱼粉应≥80%，国产鱼粉≥75%。

饲料中粗蛋白的测定-凯氏定氮法

凯氏定氮仪测定步骤
影响因素分析
1.取样
试样粉碎后一般过40 目筛，且一定要把粉碎后的试样及粉碎机中残留的部分清扫后充分混合均匀，避免粉碎的试样分级而影响分析结果的准确性。
2.催化剂及其用量
国标为0.4g 硫酸铜和6g 无水硫酸钾( 或无水硫酸钠)。若添加量大，消化液容易结晶；添加量减少，会延长消化时间或消化不完全。
饲料中粗蛋白质含量的测定
凯氏定氮法
目录
1. 适用范围
2. 测定原理 3. 仪器设备及试剂
4. 测定步骤
5. 影响因素分析
适用范围

蛋白氮（真蛋白质提供氮源）
粗蛋白质
非蛋白氮（氨基酸、酰胺、铵盐）
测定原理
凯氏法测定试样中含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，在用标准浓度的酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白质含量。
3.消化温度
刚开始时以低温(200 ～ 300℃ ) 加热，待试样焦化泡沫消失后，逐步缓慢提高温度 (360～410℃ )。起初低温加热是为防止试样起泡沫，而溢出烧瓶外或碳化后的颗粒附于烧瓶壁，导致消化不完全，所测结果偏低。
4.消化时间
可根据试样的重量、蛋白含量的多少以及消化的难易程度而适当调整消化液澄清后的消化时间。对于所称试样质量较多、蛋白含量高于蚕蛹或者难消化的试样，消化液澄清后继续消化的时间可控制在45m i n ～ 2h 不等，具体时间化验工作者可根据自己的工作经验而自行定夺。
仪器设备及试剂
样品粉碎机 40目分析筛分析天平消化炉消化管凯氏蒸馏装臵滴定管
98%浓硫酸硫酸钾硫酸铜硼酸溶液标准盐酸溶液混合指示剂

饲料中真蛋白的测定方法(精)

饲料中真蛋白的测定方法1. 前言饲料作为畜牧养殖生产中的重要生产资料，其营养价值的高低直接影响到畜牧养殖的效益，而饲料中蛋白质的含量是一项重要的指标，饲料中粗蛋白质包括真蛋白质和非蛋白质两部分含氮物质，后者主要包括游离氨基酸、硝酸盐、铵盐等，故不能反映出饲料蛋白质对动物的真正营养价值。

有些不法生产商故意添加硫酸铵、尿素等非蛋白质来提高产品的粗蛋白含量，导致部分养殖场户存在一个误区，认为标签上标注的粗蛋白质高，营养价值就高，从而造成养殖效益的低下。

本文在凯氏定氮方法的基础上进行相应的前处理从而达到测定真蛋白的目的。

蛋白质经沸水提取并在一定碱性条件下，能与硫酸铜发生盐析作用而析出沉淀，此沉淀物不溶于热水，而非蛋白氮则易溶于水，用热水洗沉淀，将水溶性含氮物洗去，剩下的沉淀物再用凯氏定氮法测定，得出真蛋白质的含量。

2. 实验部分2.1仪器与试剂粉碎机、40目分样筛、分析天平（感量0.1mg ）、烧杯250ml 、玻璃棒、漏斗(直径10cm 、定性滤纸（中速，12.5cm ，15cm 、可控温干燥箱、K1100F 全自动凯氏定氮仪、SH420石墨消解炉、可控温电炉浓硫酸（98%）、硫酸铜(分析纯、硫酸铜溶液(10%、硫酸钾、氢氧化钠溶液（40%）、氢氧化钠溶液（2.5%）、硼酸（20g/L，按混合指示剂：硼酸=1:100加入指示剂）、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂(1:5、硫酸标准溶液（C （1/2H2SO4=0.1011mol/L、氯化钡溶液（5%）2.2实验过程2.2.1前处理将风干饲料样品用饲料样品粉碎机粉碎，通过40目（孔径0.45mm ）筛，制得分析饲料样-1--3-定氮法测定蛋白质含量，操作并不复杂，且结果令人满意，通过添加非蛋白氮（尿素、硫酸铵）成分验证了此方法的适用性，可以用于实际的真蛋白检测中。

5. 注意事项5.1倾泻法过滤洗涤时，烧杯中的沉淀物一定要彻底清洗。

且洗涤时要用80℃左右的热水，可以减少洗涤次数。

纯蛋白质测定

纯蛋白质测定氢氧化铜沉淀法一、定义：纯蛋白质又叫真蛋白质，是由多种氨基酸合成的一类高分子化合物。

二、原理：饲料样品在水溶液中，当硫酸铜过量时，蛋白质被氢氧化铜沉淀而生成不溶于热水的化合物，使真蛋白质沉淀，然后用水洗去盐类和溶解性的氨化含氮物，从而将纯蛋白的沉淀物进行常规凯氏定氮法的消化、蒸馏、滴定过程测定其含氮量，将结果乘以蛋白质的换算系数后即得纯蛋白质的含量。

沉淀蛋白质：CuSO4+2NaOH→Cu(OH)2↓+Na2SO4三、仪器及用具：250mL烧杯，慢速新华滤纸，其它设备与粗蛋白质方法相同。

四、试剂：6%硫酸铜溶液、1.25%氢氧化钠溶液、10%氯化钡溶液，其它与测定粗蛋白质相同。

五、操作步骤：称取样品0.3～0.6g，于250mL烧杯中，加蒸馏水50mL，加热至沸，向烧杯内倒入25mL6%硫酸铜溶液略搅，再徐徐加入25mL 1.25%氢氧化钠溶液搅拌，注意不要倒得太快，否则局部氢氧化钠浓度太高将溶解蛋白质。

静止一小时，用新华定量滤纸（慢速）过滤，用热蒸馏水洗涤残渣，洗至用氯化钡溶液检查，滤液不混浊后，将漏斗连同滤纸置100～120℃烘箱中烘至略潮，取下滤纸卷成细长卷放入消化管内，按凯氏定氮法测定。

主要步骤及对结果的影响：称样→煮沸→加入硫酸铜溶液和碱液→过滤（洗涤）→烘至略潮→消化→蒸馏→滴定1、称样准确。

2、加蒸馏水后必须煮沸。

3、加 1.25%氢氧化钠溶液必须徐徐加入且搅拌，以免氢氧化钠浓度太高溶解蛋白质导致结果偏低。

加碱时样液必须保证有较高的温度，样液温度不够时，加碱后生成的沉淀很快变黑，过滤洗涤困难，结果也偏低。

4、必须静置1小时以上。

5、必须用定量慢速滤纸过滤，使用中速滤纸过滤结果偏低。

6、必须用蒸馏水洗至无硫酸根离子。

7、过滤后只需烘至略潮。

如烘得太干，加入硫酸前可滴数滴蒸馏水。

8、以下同粗蛋白一样。

饲草料粗蛋白测定的原理

饲草料粗蛋白测定的原理饲草料粗蛋白测定是饲料中蛋白质含量的重要分析方法之一。

粗蛋白是由真蛋白和非蛋白氮化合物组成的总蛋白质的含量。

正确测定饲料中的粗蛋白含量有助于制定科学合理的饲养方案，提高动物的生产性能。

下面将详细介绍饲草料粗蛋白测定的原理。

粗蛋白质含量的测定方法多种多样，常用的有几种基本的方法，如凯氏法、低氮减少法、Kjeldahl法和酱油蛋白法。

其中，凯氏法和Kjeldahl法是广泛应用于饲草料粗蛋白测定中的两种主要方法。

凯氏法是一种以凯氏酸试剂为氮元素的酸化试剂，通过与饲料样品中的粗蛋白发生氧化反应，并生成一系列含硫的物质，并通过碱性高锰酸钾溶液滴定来确定样品中的粗蛋白含量。

凯氏法的基本原理是：将饲料样品与凯氏酸试剂混合并进行高温酸化，将蛋白质分解为硫酸和氨气，而非蛋白质氮化合物不能与凯氏酸试剂反应，因此不影响测定结果。

经过酸化后，原本无机态的硫被氧化为SO2，与高锰酸钾滴定溶液中的还原剂发生氧化还原反应，并以硫酸根离子形式存在。

根据硫酸根离子的浓度来计算饲料样品中的粗蛋白含量。

Kjeldahl法是另一种常用的饲草料粗蛋白测定方法。

这个方法的基本原理是将饲料样品经过酸化和蒸馏处理，使样品中的蛋白质转化为含氮有机物，然后再采用滴定的方法测定样品中的氮含量，最后通过乘以一个氮蛋白质的修正系数计算出样品中的粗蛋白含量。

具体步骤包括：将饲料样品与硫酸和硒代硫酸混合，加热酸炸，使样品中的有机氮转化为铵盐；再将样品溶液冷却，并加入氢氧化钠和硼酸，将样品中的铵盐转化为氨气；将生成的氨气传递至硫酸中，并与硫酸反应，生成硫酸铵；最后，用氢氧化钠或氨水将未反应的酸中和，然后利用盐酸溶液滴定样品中剩余的氢氧化钠或氨水，计算出样品中的总氮含量。

无论是凯氏法还是Kjeldahl法，它们都具有操作简单、数据准确、结果可靠的特点。

但是，每种方法都有其局限性。

凯氏法对于饲料中非蛋白氮和少量氨基酸的测定结果会有所偏低；而Kjeldahl法会低估胎球蛋白和非小时氨基酸的氮含量，因为这些有机物与硫酸化学反应导致它们的氮无法测定。

饲料原料的掺假与伪劣识别

2020/4/17
三 . 大宗饲料原料的识假实例
(3) 其他NPN的检测（如叠氮化钙）部分NPN目前还没有特效方法检测，但它们
并不含氨基酸，其粗蛋白均会很高（>100%或远大于指标值），因此可借助镜检将可疑的颗粒逐一挑出，收集0.1g以上的可疑颗粒，检测其粗蛋白值或氨基酸，来判断是否掺NPN。还可将样品过筛（40-100目），分别测定筛下物和筛上物的粗蛋白，依据二者差异的程度判断是否掺假。
2020/4/17
前言
• 饲料是典型的原料依赖性产品，原料决定着产品的质量和成本，现有的饲料原料就有12 类、近200多种，掌控其质量绝非易事。
• 根据实际体会介绍当前饲料原料的搀假的特点、发展趋势和识假方略，然后分类讲述一些近年来市场上搀假、造假最多的饲料原料的识别实例，希望起到警示作用，并能提高饲料企业的检测水平。
(5) 将少许鱼粉（约3-5g ）放入分液漏斗中,加四氯化碳50-80ml,轻轻摇动后静止5分钟,把分液漏斗活拴打开将沉淀物放到一小烧杯内,之后将小烧杯内沉淀物过滤出来,此残渣用于蛋白精的检测.
请注意：乙醚、丙酮、石油醚均为易燃品，请在通风的条件下操作，严禁烟火。
2020/4/17
7.其它定性检查的方法
2020/4/17
二 .饲料原料掺假识别的基本方略
掺假的原料虽然手段不断更新，但我们只要通过感官判断、镜检、可疑物分离和必要的理化试验或光谱等手段，仔细观察、分辨还是能发现一些破绽，跟踪追击，就能将假货拒之门外。
2020/4/17
二 .饲料原料掺假识别的基本方略
一般饲料原料掺假识别可按如下步骤进行： ➢ 发现疑点：
2020/4/17
一、饲料原料掺假的现状、发展趋势与对策

常见精饲料原料的真蛋白质比率测定

饲料研究FEED RESEARCH NO .2,201152饲料检测饲料真蛋白质的测定较为简便，不需要添加设备，在凯氏定氮的基础上增加真蛋白质沉淀和过滤的步骤即可完成。

测得饲料中粗蛋白（CP）和真蛋白质的含量，也就得出了总的非蛋白含氮物（NPN）含量和比率。

如果了解正常常用精饲料原料的真蛋白质比率，即可推断常用精饲料原料、猪和鸡等的配合饲料及牛和羊等所用精料补充料中的NPN 比率。

通过检测实际购入的精饲料原料或配合饲料中的真蛋白质比率，推测NPN 比率，为判断其中是否加入NPN 及是否需要进一步测定其中NPN 种类提供参考。

但是，除了鱼粉的真蛋白质比率有文献报道外，目前其他常用精饲料原料的真蛋白质比率均未见报道。

该试验利用硫酸铜沉淀法，对常用的精饲料原料中的真蛋白质进行测定，确定常用精饲料原料的真蛋白质比率，以期为判断实际生产中使用的精饲料原料、配合饲料及精料补充料中是否加入NPN 提供参考。

1 材料与方法1.1 饲料样品采集及制备从某饲料公司采集畜禽常用精饲料原料饲料样本，包括玉米、麸皮、豆粕、菜籽饼、棉籽饼、胡麻饼、鱼粉及肉骨粉等，将风干饲料样品用饲料样品粉碎机粉碎，通过40目（孔径0.45 mm）筛，制得分析饲料样本，备用。

1.2 仪器设备样品粉碎机、电子分析天平（感量0.000 1 g）、红外线消煮炉、凯氏半微量定氮仪、自动恒温鼓风干燥箱、通风橱柜、凯氏烧瓶、酸式滴定管、容量瓶、烧杯、移液管、锥形瓶和定性滤纸等。

1.3 试剂浓硫酸（98 %）、硫酸铜（分析纯）、硫酸钾（分析纯）、40 %氢氧化钠溶液、2 %硼酸溶液、盐酸标准滴定溶液、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂、10 %硫酸铜溶液、2.5 %氢氧化钠溶液、1 %氯化钡溶液和2 mol/L 盐酸溶液。

1.4 饲料中真蛋白质的测定方法试验参照袁缨主编的《动物营养学实验教程》中的硫酸铜沉淀法测定饲料中的真蛋白质。

1.4.1 测定原理饲料蛋白质经沸水提取并在碱性溶液中被硫酸铜沉淀，经过滤和洗涤后，可将真蛋白质和NPN 分离，再用凯氏定氮法测定沉淀物中的蛋白质含量。

饲料中真蛋白的测定及其意义

饲料中真蛋白的测定及其意义作者：辛欣来源：《品牌与标准化》2016年第01期【摘要】蛋白质是生命的物质基础，饲料中蛋白质测定的准确性在饲料应用中有极其重要的作用。

【关键词】蛋白质测定意义【DOI编码】 10.3969/j.issn.1674-4977.2016.01.004蛋白质是复杂的含氮有机化合物，动物在成长过程中所需要的蛋白质营养成分多少决定其生长的质量，所以真蛋白质含量测定的准确性直接影响饲料的质量和动物的成长。

饲料原料的种类很多，有动物蛋白饮料和植物蛋白饮料，饲料中蛋白质含量是判定饲料营养价值的一项重要指标。

饲料中粗蛋白质包括真蛋白质和非蛋白质两部分含氮物质，后者主要包括游离氨基酸、硝酸盐、氨等，在饲料生产中添加羽毛粉、血粉、尿素等不易被动物肌体吸收的物质，饲料产品中粗蛋白含量上去了，但却没有相应的营养价值，造成养殖效益的低下，所以检测饲料中真蛋白含量的意义重大。

近年来，在国内外测定饲料中蛋白质含量的方法很多，但是应用广泛的分析方法中主要采用凯氏定氮法。

凯氏定氮法由Kieldahl于1833年首先提出，经长期改进，迄今已发展的非常完善及准确，其中自动定氮仪法采用较广泛。

1 原理真蛋白的检测原理是将20%硫酸铜加入已溶解的饲料原料中，加入过程中要缓慢且过量，这样才能使饲料中的真蛋白在碱性条件下被氢氧化铜沉淀出来，为了防止水溶性含氮物的干扰，还要用蒸馏水将其洗净，此时的沉淀物可按饲料中粗蛋白的检测方法将真蛋白质的含量测定出来。

蛋白质是有机化合物，将饲料原料与硫酸和催化剂一起在高温炉上加热，将其中的蛋白质充分分解出来，分解出来的氨与硫酸产生碳酸铵，最后再加入过量的碱溶液，在蒸馏过程中使其中的氨游离，在硼酸吸收液接收后用标准盐酸溶液滴定，根据酸的消耗量计算其中蛋白质的含量。

2 样品消化（1）消化反应方程式H2SO4+2NH3=（NH4）2SO4加入硫酸钾可提高溶液的沸点，进而加快有机物的分解。

饲料中真蛋白的测定

饲料中真蛋白的测定方法饲料中真蛋白的测定方法BB.1方法一：BB.1.1试剂和仪器BB.1.1.1硫酸铜溶液6%，称取30.00g CuSO4加水溶解，并稀释至500mL。

BB.1.1.2氢氧化钠溶液1.25%，称取6.25gNaOH加水溶解,并稀释至500mL。

BB.1.1.3盐酸标准溶液 0.0500mol/L。

BB.1.1.4半微量定氮仪。

BB.1.2样品测定精确称取样品1g左右，置于250mL烧杯中，加100mL水（指去离子水），于电炉上加热煮沸，加入25mL6%CuSO4溶液，再在搅拌下缓缓加入25mL1.25%NaOH溶液，摇匀。

从电炉上取下，室温放置2h，用11cm中速定性滤纸，倾斜法过滤。

并用少量水多次洗涤烧杯和沉淀物，直至洗出液无SO42－离子（用10%BaCl2溶液检验无沉淀），连漏斗一起放入80℃干燥箱，烘至略潮，小心卷起滤纸成棒状，连沉淀物一起移入250mL凯氏烧瓶，加浓硫酸20mL，3.5gK2SO4和0.5gCuSO4，摇匀。

置电炉上小心消化至澄清透明，继续加热半小时，取下冷却，小心加入50mL水，放冷，移入100mL容量瓶中，用少量水多次洗涤烧瓶，洗液并入容量瓶，再补加水至刻度。

吸取20mL样品消化稀释液于定氮仪中。

以下按粗蛋白测定方法测定。

蛋白系数取6.25。

同时作空白试验。

BB.2方法二：将样品充分混匀后分成两份，准确称取。

一份用于常规凯氏定氮法测定其粗蛋白质含量，将另一份加五倍（50ml）的三氯乙酸溶液（10%的水溶液）搅动，静置10min后全部转移到漏斗中过滤，再用五倍（50ml）三氯乙酸溶液洗涤滤渣两遍，于105℃烘干按常规测定。

鱼粉中真蛋白质

鱼粉中真蛋白质(非蛋白氮)的测定方法1、适用范围：本方法适用于饲料级鱼粉中真蛋白与粗蛋白的检验。

2、原理蛋白质在一定碱性条件下，能与重金属盐类发生盐析作用而析出沉淀，此沉淀物不溶于热水，而非蛋白氮则易溶于水，用热水洗沉淀，将水溶性含氮物洗去，剩下的沉淀物再用凯氏定氮法测定，得出真蛋白质的含量，再用真蛋白质与粗蛋白质含量之比，可判断出鱼粉中是否掺入水溶性非蛋白含氮物质。

鱼粉真蛋白质比率与指标：鱼粉蛋白质的比率以测得的真蛋白质含量与粗蛋白质含量之比来表示，粗蛋白质含量应符合产品规定，真蛋白质比率应符合：进口鱼粉中真蛋白质比率不得小于80%，国产鱼粉中真蛋白质比率不得小于75%，鱼粉真蛋白质比率小于上述值时，则判为该鱼粉中参有水溶性非蛋白含氮物质。

3、仪器设备粉碎机、20目分样筛、分析天平（感量0.1mg）、烧杯200ml、玻璃棒、漏斗(直径10cm)、定性滤纸（中速，12.5cm，15cm)、表面皿（直径10cm）、干燥箱(可控温65--70℃)、定氮仪、容量瓶200ml、锥形瓶200或250ml、酸性滴定管25ml4、试剂98%浓硫酸、硫酸铜(分析纯)、硫酸铜水溶液(60g/L)、硫酸钾、400g/L氢氧化钠水溶液、12.5g/L 氢氧化钠水溶液、30g/L硼酸水溶液、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂(保存期不超过3个月)、0.5N盐酸溶液、50g/L氯化钡水溶液5、测定步骤5.1 试样的处理称取试样1—2g(精确到0.1mg)于250ml烧杯中，加蒸馏水100ml煮沸，加入6%的硫酸铜溶液25ml和1.25%的氢氧化钠溶液25ml，边加边搅拌，加完后继续搅拌1分钟，从电炉上取下，室温放置2h以上，沉淀物以11cm中速定性滤纸过滤，用70℃以上热水反复洗残渣，直至滤液无硫酸根离子为止(取5%氯化钡试液5滴于表面皿中，加2N盐酸1滴，滴入滤液，在黑色背景处观察应无白色沉淀)。

将滤纸与残渣包好，放入烘箱，在65-75℃干燥2小时。

饲料中基本营养成分测定标准

实际上，100多年来世界各国一直沿用的是由德国科学家Hennberg和Stohman所创立的Weende饲料分析体系。

该分析体系是把饲料分成6种组分来分析测定：①水分(干物质)；②粗灰分(矿物质)；②粗蛋白(N x 6．25)；④粗脂肪(乙醚浸出物)⑤粗纤维；⑧无氮浸出物(NFE，计算值)。

这种饲料分析体系显然是饲料的概略分析(Feed Proximate Analysis) ，但也是最基本的饲料成分分析。

按照GB10648-1999 饲料标签的规定：蛋白质饲料、配合饲料、浓缩饲料和复合顶混料等饲料都要把水分、粗蛋白、粗纤维和粗灰分做为保证值项目进行标注。

饲料组成成分的分析对饲料组成成分的分析是研究营养物质的利用，评价饲料营养价值最基础的工作。

饲料中最重要的营养物质有碳水化合物、蛋白质、脂类、矿物质和维生素。

概略养分分析法把饲料组成成分分为水分、粗灰分、粗蛋白质（CP）、粗脂肪或乙醚浸出物（EE）、粗纤维（CF）和无氮浸出物（NEF）。

(一)水分饲料中的水分有两种存在形式，游离水和结合水。

饲料分析中经常测定总水分，采用干燥失重的方法。

对于不同饲料，干燥的方法应考虑其理化性质而有所区别。

尽管饲料中的水分营养价值不大，但是测定饲料中的水分可得出饲料干物质的含量，这与饲料的能量含量密切相关，因此水分的测定意义重大。

本方法依据GB6435—86 饲料中水分的测定，它适用于配合饲料和单一饲料水分含量的测定，但不适用于做饲料的奶制品、动植物油中的水分测定。

1.方法原理试样在(105±2)℃烘箱内和常压条件下烘干至恒重的质量为水分。

2.仪器设备(1)植物样品粉碎机或研钵；(2)试验筛：孔径0.42mm（40目）(3)分析天平：分度值0．0001g；(4)称量皿：玻璃或铝质，直径40mm、高25mm(5)电热式恒温烘箱：控制±2℃；(6)干燥器：变色硅胶干燥剂3．样品的制备(1)选取有代表性的原始样品不少于1000g。

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饲料中真蛋白的测定方法
1.前言
饲料作为畜牧养殖生产中的重要生产资料，其营养价值的高低直接影响到畜牧养殖的效益，而饲料中蛋白质的含量是一项重要的指标，饲料中粗蛋白质包括真蛋白质和非蛋白质两部分含氮物质，后者主要包括游离氨基酸、硝酸盐、铵盐等，故不能反映出饲料蛋白质对动物的真正营养价值。

本文在凯氏定氮方法的基础上进行相应的前处理从而达到测定真蛋白的目的。

2.实验部分
2.1仪器与试剂
粉碎机、40目分样筛、分析天平（感量0.1mg）、烧杯250ml、玻璃棒、漏斗(直径10cm)、定性滤纸（中速，12.5cm，15cm)、可控温干燥箱、K1100F全自动凯氏定氮仪、SH420石墨消解炉、可控温电炉
浓硫酸（98%）、硫酸铜(分析纯)、硫酸铜溶液(10%)、硫酸钾、氢氧化钠溶液（40%）、氢氧化钠溶液（2.5%）、硼酸（20g/L，按混合指示剂：硼酸=1:100加入指示剂）、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂(1:5)、硫酸标准溶液（C（1/2H2SO4=0.1011mol/L)、氯化钡溶液（5%）
2.2实验过程
2.2.1前处理
将风干饲料样品用饲料样品粉碎机粉碎，通过40目（孔径0.45mm）筛，制得分析饲料样
本，备用。

准确称取约0.5g试样（精确至0.0001g）置于250mL烧杯中，加75mL蒸馏水，加热至沸。

，煮沸30min，加入2.5%氢氧化钠溶液20mL，10%硫酸铜溶液20mL，用玻璃棒充分搅拌均匀，微沸一段时间，冷却放置超过2h。

用定性滤纸过滤，然后用70~80℃热水冲洗沉淀5次以上，用5%氯化钡溶液5滴和数滴盐酸检查滤液，直至不生成白色硫酸钡沉淀。

将沉淀和滤纸放在65℃烘箱烘干。

（共称取9个样品，4-9经上述沉淀处理，8号样品添加0.0636g尿素，9号样品添加0.1135g硫酸铵；1-3号样品不做沉淀处理直接消化）
2.2.2消化
将干燥后的沉淀连同滤纸一起放入消化管中，加入15mL浓硫酸，3g硫酸钾，0.2g硫酸铜，放在石墨消解炉上设置温度梯度升温消化（同时做空白试验）。

升温程序：
阶段温度℃时间min
120030
232030
340090
消解完成后，冷却，待上机。

2.2.3测试
将冷却后的消化管置于K1100F全自动凯氏定氮仪上，设置参数：硼酸20mL，碱60mL，稀释水10mL，蒸馏5min。

依次做空白及样品，结果自动计算，打印。

3.结果与讨论
3.1样品空白消耗滴定酸的体积
样品空白123平均值
消耗滴定酸体积mL0.58260.53760.50580.5421
3.2饲料中粗蛋白的测定
样品编号质量（g）粗蛋白含量（%）平均值（%）
10.533615.6215
20.577315.6626
15.5480
30.555115.3598
3.3饲料中真蛋白的测定
样品编号质量（g）真蛋白含量（%）平均值（%）
40.554012.5942
50.581613.4787
13.6072
60.527113.7658
70.530013.5771
80.555913.7830
90.575913.6927
4号样品测得结果偏低，可能是在过滤的过程中造成损失，因此平均值计算时将其舍去，通过3.2与3.3的数据对比可以看出两者相差近2%，除去操作损失基本可以判断饲料中确实含有非蛋白氮成分。

8号和9号样品分别添加一定量的尿素、硫酸铵，但是真蛋白含量与其他样相差不大，所以可以验证此方法测定饲料中真蛋白的可行性。

4.结论
通过硫酸铜等重金属盐在碱性环境下是蛋白质变性，过滤掉非蛋白氮成分，再利用凯氏
定氮法测定蛋白质含量，操作并不复杂，且结果令人满意，通过添加非蛋白氮（尿素、硫酸铵）成分验证了此方法的适用性，可以用于实际的真蛋白检测中。

5.注意事项
5.1倾泻法过滤洗涤时，烧杯中的沉淀物一定要彻底清洗。