促红细胞生成素测定及其在临床中的应用

第9卷第06期·总第110期2011年03月·下半月刊78促红细胞生成素测定及其在临床中的应用程玉萍关键词：促红细胞生成素；检测方法；临床检测；综述doi：10.3969/j.issn.1672-2779.2011.06.053 文章编号：1672-2779（2011）-06-0078-02促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）是一种调节红细胞生成的激素。

以往研究认为，EPO在体内的主要作用是与其受体（EPO receptor，EPOR）结合后，促进红系祖细胞分裂分化为成熟的红细胞，抑制其凋亡。

因此，临床上EPO被广泛应用于治疗各种原因引起的贫血。

近年来研究发现，EPOR还广泛表达于人体内的非造血组织，它们与EPO结合发挥器官保护、免疫调理、抗炎等多种非造血作用，所以EPO被认为是一种多效性作用的细胞因子。

本文主要就EPO及其受体生物学特性，测定方法及其在临床的应用进展作一综述。

1 EPO及其受体生物学特性天然EPO是一种含唾液酸的酸性糖蛋白，分子量为34000，在胚胎早期，EPO由肝脏产生，出生以后主要转由肾脏产生。

编码EPO的基因位于7号染色体，由165个氨基酸残基组成。

由基因重组技术合成的重组人促红细胞生成素（rhEPO），分子量为30400，其理化性质和生物学活性与天然EPO相同。

EPO的生物学活性是通过和EPOR结合而产生的。

研究发现EPO和EPOR可以在人、鼠以及其他成年动物的缺血、缺氧器官的组织细胞中表达。

EPO的产生受组织氧合状态的调节，组织氧的降低可刺激肾脏和肝脏中EPO的产生并使其受体表达增高。

EPOR是由507个氨基酸组成的跨膜糖蛋白。

新近研究发现其具有两种不同的类型，一种为同型二聚体（EPOR）2，与EPO造血作用相关。

EPO与其结合后促进红系祖细胞分化增殖，用于各种原因引起贫血的纠正。

同时该功能对心血管疾病的益处在于随着红细胞的增加，可以增加血液携氧能力，从而减少应激对心肌的损伤。

另外一种是由EPOR和β共同受体（βcR）亚单位组成的异源二聚体，该受体可以在心肌细胞、成纤维细胞和血管内皮细胞表达，主要与EPO的细胞保护作用相关。

由此可见EPO不仅可以改善肾病等患者的贫血症状，且可结合不同受体与发挥不同的生物学效应相关[1]，从而表现出多种的生物学作用。

2 EPO测定技术的发展EPO的测定方法主要经历了3个阶段:生物体内测定法；生物体外测定法；免疫学方法。

由于生物学方法检测的是细胞因子的生物活性，因此具有高亲和力，但存在着特异性差，操作繁琐，易受干扰等缺点。

免疫学方法是伴随免疫标记技术发展起来的方法。

是目前应用最广泛检测EPO的方法。

2.1 放射免疫法（RIA）RIA技术是利用放射性核素的灵敏性与抗原抗体反应的特异性相结合而创建的一类免疫检测技术。

其基本原理是：①未标记抗原、标记抗原和限量的抗体加入反应管中，在一定条件下进行竞争抑制反应。

②反应平衡后标记抗原与抗体形成免疫复合物。

由于其含量极少不能自行沉淀，需加入适当的沉淀剂将其彻底沉淀，然后经离心与游离的标记抗原分离。

③对标记抗原抗体复合物进行放射性测量。

最后由标准曲线计算出待测抗原的含量。

最初关于人体内EPO浓度的测定基本上都采用RIA方法。

该方法技术成熟，灵敏度高。

王国洪等人[2]用rhEPO 免疫动物制备了高质量的抗血清建立的RIA法灵敏度达到0.22μg/L。

缺点是:手工操作，出结果慢，试剂半衰期短，对环境有污染等限制了该方法的应用。

随着检测技术的发展，具有同样准确性和灵敏度的非放射免疫法越来越受到人们的推崇。

2.2 酶联免疫吸附试验（ELISA） ELISA是运用酶标记技术进行微量物质测定的实验方法。

基本原理是把抗原或抗体预先结合到固相载体表面，测定时将样本和酶标试剂按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原或抗体复合物。

反应终止时，洗涤去除不反应物质，加入底物后酶催化变为有色产物。

固相载体上酶标抗原或抗体被结合量与待检物质的量成一定比例，最后通过定性或定量分析即可确定样本中待测物含量。

ELISA具有操作简单，适合大批量标本测定，且成本低廉，灵敏度适中的特点。

目前曾昭伟等人建立的双抗体夹心法的ELISA试剂盒，为临床提供了准确、方便检测EPO的工具[3]。

2.3 荧光免疫法（FIA）FIA是非放射免疫法中灵敏度最高的，它常用来检测含量很低的生物活性物质。

近年来利用特殊的荧光探针，建立有效的FIA法对EPO进行检测也成为众多学者研究的热点。

如从螺旋藻中提取藻胆蛋白作为荧光探针等[4]。

FIA检测在灵敏度和特异性等方面并不亚于传统的ELISA，而在有些方面还要优于ELISA。

2.4 化学发光免疫分析法（CLIA）CLTA是以化学发光信号示踪藉以检测抗原或抗体的分析技术。

CLIA的灵敏度一般均高于酶免疫分析法。

并且具有特异性强、标记物稳定、线性范围宽，检测速度快等优点。

李君等人采用CLIA 和FIA检测EPO，CLIA批内、批间变异均优于FIA，特别是低EPO组[5]。

电化学发光免疫分析（ECLIA）是电化学发光和免疫测定相结合的产物。

ECLIA采用链霉亲和素包被磁性微粒，作者单位：解放军252医院（保定071000）第9卷第06期·总第110期 2011年03月·下半月刊79配以生物结合的抗原或抗体，使反应在液相中进行，一经问世就以发光标记物不需催化剂、受外界因素干扰少、快速、稳定等优点，成为目前最有发展前途的一种分析方法[6]。

目前CLIA 发展迅速有取代RIA 而成为主流产品的趋势。

但存在着国外的检测系统价格昂贵难以普及，国内的虽然价格便宜但灵敏度和检测的可靠性得不到保证[7]之不足。

3 EPO 的临床应用3.1 EPO 与肾脏疾病 贫血是慢性肾脏疾病的常见并发症。

其发病机制涉及慢性炎症，体内铁缺乏，红细胞寿命减半等。

但主要原因是EPO 产生不足[8,9]。

肾功能衰竭的患者，由于肾组织被破坏，由肾间质等部位产生的EPO 减少，使得体内缺乏这种高效能的激素，骨髓的红细胞系统就不能发育成熟，因而患者出现贫血。

出现尿毒症时，由于受毒素的影响，原有平均寿命为120d 的红细胞缩短为75d 左右，久之，患者的血红蛋白就明显降低。

因此，必须通过补充外源性EPO 才能解决体内EPO 缺乏的问题。

EPO 是迄今所知作用最单一且安全可靠的升血红蛋白制剂。

EPO 的应用能有效改善肾性贫血患者生活质量，减少输血次数，甚至不输血，降低心血管等并发症的发生率。

3.2 EPO 与心力衰竭（HF ） HF 是心血管系统主要的致残与致死性疾病。

其原因主要有慢性肾功能不全导致EPO 生成减少，细胞因子水平提高抑制血细胞生成，铁剂吸收不良和血液稀释等。

贫血可通过心动过速和每搏量增加引起心脏应激，又通过肾血流减少引起体液潴留，进一步加重心脏应激，长期贫血引起心脏肥厚，加速心肌细胞凋亡而加重HF 。

贫血又可引起慢性肾功能不全。

HF 、贫血和慢性肾功能不全三者相互影响，其中之一者可以引起和加重其他两者，形成一个恶性循环，即“心肾贫血综合症”。

有研究表明，心脏缺血损伤早期，EPO 除了抗炎、抗氧化应激损伤作用之外，对心肌的保护作用主要是提高心肌存活而保护心脏功能。

临床试验也证实，伴随不同程度贫血的HF 患者长期EPO 治疗可以抑制心室肥厚，增加运动能力，降低住院率和住院天数[10]。

3.3 EPO 与癌症 癌性贫血又称肿瘤相关贫血，是指恶性肿瘤本身以及治疗相关导致的贫血，发生率约50%。

贫血不仅会降低化疗的耐受性，同时也会明显降低患者的生活质量。

贫血原因之一是EPO 低反应性，升高EPO 的血液浓度能显著改善患者的贫血状况，增强抵抗力，减少并发症，故EPO 被广泛应用于预防和治疗癌症相关性贫血。

但由于EPO 具有抗凋亡、促血管生长等作用，EPO 的应用是否会对肿瘤生长发展产生促进作用引起了人们的担心。

有研究表明EPO 有利于改善总体患者的生存率，但不利的是促进了肿瘤生长进展[11]。

因此在应用EPO 纠正贫血的同时，EPO 疗法又可能有促进癌细胞生长的负面效应，以及增加静脉血栓发生的风险，这些不良效应需进一步研究和找出有效的预防方案加以应对。

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方法 收集2008～2010年冬春季入住我院并诊为急性上呼吸道感染的患儿60例；根据小儿体弱、急性上呼吸道感染冬春季易感、反复、多发的特点，分别采取积极、有效、及时的预防治疗与护理措施，以期达到治愈康复之目的。