丙酮酸含量测定定1

1
2 3
0
0.2 0.4
3.0
2.8 2.6
0
12 24
0
OD1 OD2
4
5 6 样品 提取 液
0.6
0.8 1.0
2.4
2.2 2.0
36
48 60
OD3
1
5
OD4 OD5
1取
① 取 1.5g大蒜于研钵中，加少许石英砂及2ml三氯乙 酸充分研磨成匀浆 。
生物化学实验
2010、4、30
实
验
八
植物组织中丙酮酸含量的测定
学时：3
丙酮酸是糖类代谢的重要中间产物。
多糖 乙醇
无氧
单糖
糖酵解
能量
丙酮酸
无氧
有氧
TCA
乳酸
丙酮酸的生物功能
丙酮酸能促进减体重,特别是减体脂有重要作用 增加肌肉耐力和增强运动能力。
抑制自由基生成和抗疲劳等方面有明显的效果.
在改善心血管功能上也可能有一定的作用.
② 用5ml三氯乙酸分三次冲洗研钵，转入25ml容量 瓶中，用三氯乙酸定容至刻度，振荡摇匀。 ③ 室温下静置 15min 。取约 10ml 匀浆液离心 10000 r/min 10min 。
3、组织液中丙酮酸的测定
取 1. 0ml 上清液于一刻度试管中，加 2ml 8 ％三氯乙酸，加 1.0ml 0 . 1 ％ 2 ， 4 －二硝基 苯肼液，摇匀，再加 5 . 0ml 1 . 5mol/1 NaOH 溶液，摇匀显色，在 520 nm 波长下比色，记 录吸光度，在标准曲线上查得测定管的丙酮酸 含量。
二、实验原理:
CH3 | C O | COOH
NH— CH3 | C N | COOH
﹢ NH2
—NO2
=
NH －
—NO2
NO2
NO2 丙酮酸 2，4-二硝基苯肼
丙酮酸- 2，4-二硝 基苯腙
三、实验材料、仪器和试剂：
1、实验材料：大蒜
2、仪器：离心机 ，天平，试管，研钵，容量瓶，
Spc22-可见分光光度计等。
3、试剂：
（1）8%三氯乙酸溶液
（2）1.5mol/L NaOH溶液
（3）0.1% 2，4-二硝基苯肼溶液
（4）丙酮酸标准液 浓度：60ug/ml
四、实验步骤：
1、制作标准曲线: 取6支试管，按下表操作，然后以丙酮酸标 准液为横坐标，对应的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
管 号 丙酮酸标 8%三氯乙 酸溶液 准液 (mL) (mL) 丙酮酸 含量 （ ug ） 2，4-二 NaOH溶 硝基 液(mL) 苯肼 (mL) 光密度值 OD520nm
OD值
OD5 OD4 OD3
样品OD值
OD2 OD1
0
12
24
A
36
48
60
标准丙酮酸含量
（ug)
五、计算：
A×样液总体积 样品鲜重(g) ×1000
丙酮酸含量(mg/ g鲜重 ) =
六、思考题：
测定丙酮酸含量的基本原理是什么？
下课了! !！
一、实验目的：
学习并掌握植物组织中丙酮酸含量测定的原 理及方法。
二、实验原理:
植物样品组织液用三氯乙酸去除蛋白质后，其中所含丙酮酸
可与2，4-二硝基苯肼发生反应，生成的丙酮酸- 2，4-二硝基苯
腙在碱性溶液中呈樱红色。 丙酮酸- 2，4-二硝基苯腙在520nm处有最大的光吸收，在一 定范围内O.D520nm值与组织中丙酮酸的含量成正比。 所以用分光光度计测定其吸光度，然后与已知丙酮酸标准曲 线进行比较，即可求出样品中丙酮酸的含量。