PC-12细胞培养方案
诱导表达5—脂氧合酶PC12细胞系的建立
张 兴梅 刘 刚 孙 曼霁 军事 医学科 学院毒 物 药物研 究所 北京 １０５ ０ ８０
纯 化 了兔 抗 电鳐 Ａ ｈ 多 克 隆 抗 体 。 采 用 间 ＣＥ 接 Ｅ ＩＡ法 检 测 了人 脑 Ａ ｈ 的 抗 原 十 肽 片 ＬＳ ｃＥ 段 与兔 抗 电 鳐 Ａ Ｅ多 克 隆 抗 体 之 间 的 交 叉 ｏＩ 免 疫 反 应 性 。 结 果 ： 些 抗 原 十 肽 大 多 数 可 这 与 抗 电 鳐 多 克 隆 抗 体 有 抗 原 抗 体 反 应 ， 脑 人
胞 中 的胆 碱 能 神 经 的 标 志 酶 Ｃ Ａ ｈ Ｔ活 性 ， 并 鉴 定 了细 胞 分 化 后 Ｃ Ａ ｈ Ｔ抗 体 阳 性 的 神 经 元 数 目． 进 一 步 的 干 细 胞 脑 内 移 植 研 究 奠 定 为
基 础
人 脑 乙 酰 胆 碱 酯 酶 的化 学 合 成 抗 原 十 肽 与 电 鳐 乙 酰 胆 碱 酯 酶 抗 血 清 的交 叉 免 疫 反 应 性
维普资讯
在 血 清 的诱 导 下 能 分 化 为 成 熟 的 神 经 细 胞 ，
并 在 细 胞 问 建 立 起 明 显 的 纤 维 连 接 。 Ｂｄ ｒＵ
ROS检测
一：最近在做一种药物对PC12细胞H2O2氧化损伤的保护作用。
用碧云天购买的ROS检测试剂盒检测细胞内的ROS含量。
实验过程：将PC12细胞接种于六孔板内，待细胞长满后，1. 装载探针
PC12属于贴壁培养细胞。
按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。
去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。
加入的体积以能充分盖住细胞为宜，我加入1ml,37℃细胞培养箱内孵育30分钟。
中间每隔5分钟摇晃一次，以使探针充分接触细胞。
然后用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。
2. 实验
我做了5个孔，第一个孔为正常组，第二个为只加终浓度为200uM 的H2O2，后面三个先加不同浓度的药物（分别为10ug/ml，60ug/ml，120ug/ml）
第一步，后面三个孔加入不同浓度的药物，前两个孔以无血清的1640代替，孵育30分钟
第二步，后面四个孔加H2O2，第一个孔加无血清的1640代替，孵育1个小时
第三步，荧光显微镜下观察
发现细胞有死亡，但就是没发现有荧光，应该是探针没装上，但我又实在想不出为什么没装上？
本科毕业论文急着用，还请各位高手指点，先谢谢了！
二：流式测ROS分组
想用流式测ROS，购买的碧云天的试剂盒，用无血清培养基稀释探针，分组
1--阳性对照组，即，加入试剂盒内的ROS，
2--空白对照，即加入无血清培养基，不加探针
3--阴性对照，不加药物，加入探针
4--实验组，加入药物，加入探针。
这样设计可以吗，前两组有没有必要做，比较的时候以哪组为基线，流式细胞仪的参数设置有哪些注意的，谢谢啦。
多聚赖氨酸（Poly-L-Lysine）的配制、保留、应用总结[最新]
![多聚赖氨酸（Poly-L-Lysine）的配制、保留、应用总结[最新]](https://img.taocdn.com/s3/m/14811bc0185f312b3169a45177232f60ddcce7e5.png)
因为自己做PC12细胞培养，想在接种前将培育皿用多聚赖氨酸包被，到园子里搜索了下，关于多聚赖氨酸的帖子不少，看了一些帖子，将大部分收集在此。
个人觉得关于多聚赖氨酸的配置、保存、使用各方面问题，这些帖子里面都解释了。
注：我只是摘了一个帖子里某段或某句话。
一般一段话来自某一位战友。
一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用0.1 mg/ml进行包被。
二、其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例)：49456826.snap三、我配成1mg/ml的储存液，用Mini-Q(超纯水)配制，放在－20℃储存，使用时稀释10倍（也用超纯水），即终浓度100ug/ ml，过滤后使用。
工作液过滤使用，如一次用不完，放在4℃储存。
多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配太多工作液。
四、我现在要配多聚赖氨酸,书上写的用PBS配,但没写PH,浓度，向各位请教。
答：PH应该在7.0~7.4，PBS：取氯化钠7.650 g，无水磷酸氢二钠0.724 g，磷酸二氢钾0.210g 溶于蒸馏水1000 mL 中，以1N 氢氧化钠溶液调pH 值为7.0~7.4，经121℃灭菌15 分钟五、我准备用多聚赖氨酸涂片培养细胞,不知道多聚赖氨酸涂过的玻片如何灭菌？能否干烤灭菌？答：Sigma的产品说明书上写的很明白的。
另外，有本书上是这么写的，供参考：Poly-ly sine-coated tissue culture surf acesTo coat cov erslips: Prepare a stock solution by dissolv ing 25 mg/ml poly ly sine in 4.73 ml water (both poly-L-lysine an d poly-D-lysine are used to coat tissue culture surf aces; check specif ic protocol f or choice of isomer) and f ilter sterilize throu gh a 0.22-μm f ilter. Store in 100-μl aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 μg/ml working solution. Sterilize cov erslips by autoclav ing prior to coating. Dip cov erslips in the working solution, then inc ubate 15 min to sev eral hours in a humidif ied 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surf ace to dry.To coat culture dishes or 8-well chamber slides: Prepare a stock solution by dissolv ing 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surf aces; check specif ic protocol f or choice of isom er) and f ilter sterilize through a 0.22-μm f ilter. Store in 5-ml aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute 1 part stock solutio n with 9 parts water to prepare 100 μg/ml working solution. Fill tissue culture dishes or slide wells with the working soluti on and incubate 1 hr in a humidif ied 37°C, 5% CO2 incubator, then remov e solution by v acuum aspiration and allow surf ace to dry.Store coated tissue culture ware up to 3 months at 4°C. Use diluted solutions only once, but unused diluted aliquots can be stored up to 3 months at 4°C.你可以配置好PLL后单独将其过滤除菌，分装，待用。
PC12细胞诱导分化成神经元样细胞的培养机制研究
PC12细胞诱导分化成神经元样细胞的培养机制研究傅松文;农梦妮;李柯柯;曾高峰【摘要】目的:研究适宜PC12细胞的培养方法及其在神经生长因子(NGF)作用下的分化效果.方法:PC12细胞培养于F12K培养基中,传代时直接将细胞吹打下来,并用注射器吹散成单细胞悬液;PC12细胞接种于6孔培养板中,并用含NGF 50μg/L 的无血清培养基进行诱导分化5d,倒置显微镜下观察细胞的形态特征,Image J软件进行图像分析.结果:PC12细胞生长状态良好,且经NGF作用5d后,细胞体积显著增大,突起增多增长,细胞分化率达(72.60±3.61)％.结论:本实验中对PC12细胞培养的方法简单易行,适用于PC12细胞的培养;NGF能够诱导PC12细胞分化成神经元样细胞,可为神经退行性疾病的研究奠定基础.【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2014(031)006【总页数】2页(P919-920)【关键词】PC12细胞;细胞培养;NGF;神经元样细胞【作者】傅松文;农梦妮;李柯柯;曾高峰【作者单位】广西医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室南宁 530021;广西医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室南宁 530021;广西医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室南宁 530021;广西医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室南宁 530021【正文语种】中文【中图分类】R322.85PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞，其在形态、生理和生化等方面具有神经元细胞的特性[1]；因其具可传代特点，故可作为体外研究神经退行性疾病的模型。
然而，PC12细胞存在贴壁能力差，容易聚集成团生长，难以吹散成单细胞悬液等缺点。
而常规培养中，吹散细胞时往往直接采用巴氏吸管进行吹打，难以有效地将PC12细胞吹散成单细胞悬液，以致细胞接种后即可出现较为严重的成团现象，不利于细胞的生长；且PC12细胞接种于普通培养板进行后续实验时，细胞也易聚集成团，并容易脱落，影响实验的顺利进行。
低氧培养PC12细胞HO的表达
中国医疗前沿China Healthcare InnovationMay ,2008Vol ,3N o.102008年05月第3卷第10期作者简介汪涛,辽宁省大连市中心医院神经内科。
现已证实,内源性CO 具有重要的生理和病理生理作用,关于HO /CO 在机体的作用日益受到关注,其对神经活性影响的研究也成为热点[1],本研究在低氧状态下培养PC12细胞,观察HO 的表达。
1材料与方法1.1材料PC12细胞系由大连市中心医院实验室提供;胎牛血清(FBS )、胰蛋白酶、DM EM 培养基购自Gibco 公司;牛血红蛋白购自S igma 公司;Z nPP 、S ABC 免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物制剂公司。
其他试剂均为国产分析纯。
1.2PC12细胞的培养及分组PC12细胞在含5%FBS 的DMEM 基质的培养皿中置于37℃、5%CO 2:95%空气的培养箱中培养,当细胞铺满培养皿时,传代。
当PC12细胞呈对数生长时,换无血清的DMEM 培养24h,使细胞统一至Go 期,再进行分组。
分为常氧对照组(C 组)、低氧组(H 组)、低氧加血红素氧合酶抑制剂卟啉锌-9组(H+ZnP P 组)。
H 组及H+ZnPP 组通入5%CO 2:95%N2,连接测氧化检测浓度为1%～3%。
1.3HO 的表达及图象分析将2h 时间点的培养细胞制成密度为104～105/ml 的细胞悬液。
滴加细胞悬液于涂有多聚赖氨酸的载玻片上,按S ABC 免疫组化试剂盒说明进行免疫细胞化学常规操作,倒置显微镜(×400)下观察。
用显微镜每组取3个玻片,每个玻片取4个视野拍照,图像入图像分析系统,用美国z magepro-plus 4.5软件测定阳性细胞染色的累积光密度。
1.4统计学分析实验数据均以x ±s 表示。
应用SPS S11.5软件,不同组别采用方差进行分析。
结果2.1HO 的表达C 组PC12细胞的HO-1染色反应为阴性(图A ),说明常氧状态下HO-1无表达。
PC12细胞转化为神经元样细胞的培养、鉴定及氧糖剥夺模型的制备
PC12细胞转化为神经元样细胞的培养、鉴定及氧糖剥夺模型的制备何金婷;莽靖;郭洪亮;梅春丽;胥桂华;陈罕;徐忠信【摘要】@@ 本实验采用PC12细胞是由大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤分离并建立起的细胞系,其在体外经NGF刺激诱导后可向交感神经元分化,最终导致PC12细胞在生理、生化方面具有神经元样的功能,同时应用体外氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)来模拟体内脑缺血过程,为探讨缺血缺氧状态下对神经元的活力、凋亡、信号通路机制的研究定物质基础.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2012(016)005【总页数】3页(P769-771)【作者】何金婷;莽靖;郭洪亮;梅春丽;胥桂华;陈罕;徐忠信【作者单位】吉林大学中日联谊医院,神经内科,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,神经内科,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,神经内科,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,神经内科,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,神经内科,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,神经内科,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,神经内科,吉林,长春130033【正文语种】中文本实验采用PC12细胞是由大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤分离并建立起的细胞系，其在体外经NGF刺激诱导后可向交感神经元分化，最终导致PC12细胞在生理、生化方面具有神经元样的功能，同时应用体外氧糖剥夺（oxygen－glucose deprivation，OGD）来模拟体内脑缺血过程，为探讨缺血缺氧状态下对神经元的活力、凋亡、信号通路机制的研究定物质基础。
1 材料和方法1.1 实验细胞大鼠PC12细胞株购自北京金紫晶生物医药技术有限公司（中国医学科学院肿瘤细胞库）。
鼠神经生长因子（NGF）（Sigma公司，美国）。
1.2 实验方法1.2.1 PC12细胞的培养、传代将细胞悬液加入含有DMEM完全培养基，培养液2－3天更换一次。
细胞模型建立实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞培养的基本操作技术。
2. 学习建立特定细胞模型的方法。
3. 了解细胞模型在研究疾病发生机制及药物筛选等方面的应用。
二、实验原理细胞模型是指通过体外培养细胞，模拟体内细胞在特定生理、病理条件下的功能状态，从而研究相关生物学问题的实验模型。
建立细胞模型的关键在于模拟体内环境，包括细胞培养条件、细胞表型、细胞功能等。
三、实验材料1. 细胞：HL-1细胞（心房肌细胞系）2. 培养基：1640培养基、DMEM培养基3. 试剂：胰蛋白酶、胎牛血清、青霉素、链霉素、双抗、D-半乳糖、油红O、MTT、Fura-2/AM、Hoechst 33258、碘化丙啶、抗氧化药物、护肝清脂片等4. 仪器：细胞培养箱、倒置显微镜、透射电镜、细胞培养皿、酶标仪、离心机、冰箱等四、实验方法1. 细胞培养（1）HL-1细胞培养：将HL-1细胞接种于培养皿中，加入含有10%胎牛血清的1640培养基，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
（2）L-02细胞培养：将L-02细胞接种于培养皿中，加入含有10%胎牛血清的DMEM培养基，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
2. 细胞模型建立（1）HL-1细胞快速起搏模型：采用电场刺激方法，将HL-1细胞置于电场刺激器中，以600次/min、1 V/cm的频率和强度进行电场刺激24 h。
（2）L-02细胞肝脂肪变性模型：将L-02细胞分为模型组和正常组，模型组加入含有游离脂肪酸（油酸和棕榈酸）混合物的1640培养基诱导培养24 h。
（3）D-半乳糖诱导HepG2细胞氧化应激模型：将HepG2细胞分为模型组和正常组，模型组加入不同浓度的D-半乳糖（37.5、75、150、300 mmol/L）处理24、48、72 h。
（4）Aβ诱导PC12细胞凋亡模型：将PC12细胞分为模型组和正常组，模型组加入不同浓度的Aβ（25-35）处理不同时间，观察细胞凋亡情况。
3. 细胞模型鉴定（1）HL-1细胞快速起搏模型：通过全细胞膜片钳技术记录刺激前后HL-1细胞的动作电位周期，并利用透射电镜观察细胞超微结构的变化。
PC12脑神经细胞行为表现
PC12脑神经细胞行为表现PC12脑神经细胞是一种常用于神经生物学研究的细胞系，具有许多重要的特性和行为表现。
本文将就PC12脑神经细胞的特性、生命周期、分化过程以及其与神经元的相关性进行详细探讨。
PC12细胞是一种来自大鼠嗜铬细胞瘤的细胞系，最早由E. Greene博士于1970年首次建立。
这些细胞具有许多神经元的特性，包括能够释放神经递质、生成神经突起以及对外界刺激做出反应等。
因此，PC12细胞成为了研究神经生物学和细胞行为的重要模型。
PC12脑神经细胞具有较为明确的生命周期。
在培养基中，PC12细胞通常呈现为一种悬浮生长方式。
细胞会迅速分裂扩增并形成一个细胞集落。
经过一段时间的培养后，PC12细胞开始出现转变，进入分化阶段。
分化的PC12细胞会产生许多细长的突起，类似于神经元的轴突。
同时，细胞还会表达一系列与神经元相关的蛋白质，如神经元特异性烯醇化酶（tyrosine hydroxylase, TH）和神经元特异性磷蛋白（neurofilament protein, NF）。
这表示着PC12细胞进入到了一个成熟的神经样状态。
PC12细胞的分化过程与神经细胞的分化过程有许多相似之处，这使得这个细胞系统成为神经发育和神经退行性疾病研究的有力工具。
当受到刺激时，PC12细胞会释放大量的肾上腺素和去甲肾上腺素，这与真实的神经元对刺激的反应非常类似。
此外，细胞的形态学变化和突起的生成也与神经元的分化过程密切相关。
PC12细胞的分化过程受到多种信号分子的调控。
神经生长因子（nerve growth factor, NGF）是最重要的一种信号分子，其通过与PC12细胞表面的TrkA受体结合来激活下游信号通路。
NGF的作用导致PC12细胞开始分化，并形成突起。
此过程中，细胞会逐渐增加TH和NF等蛋白的表达量，加强细胞的神经细胞特性。
在细胞行为方面，PC12细胞的活动表现出了优良的可塑性。
这些细胞能够形成突起，通过突起与周围细胞进行连接，并实现信息传递。
槲皮素对皮质酮损伤的pc12细胞的保护作用
槲皮素对皮质酮损伤的pc12细胞的保护作用陈箐筠;干信【摘要】利用pc12细胞的抗抑郁损伤模型,研究了槲皮素的抗抑郁作用.槲皮素、氯丙咪嗪与0.1 mmol·L-1皮质酮共孵pc12细胞48 h,用MTT比色法判断细胞损伤程度.结果表明,高浓度皮质酮处理pc12细胞后,细胞存活率比正常细胞降低;当给予槲皮素或氯丙咪嗪后,细胞存活率升高,表明细胞损伤减少或接近正常.与经典抗抑郁剂氯丙咪嗪的作用效果一样,槲皮素对皮质酮损伤的pc12细胞有明显的保护作用,有抗抑郁作用.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2009(026)001【总页数】3页(P47-49)【关键词】槲皮素;抗抑郁剂;皮质酮;pc12细胞【作者】陈箐筠;干信【作者单位】湖北工业大学生物工程学院,湖北,武汉,430068;湖北工业大学生物工程学院,湖北,武汉,430068【正文语种】中文【中图分类】Q946.833抑郁症是一种典型的情绪障碍性疾病，随着社会的发展和生活压力的加剧，越来越多的人饱受抑郁症的困扰。
抑郁症的发病机理至今尚未完全清楚，一般认为是与人体内缺乏神经递质等有关，尤其是5-羟色胺(5-Hydroxytryptamine，5-HT)学说更为众多学者所认同[1]。
因此，抗抑郁剂是通过提高脑内的单胺递质水平来产生效用的。
据报道，抑郁症病人的下丘脑-垂体-肾上腺轴(Hypothalamic-pituitary-adrenalaxis，HPA)功能亢进，甚至导致高皮质酮血症[2，3]，而持续高浓度的皮质酮(Corticosterone，Cort)则导致海马神经元损伤[4，5]。
另外，抑郁症病人脑内突触间5-羟色胺等单胺递质水平明显降低，5-HT传导功能出现障碍。
pc12细胞是鼠肾上腺嗜铬细胞瘤的细胞株。
分化的pc12细胞在形态和功能上具有典型的神经内分泌细胞的特征，其细胞膜上的糖皮质类固醇(Glucocorticoids，GC)受体表达丰富[6]，已有关于高浓度皮质酮损伤pc12细胞的模型用于抑郁症方面的研究报道[7]。
CBS基因过表达PC12细胞株的建立及鉴定
ＣＢＳ基因过表达ＰＣ１２细胞株的建立及鉴定尹蔚兰１，２，廖志强２，阳柏成２，姜骆永２，文芳１，邬力祥１（１中南大学基础医学院，长沙４１００８３；２南华大学医学院） 摘要：目的 建立胱硫醚-β-合成酶（ＣＢＳ）基因过表达ＰＣ１２细胞株并进行鉴定。
方法 根据ＧｅｎＢａｎｋ数据库中的ＣＢＳｃＤＮＡ序列设计合成ＣＢＳ基因引物，ＰＣＲ扩增ＣＢＳ基因，并将其克隆到慢病毒过表达载体ＧＶ３４１中，用慢病毒过表达载体连同两种包装病毒载体对２９３Ｔ细胞进行转染，收获含ＣＢＳ慢病毒载体的上清液，用其感染正常的ＰＣ１２细胞，用嘌呤霉素进行筛选得到ＣＢＳ基因过表达ＰＣ１２细胞株。
用实时荧光定量ＰＣＲ法检测所得ＰＣ１２细胞（观察组）、空载体转染的ＰＣ１２细胞（对照组）、正常ＰＣ１２细胞（空白组）中的ＣＢＳｍＲＮＡ。
用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测上述三组细胞中的ＣＢＳ蛋白。
结果 观察组、对照组、空白组ＰＣ１２细胞ＣＢＳｍＲＮＡ表达量分别为１６２．２０±１１．２０、１．００±０．０３、２．３０±０．０７，ＣＢＳ蛋白表达量分别为１．５３±０．０９、１．００±０．１０、０．９６±０．１０。
观察组ＰＣ１２细胞ＣＢＳｍＲＮＡ、蛋白表达量均高于对照组和空白组（Ｐ均＜０．０５），对照组ＰＣ１２细胞ＣＢＳｍＲＮＡ、蛋白表达量与空白组相比差异均无统计学意义。
结论 成功构建ＣＢＳ基因过表达ＰＣ１２细胞株。
关键词：ＰＣ１２细胞；胱硫醚-β-合成酶；慢病毒载体 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２-２６６Ｘ．２０１６．２６．００５ 中图分类号：Ｑ７８２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２-２６６Ｘ（２０１６）２６-００１７-０３基金项目：国家自然科学基金资助项目（８１２００９８６）；国家级大学生创新创业训练计划项目（２０１３１０５５５１９６）。
第一作者简介：尹蔚兰（１９７３-），女，硕士，在读博士，副教授，主要研究方向为神经退行性疾病发病机制及防治。
PC12细胞
PC12细胞培养PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株，具神经内分泌细胞的一般特征，因其具可传代特点，广泛应用于神经生理和神经药理学研究。
1. PC12细胞有两种：未分化型和分化型。
其中未分化型的PC12细胞贴壁能力强，传代时需要胰酶消化，形状不规则。
分化型PC12细胞传代时不需要胰酶，直接可以吹下来，形状规则。
这两种细胞没有很大的区别，但我在实验中发现，未分化型的PC12细胞对药物的敏感性较之分化型的要差一些。
2. 由于PC12细胞是一种肿瘤细胞，在传代次数较多后，它的形状和性状会发生改变。
这些改变尤见于未分化型PC12细胞。
主要是细胞形状变得更加不规则，对药物的敏感性愈加下降。
因此，建议长期用PC12细胞作实验的战友最好严格控制细胞的传代次数。
3.在复苏细胞时动作一定要迅速，放入温水中1～2min后要马上加入培养液中，培养12～24小时后更换一次培养液，这样不仅可以把DMSO吸掉，而且可以将死亡的细胞也吸掉。
细胞一天一看即可，经常动会有影响。
注意过滤后血清的PH值，因为培养液过滤后PH值会有所改变。
复苏后的换液时间取决于您复苏时是否洗涤离心细胞，去除了冻存液中的DMSO，如果没有去除DMSO，细胞培养过夜后就要彻底换液；如果复苏时洗涤离心过，可以待传代时再换液也可。
（据我个人经验，还是复苏时去除DMSO，细胞的生长状态好一些）4. 状态良好的细胞复苏后 4 h即可贴壁，开始增殖，大约2 d即可传代，接种48h应该到了对数增长期。
5. 每天观察一两次细胞我不认为会对细胞的生长造成不良影响，不过每次观察的时间不易过长。
6. 传代时我认为最好不要用胰蛋白酶，因为胰蛋白酶对细胞有破坏作用。
我以前用胰蛋白酶消化传代过PC12, 结果传代后的细胞虽然贴壁，形态也好，但就是增殖缓慢，所以我现在都是用枪吸取培养液直接吹打，传代后细胞增殖迅速，2 d就长满了（因为长的太快，我只好降低血清浓度，用5%FBS）7. 传代的时机最好选在细胞生长旺盛，占瓶底70%－80%时最好，如果细胞长的太满，细胞的状态会越来越差，最后大片死亡；这种细胞传代后生长也不好；而且长的太满后，细胞贴壁牢，难于吹起来，相反，70%－80%时细胞很容易吹起来。
三维调控光纤激光引导PC12细胞突起定向生长
三维调控光纤激光引导PC12细胞突起定向生长目的本实验采用创新设计的光纤激光束引导装置，精确引导单个PC12细胞突起的定向生长，探求光纤引导低能量激光精确控制神经细胞突起在体外定向生长的新方法。
方法选取体外培养突起生长活跃的PC12细胞为研究对象，将光纤末端经拉制后固定于三维微操上。
波长为800nm的激光束经光纤引导投射在靶区域，引导过程中光纤随突起的生长而移动，始终与突起的生长方向保持近似垂直位。
每隔5min拍摄一张照片，连续观察30min。
结果30例突起生长活跃的PC12细胞中，20例细胞突起的生长方向可在5min内被波长为800nm的激光影响。
在30min的照射中，13例PC12细胞的突起跟随光纤激光束生长，偏转角度在60°及以上的有6例，最大偏转角度可达100°以上。
结论本引导装置可影响PC12细胞突起的生长方向，引导其细胞突起跟随激光生长，为光纤引导低能量激光精确控制神经细胞突起在体外定向生长的提供了一种新方法。
标签：医学光学；光纤；激光；PC12细胞；生长锥神经再生修复过程中，再生神经元网络的结构重建关系到神经功能的再生。
神经元突起定向生长沿一定路径最后到达靶位，并与下一个神经元形成正确的突触连接过程主要依赖于神经纤维最前端生长锥的活动。
生长锥的活动受一系列微环境信号的调控，局部微环境的各种化学或电信号等改变是引导神经细胞定向生长的主要体内因素。
在体外培养条件下，突起沿着黏附性最佳的表面前进的特性决定了神经元的网络结构[1]，如体外培养的Neuroblastoma-glioma细胞突起可以沿培养皿表面划痕或沿血浆凝块张力线定向生长。
电场对轴突亦具有引导作用，Patel等的实验显示电压梯度广泛存在于发育中的胚胎，并影响着胚胎中轴突的生长[2]。
近期研究发现，激光作为一种非接触性的操控方式，也能引导神经细胞生长锥的生长方向。
A Ehrlicher等学者采用倒置激光共聚焦显微镜对生长中的神经元轴突进行扫描，引导生长锥的生长[3]。
稳定表达miR-17-5p的PC12细胞株构建及鉴定
稳定表达miR-17-5p的PC12细胞株构建及鉴定张皓云;王鲁娟;王凤斌;刘红兵;苏文霞【期刊名称】《实验技术与管理》【年(卷),期】2015(032)012【摘要】目的:构建稳定表达miR-17-5p的PC12细胞株.方法:将质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFP-N1-miR-17-5p表达载体扩增、抽提,利用脂质体转染技术将质粒转染PC12细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白GFP表达,Real-time PCR检测转染PC12细胞miR-17-5p的表达.结果:荧光显微镜观察到空载组和miR-17-5p组细胞都有绿色荧光蛋白高表达,Real-time PCR检测稳定转染miR 17-5p后PC12细胞内miR-17-5p的表达较空载组明显升高(P＜0.01).结论:miR-17-5p在PC12细胞稳定表达,为进一步研究miR-17-5p对神经细胞的调制作用提供有用的细胞模型.【总页数】3页(P66-68)【作者】张皓云;王鲁娟;王凤斌;刘红兵;苏文霞【作者单位】潍坊医学院基础医学概论教研室,山东潍坊261053;潍坊医学院诊断学教研室,山东潍坊261053;潍坊医学院生理学教研室,山东潍坊261053;潍坊医学院生理学教研室,山东潍坊261053;潍坊医学院生理学教研室,山东潍坊261053【正文语种】中文【中图分类】R33-33;Q4-33【相关文献】1.CaMKⅡα/β稳定表达的PC12细胞株的构建及其功能的初步研究 [J], 张蕊;苑玉和;赵明;陈乃宏2.人GRP94基因慢病毒载体构建及稳定表达GRP94蛋白的人宫颈癌HeLa细胞株筛选及鉴定 [J], 杨娅楠;王媛;左志宇;王鑫廷;杨洁3.稳定高表达TGF-β1的大鼠心肌细胞H9c2细胞株的构建及鉴定 [J], 许淑文;李艳;李继强;戴雯4.稳定表达 Notch1胞内结构域肺腺癌细胞株的构建及鉴定 [J], 邹斌;吴霞;周学亮;詹宇亮;赖松青;刘季春5.稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞株的构建及鉴定 [J], 陈姣;王晓冬;贾永前因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Mimics转染PC12细胞条件的优化
doidoi:10.3969/j.issn.1002-2481.2022.03.05山西农业科学2022，50（3）：314-318Journal of Shanxi Agricultural Sciences Mimics转染PC12细胞条件的优化任静，郝琴琴，成俊丽，李鹏飞（山西农业大学生命科学学院，山西太谷030801）摘要：PC12作为模式细胞已被广泛应用于多种疾病研究。
为探究高效、低毒的PC12的细胞转染方法，试验采用化学转染法，以带有5′-羧基荧光素（FAM）标记的NC mimics作为外源基因，分别用RFect、D-Portal、Tran‑sIntro TM EL、Lipofectamine3000和Lipofectamine2000等5种转染试剂转染PC12细胞以筛选最佳转染试剂；然后设置NC-FAM mimics浓度为50、60、70、80、90、100nmol/L，通过倒置荧光显微镜观察PC12细胞在最佳转染试剂下的荧光信号对转染效果进行评定。
结果表明，在相同的培养条件下，不同转染试剂对PC12细胞的转染效果之间存在较大差异，其中，TransIntro TM EL转染后荧光强度最高，D-Portal、Lipofectamine3000和Lipofectamine2000转染后荧光信号次之，RFect转染后荧光信号最弱；且不同处理对细胞损害无显著差异。
以TransIntro TM EL作为最佳转染试剂进一步优化NC-FAM mimics转染浓度发现，荧光强度随NC-FAM mimics浓度的增加呈现先增强后降低的趋势，且在NC-FAM mimics浓度为70nmol/L时荧光信号最强；此外不同浓度下的细胞数量无显著差异。
综上可见，以TransIntro TM EL作为转染试剂、NC-FAM mimics浓度为70nmol/L时，转染后PC12细胞荧光强度最高，转染效果最好。
关键词：PC12；化学转染法；TransIntro TM EL；NC-FAM mimics；荧光信号中图分类号：Q78文献标识码：A文章编号：1002-2481（2022）03-0314-05Optimization of Mimics Transfection Conditions in PC12CellsREN Jing，HAO Qinqin，CHENG Junli，LI Pengfei（College of Life Science，Shanxi Agricultural University，Taigu030801，China）Abstract：PC12cells has been widely used as a model for researches on many diseases.To explore transfection methods of PC12cells with high efficiency and low toxicity,in this study,using chemical transfection and taking5'-carboxyfluorescein (FAM)-labeled NC mimics as the foreign gene,five different chemical transfection reagents（RFect,D-Portal,TransIntro TM EL,Lipofectamine3000and Lipofectamine2000）were applied to transfect PC12cells for screening the optimal transfection reagent.Then,concentrations of NC-FAM mimics were set to50、60、70、80、90、100nmol/L,and transfection effects were evaluated by observing fluorescence signal of PC12cells with the optimal transfection reagent under an inverted fluorescence microscope.The results showed that transfection effects between different transfection reagents were significantly different on PC12cells under the same culture condition.The TransIntro TM EL had the highest fluorescence intensity,the group of D-Portal、Lipofectamine3000and Lipofectamine2000took the second place and the RFect had the lowest.In addition,there was no significant difference on injury of cells by different treatments.The further results showed that the trend of fluorescence intensity was first increased and then decreased with increase of the NC-FAM mimics concentration when TransIntro TM EL was taken as the optimal transfection reagent to optimize the NC-FAM mimics transfection concentration.And fluorescence signal was the strongest when the concentration of NC-FAM mimics was70nmol/L.There was also no significant difference on amounts of cells by different concentration.In summary,the PC12cells transfected with the concentraion of70nmol/L of NC-FAM mimics by Transintro TM EL as the optimal transfection reagent in this study had the highest-intensity fluorescence and the best transfection effect.Key words：PC12;chemical transfection;TransIntro TM EL;NC-FAM mimics;fluorescence signal将外源基因导入真核细胞内并使其表达的技术称为细胞转染技术，该技术是研究基因表达调控的重要手段。
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化);PC-12(高分化)
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)；PC-12(高分化)简单描述：细胞名称：大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)；PC-12(高分化)形态特性：多角形生长特性：贴壁生长特征特性：该细胞系来自能移植的雄性大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤。
这些细胞表达神经生长因子(NGF)受体。
NGF 可诱导产生神经表型。
这些细胞不合成肾上腺素。
培养条件：1640+10%马血清+5%胎牛血清传代方法：消化3-5分钟。
1:2。
3天内可长满。
冻存条件：完全培养基+40%FBS+10%DMSO支原体检测：阴性使用权限：A类细胞的保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜原代细胞，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。
如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。
本库的细胞系（株）仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的。
T25瓶细胞处理方法收到细胞后，检查外包装是否完整，细胞培养瓶是否完好。
如有破损漏液等问题，请即时联系我们。
1. 75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。
2. 肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（40×,100×,200×各一张）。
3. 将细胞放入37度培养箱中预温1-2小时后再做处理，以稳定细胞状态。
4. 预热培养基（含10%胎牛血清，1%双抗）。
5.若细胞密度较小，无菌操作，去掉培养基。
每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。
放到37度培养箱培养。
待细胞密度达到80%以上，进行传代。
6. 若细胞密度较大，达到80%以上，将细胞传到10cm培养皿培养。
7. 传代时，T25瓶里保留部分细胞，同步培养，直到能确保10cm培养皿中的细胞状态良好。
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)；PC-12(高分化)其它相关优质产品：HL3268 小鼠X小鼠 PK136 DMEM+10% HLlone 灭活血清HL3269 杂交瘤细胞CD25 PC 61 5.3 [PC 61; PC 61.5.3] DMEM+10% HLlone 灭活血清HL3270 中国仓鼠X小鼠B淋巴细胞杂交瘤 MR1 [derivative of HB-11048] RPMI-1640(GIBCO）+10%FBS HL3271 杂交瘤细胞抗AChE AE-1 DMEM+10% HLlone 灭活血清HL3273 杂交瘤细胞抗CD2 OKT 11 IMDM培养基(GIBCO)+20%FBSHL3274 杂交瘤(抗CD3) OKT 3 IMDM培养基(GIBCO)+20%FBSHL3280 大鼠成纤维细胞 208F MEM+10% FBSHL3283 小鼠黑色素瘤细胞 B16-F0 DMEM+10% FBSHL3287 小鼠肝癌细胞 Hepa1-6 DMEM+10% FBSHL3289 猪肾近曲小管上皮细胞 LLC-PK1 M199+3% FBS/DMEM+F12+12%FBSHL3292 小鼠成纤维细胞 NIH-3T3 DMEM+10% FBSHL3300 小鼠单核细胞白血病细胞 Raw-Blue DMEM+10% FBS,不能加双抗+200μg/ml ZeocinHL3313 大鼠乳腺癌细胞 MADB-106 1640+10% FBSHL3314 猪肾上皮细胞 PK（15） MEM+10% FBSHL3315 狗肾上皮细胞 MDCK[NBL-2] MEM+10% FBSHL3316 猪肺泡巨噬细胞 3D4/21 1640+10% FBS+0.1mM NEAA+1mM 丙酮酸钠HL3317 猴胚胎肾上皮细胞 marc-145 DMEM+10% FBSHL3329 大鼠脑胶质瘤细胞 F98 DMEM+10%FBSHL3330 小鼠骨髓基质细胞 P9 1640+10%FBSHL3333 小鼠B淋巴细胞 WEHI-231 DMEM+10% FBS+0.05mM β-MercaptoethanolHL3071 小鼠前列腺癌细胞 RM-1 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3072 小鼠睾丸间质细胞瘤细胞 MLTC-1 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3073 小鼠睾丸间质细胞 TM3 D-MEM/F-12培养基(GIBCO)+5%马血清+2.5%FBSHL3074 小鼠畸胎瘤细胞 F9 DMEM培养基+10%FBSHL3076 小鼠乳腺癌细胞 4T1 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3077 小鼠乳腺肿瘤细胞 C127 DMEM培养基+10%FBSHL3079 小鼠腹水瘤细胞 S-180 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3080 小鼠脑神经瘤细胞 Neuro-2a [N2a; Neuro-2a] MEM培养基(GIBCO)+10%FBS HL3081 小鼠垂体瘤细胞 AtT-20 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3082 小鼠骨髓瘤细胞 FO DMEM培养基+10%FBSHL3087 小鼠淋巴样瘤细胞 P388D1 RPMI-1640(GIBCO）+90%马血清+10%FBSHL3088 小鼠淋巴瘤细胞 EL4 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3091 小鼠巨噬细胞 Ana-1 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3092 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞 RAW 264.7 DMEM+10% FBSHL3093 小鼠白血病细胞 L1210 DMEM培养基+10%FBSHL3094 小鼠白血病克隆细胞系 L6565 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3095 小鼠胚胎成纤维细胞 3T3-L1 DMEM+10%FBS。
PC12细胞培养
PC12细胞培养PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株，具神经内分泌细胞的一般特征，因其具可传代特点，广泛应用于神经生理和神经药理学研究。
1. PC12细胞有两种：未分化型和分化型。
其中未分化型的PC12细胞贴壁能力强，传代时需要胰酶消化，形状不规则。
分化型PC12细胞传代时不需要胰酶，直接可以吹下来，形状规则。
这两种细胞没有很大的区别，但我在实验中发现，未分化型的PC12细胞对药物的敏感性较之分化型的要差一些。
2. 由于PC12细胞是一种肿瘤细胞，在传代次数较多后，它的形状和性状会发生改变。
这些改变尤见于未分化型PC12细胞。
主要是细胞形状变得更加不规则，对药物的敏感性愈加下降。
因此，建议长期用PC12细胞作实验的战友最好严格控制细胞的传代次数。
3.在复苏细胞时动作一定要迅速，放入温水中1～2min后要马上加入培养液中，培养12～24小时后更换一次培养液，这样不仅可以把DMSO吸掉，而且可以将死亡的细胞也吸掉。
细胞一天一看即可，经常动会有影响。
注意过滤后血清的PH值，因为培养液过滤后PH值会有所改变。
复苏后的换液时间取决于您复苏时是否洗涤离心细胞，去除了冻存液中的DMSO，如果没有去除DMSO，细胞培养过夜后就要彻底换液；如果复苏时洗涤离心过，可以待传代时再换液也可。
（据我个人经验，还是复苏时去除DMSO，细胞的生长状态好一些）4. 状态良好的细胞复苏后4 h即可贴壁，开始增殖，大约2 d即可传代，接种48h应该到了对数增长期。
5. 每天观察一两次细胞我不认为会对细胞的生长造成不良影响，不过每次观察的时间不易过长。
6. 传代时我认为最好不要用胰蛋白酶，因为胰蛋白酶对细胞有破坏作用。
我以前用胰蛋白酶消化传代过PC12, 结果传代后的细胞虽然贴壁，形态也好，但就是增殖缓慢，所以我现在都是用枪吸取培养液直接吹打，传代后细胞增殖迅速，2 d就长满了（因为长的太快，我只好降低血清浓度，用5%FBS）7. 传代的时机最好选在细胞生长旺盛，占瓶底70%－80%时最好，如果细胞长的太满，细胞的状态会越来越差，最后大片死亡；这种细胞传代后生长也不好；而且长的太满后，细胞贴壁牢，难于吹起来，相反，70%－80%时细胞很容易吹起来。
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PC-12细胞的培养
一、 [所需溶液]
1、细胞冲洗液：磷酸盐缓冲液(PBS)——无Ca、Mg
NACL 8.00g；
KCL 0.20g;
KH2PO4 0.20g;
Na2HPO4 .。
12H2O 1.15g
加水至 1 000mL,将PH调至7.4，高压灭菌。
2、消化液
（1）胰酶-PBS
结晶胰酶 2.5g;
高压灭菌后的PBS 1000ml
用磁力搅拌器搅拌均匀，使其完全溶解，通过0.22μm的滤膜过滤除菌，分装备用，放置—20℃保存。
（2）胰酶—EDTA:
结晶胰酶 0.5g;
EDTA盐溶液 0.2g
无Ca、Mg PBS 1 000ml
用磁力搅拌器搅拌均匀，使其完全溶解，通过0.22μm的滤膜过滤除菌，分装备用，放置—20℃保存。
3、培养液：用含有体积分数分别为5%FBS、5% HS、青霉素100 U/mL、链霉素100 U/mL的DMEM,于37℃、5% CO2的培养箱中进行培养。
PC12
细胞为贴壁状态生长的细胞,当细胞覆盖率达80%左右时,用0.25%胰酶-0.02%EDTA消化传代备用。
配制方法：
（1）调整培养液的ＰＨ值，用ＰＨ精密试纸观察ＰＨ７.２～７.４即可。
（2）过滤法除菌，所使用的滤器为Ｏ２加压过滤，０.２２μｍ滤膜，滤膜事先采用高压灭菌消毒。
（3）分装，加盖瓶塞，加封纱布报纸，用绳固定，放置—20℃保存。
二、［细胞的维持和培养］
细胞的复苏
1、准备一个盛有37℃温水的烧杯，从液氮罐中取出存有细胞的冻存管，放于37℃温水中，用镊子夹住轻轻摇动使其迅速融化。
2、1000～2000 r，3～5min离心。
3、在无菌操作台中采用75%的乙醇彻底擦拭冻存管，然后打开冻存管，注意动作要轻柔。
4、用1ml枪头将上清液去除，加入1ml预热的细胞培养液将细胞吹散开，转移至25cm2培养瓶中。
5、补充4ml的培养基，并且添加10%的胎牛血清。
6、倒置显微镜下观察，37℃、5%CO2培养。
24h后，更换新的培养液。
7、常规传代培养。
2、更换新的培养液
（１）无菌操作打开培养瓶瓶盖，倒掉培养液。
（２）用PBS反复冲洗细胞2～3遍。
（３）加入新鲜的预热好的培养液及10%的胎牛血清。
各种液体需要量（ml）
表面积 25cm2 75cm2 150cm2
洗涤 3 5 10
胰酶 1～2 1～3 2～5
培养液 5 10 20
（４）倒置显微镜下观察，37℃、5%CO2培养。
3.细胞的传代
（１）无菌操作打开培养瓶瓶盖，倒掉培养液。
（２）向已经长满的细胞中加入消化液1ml，轻轻摇动培养瓶，使消化液流遍所有的细胞表面，吸弃或倒掉，轻轻冲洗细胞表面2～3遍，以尽可能去除原培养液中的牛血清。
（３）加入1ml消化液，在37℃培养箱中孵育5～8min后把培养瓶放置在倒置显微镜下观察，发现细胞的胞质回缩、胞间质增大后，立即终止消化。
（４）加入5ml预热至37℃的培养液，用玻璃吸管反复吹打以分散细胞。
吹打过程按顺序进行，从培养瓶底部一边开始到另一边结束，以确保所有的底部都被吹到。
（５）吸取一半的细胞悬液，接种到新的25cm2培养瓶中，补足培养液，并且添加10%～20%的胎牛血清。
通常每瓶液体量为5～10ml。
（６）倒置显微镜下观察，37℃、5%CO2培养。
注意事项：
1所有液体在加入细胞瓶前均应预热到37℃。
所有液体均应调整PH 至7.2左右，均不能超过7.4。
2细胞消化传代时吹打不要产生气泡，吹打力量不宜过多，否则会损伤细胞。
3严格执行无菌操作的要求。
4尽可能减少消化液剩余量，过多时会对细胞产生损伤，可多添加些含牛血清的培养液中和。
5培养瓶在室温中放置时间应尽可能短。
4.细胞的冻存
1、消化已生长融合的单层细胞。
2、用生长液悬浮细胞，并且添加10%的FCS和10%DMSO(二甲基亚砜)。
分装在2ml容积的冻存管中。
3、用本实验室自制的冻存包包裹好冻存管，放在-70℃冰箱中过夜。
4、放入液氮中冻存。