黄芩中有效成分的提取工艺探讨

黄芩中有效成分的提取工艺探讨发表时间：2009-07-21T10:51:18.480Z 来源：《中外健康文摘》2009年第15期供稿作者：周现军 (河南省安阳市中医药学校河南安阳45500

[导读] 优选提取黄芩中有效成分的最佳工艺条件。【摘要】目的优选提取黄芩中有效成分的最佳工艺条件。方法以中药“多靶点多部位有效部位群”理论为依据，应用U9（96）均匀设计安排试验，分别用煎煮法、渗漉法、连续回流提取法和浸渍法提取黄芩中的有效成分,以确定其最佳工艺条件。结果四种方法的提取效果明显不同。结论连续回流提取法提取效果最好,其最佳工艺条件为:加6倍量 85％乙醚,药材颗粒过30目筛,提取12小时。【关键词】黄芩渗漉法连续回流提取法多靶点多部位有效部位群黄芩为常用的清热燥湿药,广泛用于湿热证和热毒证,具有显著疗效。近年来的研究表明,黄芩还有降血糖、抗癌等药理作用。黄芩的主要成分有:黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷和汉黄芩素等。本试验在黄芩苷和黄芩素等的定量基础上,对其提取工艺进行了探讨。

1 材料与仪器1.1 材料

黄芩购于安阳市药材站，经鉴定为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。黄芩苷（批号：0315—9345）、黄芩素（批号：0315—8965）对照品购于郑州市药材总公司。汉黄芩苷（批号：6902—8975）和汉黄芩素（批号：6903—8762）对照品购于邯郸市药材站。

1.2 仪器

索氏提取器（郑州市化学仪器厂）、渗漉筒（郑州市化学仪器厂）、色谱柱LiChrosorb Rp—C18（150mm×4mm，5μm ）［Waters公司］、色谱柱Shim-Pack CLC-ODS（150mm×5mm）［Waters公司］2 方法与结果2.1 提取液的制备2.1.1 煎煮法取500g黄芩粗粉，加5倍量水煎煮2次，每次40分钟，提取液浓缩至500ml。

2.1.2 渗漉法取500g黄芩粗粉，加5倍量80％乙醇渗漉，渗漉液减压蒸馏浓缩至500ml。

2.1.3 浸渍法取500g黄芩粗粉，加5倍量水浸泡2次，每次1天，浸出液合并浓缩至500ml。

2.1.4 连续回流提取法：取黄芩粗粉500g，加5倍量乙醚，用索氏提取器连续提取10小时，提取液浓缩至500ml。

2.2 标准曲线的制备2.2.1 黄芩苷、黄芩素标准曲线的制备分别精密称取黄芩苷、黄芩素0.3500g、0.2500g 分别置于10ml量筒中，加甲醇至刻度，分别精密量取2ml，置20ml量筒中，加甲醇至刻度，分别吸取2、4、6、8、10、12、14μl 进样，色谱条件为：色谱柱LiChrosorb Rp—C18（150mm×4mm，5μm）；流动相为甲醇—2.5％醋酸，检测波长为270nm，以峰面积（Y）对进样量（X）回归，得回归方程，黄芩苷的回归方程：Y=936.9567163X －0.5634721，r =0.99998，黄芩素的回归方程：Y=1025.X+2.354687,r =0.99999，黄芩苷量在0.158 —

1.256μg与峰面积呈良好的线性关系，黄芩素量在0.145 —1.030μg与峰面积呈良好线性关系。

2.2.2 汉黄芩苷、汉黄芩素工作曲线的制备分别精密称取汉黄芩苷、汉黄芩素对照品0.0150g、0.0230g，分别溶于50ml甲醇溶液中，分别取0.2、 0.4 、0.6、 0.8、 1.0、 1.2、1.4ml，溶于10ml量筒，加甲醇至刻度，分别取5μl进样，色谱条件：Shim—Pack CLC—ODS（150mm ×5mm）柱，甲醇 —水—0.2％醋酸钠（100：100：50）为流动相，检测波长为300nm，以峰面积Y对进样量X（μg）回归，得回归方程，汉黄芩苷的回归方程Y=351678.41X－4512.36， r =0.9918,汉黄芩素的回归方程Y=68057.13X －36365.39，r =0.9898。

2.3 供试品溶液的制备2.

3.1 分别取4种方法的提取液各50ml，分别用150ml氯仿萃取3次，回收氯仿，残渣置20ml量筒中，用甲醇溶解，并加至刻度，过滤，用于测定黄芩苷和黄芩素。

2.3.2 分别取4种方法的提取液各50ml，调节PH值为2.5，分别用200ml石油醚萃取3次，母液用NaOH调节PH值为8.5—9.8，用150ml石油醚萃取3次，向萃取液中滴加浓HCl至PH值为3.5回收石油醚，残渣置50ml量筒中，用甲醇溶解并加至刻度，过滤，用于测定汉黄芩苷和汉黄芩素。

2.4 提取方法的比较将各供试品溶液按照各成分标准曲线下条件进行测定，结果见表1。表一不同提取方法对提取效果的影响方法黄芩苷黄芩素汉黄芩苷汉黄芩素 (mg/g) (mg/g) (mg/g) (mg/g) 煎煮法

3.3561 2.5362 0.4836 0.1597 渗漉法

4.1513 2.7896 1.0305 0.3841 连续回流提取法 6.7876 4.2153 1.1676 0.9392 浸渍法 2.8519 2.7631 0.5862 0.3365 2．5 确立综合评判方法把各成分权重定为0.25，确定出综合评判公式:G=0.25X/Xmax+0.25Y/Ymax+0.25Z/Zmax+0.25W/Wmax，式中X、Y、Z、W分别为黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷和汉黄芩素的提取率（mg/g）。对表1中数据进行处理，可知四种方法的G值顺序为：连续回流提取法＞渗漉法＞煎煮法＞浸渍法，连续回流提取法提取出的各种成分远高于其它三种方法，故确定提取黄芩的最佳方法为连续回流提取法。

2.6 筛选提取条件

以黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素为指标，以乙醚为溶媒，选择影响连续回流提取法的主要因素：乙醚的体积分数、提取时间、溶媒用量、药材粉碎度，设计9个水平，选用U9（96）表安排试验，筛选最佳提取条件，测定各实验结果的提取率和G值，详细结果见表2，同时，将数据进行处理后，其结果为G=0.753128+0.004123A-0.003426B-0.005381C-0.002687D,P=0.0289＜0.05，方程有意义表二 U9均匀设计结果（n=3）

1 50 5

2 10 8.8365 3.125

3 0.5676 0.2633 0.4035

2 55 6

3 10 9.6710 4.2356 0.4917 0.2530 0.5122

3 60 7

4 20 10.5670 5.1678 0.5897 0.3698 0.6283

4 6

5 8 5 20 12.6971 6.2358 0.5129 0.2687 0.6856

5 70 9

6 30 13.1925 8.3654 0.533

7 0.4632 0.7012

6 80 10

7 30 16.9871 8.9652 0.7516 0.6816 0.8970

7 85 12 8 40 15.8795 7.6985 0.8693 0.6594 0.7982

8 90 14 9 40 14.3692 7.2315 0.7564 0.5687 0.7956

9 95 16 10 50 14.3695 8.3624 0.7954 0.6952 0.7835

根据均匀设计的特性，最优的实验结果与优化结果最为靠近，由表2可知，6号实验为优化组合，结果表明，乙醚的体积分数和提取时间对提取效率影响最大，而溶媒用量影响不大，药材的粉碎度不能太大，也不能太小，结合实际，将最优实验条件定为：用6倍量85％乙醚，药材粉碎过30目筛，提取12小时。将该实验与6号实验平行进行，结果见表3

表三对比实验

组别 A％ B/h C/倍 D/目 Xmg/g Ymg/g Zmg/g Wmg/g G

优化实验 80 10 7 30 16.9871 8.9652 0.7516 0.6816 0.8970

最优实验 85 12 6 30 17.1504 9.0562 0.8632 0.7124 0.9018

3 讨论

3.1 黄芩苷和黄芩素是黄芩中的主要有效成分，其含量高，活性强，具有重要的药理作用，在评价黄芩质量上有重要意义。

3.2 在不同条件下各类有效成分的提取效果具有显著差异，这说明单纯以某一指标成分来评价提取工艺均不全面，甚至会得出相反的结论。

3.3 在用索氏提取器连续回流提取过程中，曾用乙醇和氯仿为溶媒进行提取，但出现大量油状物，且杂质峰较多。换用乙醚后，有效的避免了这些问题。

参考文献

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[3] 刘继勇.均匀设计法优选痹痛宁贴剂的处方基质配比.中草药，2005,36(2):202-205.