微生物CLSI更新摘要
CLSI临床微生物实验室标准解读XXXX

CLSI临床微生物实验室标准解读CLSI2021更新CLSI临床微生物实验室标准解读第三辑2021年CLSI药敏试验的更新中国医学科学院北京协和医学院杨启文王辉美国临床与实验室标准化研究所(TheClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,CLSI)是一个国际性、跨学科、非营利的、致力于开展操作标准的教育组织。
其抗菌药物敏感性试验小组委员会(SubcommitteeonAntimicrobialSusceptibilitytesting)每年组织该领域专家和药厂代表等对药敏相关文件M100进行一次修订。
目前我国的临床微生物实验室均以CLSI文件作为药敏指导文件进行试验操作和报告,本文将CLSIM100-S20(2021年)的要紧更新点总结如下:一、要紧格式的更新:下表显示了一些在M100-S19(2021年)中位于最后的附录在M100-S20(2021年)文件中新的命名、编号和位置。
表1.M100-S20的格式更新M100-S19中的名称M100-S20名称/位置附录A(ESBLs的筛选和确证试验) 补充性表格2A-S1/表2A的最后附录G(碳氰酶烯酶的筛选和确证试验) 补充性表格2A-S2/表2A的最后附录B(金黄色葡萄球菌的筛选试验) 补充性表格2C-S3/表2C的最后附录C(凝固酶阴性葡萄球菌的筛选试验) 补充性表格2C-S4/表2C的最后附录D(肠球菌的筛选试验) 补充性表格2D-S5/表2D的最后附录E(药敏结果确实证建议) 附录A/M100-S20的最后,术语表前附录F(药敏试验的质控菌株) 附录B/M100-S20的最后,术语表前二、表1和表2介绍内容中的更新(1)修订了“非敏感〞的定义:M100-S20中对“非敏感〞的定义是由于耐药菌株缺失或稀少因而仅确立了敏感性解释标准。
当药物对菌株的MIC高于或抑菌圈直径低于此折点时需报告为非敏感。
非敏感并不意味着菌株携带某种耐药机制。
clsi更新中文

Negative (N=19) 3
24
11
74
7
4
-
-
2
1、已明确 2、用厄他培南纸片法 3、AmpC过表达或ESBL+/-膜不通透 4、NDM-1(7/14产NDM-1菌MHT阴性)
MHT:敏感性:77.4%; 特异性 38.9% MHT对KPC和OXA检出能力好;对NDM-1检出能力低。
Girrlich et al. 2012. J Clin Microbiol. 50:477.
降低亚胺培南、美罗培南的折点;增加多尼培南的 折点
葡萄球菌属
增加青霉素纸片抑菌圈边缘法检测β内酰胺酶。
修订折点必须切记!
CLSI和FDA设定的折点都是针对美国的。 CLSI和FDA建立的折点二者有少许不同 商业化药敏系统必须使用FDA折点 临床实验室即可使用CLSI也可使用FDA
折点
Adapted from Queenan & Bush. 2007. Clin Microbiol Rev. 20:440.
MHT对碳青霉烯酶的检出价值
MHT2
Positive Negative Not interpretable Not Done
Carbapenemase1
Positive (N=35)
针对MDR的报告制度
Section I.D. Selective Reporting ……
Ipnroa另tdodc外oitlio,tno,a每edad个crhes实lasbi验soorala室ttoer必sy tsh须haotu建ladr立ede针vel对op a 对co所nf有irm常ed规as药res敏ist测ant试to均all为ag耐en药ts o的n t制he度ir 。 这rino种cultui制ndee度toeps应ttiopn包asnf括eolsr.增teTsh加tiisn实gprao验dtodc室itoiol 内nshalo部augld可ent完s 成in测-ho试us的e o药r s物end种ing类th或e i必sol须ate送to至a r参efe考re实nce 验la室bo的rato菌ry.株。
《 clsi及eucast更新要点及替加环素药敏测定难点解析》.

1.肠杆菌科
沙门菌推荐报告哪些药物?
• “对于分离自粪便的沙门菌或志贺菌,仅常规测
试并报告氨苄西林、一种氟喹诺酮类药物和复方 新诺明。另外,对于分离自肠道外的沙门菌,增 加测试并报告一种三代头孢菌素,如有需要亦测 试并报告氯霉素药敏结果。”
M100-S22. P44
MIC (µg/ml)
Susc Int
Res
≤2
4
≥8
≤0.25 0.5
≥1
≤0.5 1.0
≥2
Disk Diffusion (mm)
Susc Int
Res
≥19 16-18 ≤15
≥23 20-22 ≤19 ≥22 19-21 ≤18
New
*目前和FDA折点相同
1.肠杆菌科
为什么CLSI再次修订肠杆菌科对厄他培南的折点?
S. aureus
• 5% sheep blood agar • 1 unit penicillin disk • S. aureus ATCC 25923
as the indicator βlactamase negative (penicillin S) strain • Some difficulties reading
备注:并不是所有产碳青霉烯酶的肠杆菌科 细菌MHT均为阳性,有些菌株MHT阳性但对 碳青霉烯类药物耐药的机制并不一定是产碳 青霉烯酶。
M100-S22.P52-60
什么时候做MHT?
如果使用旧的折点 如果使用新的折点
碳青霉烯酶筛查阳性
流行病学需要
做MHT
做MHT
M100M100--S222. Comment (23) Page 47. Table 2A Supplemeental Tables 2 and 3. Pages 52 and 56.
CLSI M S 第 版 主要更新内容解读

2016年CLSI M100S(第26版)主要更新内容解读张雅薇? ? 王辉(通讯作者)北京大学人民医院检验科此文发表在《中华检验医学杂志》2016年3月第39卷第3期,165-169建立和完善病原菌鉴定和体外药敏试验的标准化操作规程,是加强微生物室能力建设的基本要求之一。
其对优化临床药物选择、减缓耐药菌的产生具有重要意义。
CLSI制定的药敏试验标准是我国实验室遵循的指导性文件。
作为CLSI批准的药敏试验标准(包括M02-A12、M07-A10和M11-A8)的补充文件,2016年M100-S26正式更名为M100S(第26版)。
本文将重点解读CLSI M100S(第26版)文件[1]中的主要更新内容,以供临床实验室参考。
一、常规试验及报告药物的更新CLSI M100S(第26版)文件新增了多种目前新上市的新药如ceftolozane-他唑巴坦、奥利万星、泰地唑胺和特拉万星作为临床选择性报告的药物,并修订了几种抗菌药物的临床药敏报告组别,见表1。
注:a A组:常规测试并报告的药物。
b B组:常规测试,但选择性报告的药物。
c C组:补充性抗菌药物,选择性地报告。
d U组:仅用于泌尿道感染的抗菌药物。
e O组:其他药物,是指对微生物有作用,但在美国不常规要求测试的药物。
f其他非肠杆菌科:包括假单胞菌属和其他非苛养、非发酵糖革兰阴性杆菌(除外铜绿假单胞菌、不动杆菌属、洋葱伯克霍尔德菌和嗜麦芽窄食单胞菌)。
二、药敏折点的相关更新2016年CLSI M100S(第26版)文件修订了头孢唑林对肠杆菌科的纸片法和MIC 折点,并建议将头孢唑林药敏结果用于预测口服头孢菌素的药敏。
当头孢唑林用于治疗由大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌引起的非复杂性尿路感染时,建议使用新修订的折点,见表2,折点建立基于的给药方案为1g每12h;除非复杂性尿路感染外,当患者为其他感染时,仍沿用M100-S25中头孢唑林对肠杆菌科的折点。
《2019 clsi及eucast更新要点及替加环素药敏测定难点解析》-PPT精选文档

2.铜绿假单胞菌折点(ug/ml)修订
Agent 哌拉西林 哌拉西林-他唑巴坦 替卡西林 替卡西林-克拉维酸 Old (M100-(M100-S21) Susc ≤64 ≤64/4 ≤64 ≤64/2 Int Res ≥128 ≥128/4 ≥128 ≥128/2 New M100M100--S22 Susc ≤16 ≤16/4 ≤16 ≤16/2 Int 32--64 32/4--64/4 32--64 32/2--64/2 Res ≥128 ≥128/4 ≥128 ≥128/2
• 不常规报告AST,除非是门诊病人 •
– 沙门菌病通常是自限性疾病不常规推荐进行抗 生素治疗 在一些情况特殊的病人(如免疫功能受抑、HIV) 与医生讨论是否需要做AST – 保守地,要考虑强调更低的环丙沙星折点。
1.肠杆菌科
肠道外分离的沙门菌药敏报告策略
• 做药敏试验 • 环丙沙星使用新的折点 • 病人伴随出现分离株的应用自粪便分离株
≥31
21--30
≤20
≤0.06
0.12--0.5
≥1
M100-S22,P48
1.肠杆菌科
伤寒沙门菌及肠道外沙门菌环丙沙星药敏试验
• 最好做环丙沙星MIC • 自动化药敏仪器无法给出新折点的最低稀释度——考虑用 • • •
E-Test? 如果用纸片扩散法,考虑同时做萘啶酸和环丙沙星纸片 – 萘啶酸对gyrA酶突变菌株检出效果好 – 环丙沙星对质粒编码的基因突变的菌株检出效果好 染色体介导的gyrA酶基因突变比质粒编码的基因突变致氟 喹诺酮敏感性降低更常见。 其它氟喹诺酮(如左氧)折点仍在评估中。
1.肠杆菌科
Modified Hodge Test (MHT) (Table 2A Supplemental Table 2 and 3)
2009年CLSI更新
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新
CLSI的AST标准 2009年1月
M100-S19 表格(2009)* M02-A10 纸片扩散法(2009)** M07-A8 MIC 方法(2009)**
*M100每年更新一次 **M02,M07每3年更新一次
2009年的CLSI AST标准的主要 改变
VISA-以前的假“S”株(CLSIM100- S18)万古霉素纸片扩散法折点
金黄色葡萄球菌
万古霉素的抑菌环直径与MIC比对
以前(2008)折点15mm
抑菌环直径(mm)
汇报葡萄球菌万古霉素试验的策略
选择性的做万古霉素的MIC(如可能会使用万 古霉素的情况) 常规检测万古霉素的MIC 金黄色葡萄球菌 -在所有的DD平皿上贴万古霉素纸片筛选 VRSA -BHI琼脂筛选(注:不能检测MIC=4 μg/ml 的VISA) 金黄色葡萄球菌和CoNS的万古霉素结果对于正 在使用和已经用过万古霉素的患者十分重要。 其他
新的“折点”表格2A-2L (DD和 MIC在一个表格里)
AST实验条件小结(以前没有过)
对表格进行重组导致……
“以前列在表2A-2L中的一些要求或实验 推荐方法现在出现在附录A—G(M100S19)或分出去在M02-A10或M07-A8 ”
很重要!
“非敏感”的解释
对于只有敏感折点的菌株/药物组合,可能是由于 一种新的抗微生物制剂在其刚制定折点时还未遇 到过耐药菌株。如果菌株的 MIC 高于敏感折点则 认为是非敏感,这样的情况不一定意味着该菌株 中存在某种耐药基因。这一非敏感的 MIC 值可能 也是野生型菌株药敏结果中曾出现的,但是对于 这 样 菌 株 的 临 床 治 疗 的 经 验 有 限 。
【指南与规范】2016年CLSI M100S(第26版)主要更新内容解读
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一、常规试验及报告药物的更新CLSI M100S(第26版)文件新增了多种目前新上市的新药如ceftolozane-他唑巴坦、奥利万星、泰地唑胺和特拉万星作为临床选择性报告的药物,并修订了几种抗菌药物的临床药敏报告组别,见表1。
注:a A组:常规测试并报告的药物。
b B组:常规测试,但选择性报告的药物。
c C组:补充性抗菌药物,选择性地报告。
d U组:仅用于泌尿道感染的抗菌药物。
e O组:其他药物,是指对微生物有作用,但在美国不常规要求测试的药物。
f其他非肠杆菌科:包括假单胞菌属和其他非苛养、非发酵糖革兰阴性杆菌(除外铜绿假单胞菌、不动杆菌属、洋葱伯克霍尔德菌和嗜麦芽窄食单胞菌)。
二、药敏折点的相关更新2016年CLSI M100S(第26版)文件修订了头孢唑林对肠杆菌科的纸片法和MIC折点,并建议将头孢唑林药敏结果用于预测口服头孢菌素的药敏。
当头孢唑林用于治疗由大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌引起的非复杂性尿路感染时,建议使用新修订的折点,见表2,折点建立基于的给药方案为1g每12h;除非复杂性尿路感染外,当患者为其他感染时,仍沿用M100-S25中头孢唑林对肠杆菌科的折点。
新版标准删除了下列药物对各菌种的折点:替卡西林和头孢噻吩对肠杆菌科的折点;替卡西林对铜绿假单胞菌;替卡西林和美洛西林对不动杆菌属;美洛西林、替卡西林和氨苄西林对其他非肠杆菌科(包括假单胞菌属和其他非苛养、非发酵糖革兰阴性杆菌,除外铜绿假单胞菌、不动杆菌属、洋葱伯克霍尔德菌和嗜麦芽窄食单胞菌)的折点。
同时也删除了美洛西林和替卡西林对厌氧菌的折点。
三、常规药敏试验、补充药敏试验、初筛试验、替代药物检测法和等效药物检测法鉴定抗菌药物的敏感和耐药M100S(第26版)增加了常规药敏试验、补充药敏试验、初筛试验、替代药物检测法和等效药物检测法的说明,见表3~7。
1.常规药敏试验:用于临床常规检测的纸片扩散法、肉汤或琼脂稀释法。
clsim100 32药敏试验标准2023中文版
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clsim100 32药敏试验标准2023中文版介绍:药敏试验是一种通过检测细菌或其他微生物对不同抗生素的敏感性来指导临床用药的测试方法。
药敏试验标准是为了确保药敏试验结果的准确性和可比性,临床医生可以根据这些结果来选择合适的抗生素进行治疗。
2023年版的药敏试验标准更新了之前版本的内容,添加了新的试验项目和方法,以更好地适应临床需求。
本文将对2023年版的药敏试验标准进行详细介绍。
一、试验范围:2023年版的药敏试验标准适用于细菌、真菌和其他微生物的药敏试验。
其中包括对常见病原体如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等的药敏试验,以及对罕见病原体如多重耐药菌株、病毒等的药敏试验。
该标准还适用于临床、科研和药品监管等领域。
二、试验项目:2023年版的药敏试验标准包括以下试验项目:1.最小抑菌浓度(MIC)测定:该项目通过测定细菌对抗生素的最低抑制浓度,来评估其对抗生素的敏感性。
MIC测定是药敏试验的核心内容之一。
2.抗生素敏感度测试:该项目通过对不同抗生素的浓度进行渐进性稀释,判断细菌对抗生素的敏感性水平。
3.抗菌圈直径测定:该项目通过测定抗生素在琼脂平板上形成的抗菌圈直径,来评估细菌对抗生素的敏感性。
在临床上,抗菌圈直径的大小通常用来判断细菌对抗生素的敏感性和耐药性。
4.酶联免疫吸附测定(ELISA):该项目通过检测细菌分泌的特定酶或蛋白质的水平来评估其对抗生素的敏感性。
5.分子生物学检测:该项目通过检测细菌或真菌的特定基因或基因片段的存在与否,来评估其对抗生素的敏感性。
三、试验方法:2023年版的药敏试验标准规定了具体的试验方法,包括实验器材和试剂的准备、试验操作步骤、结果解读等。
标准强调了试验的操作规范和结果的准确性。
四、质量控制:标准强调了药敏试验的质量控制要求。
试验过程中需要使用合适的阳性对照菌株和阴性对照菌株来进行比对和验证。
质控菌株的选取和保存也在标准中有所规定。
五、结果解读和报告:标准对试验结果的解读和报告也进行了明确规定。
2012年CLSI药敏折点更新解析
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2012年CLSI药敏折点更新解析
王辉;陈宏斌
【期刊名称】《临床检验杂志(电子版)》
【年(卷),期】2012(000)002
【摘要】<正>CLSI折点更新是临床微生物工作者非常关心的问题,其更新依据是"野生菌群"或常规菌群的MIC分布、与临床预后相关的MIC和药物代谢-药效学(PK-PD)分析。
2012年CLSI也进行了药敏折点的增加和修订,本文将一一概括和分析。
【总页数】2页(P68-69)
【作者】王辉;陈宏斌
【作者单位】北京大学人民医院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】R446.5
【相关文献】
1.2006年CLSI/NCCLS药敏标准的更新(CLSI/NCCLS M100-S16代替M100-
S15) [J], 李雅军;张斌;王华
2.应用 CLSI M43-A折点值判读解脲脲原体的药物敏感性 [J], 郑业焕;陈玕;王则宇;马冰;席宇;朱大恒
3.CLSI三代头孢菌素新旧折点对判定大肠埃希菌药物敏感性及产ESBLs菌株分布的影响 [J], 江洋;许伟伟;熊自忠;沈继录;董秋萍
4.CLSI头孢吡肟折点改变对肠杆菌科细菌的药敏变化分析 [J], 林伟苗;邱芳华;李
秋明;梁冬艳;薛志锋
5.及时更新Phoen ix-100全自动微生物分析仪肠杆菌科药敏判断折点的重要性[J], 徐立冬;董莉倩
因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
-CLSI折点的重要修改和临床意义(2013)

• 最新的动物模型已经证实
32
克林霉素诱导耐药性
33
克林霉素诱导耐药性
34
对青霉素过敏反应史
没有
青霉素G 首剂 500万 单位 静脉 ;250-300万 单位 每4小时一次 , 直至分娩 或
氨苄西林 首剂 2g,静脉; 1g 每4小时一次 直至分娩
有
接受青霉素或头孢菌素后出现 下述任何一种症状者: •过敏性休克 •血管性水肿 •呼吸困难 •荨麻疹
▪ 还未专门为葡萄球菌属广泛评估折点
16
葡萄球菌和β内酰胺类
▪ 青霉素
• 对青霉素酶不稳定的一类青霉素类
▪ 苯唑西林
• 对青霉素酶稳定的一类青霉素类
▪ 头孢西丁
• 代替苯唑西林
▪ 头孢洛林(Ceftaroline)
• 具有抗MRSA活性的头孢菌素
17
葡萄球菌属和β-内酰胺类
18
头孢西丁纸片法和金葡菌和路邓葡萄球菌
• 齿龈感染、吸入性肺炎, 肺脓肿, head and neck infections, 盆腔炎 • B 组链球菌寄植的青霉素过敏的高危围产期妇女
▪ 链球菌咽炎– 青霉素治疗失败 ▪ 骨关节感染 ▪ 注意:
• 儿童中的使用多于成人 • 抗菌药物相关性腹泻– 难辨梭菌
31
克林霉素诱导耐药性
▪ 葡萄球菌
长期住院或严重感染患者需要进行MIC法药敏 试验 ▪ β-内酰胺酶测定方法可采用常规的产色头孢菌 素法
23
卡他莫拉菌药敏试验注意点
▪ 试验的环境
• 培养基 CAMHB 微量稀释法 MHA 纸片法 • 接种菌量 直接菌落悬浮法 0.5 麦氏浊度 • 培养环境 35℃ 纸片法 5%CO2, 20-24小时
clsi更新中文

Specimen: Tracheal Asspirate Diagnosis: Pneumoniaa Klebsiella pneumoniae
MIC (µg/ SOP包括:
amikacin ampicillin cefazolin cefepime ceftriaxone
CLSI设定、修订折点所使用的 数据
“野生株”或正常微生态菌的MIC分布
“野生株”=无获得性耐药机制
药动学-药代学分析(PK/PD)
PK=吸收、分布、代谢、清除 PD=体内一定时间内药物浓度与抗微生物疗效的关系
MICs与临床转归
对旧的药物只有极有限的新数据
CLSI M23--A3(2008) “Development of In Vitro Susceptibility Testing Criteria and QC Parameters; Approved Guideline” describes CLSI process for setting/ revising breakpoints
* 每年更新一次 ** 每三年更新一次
Summary of the Changes
M100-S22.Page 13.
2012主要更新
肠杆菌科
再次修订厄他培南的折点 增加环丙沙星对伤寒沙门菌及肠道外沙门菌分离株
的折点
铜绿假胞菌
降低哌拉西林、哌拉西林-他唑巴坦、替卡西林、 替卡西林-克拉维酸的折点
CLSI M100-S22更新要点
CLSI AST Standards January 2012 Update
M100-S22 Table(2012)* M02-A11 Disk Diffusion Method(2012)** M07-A9 MIC Method(2012)**
CLSI临床微生物实验室标准解1

CLSI临床微生物实验室标准解读葡萄球菌CLSI 临床微生物实验室标准解读第一辑2009年CLSI (M100-S19)中葡萄球菌属药敏更新部分中国医学科学院北京协和医院王辉陈宏斌2009年CLSI在版式上的显著变化是将K-B法和MIC法放在同一个表格中,方便比较。
对于葡萄球菌属,主要有以下更新和变化:一是去除凝固酶阴性葡萄球菌苯唑西林纸片扩散法试验;二是删除了万古霉素纸片扩散法的药敏折点;三是增加了金葡菌莫匹罗星高水平耐药性的检测。
一、β-内酰胺类的变化2009年CLSI指出在报告青霉素对葡萄球菌敏感之前,即当MIC≤0.12μg/ml或抑菌圈直径≥29 mm,需要做可诱导的β-内酰胺酶试验。
其操作如下:将分离菌株传种至血平皿或MH琼脂上,贴上作为诱导子的苯唑西林或头孢西丁纸片,35℃孵育16-18h,挑取抑菌圈边缘的细菌做b-内酰胺酶试验。
b-内酰胺酶试验阳性可以预测青霉素、氨苄西林、阿莫西林、羧苄青霉素、替卡西林、美洛西林和哌拉西林耐药。
在检测MRS时,金葡菌、路登葡萄球菌和其它凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)对苯唑西林的折点和选取的药敏方法有所不同,具体见表1(见下页)。
在CoNS(除外路登葡萄球菌以外)中,由于苯唑西林纸片扩散法存在太多假―R‖,所以此法被去除,而是采用头孢西丁纸片法、苯唑西林/头孢西丁MIC法检测mecA介导的苯唑西林耐药。
对于由CoNS(除外表皮葡萄球菌)引起的严重感染,当苯唑西林MIC值在0.5-2μg/mL之间时,应当检测该菌株是否产mecA基因或PBP2a(图1)。
利用头孢西丁检测mecA 介导的苯唑西林耐药所推荐的质控菌株是金葡菌ATCC25923-mecA阴性(抑菌圈直径23-29mm)和金葡菌ATCC43300-mecA阳性(抑菌圈直径≤21mm)。
图1 CoNS*苯唑西林MIC结果报告策略二、糖肽类耐药性的检测2009年CLSI推荐采用MIC法检测所有葡萄球菌对万古霉素的敏感性,去除了纸片扩散法。
eucast和clsi 更新

2. 诺氟沙星的药敏结果可以推导喹诺酮类药物的药敏结果,敏感可以推导分离株对环丙沙星,左氧氟沙星,莫西沙
星和氧氟沙星敏感。但是耐药不行,需要单独进行测试才能确认药敏结果
3. 克林霉素诱导耐药实验:将克林霉素和红霉素纸片间隔≤12mm;孵育6-8小时后确认是否存在“D”状抑菌圈。
对于此试验,阳性结果可靠,但是阴性结果并不能排除不存在诱导耐药情况。此外当测试克林霉素药敏试验时,
3. 克林霉素诱导耐药实验:将克林霉素和红霉素纸片间隔≤12mm;孵育6-8小时后确认是否存在“D”状抑菌圈。
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对于此试验,阳性结果可靠,但是阴性结果并不能排除不存在诱导耐药情况。此外当测试克林霉素药敏试验时,
建议QC 方法和流程
质控菌株: • 大肠ATCC 25922,金葡ATCC 29213和肺炎
15
Clindamycin
2
Trimethoprim-sulfamethoxazole
1.25-23.75
4 hours
Range Target
8-12
10
12-17
14-15
16-22
耐药
此外存在以个技术不确定区域ATU(Area of Technical Uncertainty ),因为孵育时间较短, 当抑菌圈在此区域内时无法确认其分类结果是属于敏感或耐药。其分类结果可疑。
8
如何处理和报告ATU结果
ATU区域代表了药敏分类结果(S,I,R)之间分离差的区域。 S,I,R结果解释误差在此区 域中极具增加,因此不建议对位于此区域的药敏结果进行解释。通常情况下孵育时间越短,出 现ATU结果的可能性就越高。
Target
17-18 20 18 21 25 17 17 17
2016年CLSI-M100S(第26版)主要更新内容解读

2016年CLSI M100S(第26版)主要更新容解读雅薇王辉(通讯作者)大学人民医院检验科此文发表在《中华检验医学杂志》2016年3月第39卷第3期,165-169建立和完善病原菌鉴定和体外药敏试验的标准化操作规程,是加强微生物室能力建设的基本要求之一。
其对优化临床药物选择、减缓耐药菌的产生具有重要意义。
CLSI制定的药敏试验标准是我国实验室遵循的指导性文件。
作为CLSI批准的药敏试验标准(包括M02-A12、M07-A10和M11-A8)的补充文件,2016年M100-S26正式更名为M100S(第26版)。
本文将重点解读CLSI M100S(第26版)文件[1]中的主要更新容,以供临床实验室参考。
一、常规试验及报告药物的更新CLSI M100S(第26版)文件新增了多种目前新上市的新药如ceftolozane-他唑巴坦、奥利万星、泰地唑胺和特拉万星作为临床选择性报告的药物,并修订了几种抗菌药物的临床药敏报告组别,见表1。
注:a A组:常规测试并报告的药物。
b B组:常规测试,但选择性报告的药物。
c C组:补充性抗菌药物,选择性地报告。
d U组:仅用于泌尿道感染的抗菌药物。
e O组:其他药物,是指对微生物有作用,但在美国不常规要求测试的药物。
f其他非肠杆菌科:包括假单胞菌属和其他非苛养、非发酵糖革兰阴性杆菌(除外铜绿假单胞菌、不动杆菌属、洋葱伯克霍尔德菌和嗜麦芽窄食单胞菌)。
二、药敏折点的相关更新2016年CLSI M100S(第26版)文件修订了头孢唑林对肠杆菌科的纸片法和MIC折点,并建议将头孢唑林药敏结果用于预测口服头孢菌素的药敏。
当头孢唑林用于治疗由大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌引起的非复杂性尿路感染时,建议使用新修订的折点,见表2,折点建立基于的给药方案为1g每12h;除非复杂性尿路感染外,当患者为其他感染时,仍沿用M100-S25中头孢唑林对肠杆菌科的折点。
新版标准删除了下列药物对各菌种的折点:替卡西林和头孢噻吩对肠杆菌科的折点;替卡西林对铜绿假单胞菌;替卡西林和美洛西林对不动杆菌属;美洛西林、替卡西林和氨苄西林对其他非肠杆菌科(包括假单胞菌属和其他非苛养、非发酵糖革兰阴性杆菌,除外铜绿假单胞菌、不动杆菌属、洋葱伯克霍尔德菌和嗜麦芽窄食单胞菌)的折点。
最新CLSI临床微生物实验室标准解读资料
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CLSI 临床微生物实验室标准解读CLSI2010更新CLSI 临床微生物实验室标准解读 第三辑2010年CLSI 药敏试验的更新中国医学科学院北京协和医学院 杨启文 王辉美国临床与实验室标准化研究所(The Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI)是一个国际性、跨学科、非营利的、致力于发展操作标准的教育组织。
其抗菌药物敏感性试验小组委员会(Subcommittee on Antimicrobial Susceptibility testing)每年组织该领域专家和药厂代表等对药敏相关文件M100进行一次修订。
目前我国的临床微生物实验室均以CLSI 文件作为药敏指导文件进行试验操作和报告,本文将CLSI M100-S20(2010年)的主要更新点总结如下:一、主要格式的更新:下表显示了一些在M100-S19(2009年)中位于最后的附录在M100-S20(2010年)文件中新的命名、编号和位置。
M100-S19中的名称 M100-S20名称/位置附录A(ESBLs 的筛选和确证试验) 补充性表格2A-S1/表2A 的最后附录G(碳氰酶烯酶的筛选和确证试验) 补充性表格2A-S2/表2A 的最后附录B(金黄色葡萄球菌的筛选试验) 补充性表格2C-S3/表2C 的最后附录C(凝固酶阴性葡萄球菌的筛选试验) 补充性表格2C-S4/表2C 的最后附录D(肠球菌的筛选试验) 补充性表格2D-S5/表2D 的最后附录E(药敏结果的确证建议)附录A/ M100-S20的最后,术语表前附录F(药敏试验的质控菌株) 附录B/ M100-S20的最后,术语表前(1) 修订了“非敏感”的定义:M100-S20中对“非敏感”的定义是由于耐药菌株缺失或稀少因而仅确立了敏感性解释标准。
当药物对菌株的MIC 高于或抑菌圈直径低于此折点时需报告为非敏感。
非敏感并不意味着菌株携带某种耐药机制。
中文版clsi更新PPT课件

ECVs和临床折点
临床折点建立根据: 抗菌药物的MIC分布 相关细菌 PK/PD 临床疗效
ECVs建立根据: and 仅仅是MIC的分布
临床微生物室如何使用ECVs
Ø万古霉素可用于治疗痤疮丙酸杆菌感染,但目前尚无临 床相关折点。
抗生素 万古霉素
痤疮丙酸杆菌
ECV(ug/ml)
野生型
非野生型
≤2
≥4
Table1A-1C抗菌药物的分组 Table2A-2J 纸片法及MIC法的解释标准 Table3A-3I筛选实验及确证实验的解释 Table4A-5G质量控制 Table6A-8B制备方案 AppendixA-Glossary3补充说明及术语表
变化的概要
M100-S25 第 13-15页.
重大的变化2015(1)
Ø环丙沙星体外虽然“S”,但临床疗效不是很好
Crump et al. 2008. Antimicrob Agents Chemother. 52:1278.
氟喹诺酮类非敏感——怎么办?
—— P49
沙门氏菌属ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ—氟喹诺酮类折点
抗生素
纸片 含量
环丙沙星 5ug
左氧氟沙星 -
氧氟沙星
-
培氟沙星 5ug
阳性菌株,不需要更改碳青霉烯类敏感性试验结果的解释。
目前不推荐作为临床常规使用。
—— P120
(使用M100-S20 (January 2010))解释标准 在实验室实施修订的碳青霉烯类抗生素的MIC标准之前,如 果肠杆菌科亚胺培南,美罗培南的MIC值为2-4ug/ml或厄他 培南MIC值为2ug/ml,则可能产碳青霉烯酶,需做此试验。
最大变化
Ø引入 Carba NP试验 Ø引入流行病学cutoff值(ECVs)的概念
药敏试验及CLSI标准更新_马筱玲

药敏试验条件(如葡萄球菌)
药敏试验条件
• 肠杆菌科细菌、非发酵菌、葡萄球菌、肠 球菌属等:Mueller-Hinton(MH)琼脂 • 链球菌属: 5%脱纤维羊血(马血、兔血) MH琼脂 • 淋病奈瑟球菌:GC培养基+1%特定的生 长添加剂 • 脑膜炎奈瑟菌: 5%脱纤维绵羊血
药敏试验条件
• 菌悬液制备
2013细菌的固有耐药附录B
• 肠杆菌科表格
– 删除了克氏枸橼酸杆菌对阿莫西林/克拉维酸、 氨苄西林/苏巴坦R – 进一步阐明
• 非肠杆菌科细菌—新增 • 葡萄球菌—新增 • 肠球菌—新增
• M100-S23 page 176-179
固有耐药性— 金黄色葡萄球菌(附录B)
注1:革兰阳性菌对氨曲南,多粘菌素B /粘菌素和萘啶酮酸也有固有耐 药性
药敏试验及 CLSI标准更新
安徽省立医院检验科 马筱玲
药敏试验一般知识
药敏试验
• 药敏试验定义:使用体外方法测定抗菌药 物抑制病原微生物生长的效力。 • 主要目的:预测体内抗菌效果 • 评价参数:MIC(最低抑菌浓度) ——在体 外能够抑制细菌生长的最低抗菌药物浓度。
抗菌药物在体内的情况
• 不同给药方式,药物浓度不同(药物的吸收) • 不同组织,药物浓度不同(药物的分布) • 不同时间,药物浓度不同(药物的清除) • 研究抗菌药物在体内吸收、分布和清除的动 力学过程——药代动力学(PK)。 • 研究体内药物浓度与药物抗菌效果关系—— 药效动力学(PD)
天然耐药
氨曲南,奈啶酸 替莫西林,多粘菌素 头孢他啶 青霉素耐药,约95%
葡萄 球菌
获得性耐药
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,约50% 耐甲氧西林血浆凝固酶阴性葡萄球菌约 80%
2014年CLSI更新要点 M100-S24
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2014年CLSI更新要点(M100—S24)唐朋2014·4第三军医大学新桥医院·微生物室2CLSI 是什么?p CLSIClinical and Laboratory Standards Institute ,临床实验室标准化协会。
CLSI 前身是NCCLS ,National committee for clinical laboratory ,美国临床实验室标准化委员会。
美国CLSI的抗微生物药物敏感性试验操作方法和判断标准,是目前国内临床微生物检验遵循的标准。
由于制订该项标准需要投入大量的人力、财力和物力,所以大多数国家包括中国都还没有能力建立自己的标准,而依赖CLSI的方法和标准。
第三军医大学新桥医院·微生物室3第三军医大学新桥医院·微生物室4CLSI 2014肠杆菌科细菌头孢吡肟修订了折点,并补充“SDD”头孢唑林增加了尿培养的折点不动杆菌属增加了多立培南的折点,修订了亚胺培南和美罗培南的折点移动了米诺环素的位置第三军医大学新桥医院金黄色葡萄球菌取消了万古霉素纸片法对VRSA筛选取消了苯唑西林对金葡菌纸片法药敏强调了在长期万古霉素治疗过程中万古霉素敏感菌株转变为中介的潜在趋势第三军医大学新桥医院头孢吡肟(MIC)“S” 1g q 12h SDD:基于较高的头孢吡肟暴露疗法的方法,即高于常规给药剂量或者多次给药,期待获得与“S”相同的临床疗效第三军医大学新桥医院第三军医大学新桥医院·微生物室8肠杆菌科细菌p 头孢吡肟(MIC)第三军医大学新桥医院·微生物室9肠杆菌科细菌p 头孢吡肟(KB)第三军医大学新桥医院·微生物室10肠杆菌科细菌p 头孢吡肟第三军医大学新桥医院·微生物室11肠杆菌科细菌p头孢唑林注射类口服类第三军医大学新桥医院·微生物室12肠杆菌科细菌p头孢唑林第三军医大学新桥医院·微生物室13肠杆菌科细菌p头孢噻吩肠杆菌科细菌头孢唑林VS 口服类头孢菌素非复杂性尿路感染患者头孢唑林的药敏试验结果可以代表其他口服类头孢菌素第三军医大学新桥医院·微生物室14增加了多立培南的折点修订了亚胺培南和美罗培南的折点第三军医大学新桥医院第三军医大学新桥医院·微生物室16不动杆菌属多立培南亚胺培南美罗培南三者的药敏结果不能相互替代!!!多烯环素四环素米诺环素取消了万古霉素纸片法对VRSA筛选取消了苯唑西林对金葡菌纸片法药敏强调了在长期万古霉素治疗过程中万古霉素敏感菌株转变为中介的潜在趋势第三军医大学新桥医院金葡菌VS 万古霉素纸片法为什么万古霉素纸片法不用于筛选VRSA ??l耐药表型罕见l有潜在的假耐药菌株l必须用MIC方法确证第三军医大学新桥医院葡萄球菌属M100—S24:万古霉素纸片法既不能区分万古霉素敏感和中介的金黄色葡萄球菌,也不能区分万古霉素敏感、中介和耐药的CoNS。
2014 年 CLSI M100-S24 主要更新内容解读

九、关于药敏试验操作的更新
新增了 4 种抗菌药物母液配制的方法:比
阿培南溶解液和稀释液均为 O.85%~0.9%NaCl(w/v) 的生理盐水; Eravacycline 和 Surotomycin 的溶解液和稀 释液均为水;特拉万星的稀释液为二甲基 亚砜。复合药物氯曲南一 Avibactam 药敏 试验母液配制,需将 Avibactam 浓度固定 为 4mg/L,氨曲南则倍比稀释。
四、葡萄球菌属的相关更新
对于β内酰胺酶的筛选试验,文件增加
了金黄色葡萄球菌 ATcc 29213 作为补充 性质控菌株,用于青霉素抑菌圈周边试 验 (β内酰胺酶阳性为锐利清晰抑茵圈边 缘、“绝壁样”)。补充性质控可用于评 价新试验、人员培训和实验室能力评估, 每日常规或每周药敏试验的质控不需要 包括补充性质控菌株。
谢谢
3. 设定“sDD”的剂量方案
随着抗菌药物药代动力学和药效学的不
断发展,它们对 MIc 折点的制定也愈发 重要。对肾功能正常的成年患者,折点 的恰当使用要求临床在感染部位采用符 合或超过预期的全身给药剂量,以达到 临床疗效。建立“敏感”或“sDD”折 点的剂量方案,
4. 如何在临床执行和使用“sDD”
对于肠球菌,氨苄西林药敏结果有不同
的其他药物敏感性预测作用;应用于阿 莫西林抗菌活性的预测;可能预测阿莫 西林一克拉维酸、氨苄西林一舒巴坦、 哌拉西林和哌拉西林一他唑巴坦对非产 β内酰胺酶肠球菌的敏感性;可以用于 预测亚胺培南对粪肠球菌的药敏活性。
六、其他菌种的相关更新
l. 铜绿假单胞菌:删除常规质控菌株中入常规试验和
报告药物 u 组 (补充试验仅用于泌尿道 组),作为单纯性泌尿道感染的替代试验。 治疗由大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇 异变形杆菌引起的单纯性泌尿道感染时, 头孢唑林可预测口服药物头孢克洛、头 孢地尼、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢呋 辛酯、头孢氨苄和氯碳头孢的疗效。
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CLSI 主要更新摘要
葡萄球菌
苯唑西林:
1、删除苯唑西林对凝固酶阴性葡萄球菌纸片扩散法折点
对凝固酶阴性葡萄球菌头孢西丁与苯唑西林纸片试验之间敏感性相同,但特异性高于苯唑西林
2、检测mecA介导的耐药试验:
头孢西丁纸片扩散法或MIC法试验结果可用于预报金黄色葡萄球菌和路登葡萄球菌分离株是否存在mecA介导的苯唑西林耐药性。
对于凝固酶阴性葡萄球菌(路登葡萄球菌除外),检测mecA介导的苯唑西林耐药性,首选方法是头孢西丁纸片扩散法。
头孢西丁可被用于检测苯唑西林耐药性替代品;根据头孢西丁结果来报告其敏感或耐药
青霉素:
当葡萄球菌分离株对青霉素MICs≤0.12或抑菌环直径≥29mm,在报告青霉素结果为敏感前,应进行诱导β-内酰胺酶试验,β-内酰胺酶试验阳性表明对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、羧苄西林、替卡西林、美洛西林和哌拉西林耐药。
对苯唑西林耐药葡萄球菌,报告青霉素耐药或不报告。
万古霉素:
1、删除万古霉素对葡萄球菌纸片扩散法的折点
2、测定所有葡萄球菌分离株对万古霉素敏感性执行MIC试验。
纸片扩散试验既不能将万古霉素敏感金黄色葡萄球菌与中介菌株区别开来,也不能区别万古霉素敏感、中介和药敏凝固酶阴性葡萄球菌
3、万古霉素纸片试验可检测VRSA(含VanA耐药基因)。
上述菌株纸片周围表现无抑菌环(直径=6mm),应重复确定鉴定结果。
凡万古霉素抑菌环直径≥7mm葡萄球菌分离株,应测定万古霉素MIC
替考拉宁:
在最近研究期间,替考拉宁制片扩散法折点值没有与万古霉素一起被重新评估。
因此,替考拉宁折点值区分替考拉宁中介、耐药与敏感葡萄球菌的能力还未知
肠杆菌科
头霉素类:
在B组中增加头孢替坦
喹诺酮、氟喹诺酮类:
删除有关粪便中沙门菌或志贺菌分离株报告“喹诺酮”的建议,保留“氟喹诺酮”
碳青霉烯类:
改良Hodge试验测试肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶注释:
对于三代头孢菌素耐药的肠杆菌科细菌可能产碳青霉烯酶,导致对于碳青霉烯类抗生素MIC 值的升高,或抑菌环直径的降低。
但其MIC值或抑菌环直径仍可落在敏感范围内,需要根据MIC值或抑菌环直径判断是否需要使用改良Hodge试验作为筛选试验。
肉汤微量稀释法测定结果:亚胺培南2-4μg/ml,美罗培南2-4μg/ml,厄他培南2μg/ml 纸片扩散法测定结果:美罗培南16-21mm,厄他培南19-21mm
当筛选试验结果在以上范围时,应进行改良Hodge试验作为确证试验,该方法检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的敏感性和特异性大于90%
苛养菌
肺炎链球菌:
1、对左氧氟沙星敏感的肺炎链球菌分离株,可预报其对吉米沙星和莫西沙星也敏感。
然而,对吉米沙星和莫西沙星敏感分离株,不能推定其对左氧氟沙星敏感
2、对非脑膜炎肺炎链珠菌分离株,青霉素MIC能预报对其他β-内酰胺类敏感性:青霉素MIC≤0.16μg/ml(或苯唑西林的抑菌环≥20mm)提示分离株对氨苄西林(口服或注射)、氨苄西林/舒巴坦、头孢克罗、头孢地尼、头孢托仑、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢唑肟、头孢呋辛、亚胺培南、氯碳头孢和美罗培南等敏感
青霉素MIC≤2μg/ml提示对阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢比肟、头孢噻肟、头孢曲松和厄他培南等敏感
3、对脑膜炎肺炎链球菌分离株应常规报告MIC值,青霉素、头孢噻肟或头孢曲松、美罗培
草绿色溶血链球菌:
纸片扩散法检测青霉素、达托霉素和氨苄西林不可靠
流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌:
哌拉西林/他做巴坦纸片扩散法敏感折点值≤1/4μg/ml
淋病奈瑟菌:
用体外试验产生“中介”结果的头孢美唑、头孢替坦、头孢西丁和壮观霉素治疗淋病奈瑟菌感染的临床疗效是未知的
其他
举例说明由“或”连接的一种抗菌药物可预报另一种抗菌药物的药敏结果,明确的在表格的同一栏内无“或”连接的抗菌药物,一种抗菌药物的药敏结果不能预测另一种的药敏结果
例如:对头孢噻肟敏感的非产ESBLs的肠杆菌科菌株,被认为对头孢曲松也敏感。
报告头孢噻肟试验结果时,应在报告中加上“分离菌对头孢曲松也敏感”的注释。
由于存在差异或缺乏足够数据,无“或”相连的抗菌药物,其一种抗菌药物试验结果不能用于预报其他药物。