氯霉素的药物分析

按下式计算含量(外标法)
• 含量（C X）=C R ·( A X ⁄ A R )
• 标示量%= C R ·( A X / A R ) ·D ·W— · 100%
W ·标示量
式中，C X 为对照品溶液浓度（mg/ml）； A X 和 A R分别为供 试品溶液和对照品溶液的峰面积；D为稀释体积(ml)；W为取 样量(g)；W— 为平均重量(g)；标示量为取样品规格（mg/支）
• 干燥失重 在105◦C干燥至恒重，减失重量不得
过0.5%（附录 VII L）。
• 炽灼残渣 不得过0.1%（附录 VIII N）。
• 溶出度 取本品，照溶出度测定法（附录
Ⅹ C 第一法），以盐酸溶液（9→1000） 900ml为溶出介质，转速为每分钟100转， 依法操作，30分钟时，取溶液适量，滤过， 精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，用溶 出介质稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分 光光度法（附录Ⅴ A），在278nm的波长处 测定吸光度，按C13H12CI2N2O3的吸收系数 （E 1%1cm）为298，计算每片的溶出量，限 度为标示量的70%，应符合规定。
填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：0.01mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液（磷酸 二氢钾6.8g 0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀 释，加三乙胺5ml，磷酸调节pH值至2.5） 检测波长：277nm 对照品：氯霉素
• 测定法
精密称取本品适量，加甲醇适量（每10mg氯 霉素加甲醇1ml）使溶解，用流动相定量稀释制成 每1ml中约含0.1mg的溶液，摇匀，精密量取10µl 注入液相色谱仪，记录色谱图；另外再精密称取 氯霉素对照品适量，同法测定。按外标法以峰面 积计算，即得。
• 残留溶剂 乙醇与氯苯 取本品0.5g，精密
称定，置10ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释 至刻度，摇匀，作为供试品贮备液，精密量取2ml 置顶空瓶中，再精密加二甲基亚砜1ml，摇匀，作 为供试品溶液；精密称取氯苯约36mg、乙醇约 500mg，置100ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻
度，摇匀，作为对照品贮备液；精密量取对照品 贮备液1ml置顶空瓶中，再精密加二甲基亚砜2ml，
分离度应符合要求，取对照品溶液顶空进样，计
算数次连续进样结果，相对标准偏差不得过 5.0%。取供试品溶液与对照溶液分别顶空进样， 记录色谱图，用标准加入法以峰面积计算，均应 符合规定。
四 含量测定
氯霉素的含量测定主要 用的是HPLC，除此之外还可 以用UV、TLC、LC/MS等方法
高效液相色谱
• 色谱条件
4.紫外吸收 本类抗生素分子内具苯环含有共轭双键
系统，在紫外光区有吸收。在277nm波长处 有最大吸收。
5.氧化性 氯霉素含有对硝基苯基，其中硝基具
有氧化性，可以将其还原成胺基。
二 鉴别试验
1.色谱法
高效液相色谱法 ChP采用高效液相色谱法鉴别氯霉
素，在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液的主峰 的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
2.光谱法
紫外吸收光谱 利用最大吸收波长鉴定法来鉴别。
将供试品配成适当浓度的溶液，直接测定紫外吸收光谱， 根据其最大吸收波长或最大吸收波长处的吸光度进行鉴定。
3.鉴别反应
● 氯霉素中的丙二醇能发生醛酮缩合反应，酸水解 后产物与过碘酸作用，氧化生成对硝基苯甲醛； 与 2，4-硝基苯肼缩合，生成苯腙。
• 有关物质
目前各国药典均采用HPLC法检测 精密称取本品适量，加甲醇适量（每10mg氯霉素
加甲醇1ml）使溶解后，用流动相定量稀释制成每1ml 中含0.5mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；另精密 称取氯霉素二醇对照品与对硝基苯甲醛对照品适量， 加甲醇适量（每10mg氯霉素二醇物加甲醇1ml）使溶 解，用流动相定量稀释制成每1ml中含氯霉素二醇物 5µg与对硝基苯甲醛3µg的混合溶液，作为杂质对照品 溶液。
● 本品分子中的硝基经锌粉还原成羟胺衍生物，在乙酸钠存在下 与苯甲酰氯进行苯甲酰化，再在弱酸性溶液中与高铁离子生成 紫红色的络合物。
例：ChP(2010) 取本品10mg,加稀乙醇1ml溶解后加1%氯化钙溶液 3ml与锌粉50mg置水浴上加热10分钟，倾取上清液，加苯甲酰
● 取氯霉素1ml，加氢氧化钠的乙醇溶液2ml， 再加硝酸2ml，加硝酸银3滴，生成白色沉 淀，沉淀加氨试液溶解，再加硝酸银5滴， 沉淀复生（氯离子的鉴别）。
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酰胺醇类抗生素之 —— 氯霉素
主要内容
• 一 化学结构与性质 • 二 鉴别试验 • 三 检查 • 四 含量测定
一 化学结构与性质
（一）化学结构
氯霉素结构中含有对硝基苯基、丙二醇与二氯二酰胺 三个部分，抗菌活性主要与丙二醇有关。
本品为D-苏式-（—）-N-[α-（羟基甲基）-β-羟基-对硝 基苯乙基]-2,2-二氯乙酰胺。按干燥计算，含C11H12Cl2N2O5 应为98.0% 1̴ 02.0%。
• 照含量测定项下的色谱条件，取杂质对照 品溶液10µl注入液相色谱仪，调节检测灵敏
度，使氯霉素二醇物峰的峰高约为满量程 的25%；精密量取供试品溶液与杂质对照品 溶液各10µl，分别注入液相色谱仪，记录色
谱图，按外标法以峰面积计算，含氯霉素 二醇物不得过1.0%，含对硝基苯甲醛不得 过0.5%。
三 检查
• 结晶性
取本品少许，依法检查（附录IX D），应
符 合规定。
• 酸碱度
取本品，加水制成每1ml中含25mg的混悬
液，依法测定（附录 VI H），pH值应为4.5—7.5。
• 比旋度
取本品精密称定，加无水乙醇溶解并定
量稀释制成每1ml中约含50mg的溶液，依法测定（附
录 VI E），比旋度为+18.5◦至+21.5◦。
摇匀，密封，作为系统适用性试验溶液；精密量 取对照品贮备液1ml置顶空瓶中，精密加供试品贮 备液2ml，摇匀，密封，作为对照品溶液，
• 照残留溶剂测定法（附录Ⅷ P第二法）测定，以 6%清丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（或极性相 近）为固定液的毛细管柱为色谱柱，起始温度为 40℃，维持10分钟，再以每分钟10 ℃的速率升至 200 ℃，维持4分钟；进样口温度为250 ℃；检测 器温度为300 ℃；顶空平衡温度为85 ℃，平衡时 间为45分钟。取系统适用性试验溶液顶空进样， 洗脱顺序依次为：乙醇、氯苯，各色谱峰之间的
（二）性质
1.稳定性
性质稳定，能耐热，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、微溶 于水等。干燥时稳定，在中性、弱酸性（pH4.5—7.5）溶 液中较稳定，煮沸不分解。
2.水解性
● 强碱性（pH>9） 氯水解 ● 强酸性（Ph<2） 酰胺水解
3.旋光性
氯霉素结构中具有两个手性碳，有四个旋光异构体。 仅1R,2R（—）或者（—）苏阿糖型（Threo）有抗菌活 性，临床使用。此药物在无水乙醇中呈右旋性，在醋酸乙 酯中呈左旋性。