犬细小病毒免疫血清的研制与初步应用
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收稿日期：/$$" $+ "# ! ! 作者简介：宋周虎（"+-/ ） ，男，硕士。 !
阿维菌素类药物结构式
国内阿维菌素、依维菌素均有生产厂家，使用量较大。多 拉菌素、 (9H4;9<32= 在欧洲用作宠物及畜禽体内、体外杀虫剂， 攻毒后血清抗体效价的变化情况，第 " 周即开始升高，第 ! 周时更高。由于时间、经费、人力等因素的关系，未能继续 观测，其高峰值的出现时间及其持续时间有待进一步探讨。 本高免血清中同时存在高效犬瘟热（ JGL）抗体，对于治 疗犬瘟热、犬瘟热与犬细小病毒混合感染效果确实可靠。根据 用户反映和临床病例随访资料判定，该产品对 JKL、 JGL 感染 病例的针对性强，疗效高。但因试验条件所限，有关犬瘟热的 测定、犬瘟热抗体与犬细小病毒抗体间的相互关系、病毒株的 最终鉴定以及临床扩大试验等尚待进一步研究。
摘要：采集广东本地犬细小病毒（ %&’）强毒株接种基础免疫犬，制备特效高免血清。结果表明，高免血清 %&’ 抗体效价高达 ( ) "* $+$，临床治
愈率达 ,+-+. ，安全可靠，无毒副作用，治疗效果显著，适于临床推广应用。
关键词：犬细小病毒；免疫血清；效价；治愈率 中图分类号： /#!#-"," 文献标识码： 0 文章编号：$!", （"$$"） !(*$ $1 $$"* $" ! ! ! 体胶体金免疫层析测定原理，用诊断试纸法检测粪样为阴性。 然后，用犬五联弱毒疫苗进行基础免疫接种。基础免疫接种 ( 周后取病料，经特殊处理后进行攻毒。试验期间，每日观测体 温、呼吸等生理指标。用诊断试纸法检测粪样，抽样检测血清 抗体效价和抗原动态，直到符合要求为止；饲养管理、消毒等 按常规操作。 (-"-* (-"-+ (-"-! 本地幼犬 1 只，* 月龄，体重 ! 2 1 34。临 (-"-: (-"-1 ;8 和 ;5 试验 免疫血清的制备 安全试验 无菌检验 按《兽医微生物实验指导》 （甘肃农大 在血清抗体效价达到要求时，采血， 主编）的方法进行。 按常规方法制备血清样品。 分别按每千克体重 (-$、"-$、+-$ <= 剂量 样品按常规进行细菌培养检查。 对临床诊断为犬细小病毒病的病例， 给犬肌肉注射，连续观察 +# >，继续饲养观察 * 个月。 临床应用试验
由犬细小病毒（ %&’）所引起的犬细小病毒病以出血性肠 炎或急性心肌炎为主要症状。因其发病率和死亡率高，对犬尤 其是幼犬危害极大，已被列为犬的重大烈性传染病。目前，采 用疫苗免疫注射方法预防该病取得一定效果，但因母源抗体对 临床治疗的干扰很大，保护率仍然较低。治疗方面，虽采用免 疫血清疗法、母血疗法、自家高免血清疗法和其他药物疗法， 临床效果可疑，疗效不佳。为了寻求有效、特异的血清抗体， 以提高犬细小病毒病的治愈率，在犬细小病毒病流行病学调查 和建立免疫血清学诊断方法的基础上，进行了本试验。
畜牧与兽医
"$$" 年
第 *+ 卷
第1期
・ "* ・
!!!!"
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兽药 科技
犬细小病毒免疫血清的研制与初步应用
陈 云，白挨泉，郑 军，周少波， 黎桂珊，吴智斌，顾万军
（佛山科学技术学院，广东 南海 !"#$$$）
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材料与方法
试验动物Leabharlann Baidu
床健康，自由采食，自由饮水，用作病毒复壮。本地青年犬 (" 只，# 2 (" 月龄，体重 ($ 2 (" 34。临床健康，自由采食，自 由饮水，用作血清制备和安全试验。 (-(-" 药物及制剂 *-#. 柠檬酸钠，分析纯。犬五联疫苗、 %&’ 抗体，购自解放军军需大学。$-#. 猪红细胞悬液，自备。 %&’ 抗原，由本课题组自制。犬 %&’ 诊断试纸，购自军事医 学科学院实验动物中心。 (-(-* 试验仪器 微量移液器，上海医药设备公司。高速离 心机， /5678*9*$ 型。 病毒复制试验 1 只本地幼犬常规饲养观察 ( 周，每日
"
讨论与结论
犬细小病毒病发病急，病程短，传染性强，死亡率高，危
害极其严重。近年来，有关该病暴发流行和预防接种失败的报 道不断增多， JKL 地方变异的问题日益突出。临床工作中常见 使用某些血清无效的情况，原因可能正在于病毒株的变异。本 试验表明，从当地自然病例采毒，经特别处理后按一定程序免 疫犬，所制备的特效抗体效价可高达 " M /! $#$。临床病例治疗 均有效，用户反映良好。观察记录表明， ") 例中除 " 例晚期 衰竭病例外，其余全部治愈。
观测体温、呼吸等生理指标。并根据 %&’ 单克隆抗体胶体金 免疫层析测定原理，用诊断试纸法（军事医学科学院实验动物 中心研制） ，检测粪样为阴性。病料采自临床典型犬细小病毒 病例，并经实验室检验确定为 %&’（将另文报道） 。经常规分 离、提纯和毒力测定后，口服、滴鼻、皮下注射攻毒，逐日观 测，记录其变化，同时，使用抗生素防治细菌感染。试验期 间，按常规饲养管理。" 2 * 周内，1 只幼犬全部发病死亡。常 规方法采集病料，低温保存备用。 基础免疫及病毒接种试验 ( 周，每日观测体温、呼吸等生理指标。并根据 %&’ 单克隆抗
［"］ 虫活性和较低的毒性 。最初由默克公司的研究人员发现，由
肠道蠕虫特别是线虫经常在动物体内引起广泛而严重的感 染。感染动物常见的线虫有：蛔虫、蛲虫、钩虫等。它们大多 寄生在宿主的肠道中，也有部分寄生在其他组织，如心脏、血 管、皮下淋巴组织中。感染这些线虫可导致宿主贫血、营养不 良、虚弱、消瘦、消化道和其他组织器官内壁损伤。不加治 疗，可导致宿主死亡。目前常用的抗肠虫药有枸橼酸哌嗪和咪 唑类广谱驱虫药，如丙硫咪唑、左旋咪唑、甲苯咪唑等。
性。作为杀虫剂可以杀死动物体内、体表寄生虫和一些叮咬类昆虫；作为杀菌剂和消毒剂可用于多种 % & 和 % ’ 敏感菌感染。具有广泛的市场前 景。
关键词：阿维菌素；甲胺基阿维菌素；杀虫剂 中图分类号： ()*+,-+ 文献标识码： . 文章编号：$*/+ （/$$/） *"!$ $$$/# $/ ! ! ! /! 位上选择性加氢制得，"++* 年世界范围内的销售额为 0,0* 亿美元。甲胺基阿维菌素是将阿维菌素 #C 位羟基修饰为甲胺 基，得到的一个超高效的驱虫药，表现出比阿维菌素更高的杀
收稿日期："$$( (" $: ! !
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7=2;4H >N5O4=I:P Q L939:2=4:P R9I2<2=9 /$$/
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新型高效抗蠕虫药— — —甲胺基阿维菌素
宋周虎，王彦凌，朱 洁，茅国良，王介庆
!"##$$） （浙江钱江生物化学股份公司科研所，浙江 海宁
摘要：甲胺基阿维菌素是以阿维菌素为原料经过化学结构修饰得到的一种新型大环内酯类杀虫剂，表现出比阿维菌素更高的杀虫活性和较低的毒
!"#$%"&’()$* +,$#’-"-.-* 菌种的培养液中发现了具有高效杀虫活 性的阿维菌素（789:;9<32=）并确定了结构（图 "） 。 "+)0 年 >4=95524= 和他的助手们首次报道了阿维菌素的全 合成，兴起对这个天然产物全合成的研究热潮。研究者曾尝试 既简化结构又不失生物活性，以便更加经济地制备这个天然药 物，但是最终并未开发成功。而在这个天然产物衍生物的开发 过程中，研制出了依维菌素（ ?89:;9<32=）和甲胺基阿维菌素 （@;4;9<32= .9=A6439）/ 个更高活性的产品。"++0 年阿维菌素市 场销售额为 ",0 亿美元。依维菌素是在阿维菌素内酯环的 // B 图!
诺华公司（D684325）以农用杀虫剂推向市场的。目前国外应用 于畜牧业的阿维菌素类药物还有辉瑞公司（ EF2A9:）天然发酵产
［/］ 物多拉菌素（G6:4;9<32=）及其衍生物 (9H4;9<32=（表 "） 。
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开发背景
"+-0 年，德 国 默 克 公 司 从 日 本 12345436 研 究 院 提 供 的
致谢：实验过程中得到军事医学科学院付少才研究员、佛山美宝 宠物服务中心、我校王晔、黎元坤、张更利、杨鸿、郭金彪、刘兴平 等同志和华南农业大学刘汉儒教授的支持和帮助。
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始出现临床症状，其临床表现与自然病例完全一致，"* B /$ I 相继死亡，病理解剖变化与犬细小病毒病相同，未见其他病理 变化。
每天按 (-$ <= ? 34 肌肉注射，观察记录疗效。
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结果
攻毒前后血清抗体效价变化 基础免疫后血清抗体效价轻度升高，达 ( ) +#$；攻毒后第
1 天抗体效价显著升高，达 ( ) " $+#，并持续升高；直到攻毒后 第 ", 天，高达 ( ) "* $+$，为基础免疫前的 1!$ 倍。 #"# 血清的检验 样品无菌检验未发现病原菌。安全性检验，试验犬无过敏 反应，注射部位无异常变化。 +# > 持续观察体温、呼吸、精 神、食欲等均正常，连续饲养观察 * 个月均未见异常。样品物 理性状检验符合要求。 #"$ 临床应用试验 经 ,$ 例临床诊断为犬细小病毒病犬的治疗试验，无一例 出现不良反应，结果表明疗效可靠。特别是对经其他血清治疗 无效的病例，使用效果尤为显著。其中，(# 例典型病例的治 疗记录显示，早期病例 ($ 例，经 ( 次治疗治愈 1 例，" 次治疗 后治愈 * 例；中后期病例 # 例，经 " 次治疗治愈 * 例，经 * 次 (" 只青年犬常规饲养观察 治疗治愈 * 例，( 例经 + 次治疗治愈，( 例衰竭期病犬只治疗 ( 次，转归死亡。总有效率达 ,+-+. 。 #"% 病例复制试验 1 只健康幼犬攻 毒 后，粪 样 检 测 %&’ 阳 性。至 第 ($ 天 开
阿维菌素类药物结构式
国内阿维菌素、依维菌素均有生产厂家，使用量较大。多 拉菌素、 (9H4;9<32= 在欧洲用作宠物及畜禽体内、体外杀虫剂， 攻毒后血清抗体效价的变化情况，第 " 周即开始升高，第 ! 周时更高。由于时间、经费、人力等因素的关系，未能继续 观测，其高峰值的出现时间及其持续时间有待进一步探讨。 本高免血清中同时存在高效犬瘟热（ JGL）抗体，对于治 疗犬瘟热、犬瘟热与犬细小病毒混合感染效果确实可靠。根据 用户反映和临床病例随访资料判定，该产品对 JKL、 JGL 感染 病例的针对性强，疗效高。但因试验条件所限，有关犬瘟热的 测定、犬瘟热抗体与犬细小病毒抗体间的相互关系、病毒株的 最终鉴定以及临床扩大试验等尚待进一步研究。
摘要：采集广东本地犬细小病毒（ %&’）强毒株接种基础免疫犬，制备特效高免血清。结果表明，高免血清 %&’ 抗体效价高达 ( ) "* $+$，临床治
愈率达 ,+-+. ，安全可靠，无毒副作用，治疗效果显著，适于临床推广应用。
关键词：犬细小病毒；免疫血清；效价；治愈率 中图分类号： /#!#-"," 文献标识码： 0 文章编号：$!", （"$$"） !(*$ $1 $$"* $" ! ! ! 体胶体金免疫层析测定原理，用诊断试纸法检测粪样为阴性。 然后，用犬五联弱毒疫苗进行基础免疫接种。基础免疫接种 ( 周后取病料，经特殊处理后进行攻毒。试验期间，每日观测体 温、呼吸等生理指标。用诊断试纸法检测粪样，抽样检测血清 抗体效价和抗原动态，直到符合要求为止；饲养管理、消毒等 按常规操作。 (-"-* (-"-+ (-"-! 本地幼犬 1 只，* 月龄，体重 ! 2 1 34。临 (-"-: (-"-1 ;8 和 ;5 试验 免疫血清的制备 安全试验 无菌检验 按《兽医微生物实验指导》 （甘肃农大 在血清抗体效价达到要求时，采血， 主编）的方法进行。 按常规方法制备血清样品。 分别按每千克体重 (-$、"-$、+-$ <= 剂量 样品按常规进行细菌培养检查。 对临床诊断为犬细小病毒病的病例， 给犬肌肉注射，连续观察 +# >，继续饲养观察 * 个月。 临床应用试验
由犬细小病毒（ %&’）所引起的犬细小病毒病以出血性肠 炎或急性心肌炎为主要症状。因其发病率和死亡率高，对犬尤 其是幼犬危害极大，已被列为犬的重大烈性传染病。目前，采 用疫苗免疫注射方法预防该病取得一定效果，但因母源抗体对 临床治疗的干扰很大，保护率仍然较低。治疗方面，虽采用免 疫血清疗法、母血疗法、自家高免血清疗法和其他药物疗法， 临床效果可疑，疗效不佳。为了寻求有效、特异的血清抗体， 以提高犬细小病毒病的治愈率，在犬细小病毒病流行病学调查 和建立免疫血清学诊断方法的基础上，进行了本试验。
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犬细小病毒病发病急，病程短，传染性强，死亡率高，危
害极其严重。近年来，有关该病暴发流行和预防接种失败的报 道不断增多， JKL 地方变异的问题日益突出。临床工作中常见 使用某些血清无效的情况，原因可能正在于病毒株的变异。本 试验表明，从当地自然病例采毒，经特别处理后按一定程序免 疫犬，所制备的特效抗体效价可高达 " M /! $#$。临床病例治疗 均有效，用户反映良好。观察记录表明， ") 例中除 " 例晚期 衰竭病例外，其余全部治愈。
观测体温、呼吸等生理指标。并根据 %&’ 单克隆抗体胶体金 免疫层析测定原理，用诊断试纸法（军事医学科学院实验动物 中心研制） ，检测粪样为阴性。病料采自临床典型犬细小病毒 病例，并经实验室检验确定为 %&’（将另文报道） 。经常规分 离、提纯和毒力测定后，口服、滴鼻、皮下注射攻毒，逐日观 测，记录其变化，同时，使用抗生素防治细菌感染。试验期 间，按常规饲养管理。" 2 * 周内，1 只幼犬全部发病死亡。常 规方法采集病料，低温保存备用。 基础免疫及病毒接种试验 ( 周，每日观测体温、呼吸等生理指标。并根据 %&’ 单克隆抗
［"］ 虫活性和较低的毒性 。最初由默克公司的研究人员发现，由
肠道蠕虫特别是线虫经常在动物体内引起广泛而严重的感 染。感染动物常见的线虫有：蛔虫、蛲虫、钩虫等。它们大多 寄生在宿主的肠道中，也有部分寄生在其他组织，如心脏、血 管、皮下淋巴组织中。感染这些线虫可导致宿主贫血、营养不 良、虚弱、消瘦、消化道和其他组织器官内壁损伤。不加治 疗，可导致宿主死亡。目前常用的抗肠虫药有枸橼酸哌嗪和咪 唑类广谱驱虫药，如丙硫咪唑、左旋咪唑、甲苯咪唑等。
性。作为杀虫剂可以杀死动物体内、体表寄生虫和一些叮咬类昆虫；作为杀菌剂和消毒剂可用于多种 % & 和 % ’ 敏感菌感染。具有广泛的市场前 景。
关键词：阿维菌素；甲胺基阿维菌素；杀虫剂 中图分类号： ()*+,-+ 文献标识码： . 文章编号：$*/+ （/$$/） *"!$ $$$/# $/ ! ! ! /! 位上选择性加氢制得，"++* 年世界范围内的销售额为 0,0* 亿美元。甲胺基阿维菌素是将阿维菌素 #C 位羟基修饰为甲胺 基，得到的一个超高效的驱虫药，表现出比阿维菌素更高的杀
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始出现临床症状，其临床表现与自然病例完全一致，"* B /$ I 相继死亡，病理解剖变化与犬细小病毒病相同，未见其他病理 变化。
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1 天抗体效价显著升高，达 ( ) " $+#，并持续升高；直到攻毒后 第 ", 天，高达 ( ) "* $+$，为基础免疫前的 1!$ 倍。 #"# 血清的检验 样品无菌检验未发现病原菌。安全性检验，试验犬无过敏 反应，注射部位无异常变化。 +# > 持续观察体温、呼吸、精 神、食欲等均正常，连续饲养观察 * 个月均未见异常。样品物 理性状检验符合要求。 #"$ 临床应用试验 经 ,$ 例临床诊断为犬细小病毒病犬的治疗试验，无一例 出现不良反应，结果表明疗效可靠。特别是对经其他血清治疗 无效的病例，使用效果尤为显著。其中，(# 例典型病例的治 疗记录显示，早期病例 ($ 例，经 ( 次治疗治愈 1 例，" 次治疗 后治愈 * 例；中后期病例 # 例，经 " 次治疗治愈 * 例，经 * 次 (" 只青年犬常规饲养观察 治疗治愈 * 例，( 例经 + 次治疗治愈，( 例衰竭期病犬只治疗 ( 次，转归死亡。总有效率达 ,+-+. 。 #"% 病例复制试验 1 只健康幼犬攻 毒 后，粪 样 检 测 %&’ 阳 性。至 第 ($ 天 开