土壤中微生物的分离

3. 划线时动作要轻巧，避免划破平板。 4. 注意整个操作过程是在火焰周围的无菌操作区
域内进行，操作完成后将接种工具火焰灭菌后 再放回原处。
思考题
1. 涂布好的平板在培养时为何要倒置?
实验目的
1．了解微生物分离和纯化的基本原理。 2．掌握常用的微生物分离纯化的方法。
实验原理
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种 或某一株微生物的过程称为微生物的分离 纯化，常用的方法有两种：
1．平板分离法（涂布法、混菌法） 2．划线分离法
实验器材
1. 微生物样品：以土壤为例 2. 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，高氏1号培养
③培养，挑单菌落。
平板划线操作法示意图
平板划线分离法(streak plate method)
1
3
4
平板划线菌落分离效果图
注意事项
1. 在稀释混合平板法中，注入培养基不能太热， 否则会烫死微生物；在混匀时，动作要轻巧， 应多次前后、 左右、顺或逆时针方向旋动。
2. 作涂布、划线用的平板，琼脂含量可适当高些， 倒平板时培养基不宜太烫，否则易在平板表面 形成冷凝水，导致菌落扩散或蔓延。
使用：10-2、10-3、10-4
从土壤中分离微生物操作过程
注意：
按下加样按 钮时要轻轻 按下，注意 区别加样档 和排空档； 放开时要缓 缓放松。
加样按钮 卸枪头按钮 加样量显示窗
枪头
Байду номын сангаас
③涂布
在无菌平板的底部贴好标签，然后用无菌吸管 分别由10-2 、10-3和10-4 土壤样品稀释液中各吸 取一定量的稀释液（0.1ml~0.2ml）对号放入已 写好标签的无菌平板中，用无菌玻璃涂布棒在 培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5～ 10min，使菌液吸附进培养基。
基，PDA培养基。 3. 溶液或试剂：盛9ml无菌水的试管，盛99ml无菌
水并带有玻璃珠的三角烧瓶，95%酒精。 4. 仪器或其他用具：天平，玻璃涂布棒，移夜枪，
无菌枪头，接种环，无菌培养皿，记号笔等。
实验方法
1．稀释涂布平板法
①倒平板
将固体培养基加热溶化，待冷却至55~60℃时， 在酒精灯火焰旁，将培养基迅速倒入已灭菌的培 养皿中约15~20ml，平放于桌面上，待冷却凝固 后即为无菌平板。
倒平板操作示意图
②制备样品稀释液（以土壤为例）
准确称取土壤样品1g，放人盛有99ml无菌水并 放有小玻璃珠的三角瓶中，振摇约20min，使 微生物细胞分散，即成10-2的土壤样品稀释液； 用无菌吸管吸取10-2稀释液1mL，移入装有 9mL无菌水的试管中，吹吸几次，让菌液混合 均匀，即成10-3稀释液；再换一支无菌吸管吸 取10-3稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试 管中，也吹吸几次，即成10-4稀释液，以此类 推，连续稀释，制成10-5、10-6、10-7、10-8、 10-9等一系列稀释菌液。
涂布平板操作法示意图
涂
混
布
菌
法
法
培养基 约55℃
④培养
将平板倒置于28℃温箱中恒温培养，细菌培养1～ 2 d ，放线菌培养5～7 d ，霉菌3～5 d。
⑤挑菌落
将培养后长出的单个菌落分别挑取少许细胞接种 到上述培养基的斜面上，置于28℃温箱培养，待 菌苔长出后，检查其特征是否一致，若发现有杂 菌，需再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养
2.平板划线分离法
①倒平板：按稀释涂布平板法倒平板，标明培养基名 称、样品编号和实验日期。
②划线：点燃酒精灯，在火焰旁左手拿无菌平板，右 手拿接种环以无菌操作沾取少许待分离的样品， 在无菌平板表面进行平行划线、连续化线、交叉 划线、扇形划线、方格划线或其他形式的划线， 微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少， 并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能 一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。