实验报告六高效液相色谱法用于有机农药残留的分离和分析

华南师范大学实验报告

学生姓名学号：

专业：化学师范年级、班级：09级化四

课程名称：近代有机分析方法和实验实验时间：2011年11月9日

实验六：高效液相色谱法用于有机农药残留的分离和分析

【实验目的】

1、应用高效液相色谱法对磺胺类抗生素的定性和定量检测

2、学习谱图和数据的处理方法

【实验原理】

磺胺族抗生素包括磺胺嘧啶，磺胺二甲嘧啶，磺胺甲噁唑，等, 被广泛应用到水产、畜禽类养殖中。它们被添加到动物饲料中, 以促进动物的生长以及防治各种疾病, 如果不能严格控制停药期, 很容易造成在动物肉和组织中残留, 给人体健康带来危害, 因此世界各国对畜禽肉中的磺胺族残留都有严格的限量要求。GB/T 5009.116- 2003 用液相色谱法检测畜禽肉中的磺胺类药物残留量, 操作简单快速,但是该方法灵敏度比较低。

【实验仪器与试剂】

仪器：岛津液相色谱仪，SPD-20A检测器，LC-20AT泵，微量进样器，C18色谱柱

试剂：磺胺嘧啶标准溶液，磺胺吡啶标准溶液，磺胺嘧啶-磺胺吡啶混合液（1：1），乙腈（AR），0.05%甲酸溶液

样品部分物理参数：

【实验步骤】

1、准备

1.1准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。（这里用的是流

动相是乙腈(B)和0.05%甲酸溶液(A)，分别用有机相系和水相系的0.45µm滤膜过滤，超声脱气20min。）

1.2根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。

1.3配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。（即

分别称取0.10g的磺胺嘧啶、磺胺吡啶用甲醇定容至100.0 mL，用0.45µm滤膜过滤（先在一次性注射器加上0.45µm滤膜，然后把活塞杆拉出来，把要过滤的溶液倒进去再把杆推进滤出溶液。）得到磺胺嘧啶和磺胺吡啶的标准液分别为1 mg/mL（1000ppm）。分别吸取磺胺嘧啶和磺胺吡啶标准溶液各5mL，置于10 mL容量瓶中磺胺吡啶和磺胺嘧啶-磺胺吡啶混合0.5 mg/mL（500ppm）。

1.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

2、开机

接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站（即电脑桌面上的CS-Light Real Time Analysis）。

3、参数设定

3.1波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键接着按[Enter]键，用数字键输入所

需波长值281nm，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。, w4

3.2流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线

时流速一般不超过1.0 mL/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。

3.3流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B乙腈

的浓度百分数(17%)，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。

4、更换流动相并排气泡

4.1将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；

4.2逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀；

4.3按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min

（可设定）后自动停止；

4.4将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。

4.5如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。

4.6如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为

5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。

5、平衡系统

5.1按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开"在线色谱工作站"软件，输入实验信息并

设定各项方法参数后，按下"数据收集"页的[查看基线] 按钮。

5.2等度洗脱方式; g5 J; Q

5.2.1按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流

动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。按A泵的[pump]键，A、B泵将同时

启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。

5.2.2检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。

5.2.3观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱

前管路仍有气泡，按4.6操作。

5.2.4观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认

为系统已达到平衡状态，可以进样。

6、进样

6.1进样前在CS-Light Real Time Analysis中:(1)点击“单次分析”，接着点击“样品记

录”，在样品记录名称中输入所要检测得样品名称，然后点击“数据文件”选择该样品储存在哪里，最后在“数据储存的文件夹”后面输入该样品名称，点击确定。(2)在信号采集菜单中设定停止时间和延迟时间。

6.2进样前按检测器[zero]键调零，按软件中[零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下

[查看基线] 按钮使其弹起。

6.3用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取20 L。

7、数据处理

7.1在桌面双击“CS-Light Postrum Analysis”，点击确定按钮后，在“文件夹目录中”

选中该样品记录双击鼠标，在谱图上单击鼠标右键的“显示设置”，在“显示设置”中选择“展开色谱”的“时间”“0”到“20”后点击确定

7.2用鼠标点击“编辑”选择“积分”中的“最小峰面积/高”输入“最小峰面积值”，然

后又点击“定量”在“定量方法”中选择“面积归一法”，然后点击查看。

7.3复制谱图到Word文档，在谱图中点击鼠标右键选择“复制”；复制数据，单击鼠标