杂交瘤细胞

培养 贴壁生长 (原代培养) 胰蛋白酶
细胞 培养瓶 悬浮液 分装
培养(传代培养)
原代培养： 从供体取得细胞 后在体外进行的 首次培养。
传代培养： 把原代培养瓶的细胞转接 到许多新的培养瓶内，这 个过程称传代培养。
3、动物细胞培养条件：
1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （氨基酸、无机盐、维生素、葡萄糖、动物血清等） 3、适宜温度和pH 4、气体环境：CO2培养箱
4、细胞核移植和动物的克隆繁殖 •细胞核移植
利用一个细胞的细胞核取代另一个细胞的 细胞核，形成一个重组细胞。
•动物的克隆繁殖
早期通过核移植进行动物的克隆繁殖时， 是用胚胎细胞的细胞核，移植到去核的未受精 的卵细胞中，形成重组的“合子”（重组细胞 ），培养发育成正常的个体。
胚胎细胞核的移植成功率远高于成体细胞。
6、克隆培养法
（1）概念：把一个细胞从群体中分离出来培养， 使之繁殖成一个新的细胞群体的技术。
（2）特征：遗传性状均一、相似，便于研究。 （3）要求：单个细胞
（4）克隆难度：单细胞＞群体细胞； 有限细胞系＞连续细胞系。
（5）提高克隆形成率的措施： 选择适宜的培养基、添加血清、激素刺激、 CO2培养箱调PH值等
胚胎移植 另一母羊子宫
妊娠出生
多莉羊(白脸)
●该过程用到的 技术手段： 核移植、 动物细胞培养、 早期胚胎培养、 胚胎移植。
生物导弹(连上抗癌药物治疗癌症)。
•植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理
细胞膜流动性、 细胞全能性
细胞膜流动性、 细胞增殖
融合前 酶解法去除细胞壁 (单抗的制备：正常 处理 (纤维素酶、果胶酶) 小鼠注射特定抗原)
促融来自百度文库 法
(1)物理法：电刺激 等(2)化学法：聚乙 二醇
卵细胞质
●供体细胞的选择： 一般选用传代10代 以内的细胞，因为
核移植
10代以内的细胞一
重组细胞
般能保持正常的二
细胞、胚胎培养 早期胚胎
倍体核型，保证了
胚胎移植
供体细胞正常的遗
另一母羊子宫
传基础。
妊娠出生
多莉羊(白脸)
白脸绵羊 乳腺细胞
取核
乳腺细胞核
黑脸绵羊 卵细胞 去核
卵细胞质
核移植 重组细胞
细胞、胚胎培养 早期胚胎
多莉羊－－体细胞克隆
白脸绵羊 乳腺细胞
取核
乳腺细胞核
黑脸绵羊 卵细胞 去核
卵细胞质
核移植 重组细胞
细胞、胚胎培养 早期胚胎
胚胎移植 另一母羊子宫
妊娠出生
多莉羊(白脸)
高度特化的动物 细胞，细胞全能 性受到限制。
高度特化的动物 细胞，细胞核仍 保持全能性。
卵细胞质具有调 控细胞核表达发 育的作用。
白脸绵羊 乳腺细胞
(一)理论基础 －－细胞增殖
(二)技术基础 －－动物细胞培养
1、定义
从动物体内取出组织，模拟体内生理 环境，在无菌、适当温度、PH和一定营养 条件下，使之生存、生长和分裂，并维持 其特定的结构和功能。
2、动物细胞培养步骤
从动物机体 剪碎 分散成 配制 细胞 接种到
中取出组织 胰蛋白酶 单个细胞
悬浮液 培养瓶
一种效应B细胞只产生一种抗 体，但效应B细胞不能分裂， 产生的抗体数量少，特异性差。
•骨髓瘤细胞
无限分裂
动物细胞融合的应用
效应B细胞 骨髓瘤细胞
融合、筛选 杂交瘤细胞
培养、筛选
既能分裂又能产生抗体 的杂交瘤细胞
注射小鼠腹 腔体内培养
培养液体外 培养
大量单克隆抗体
效应B细胞
单克隆抗体的应用
（1）优点：特异性强(单抗)。 （2）应用：作为探针(诊断蛋白结构)；
动物细胞电融合过程
1）在高频电流电 场下的相互接触
2）脉冲刺激后30s 3) 50秒后 4）1.5分钟后 5）6分钟后 6）15分钟后，细胞
融合完成
动物细胞融合的应用
•效应B细胞
产生抗体
机体受到特定抗原刺激后，会
产生相应的效应B细胞，效应B 细胞产生特定的抗体与该抗原
能发生特异性结合。
效应B细胞
4、细胞系 可连续传代的细胞。
（1）有限细胞系：不能连续培养下去的细胞系。
（2）连续细胞系：能连续培养下去的细胞系。 细胞染色体数发生了改变，具异倍体。
有的具有致癌性，有的不致癌。
5、细胞株
从原代培养或细胞系中获得的 具特殊性质的细胞。
（1）有限细胞株：可传代次数有限的细胞株。
（2）连续细胞株：可连续多次传代的细胞株。
(1)物、化法：同左 (2)生物法：灭活病 毒
结果
杂种细胞群
杂种植株
1、动物细胞全能性的表现程度
•全能细胞＞多能细胞＞单能细胞＞特化细胞； •低等动物＞高等动物
2、动物细胞全能性受限制的原因
基因的选择性表达（有的基因开放，有的基因 关闭）使分化潜能变低。
3、动物细胞核仍具有全能性
细胞核含有保持物种遗传性所需的全套基因， 而且并没有因细胞分化而丢失基因。
同 点
目的
获得细胞或细胞产物 等
固体培养基，激素及 其他营养物质
获得细胞产物、植株 等
取材 幼龄或胚胎细胞
任何活细胞
过程
不发生脱分化、再分 发生脱分化、再分化，
化，仍是原来细胞
可形成别的细胞
(四)动物细胞融合 1、含义：
两个或多个细胞融合成一个细胞的现象。
2、融合方法
• 物理：电融合 • 化学：PEG（聚乙二醇） • 生物：灭活的病毒（仙台病毒）
取核
黑脸绵羊 卵细胞
去核
●受体细胞选卵细
乳腺细胞核
卵细胞质 胞的原因：
核移植 重组细胞
①大，易于操作； ②卵黄多，营养丰
细胞、胚胎培养 富，为发育提供充
早期胚胎
足的营养；
胚胎移植 另一母羊子宫
妊娠出生
③细胞质能激发细 胞核基因表达。
多莉羊(白脸)
白脸绵羊 乳腺细胞
取核
乳腺细胞核
黑脸绵羊 卵细胞 去核
（6）用途：获得缺乏特殊基因的突变细胞系， 用于研究某种蛋白功能。
(三)动物组织培养
动物组织在体外及人工条件下维持 生活状态或生长特性。
•动物细胞培养与植物组织培养的比较
项目
动物细胞培养
植物组织培养
相同点
都需无菌条件；都进行有丝分裂
原理
细胞增殖
细胞全能性
培养 液体培养基，动物血
不 基 清及其他营养物质
●动物细胞培养时，一般选取幼龄动物的组织，其细 胞的分化程度较低，增殖能力强，容易培养。
●培养前要将组织细胞用胰蛋白酶分散成单个细胞， 因为：（1）成块组织接触抑制不利培养；（2）组 织内细胞有区别，获得的细胞纯度低。
●在动物细胞培养过程中，一般10代以前(原代培养) 的细胞核型不变，10代以后(传代培养)有些细胞核 型发生改变，50代以后的细胞可能发生癌变。