实验二 花粉生活力的测定

实验二花粉生活力的测定

一实验目的

掌握花粉生活力鉴定的方法和原理

二实验材料

羽衣甘蓝、矮牵牛、三色堇等植物的花粉

三仪器及药品

载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、标签、记号笔、显微镜、天平、烧杯、培养皿、玻璃棒、滴管、量筒、电炉、石棉网、烘箱

蔗糖、琼脂、蒸馏水、磷酸二氢钾、磷酸二钠、TTC

四实验原理

花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少通常与其生活力密切相关，因此可利用花粉的形态观察过氧化物酶、脱氢酶活性的高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。

鉴定花粉生活力的方法很多，主要有

1 直接鉴定法

2 形态观察法

3 染色观察法

4 培养基发芽法

五实验步骤

花粉生活力的测定

染色观察法——TTC染色

1 配置TTC染色液，称取0.5gTTC溶于100ml磷酸盐缓冲液中，装入棕色瓶

2 制片：取少量花粉于载玻片上，滴入1~2滴0.5%TTC染色液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，于35~40°C条件静置15~20min。

3 观察统计：在显微镜下观察三个不同视野。凡被染成红色或玫瑰色都是有生活力的花粉.

培养基发芽法——固体培养基

1 配制培养法：取1g琼脂，5g蔗糖，量94ml蒸馏水，装入烧杯，加热使琼脂溶化，配成5%浓度培养基。同法配置10%、15%、20%浓度的培养基。

2 制片：用滴管吸取少量培养基，趁热滴在载玻片上，使放置凝固。

3播种花粉：少量的花粉均匀撒播

4培养与观察：将制好的片子放在垫有湿润滤纸的培养皿内，于20—22℃温箱中培养。待花粉萌发后于显微镜下观察，并统计发芽率，观察是每片随机取三个视野，统计花粉总数，计算平均发芽率。

六作业及思考题

同种植物材料培养基法测得的花粉生活力较低染色法测得的花粉生活力较高

原因：因为用染色法时，只要是有活力的花粉粒就会被染上颜色，而有活力的花粉粒却不一定会萌发。