实验报告甘氨酸的含量测定

甘氨酸的含量测定——电位滴定法

生药1011 第四组

一、应用范围：

本方法采用滴定法测定甘氨酸原料药中甘氨酸的含量。

本方法适用于甘氨酸原料药。

二、方法:

供试品无水甲酸溶解后，加冰醋酸，照电位滴定法，用高氯酸滴定液滴定，并将滴定的结果用空白试验校正，根据滴定液使用量，计算甘氨酸的含量。三、原理：

和一COOH，为两性物质，在水溶液中，它的酸式电氨基酸分子中含有一NH

2

离和碱式电离的趋势都很弱(如氨基乙酸其羧基上的氢Ka=2．5×10-10，氨基作为碱Kb=2．2×10-12)，因此无法准确滴定。

作滴定剂，结晶紫为指示剂准确但在非水介质(如冰乙酸)中，可以用HC10

4

滴定氨基酸，产物为氨基酸的高氯酸盐，呈酸性。

结晶紫在强酸介质中为绿色，pH=2左右为蓝色，pH>3时为紫色，可以指示此反应的滴定终点。(由紫色到蓝色到蓝绿到绿色到黄色变化)

四、实验材料

1、试剂：

（1）冰醋酸

（2）无水甲酸

（3）高氯酸滴定液（0.1mol/L）

（4）结晶紫指示液

（5）基准邻苯二甲酸氢钾

2、仪器设备：电位滴定仪、酸度计或电位差计、容量瓶、烧杯、磁力搅拌器、搅拌子等

五、操作步骤

1.高氯酸滴定液（0.1mol/L）试样制备

配制：取无水冰醋酸（按含水量计算，每1g水加醋酐5.22mL）750mL，加入高氯酸（70~72%）8.5mL，摇匀，放冷，加无水冰醋酸适量使成1000mL，摇匀，放置24小时。若所测供试品易乙酰化，则须用水分测定法测定本液的含水量，再用水和醋酐调节至本液的含水量为0.01%~0.2%。

2.结晶紫指示液

取结晶紫0.5g，加冰醋酸100mL使溶解。

3.标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.16g，精密称定，加无水冰醋酸20mL使溶解，加结晶紫指示液1滴，用本液缓缓滴定至蓝色，并将滴定结果用空白试验校正。每1mL高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。

4.酸度计的校正

（1）接通电源，开机预热5min。

（2）用蒸馏水冲洗电极，并用滤纸吸干，然后将电极放入pH已知的标准缓冲溶液中（P H 6.864）摇动烧杯，使电极前端玻璃球与标准缓冲溶液充分接触。转动标定旋钮，使仪器度数等于标准缓冲溶液的pH值。标定完成后将电极清洗干净，并用滤纸吸干。同样的方法再标定pH 4.003的标准缓冲液。

5.供试品的电位滴定

精密称取供试品约70mg，加冰醋酸25mL，照电位滴定法，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1mL高氯酸滴定液

（0.1mol/L）相当于7.507mg的C

2H

5

NO

2

。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

六、实验结果

1.原始数据

（1）标定

项目标定1 标定2 平均值HC104 滴定量／mL 5.5 5.4 5.45 （2）电位滴定

V/mL 0 2 4 5 6 6.3 6.5 6.7 6.9 7 E/mv 362 386 412 431 485 526 585 624 645 652 2.数据处理

（1）标定KHP+HClO4 ——H2P+KClO4

所以，高氯酸滴定液浓度C=0.1438mol/L

（2）甘氨酸含量测定G+ HC1O4——HGC1O4

甘氨酸含量=

原始数据一阶微分二阶微分

V/mL E/mv △E／△V V △E／△V V

0 362 12 1 0.5 2

2 386 1

3 3

4 3.75

4 412 19 4.

5 35 5

5 431 54 5.5 127.7 5.825

6 485 13

7 6.15 632 6.275

6.3 526 295 6.4﹣500 6.5

6.5 585 195 6.6 ﹣450 6.7

6.7 624 105 6.8 ﹣233.3 6.875

6.9 645 70 6.95

7 652

由二阶微分法知滴定终点为6.4 mL 所以，甘氨酸含量=

=98.70%

电位滴定法将盛有供试品溶液的烧杯置电磁搅拌器上，浸入电极，

搅拌，并自滴定管中分次滴加滴定液；开始时可每次加入较多的量，搅拌，记录电位；至将近终点前，则应每次加入少量，搅拌，记录电位；至突跃点已过，仍应继续滴加几次滴定液，并记录电位。

滴定终点的确定用坐标纸以电位（E）为纵坐标，以滴定液体积（V）为横坐标，绘制E－V曲线，以此曲线的陡然上升或下降部分的中心为滴定终点。或以△E／△V（即相邻两次的电位差和加入滴定液的体积差之比）为纵坐标，以滴定液体积(V)为横坐标, 绘制（△E／△V）-V曲线，与△E／△V的极大值对应的体积即为滴定终点。也可采用二阶导数确定终点。根据求得的△E／△V值，计算相邻数值间的差值，即为△<2>E／△V< 2>，绘制（△<2>E／△V<2>）－V曲线，曲线过零时的体积即为滴定终点。

如系供指示剂变色域的选择核对，滴定前加入指示剂，观察终点前至终点后的颜色

变化，以选定该品种终点时的指示剂颜色。

电位滴定法选用2支不同的电极。1支为指示电极，其电极电势随溶液中被分析成分

的离子浓度的变化而变化；另1支为参比电极,其电极电势固定不变。在到达滴定终点时,

因被分析成分的离子浓度急剧变化而引起指示电极的电势突减或突增，此转折点称为突

跃点。

电位滴定仪作滴定分析时的使用方法：

本仪器可以用于各种类型的电位滴定，用户根据不同的电极，插后面板的电极插孔，如有的电极不能直接插入Q9插孔中，则可用本仪器提供的 Q9 插头；连线用鳄鱼夹住电极头即可。

A、按图 1 所示，装好滴定装置，将电磁阀两头的硅胶管分别用力套入滴定管和滴液管的接头上。

B、将电磁阀插入仪器后部的插孔中，在滴定管中加入标准溶液。

C、按“快滴”键，调节电磁阀螺丝，使标准液流下，赶走液路部分全部气泡。

D、按“慢滴”键，同样调节电磁阀螺丝，使慢滴速度为每滴 0.02ml 左右。

•E、重新加满标准液，按短滴键，使滴定管中的标准液调节到零刻度。

•F、选择开关置“预设”档，调节预设电位器至使用者所滴溶液的终点电位值，mv 值和 PH 值通用，如终点电位为-800mv，则调节终点电位器使数显为-800，如终点电位为 8.5PH，则调节终点电位器使数显为 850 即可。

•G、预设好终点电位后，选择开关按使用要求置mv或PH档，此时“预设”电位器就不能再动了。

•H、用户在作滴定分析时，为了要保证滴定精度，不能提前到终点也不能过滴，同时又不能使滴定一次的时间太长，本仪器设有长滴控制电位器，即在远离终点电位时，滴定管溶液直通被滴液，在接近终点时滴定液短滴(每次约 0.02ml)逐步接近终点，到达终点时(±3mv 或±0.03PH)停滴，延时 20 秒左右，电位不返回即终点指示灯亮，蜂鸣器响。