动物细胞组织培养(精)

思考讨论
1.胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的 物质是什么成份？
胰蛋白酶水解蛋白质
蛋白质
2.细胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能将细胞消 化掉吗？
蛋白质和磷脂
能
3.既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分 散成单个细胞要注意什么问题呢？能够用胃蛋白酶 代替胰蛋白酶吗？为什么？
注意时间的控制 不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细 胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近
1、下列属于动物细胞工程中的工具是（ C ） A．限制性内切酶 B．DNA连接酶 C．胰蛋白酶 D．果胶酶 2、在动物细胞培养的有关叙述中，正确的是 （B ） A．动物细胞培养的目的就是为了获得大量的 细胞分泌蛋白 B．动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞 分散 C．细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程 中 D．培养至50代后继续传代的细胞是细胞株
3.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在 于（ A ）
A.培养基不同； B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培
养成植株。
4、07年江苏高考题
动物细胞体外培养时，通常要在培养 基中补充一定浓度的某些物质。 右图是血清对正常细胞和癌细胞培养影 响的实验结果。从该图提供的信息可以 获得的正确结论有( BCD ) A．正常细胞与癌细胞的增殖速率相同 B．有无血清对正常细胞培养的影响不同 C．培养基中补充血清有助于正常细胞的 培养 D．培养基中是否补充血清对癌细胞的培 养影响不大
5、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此图回答 (1)容器A中放置的是动物器官或组织。它一
幼龄动物的器官或组织、动物胚胎 般取自___________ 。 (2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的 剪碎 处理是__________ ，然后用 胰蛋白 酶处理， 这是为了使细胞分散开来。这样做的目的是 使每个细胞能与培养液接触 _______________. (3)培养首先在B瓶中进行。瓶中的培养基 成分有 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清 _______ ___等。在此 瓶中培养一段时间后，一般传到第 代 10 ，有许多细胞衰老死亡，到这时的培养称为 原代培养 ___________.
原代培养
细胞株 细胞系
传代培养
原代培养：一般细胞繁殖1-10代，就发生接触抑 制不再分裂，这种培养就叫原代培养。
传代培养：贴满瓶壁的细胞由于接触抑制不再分裂， 需重用胰蛋白酶处理，再分瓶培养让细胞继续增殖。 细胞株：原代细胞一般传至10代左右生长停滞， 大部分细胞衰老死亡，少数存活到40~50代， 这种传代细胞为细胞株，遗传物质不改变。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长 停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变， 出现癌变特点，可以无限制传代，这种传代细胞 为细胞系。
2.3动物细胞工程
动物细胞培养
1、定义:
动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将 它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中让这些 细胞生长和增殖。
2、选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 它们细胞增殖能力强，分裂旺盛， 分化程度低，容易培养。
3、动物细胞培养条件：
(1)、无菌、无毒的体外环境 （添加一定量的抗生素 ? 定期更换培养液
植物组织和动物细胞培养的比较
比较项目 植物组织培养 动物细胞培养
原理
培养基性质 培养基特有成分
细胞的全能性 固体培养基
细胞增殖 液体培养基
糖、植物激素 葡萄糖、动物血清
培养结果
培养目的
植物体
快速繁殖、培育 无病毒植株等
细胞株、细胞系
获得细胞或细 胞产物
6、动物细胞培养应用
• 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干 扰素、单克隆抗体） • 作为基因工程中的受体细胞 • 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质， 判断某种物质的毒性 • 为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依 据
将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然 后继续增殖。 这样的过程叫做传代培养
8、如何理解原代培养和传代培养？ 在第一培养瓶中培养就是原代培养，之 后转移到其它培养瓶中培养就是传代培 养 9、传代培养的细胞能一直传代下去吗？ 不都能 10、有些为何能一直传下去？ 发生突变，朝着癌细胞方向发展 11、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？ 保存10代以内的细胞，因为10－50部分 细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分 还发生突变向癌细胞方向发展
4、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？
成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮 液利于培养，使每个细胞与培养液接触
5、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成 新个体？
Hale Waihona Puke Baidu
不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，因 为动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度 的提高而逐渐受到抑制
6、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再 分裂、增殖？ 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时， 细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象 叫接触抑制。 7、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应 该怎样办？
(3)、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 (4)、气体环境 O2和CO2
4.动物细胞生长特性：
细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴 附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞 就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑 制。
5.过程：
动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官
剪碎
胰蛋白酶 加培养液
单个细胞 细胞悬浮液 原代培养 10代细胞
遗传物质 未改变
细胞株 细胞系
（贴 壁生 长）
50代细胞
遗传物质 已改变
胰蛋 白酶
传代培养
无限传代
动物组织块 幼龄动物的器官组织；动物胚胎
动 物 细 胞 培 养
细胞贴壁
胰蛋白酶处理
细胞悬液
接触抑制 原代培养 传代培养
?）
防止培养过程中污染 防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害
(2)、培养基 成分： 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等
种类： 天然培养基：主要取自动物血清，组织提取液，营 养价值高，成分复杂 合成培养基：人工配置，成分明确，便于控制试验 条件
和植物组织培养基相比有何独特之处？
液体培养基 、成分中有动物血清等