几种粪大肠菌群检测方法的比较
滤膜法与酶底物法检测污水中粪大肠菌群的比较分析
滤膜法与酶底物法检测污水中粪大肠菌群的比较分析滤膜法与酶底物法检测污水中粪大肠菌群的比较分析摘要粪大肠菌群是污水中常见的指标菌，其检测与评价对于污水处理过程的监测和卫生保障非常重要。
本研究采用滤膜法和酶底物法两种方法对污水中的粪大肠菌群进行了比较分析。
结果表明，滤膜法具有操作简单、准确性高的优点，适用于对粪大肠菌群进行定量检测；而酶底物法快速、便捷，适用于快速筛查和初步评价。
两种方法在不同场景和实际应用中具有各自的优缺点，应根据具体需求选取合适的检测方法。
1. 引言粪大肠菌群是一类常见的从属于大肠杆菌科的细菌，广泛存在于土壤和水体中，为评估环境水质状况提供了一种重要的指标。
粪大肠菌群来源于人体和动物的消化系统，其存在与污水中表明该水源可能受到了粪便污染。
因此，对于污水处理厂和水源地的管理和监测，粪大肠菌群的检测是必不可少的。
2. 滤膜法检测粪大肠菌群滤膜法是一种常用的粪大肠菌群定量检测方法。
其基本原理是通过滤膜将样品中的粪大肠菌群分离并聚集，然后用染色剂进行着色，并在显微镜下进行计数。
滤膜法的优点是操作简单、准确性高，可以快速定量检测粪大肠菌群的数量。
其缺点是耗时较长，需要使用显微镜进行观察和计数，有一定的操作难度。
3. 酶底物法检测粪大肠菌群酶底物法是一种基于粪大肠菌群特定酶的检测方法，通过检测粪大肠菌群特异酶的活性来间接反映其存在量。
常用的酶底物法是利用3-苯基-六胺葡萄糖（X-GAL）和X-α-半乳糖苷酶（β-galactosidase）进行检测。
该方法操作简单、迅速，只需在特定培养基中添加相应底物，通过观察底物转化后的色素变化来判断是否存在粪大肠菌群。
酶底物法的优点是快速、便捷，适用于大规模样品的筛查和初步评价。
然而，酶底物法只能定性判断粪大肠菌群的存在与否，无法精确定量。
4. 比较分析滤膜法和酶底物法是常用的粪大肠菌群检测方法，两种方法在检测原理、操作步骤、检测结果及适用范围等方面存在一定差异。
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测方法粪大肠菌群检测是指对人体粪便中的大肠菌群进行检测分析，以了解肠道微生态的状况。
粪大肠菌群的平衡与人体健康密切相关，因此对其进行检测具有重要意义。
目前，有多种方法可用于粪大肠菌群检测，本文将对常见的几种方法进行介绍和比较。
首先，传统的培养法是一种常见的粪大肠菌群检测方法。
该方法通过在特定培养基上培养粪便样本中的细菌，然后根据形态、生理生化特性进行鉴定和计数。
这种方法简单易行，能够得到各种细菌的数量和种类，但是需要较长的培养周期，且无法培养一些难以培养的菌种，因此在一定程度上存在局限性。
其次，分子生物学方法在粪大肠菌群检测中得到了广泛应用。
其中，16SrRNA基因测序是一种常用的方法，通过对粪便样本中的细菌DNA进行测序，可以得到细菌的种类和数量信息。
这种方法具有高通量、高灵敏度的特点，能够检测到微生物群落的整体结构，但是需要较高的技术水平和设备支持。
另外，代谢组学方法也被应用于粪大肠菌群检测。
这种方法通过检测粪便样本中的代谢产物，了解肠道微生物的代谢活动情况，从而推断微生物群落的组成和功能。
代谢组学方法能够直观地反映微生物群落的代谢活动，但是受到代谢产物的多样性和复杂性的限制，需要较高的分析技术和数据处理能力。
此外，基于人工智能的分析方法也逐渐应用于粪大肠菌群检测。
这种方法通过建立粪便微生物组的数据库和模型，利用人工智能算法对样本数据进行分析和预测，从而实现对微生物群落的快速、准确的检测。
人工智能方法具有高效、自动化的特点，但是需要大量的数据支持和算法优化。
综上所述，粪大肠菌群检测方法多种多样，各有优缺点。
在实际应用中，可以根据具体需求和条件选择合适的方法进行检测。
随着科技的不断发展，相信粪大肠菌群检测方法会越来越完善，为人体健康提供更多的帮助。
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测是一项非常重要的检测方法，可以帮助医生了解肠道菌群的健
康状况，对于一些肠道疾病的诊断和治疗具有重要的指导意义。
目前，常见的粪大肠菌群检测方法主要包括传统培养法、分子生物学方法和代谢产物分析法。
传统培养法是最早被使用的检测方法之一，其原理是将粪便样本在特定的培养
基上进行培养，然后观察和计数不同菌种的数量。
这种方法简单易行，但是存在着检测时间长、无法培养一些难以培养的菌种等缺点。
分子生物学方法是近年来得到广泛应用的一种检测方法，其原理是通过PCR
扩增、测序等技术，对粪便样本中的微生物DNA进行检测和分析。
这种方法可以
快速、准确地获取肠道微生物的信息，但是需要专业的设备和技术人员进行操作，成本较高。
代谢产物分析法是一种新兴的检测方法，其原理是通过检测粪便中微生物代谢
产物的种类和含量，来推断肠道微生物的组成和功能状态。
这种方法无需培养微生物，可以直接反映微生物的活动情况，但是目前仍处于研究阶段，需要更多的临床验证。
除了以上几种方法外，近年来还出现了一些新的粪大肠菌群检测技术，如16S rRNA测序技术、宏基因组测序技术等，这些新技术在提高检测灵敏度、准确性和
全面性方面具有一定优势，但是也存在着技术门槛高、设备昂贵等问题。
总的来说，粪大肠菌群检测方法在不断地发展和完善，不同的方法各有优缺点，应根据具体的临床需求和实际情况选择合适的检测方法。
未来随着技术的不断进步，相信粪大肠菌群检测方法会更加快速、准确、全面，为肠道健康的评估和疾病的诊断治疗提供更好的帮助。
滤膜法与酶底物法检测污水中粪大肠菌群的比较分析
滤膜法与酶底物法检测污水中粪大肠菌群的比较分析滤膜法与酶底物法检测污水中粪大肠菌群的比较分析一、引言随着城市化进程的加速和人口的不断增长，污水处理成为一项重要的环保任务。
污水中的粪大肠菌群是评估水质和卫生水平的重要指标之一。
为了准确快速地检测污水中的粪大肠菌群，科学家们发展了各种检测方法。
其中，滤膜法和酶底物法是常用的两种方法，本文将对这两种方法进行比较分析。
二、滤膜法滤膜法是通过将粪大肠菌群附着在滤膜上，再通过计数形状与颜色进行检测。
其操作包括取样、滤膜萃取、滤膜染色和计数四个步骤。
滤膜法具有简单、直观、操作便捷等优势，被广泛应用于实际工作中。
然而，滤膜法的检测结果容易受到环境因素的干扰，例如水质的浑浊度、背景物质的影响等，这可能导致结果的不准确。
三、酶底物法酶底物法是通过检测粪大肠菌群特有的酶活性来间接测定其存在。
常用的指示剂是3-indoxyl-β-D-glucuronide（X-Gluc），它能与酶β-D-葡萄糖苷酸酶反应产生可见的蓝色产物。
这种方法的优势在于结果的准确性较高，而且不受环境因素的影响。
但是，酶底物法需要较长的检测时间，操作较为复杂，并且对仪器设备要求较高。
四、比较分析（1）准确性方面：滤膜法和酶底物法在检测粪大肠菌群方面均有较高的准确性，但是酶底物法的结果更为精确。
滤膜法容易受到环境因素的影响，导致结果的偏差。
（2）操作方面：滤膜法操作简便，流程清晰，不需要特殊的仪器设备，适用于现场快速检测。
酶底物法的操作较为复杂，需要仪器设备支持，所需时间较长。
（3）受环境因素影响方面：滤膜法受环境因素影响较大，如水质浑浊度、背景物质等因素会干扰检测结果。
酶底物法不受环境因素的影响，结果更为稳定。
（4）适用范围方面：滤膜法适用于对大量样品进行快速筛查，特别是现场检测。
酶底物法适用于对粪大肠菌群的高灵敏度检测，尤其适合于研究或实验室内的检测。
五、结论综上所述，滤膜法和酶底物法是常用于检测污水中粪大肠菌群的两种方法。
三种监测地表水中粪大肠菌群标准方法的比较
I节能环保LOW CARBON WORLD2021/6三种监测地表水中粪大肠菌群标准方法的比较唐微微，罗娅敏，陈瀚,赵志友(四川省成都生态环境监测中心站，四川成都610066)【摘要】多管发酵法、纸片法和酶底物法是目前测定地表水中粪大肠菌群的常用标准方法，通过三种方法对粪大肠菌群标准物质和实际地表水样进行分析检测，结果表明：多管发酵法、纸片法和酶底物法用于粪大肠菌群的检测结果具有一致性；通过三种方法优缺点的对比，多管法成本低适用于常规检测，纸片法高效方便更适用于大批量快速检测，酶底物法操作简单，不受场地限制可直接现场检测,更适用于应急现场监测遥【关键词】多管发酵法；纸片法；酶底物法；粪大肠菌群;地表水【中图分类号】X132【文献标识码】A【文章编号】2095-2066(2021)06-0034-020前言粪大肠菌群又称耐热大肠菌群，是在44.5益能生长并发酵乳酸产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽抱杆菌⑴。
环境地表水中的粪大肠菌群主要来自粪便的污染，因此通过测定水中粪大肠菌群的含量，可间接得出水体受粪便污染的情况囚,是当前国内外环境监测部门主要监测项目之一，是评价水体污染程度和环境卫生的重要指标，在《地表水环境质量(GB3838—2002)》中，规定I、域、芋、郁及吁类水粪大肠菌群的含量依次臆200、200〜2000、2000〜10000、10000~20000及20000~40000个/L,我国地表水体粪大肠菌群含量普遍较高，部分水域含量甚至超过吁类水质标准。
多管发酵法叫纸片法⑷和酶底物法间是目前国内测定地表水中粪大肠菌群常用的标准方法。
多管发酵法早在1985年就列入《生活饮用水标准检验方法(GB5750-85)》，并于2018年发布修订版，是粪大肠菌群测定的经典方法,它作为《水和废水监测分析方法(第四版)》中的推荐方法向，美国公共卫生协会(APHA)出版的《水和废水标准检验方法(20版)》中方法9221E也采用的是多管发酵法；纸片法在西方发达国家运用较少，主要在一些发展中国家使用，环保部在2015年发布了纸片法的标准方法，它作为《水和废水监测分析方法(第四版)》中的推荐方法(C类方法)叫酶底物法是一种新型酶技术检测方法，已在美、日、韩和欧洲许多国家使用孔2003年从美国引入我国，环保部在2018年发布了酶底物法的标准方法。
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测是一种常用的微生物检测方法，用于评估肠道内大肠埃希杆菌等菌群的数量和组成。
以下介绍几种常见的粪大肠菌群检测方法：
1. 传统培养法：该方法通过将粪便样本接种在含有特定培养基的培养皿中，利用培养皿中的营养物质、温度等条件，使大肠菌群等菌种在培养基上生长。
然后通过观察培养皿中的菌落形态、颜色等特征，或进行进一步的生化试验，来鉴定和计数菌群。
这种方法操作简便，但需要较长时间（通常需要2-3天）。
2. PCR法：PCR（聚合酶链反应）是一种快速、高效的核酸扩增技术，可用于检测微生物的DNA或RNA。
在粪大肠菌群检测中，可以选择一种或多种特异引物，通过PCR扩增粪便样
本中的大肠菌群DNA片段。
扩增后的产物可以进行电泳分析，根据特定的条带模式来鉴定和计数菌群。
相比传统培养法，PCR法的优势在于快速、高灵敏度和特异性。
3. 16S rRNA测序法：16S rRNA是细菌基因组中高保守的区域，其序列具有物种特异性。
基于16S rRNA序列的差异，可以通
过测序技术快速准确地鉴定粪大肠菌群的组成。
该方法可通过提取粪便样本中的总DNA，进行PCR扩增和纯化后，进行高
通量测序。
测序结果可以使用相应的数据库比对，识别和计数样本中的各种大肠菌群。
总结来说，传统培养法、PCR法和16S rRNA测序法是常见的
粪大肠菌群检测方法。
其中，PCR法和16S rRNA测序法更加
快速、准确，逐渐成为主流的检测方法。
这些方法的应用有助于揭示肠道微生物群落的组成和功能，为相关疾病的诊断和治疗提供依据。
水环境粪大肠菌群监测2种分析方法的对比
水环境粪大肠菌群监测2种分析方法的对比粪大肠菌群是监测水体是否被粪便污染的指示菌,是监测地表水尤其是饮用地表水的重要指标之一。
它是总大肠菌群的一部分,其基本性状和总大肠菌群相似。
在实验时,将培养温度提高到44.5C,我们把可以在此条件下生长并发酵产酸产气的,称粪大肠菌群。
经典的粪大肠菌群的监测方法是采用多管发酵法,但这种方法具有前期准备时间长、任务繁重;培养过程中操作繁琐的缺点,并且事后还要清洗大量的试管,浪费人力、物力、财力。
为此很多厂家研发了大肠菌群的快检纸片。
采用纸片法,大大缩短了实验的时间,并且根本不需要再清理大量的试管,减轻了劳动强度,也节约了宝贵的水资源。
那么,多管发酵法和纸片法的数据究竟有没有相关性?作者采用某厂生产的大肠菌群的快检纸片通过对比实验旨在探讨这个问题。
一、分析方法1、多管发酵法(1)培养基单倍和三倍乳糖蛋白胨培养液(培养液的成分与制备略,下同)EC培养液(2)步骤①水样接种量：将水样充分混匀后,根据水样污染的程度确定水样的接种量,每个样品至少用3个不同的水样量接种,同一接种水样量要有五管。
如果接种的体积为10ml,则接种于含有三倍浓度5ml的乳糖蛋白胨培养液的试管内,如果接种量为1ml或者小于1ml,则接种于含有单倍浓度10ml的乳糖蛋白胨培养液的试管内。
②初发酵：将接种了水样的试管,在370.5C下培养242h,产酸和产气的发酵管表明实验阳性。
如产气不明显,可轻拍试管,有小气泡升起的为阳性。
③复发酵试验轻微振荡初发酵阳性的发酵管,用3mm接种环将培养物转接到EC培养液中。
在440.5C水浴中培养242h,培养后立即观察。
发酵管产酸产气表明确信试验阳性。
④计算和报告结果根据不同接种量的发酵管所出现的阳性结果的数目,从MPN表中查相应的MPN 指数,计算出每升水中粪大肠菌群的MPN值。
2、纸片法采用某厂生产的大肠菌群快检纸片①水样接种量：将水样充分混匀后,根据水样污染的程度确定水样的稀释倍数,每个样品至少用3个不同的水样量接种,同一接种水样量要有五个纸片。
关于粪大肠菌群等检出限及结果报出问题的回复
关于粪大肠菌群等检出限及结果报出问题的回复（实用版）目录一、引言二、粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的定义与计算方法三、粪大肠菌群及总大肠菌群检测方法的比较四、关于结果报出的问题五、结论正文一、引言近期，关于地表水和地下水中粪大肠菌群及总大肠菌群检出限及结果报出的问题引起了广泛关注。
针对这一问题，本文将提供一些解答，以期为相关工作者提供参考。
二、粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的定义与计算方法粪大肠菌群和总大肠菌群是评价水质污染程度的重要指标。
检出限是指在一定条件下，分析方法能够检出的最低浓度。
粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的计算方法主要有多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法的检出限是根据统计学方法计算出来的 MPN（最可能数）值，而非试验方法得到的具体数值。
这种方法的优点是结果较为准确，缺点是操作较为繁琐。
滤膜法则是通过比较试验方法得到的具体数值来计算检出限，其优点是操作简便，缺点是结果可能受到一些主观因素的影响。
三、粪大肠菌群及总大肠菌群检测方法的比较粪大肠菌群和总大肠菌群的检测方法有很多种，如多管发酵法、滤膜法、免疫法等。
不同的检测方法有不同的优缺点。
多管发酵法和滤膜法在检出限的计算方面有一定的优势，但滤膜法受到主观因素的影响较大。
免疫法则具有较高的灵敏度和特异性，但操作较为复杂。
因此，在实际工作中应根据具体情况选择合适的检测方法。
四、关于结果报出的问题在粪大肠菌群和总大肠菌群检测中，结果报出是一个重要环节。
根据我国相关标准，地下水和地表水的粪大肠菌群及总大肠菌群检出限分别为 10^2 MPN/L 和10^3 MPN/L。
但在实际工作中，结果报出应考虑多种因素，如实验方法、设备性能、水质状况等，以确保结果的准确性和可靠性。
五、结论总之，粪大肠菌群和总大肠菌群检出限及结果报出问题是水质检测中的重要议题。
在实际工作中，应根据具体情况选择合适的检测方法，并注意结果报出的准确性和可靠性。
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大肠菌群检测方法
大肠菌群检测方法
大肠菌群是人体内重要的微生物群落之一，它对于维持肠道健康、消化食物、
合成维生素等方面起着重要作用。
因此，对大肠菌群进行检测具有重要的临床意义。
本文将介绍几种常见的大肠菌群检测方法，帮助读者更好地了解大肠菌群检测的原理和应用。
首先，常见的大肠菌群检测方法之一是通过粪便样本进行分析。
粪便样本是最
常用的样本类型，采集方法简单、成本较低，并且能够全面反映肠道微生物的情况。
通过对粪便样本中的细菌进行培养和鉴定，可以获得大肠菌群的组成和数量信息。
其次，分子生物学方法也被广泛应用于大肠菌群的检测中。
例如，通过16S rRNA基因测序可以对肠道微生物进行分类和鉴定，从而了解大肠菌群的多样性和
丰度。
此外，还可以利用荧光原位杂交技术（FISH）直接在样本中观察和定量大
肠菌群的情况。
除了以上两种方法，近年来，基于高通量测序技术的宏基因组学分析也成为大
肠菌群检测的重要手段。
这种方法可以对肠道微生物的整个基因组进行测序和分析，揭示大肠菌群的功能和代谢特点，为肠道微生物相关疾病的诊断和治疗提供重要依据。
总的来说，大肠菌群检测是一项复杂而又重要的工作，不同的方法各有优劣。
在实际应用中，可以根据具体情况选择合适的检测方法，结合临床病情进行综合分析，从而更好地指导临床诊疗工作。
希望本文介绍的大肠菌群检测方法能够为相关人士提供一定的参考价值，促进大肠菌群检测技术的进一步发展和应用。
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测方法粪大肠菌群检测是一项非常重要的检测方法，它可以帮助我们了解肠道内的微生物组成情况，对于肠道健康的评估和疾病的诊断具有重要意义。
在进行粪大肠菌群检测时，我们可以采用多种方法来获取准确的检测结果。
下面将介绍几种常见的粪大肠菌群检测方法。
首先，传统的培养法是一种常用的粪大肠菌群检测方法。
通过将粪便样品接种到含有特定培养基的培养皿中，然后进行培养和计数，可以得到不同菌群的数量和种类。
这种方法操作简单，成本较低，但需要一定的培养时间，并且只能检测到能够在特定培养条件下生长的菌群，对于一些无法在常规培养条件下生长的菌群无法检测到。
其次，分子生物学方法也是常用的粪大肠菌群检测方法之一。
包括PCR、实时荧光定量PCR、16S rRNA基因测序等技术，可以对粪便中的微生物DNA进行扩增和测序，进而对菌群进行鉴定和数量分析。
这种方法可以检测到更多种类的微生物，具有更高的灵敏度和特异性，但相对来说操作复杂，成本较高。
另外，近年来，基于高通量测序技术的宏基因组学方法也逐渐应用于粪大肠菌群检测。
通过对粪便样品进行高通量测序，可以获得更全面、更深入的微生物组成信息，包括细菌、真菌、病毒等。
这种方法可以帮助我们更好地了解肠道微生物的多样性和功能，但需要较高的测序深度和数据分析能力。
除了上述方法外，还有一些新兴的粪大肠菌群检测方法，如代谢组学、蛋白质组学等，可以通过检测粪便中的代谢产物和蛋白质组成来评估肠道微生物的活动和功能。
这些方法在研究肠道微生物与宿主健康的关系方面具有重要意义。
综上所述，粪大肠菌群检测方法有多种选择，每种方法都有其特点和适用范围。
在进行粪大肠菌群检测时，应根据具体的研究目的和实际情况选择合适的方法，以获得准确、全面的检测结果。
希望通过不断的技术进步和方法改进，粪大肠菌群检测能够更好地为肠道健康的评估和疾病的诊断提供帮助。
比较快速检测水中粪大肠菌群的方法
f论与综述清洗世界Cleaning World第36卷第12期2020年12月文章编号：1671-8909 ( 2020) 12-0121-003比较快速检测水中粪大肠菌群的方法刘招椿(宁德市环境监测站东侨分站，福建宁德 352 1000)摘要：目的：粪大肠菌群集中产生在温血动物和人的粪便当中，其数量的多少在一定程度上直接代表着水体受粪便污染的具体程度，是目前国际上所通行的对受粪便污染水质监测的重要指示菌，其也是对城市污水特别是 生活污水进行综合评价的关键指标之一。
现阶段，我国环境监测部门主要采用多管发酵法和膜过滤法作为标准的 检测方法，但是这两种方法在检测过程中所花费的时间往往都比较长，一般需要两三天的时间，并且实验步驟十 分繁琐，对于环境的要求非常高。
为此，简便快速的检测方法至关重要。
关键词：水中粪大肠菌群；快速检测；固定底物酶底物法；多管发酵法中图分类号：X 321 文献标识码：A〇引言分析水中粪大肠菌群快速检测方法-固定底物酶底 物法与多管发酵法的比较，进而为实际检测工作提供更 多更好的检测方法。
方法：在检测水中粪大肠菌时分别利用固定底物酶 底物法与多管发酵法进行检测，在此基础上对两种方法 的检测结果进行比较。
结果：对大肠菌群进行科学检测 时，利用酶底物法与多管发酵法所检测出来的结果，在 一定程度上具备非常强的相关性，在浓度范围相对较低 的状态下样品浓度所具备的相关性比高浓度范围更好， 二者差异有统计学意义。
结论：利用酶底物法的检测结 果在一定程度上会比多管发酵法的检测结果低，这极有 可能与酶底物法检测的大肠埃希氏菌、多管发酵法检测 的粪大肠菌群所造成的，当置信度控制在95%的条件 下是允许存在差异的，并且与环境各方面的监测要求十 分相符，基于检测水中粪大肠方法成本价格、准确度、 灵敏度、简易性及定量范围的考虑，建议选用97孔定 量盘法与酶底物法检测水中粪大肠菌群。
1实验部分1.1仪器设备和试剂材料(1) 仪器设备。
大肠菌群的检验方法
大肠菌群的检验方法
大肠菌群是指人体肠道内的一类细菌群落，对人体健康有着重要的影响。
检验大肠菌群的方法主要包括以下几种：
1. 粪便培养法，通过采集患者的粪便样本，将其培养在含有特定营养物质的培养基上，利用培养基的选择性和差异培养特性，可以筛选出大肠菌群中的细菌，并对其进行鉴定和计数。
2. 分子生物学方法，包括PCR（聚合酶链式反应）、16S rRNA 基因测序等技术，通过检测特定基因序列或者DNA指纹图谱来确定大肠菌群的成分和数量。
3. 生化检测法，通过测定粪便中的各种生化指标，如pH值、氨氮含量等，来间接反映大肠菌群的代谢活动和数量。
4. 荧光原位杂交技术（FISH），利用荧光探针对大肠菌群中的特定细菌进行染色和检测，可以直观地观察其在肠道内的分布和数量。
5. 免疫学检测法，通过检测粪便中的特定抗原或抗体水平，来
间接反映大肠菌群的情况，如检测肠道病原菌的抗原或特定免疫球蛋白的水平。
总的来说，不同的检测方法各有优势，可以综合应用以获得更全面和准确的大肠菌群信息。
这些方法可以帮助医生评估肠道菌群的健康状况，指导治疗和调整饮食，对于维护肠道健康和预防疾病具有重要意义。
粪大肠菌群检测的结果偏差及影响因素
粪大肠菌群检测的结果偏差及影响因素摘要：介绍了目前城镇污水处理消毒后的出水中粪大肠菌群指标的检测方法原理，对检测结果偏差产生的原因进行了分析和阐述，提出了检测过程中的质量保证措施，对基层实验室提高粪大肠菌群检测结果的精确性具有实际指导意义。
关键词：粪大肠菌群；质控；影响因素；偏差目前，粪大肠菌群的检测作为城镇污水处理厂排放标准的重要指标之一，经常被环保督查部门抽检。
而各厂在进行日常出水检测时，也存在着实验室内及实验室间实验结果差异性较大的问题。
由于微生物检测技术、方法、水样等的特殊性，导致影响其检测数值偏差大的因素较多，本文结合实际检测工作，从实验方法、培养基的质量控制、检测环境条件及现场采样等多方面进行分析，阐述这些因素的影响及质控措施。
目前，污水类的粪大肠菌群的检测，常采用多管发酵法、滤膜法和酶底物法。
三种方法的生物学培养机理是相同的，由于使用的培养基成分、培养介质和菌落形成的特征和方式的不同，最终导致了粪大肠菌群检测结果的差异，这是由于检测方法导致的偏差。
下面简单介绍一下这三种常用方法：1 常用粪大肠菌群的检测方法1.1 多管发酵法多管发酵法是以最可能数来表示试验结果的。
实际上它是根据统计学理论估计水体中大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。
不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阴性又显示阳性的稀释度。
因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。
多管发酵法是先在37度下培养，产酸产气则为阳性，也就是总大肠菌群。
然后再进行复发酵，从37℃培养出来的总大肠菌群，再接种到EC培养基中，45℃下产酸产气的则为粪大肠菌群。
1.2 滤膜法滤膜是一种微孔性薄膜。
将水样注入已被灭菌的放有滤膜（孔径0.45μm）的抽滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜片上，然后将滤膜贴于M-FC培养基上，在44.5℃温度下恒温培养，对微生物细胞染色后，对滤膜上生长的此特性菌落进行计数，计算出每1L水样中含有粪大肠菌群的个数。
环境水样中粪大肠菌群的两种方法的比较
的测定原理和实验步骤 ， 比较 固定底物酶底物法与 多管发酵法对于水 中粪大肠菌群 的检测 ， 即使用科立得 Ｔ Ｍ （ Ｃ ｏ ｌ ｉ ｌ ｅ ｒ ｔ ） 试剂和传统 方法检 测比
较两种方法试验结果 ， 最 终 得 出结 论 。
【 关键词 】 粪大肠菌群 多管发酵法 ｉ 固定底物酶底物法
３ 实验结果
选 用 粪 大肠 茵 群 标 准 茵株 ０ ６ ２ ０ １ ６ 一 Ｈ 对 两种 方 法 进 行 比
对。 比对 结果 如 表 ｌ 。
袭 ｌ 两 种 方 法 的 可 储 度 检 验
验 步骤繁琐 ． 实验 环 境 要 求较 高 ． 所 以我 们 需要 寻 找 和 选 择 快
速 简便 的 检 测 方 法 是 十 分 必 要 的 。此 外还 有 最 新 发 布 了一 个
１ ． ２ 设 备和材 料
科 立得 Ｔ Ｍ（ Ｃ ｏ ｌ ｉ ｌ ｅ ｒ ｔ ） 试剂 ， １ ０ ０ ｍ Ｌ无 菌瓶 （ 合有 １ ． ５ ％硫 代 硫 酸钠） ， 封 口机 ， ９ ７孔 定 量 盘 ， ９ ７孔 阳 性 标 准 比 色盘 ， 乳 糖 蛋
白胨 ， Ｅ Ｃ 肉汤 ， ３ ｍ ｍ 接种 环 ，酒精灯 ，培养 箱 （ 控 温 精 确± Ｏ ． ５ ℃） 、 恒 温振 荡 水 浴锅 ， 压力灭菌器 ． 移液枪等 。
【 中图分类号 】 Ｘ ８ ３ ２
【 文献标识码 】 Ａ
【 文章编号 】 ２ ０ ９ ５ — ２ ０ ６ ６ （ ２ ０ １ ７ ） １ ０ — ０ ０ １ ５ — ０ ２
引 言
①用无菌样品瓶量取 １ ０ ０ ｍ Ｌ混匀水样 （ 或 用无菌水适度
， 并加 入 科 立 得 Ｔ Ｍ（ Ｃ ｏ ｌ ｉ ｌ ｅ ｒ ｔ ） 试 剂 充 分 摇 匀溶 解 。 粪 大 肠 菌 群 又 称 耐 热 大肠 茵群 ． 是一群在 ４ ４ ． ５ ℃培 养 ２ ４ ～ 稀释 的水样）
酶底物法与多管发酵法和纸片法测定水中粪大肠菌群方法比较
酶底物法与多管发酵法和纸片法测定水中粪大肠菌群方法比较背景介绍随着人口的不断加添和城市化的进程，水诘责题也越来越受到关注。
其中水中粪大肠菌群是判定水质是否达标的指标之一、因此，快速、精准地测定水中粪大肠菌群已成为保障公共卫生和水环境安全的紧要工作。
在测定水中粪大肠菌群时，目前紧要有三种方法：酶底物法、多管发酵法和纸片法。
本文将对这三种方法进行比较，以便选择适合的方法进行水质检测。
酶底物法酶底物法是利用粪大肠菌群分泌的β—D—半乳糖苷酶对其底物苯基—β—D—半乳苷（X—Gal）水解，产生可见的蓝色色素。
实在试验步骤如下：1.接受分光光度计，读取X—Gal水解产生的蓝色产物的吸取值。
吸取值越高，表明样品中粪大肠菌群的数量越多。
该方法具有快速、精准等优点，但存在确定的局限性，比如无法区分大肠杆菌和其他肠道菌，仅仅只能检测粪生源的水体样品。
多管发酵法多管发酵法是利用粪大肠菌群在固体培育基中进行培育，利用二氧化碳生成的压力变化判定粪大肠菌群的数量。
实在试验步骤如下：1.将含有气管的玻璃管一端紧贴于固体培育基上。
2.向不同的玻璃管中分别加入不同的水样，并进行固体培育。
3.通过察看玻璃管顶端气泡的产生和数量，判定样品中粪大肠菌群的数量。
该方法不仅可以检测含有粪便的水产品中的粪大肠菌群，而且适用范围广，可以检测非点源污染和净化污水等水产品中的粪大肠菌群，但操作多而杂、时间较长。
纸片法纸片法是将覆盖了0.5～1.0 ml水体样品的纤维素纸分别带入含有荧光素β—D—葡萄糖苷（MUG）的细菌培育基中，然后在黑暗中孵育后，通过紫外线灯照射MUG荧光显带样品，察看荧光显带情况，得出粪大肠菌群数量。
实在试验步骤如下：1.制备含有MUG的培育基。
2.将确定数量的水样加入到带有MUG的培育基中并进行培育。
3.在黑暗中察看培育基上产生的荧光显带情况，得出样品中粪大肠菌群的数量。
该方法具有灵敏度高、操作简便等优点，但也有局限性，例如无法检测混合大肠杆菌和其他的大肠杆菌感染和污染的水样。
粪大肠菌群(MPN法)测定结果的评价方法比较
HUANJINGYUFAZHAN 73 V
/环境与发展
HUANJINGYINGXIANGPINGJIA
布。该考核样品标准值为31. lcfu,样品计数体均数的置信区间(95%概率)下限值21.0,上 於31,经查poisson(泊松)分布可信区间表问，总 限值44.0,用该置信区间进行结果评价。
实验室 编号
用公式（4）计算,En=En（f）；然后再按照2. 3. 2 进行En值评价。
3结果评价
3. 1 Grubbs检验法评价结论 8家实验室的结果最大值和最小值的Gn<
G。. 95（8），因此判定8家实验室无异常值，均合格, 详见表2。
表2 Grubbs检验法结果评价
实验室 编号
1 2 3 4 5 6 7 8 平均值2
Key WO rds： Fecal coliform;most probable numbers; MPN;En value 最大可能数(MPN)法R］很早就应用于总大方法是生态环境监测领域多管发酵法问和酶底 肠菌群和粪大肠菌群等微生物指标分析。该物法⑴的理论基础,也在卫生检验 、食品检验领
k 72 HUANJINGYUFAZHAN
Abstract： Objective: Explore an evaluation method of fecal coliform (MPN) detection results of 8 laboratories.
Method: Grubbs test method, Poisson distribution confidence interval method and improved en value method were used to evaluate the test results. Combined with the "unqualified" or "Unsatisfactory” laboratory problem tracking re sults, the evaluation conclusions of the three methods were compared.Result : Compared with the other two methods, the improved en value evaluation method considered not only the uncertainty of standard quantitative strains and MPN method, but also their distribution characteristics. The evaluation conclusion is more in line with the actual situ ation and more scientific and reasonable. Conclusion: This method was suitable for the accuracy evaluation of MPN method, which can not only evaluate the ability verification or ability examination results, but also evaluate the accura cy of routine quality control samples.
几种粪大肠菌群检测方法的比较
水样滤完后，再抽气约 5s，关闭滤器阀门。取 下滤器，用灭菌镊子夹取带菌滤膜边缘部分移放 到 M – FC 培养基上，滤膜截留细菌面朝上，滤膜 应与培养 基 完 全 贴 紧。 盖 好 平 皿，将 平 皿 倒 放 到 44. 5℃ ± 0. 5℃ 隔水式培养箱中，培养 24 ± 2 h。 1. 2. 2. 3 计数和报告结果
和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气
不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。
1. 1. 3 复发酵实验
轻微振荡初 发 酵 试 验 阳 性 结 果 的 发 酵 管，用
3 mm 接种环或灭菌棒将培养物转接到 EC 培养
液中。在 44. 5℃ ± 0. 5℃ 水浴下培养 24 ± 2 h。培
养后立即观察。发酵管产气表明确信试验阳性。
随着分子生 物 学 的 发 展 及 原 理 的 利 用，微 生 物的检测方法发生了质的变化，如仍然处于研究 阶段，技术的复杂性和检测费用较高的聚合酶链 式技术 （ polymerase chain reaction，PCR）〔5〕、荧 光 原位 杂 交 技 术 （ fluorescent in situ hybridization， FISH）〔6〕、自动化检测方法（ Automatization） 、利用 抗体与抗原特异性结合免疫荧光法〔5〕等目前还不 能广泛用于粪大肠菌群的日常检测。因此要实现 实际操作应用与普及还需要经历一个长期的反复
1. 1. 4 计算和报告结果
根据不同的接种量的发酵管所表现阳性结果
水中粪大肠菌群测定方法的比较研究分析
水中粪大肠菌群测定方法的比较研究分析湖南衡阳421200摘要:多管发酵法、滤膜法、纸片快速法和酶底物法是目前国内测定水中粪大肠菌群的常用标准方法。
分别从方法的检出限、方法操作、准确度和方法间的一致性四个方面对水中粪大肠菌群的测定进行了对比研究，总结出各方法的适用范围和优缺点，为分析人员根据实际条件和水样类型选择最佳方法提供参考。
关键词:粪大肠菌群;酶底物法;多管发酵法;滤膜法;纸片快速法粪大肠菌群是在 44．5℃ 温度下能生长并发酵乳糖产酸，产气，需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，主要来自粪便。
粪大肠菌群又称耐热大肠菌群，可以指示水体是否遭受粪便污染，直接指示生活污水的污染，间接反映肠道致病菌的污染风险，是水质检验中非常重要的卫生指标。
目前，国内测定水中粪大肠菌群的标准分析方法有多管发酵法、滤膜法、纸片快速法和酶底物法。
多管发酵法早在 1985 年就列入了《生活饮用水标准检验方法》( GB 5750 －85) ，至今已经沿用了三十多年，是行业内公认的粪大肠菌群测定的经典方法，卫生、水利、环保等行业均有多管发酵法的方法标准。
美国公共卫生协会( APHA) 出版的《水和废水标准检验方法》( 20 版) 中方法 9221E 也采用的是多管发酵法; 滤膜法采用直接计数特征菌落的方式，不同于其它三种方法采用 MPN 法计数，其应用广泛性仅次于多管发酵法，美国 APHA 方法9222D和ISO9308 － 1: 2014采用的是滤膜法; 纸片快速法在西方发达国家采用较少，主要在一些发展中国家使用，环保部在 2015 年发布了测定水中粪大肠菌群的纸片快速法; 酶底物法利用粪大肠菌群在邻硝基苯－β － D －吡喃半乳糖苷培养基上培养产生β － D －半乳糖苷酶，该酶可以分解色源底物释放出黄色的邻硝基苯酚，通过颜色变化定性，MPN 法定量。
我国没有酶底物法测定粪大肠菌群的现行国家和行业标准，美国APHA 方法 9221 E、ISO 9380 － 2: 2012 和 GB5750． 12 －2006均将酶底物法列入标准，但仅限测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌。
水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)两种检测方法的比较研究
水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)两种检测方法的比较研究摘要：本文采用固定底物酶底物法与传统多管发酵法对水中粪大肠菌群进行比对试验，比较两者检测结果的一致性。
结果表明，两种方法在结果一致性方面相关性好，无统计学意义上的显著性差异，与多管发酵法相比，酶底物法具有简便快速、结果准确、特异、实验过程污染的可能性低、无二次污染等优点。
关键词：固定底物酶底物法多管发酵法粪大肠菌群Comparative Study on Two Detection Methods of Fecal Coliform in Water (Thermotolerant Coliforms )Luo Yun Liuzhou Environmental Protection Monitoring Station, Guangxi 545001Abstract: This paper conducts a comparative test on fecal coliform in water with Defined Substrate Technology(DST) enzyme substrate technique and traditional Multiple-tube fermentation technique and compares the consistency of detection results. The result shows that both methods have a good correlation in the consistency of results and there is no significant difference in statistical sense. Compared to multiple-tube fermentation technique, enzyme substrate technique has such advantages as simplicity, rapidness, accurate result, specificity, low possibility of pollution in the experimental process and secondary pollution avoided.Key words: Defined Substrate Technology(DST) enzyme substrate technique; Multiple-tube fermentation technique; Fecal coliform粪大肠菌群（耐热大肠菌群）是水质污染的重要指标之一。
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3 结语 本文通过对粪大肠菌群检测方法的综合分析
比较，认为快速检测法即纸片法、酶底物法以其操 作简便、检测周期短将在未来取代多管发酵法、滤 膜法等传统方法，尤其是酶底物法采用密封培养 技术，在检测医院污水时可以减少人员接触而降 低检测人员的致病风险，因此具有更强的实用价 值和应用价值。并且酶底物法极有可能在近期成 为评价水 质 微 生 物 污 染 的 快 速 标 准 检 测 方 法 之 一。
第34 卷 第 3 期 2010 年 9 月
黑龙江环境通报 Heilongjiang Environmental Journal
Vol. 34 No. 3 Sep. 2010
几种粪大肠菌群检测方法的比较
马 原 刘 虹（ 牡丹江市环境监测中心站 黑龙江 牡丹江 157000）
摘 要： 粪大肠菌群作为水体粪便污染的指示菌，其在地表水水质监测评价中具有重要作用。采取精确、快速的粪大
酶底物法采用大肠菌群细菌能产生 β － 半乳 糖苷酶（ β － D － galaetosidase） 分解 PG（ Orthonitropheny1β － D － galactopyranoside） 使培养液呈黄色， 以及大肠埃希氏菌产生葡萄糖醛酸酶（ 13 － glueuronidase） 分解 MUG（ 4 － methY1 － umbelllfery － β － D － glucuronide） 使培养液在波长 366 nm 紫外 光下产生荧光的原理，来定量分析水样中粪大肠 菌群数。 1. 4. 2 检测方法
和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气
不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。
1. 1. 3 复发酵实验
轻微振荡初 发 酵 试 验 阳 性 结 果 的 发 酵 管，用
3 mm 接种环或灭菌棒将培养物转接到 EC 培养
液中。在 44. 5℃ ± 0. 5℃ 水浴下培养 24 ± 2 h。培
养后立即观察。发酵管产气表明确信试验阳性。
肠菌群检测方法，对控制流行疾病的发生和传播有重要的科学意义。为此对应用多管发酵法、滤膜法、快速检测法
（ 纸片法） 、酶底物法检测粪大肠菌群的优缺点作了对比研究。得出了快速检测法 （ 纸片法） 、酶底物法有较准确、快
速等方法特性，有较好的实用价值。
关键词： 粪大肠菌群； 检测方法； 新技术
中图分类号： X830. 2
中国环境监测总站推荐的试用方法《水中总 大肠菌群和粪大肠菌群的快速测定》（ 简称纸片 法） ，与发酵法相比，纸片法只需要 45℃ ，18 ～ 24h 培养即可报告结果，纸片法快速省时简便，适宜污 染事故应急监测〔2〕。
酶底物法可以较好地弥补传统方法的不足， 该法操作简便，检测时间 18 ～ 24 h 或更短，结果 可靠，无需确认试验，且可以同时检测水中大肠菌 群和大肠埃希氏菌的污染状况，能够较精确地判 断水样的微生物污染状况。并且此种方法已经被 世界各国国家及地方实验室和世界各组织机构认 可〔4〕。
酶底物法采用 51 孔定量盘法，此方法是一种 基于 MPN 的方法。检测所需水样为 100 mL。用 100 mL 的 无 菌 稀 释 瓶 量 取 100 mL 水 样，加 入 （ 2. 7 ± 0. 5） g MMO － MUG 培养基粉末，混摇均匀 使之完全溶解，将水样全部倒入 5l 孔无菌定量盘 内，以手抚平定量盘背面以赶除孔穴内气泡，然后 用封口机封口。放入 44℃ 培养箱中培养 24 h 后 进行结果判读，将培养 24 h 之后的定量盘取出观 察，如果孔穴内的水样变成黄色则表示该孔穴中 含有大 肠 菌 群。将 定 量 盘 在 暗 处 用 波 长 为 366 nm 的紫外光灯照射，有黄色反应的孔穴如果有蓝 色的荧光产生则表示该定量盘孔穴中含有大肠埃 希氏菌。计算有黄色反应及有荧光的孔穴数，对 照 MPN 表查出其代表的粪大肠菌群最可能数。
2 各检测方法的比较 在粪大肠菌群检测方法中发酵法和滤膜法是
传统的检测方法，操作步骤繁杂、干扰因素多，专 一性差，需要确认实验，因此检测周期较长，需 48
· 环境监测 ·
～ 72 h，不适于大量样品的分析。但传统方法具 有原理简单、费用较低、利于推广的优点，因此仍 是常规监测中的主要检测方法〔3〕。
文献标识码： A
文章编号： 1674 － 263X （ 2010） 03 － 0043 － 03
Comparison of Several Test Methods of Fecal Coliforms MA Yuan LIU Hong（ Mu Dan Jiang Environment Montitoring Center Mu Dan Jiang Hei Long Jiang 157000） Abstract： Fecal coliforms are index of water body and have important function in quality monitoring and evaluation of surfacewater． Accurate and fast test method of fecal coliforms is important for epidemic diseases control． We compared testing methods of fecal coliforms，including multiple － tube fermentation，membrane filter， rapid paper strip method，enzyme substrate technique，found out that rapid paper strip method and enzyme substrate technique was accurate and fast and had higher practical value． Key words： Fecal coliforms Test method New technology
用无菌镊子 夹 取 灭 菌 滤 膜 边 缘 部 分，将 粗 糙 面向上，贴放于已灭菌的滤床上稳妥地固定好滤 器，将 100mL 水样注入滤器中，加盖，打开滤器阀 门，在负压 50KPa 下进行抽滤。 1. 2. 2. 2 培养
水样滤完后，再抽气约 5s，关闭滤器阀门。取 下滤器，用灭菌镊子夹取带菌滤膜边缘部分移放 到 M – FC 培养基上，滤膜截留细菌面朝上，滤膜 应与培养 基 完 全 贴 紧。 盖 好 平 皿，将 平 皿 倒 放 到 44. 5℃ ± 0. 5℃ 隔水式培养箱中，培养 24 ± 2 h。 1. 2. 2. 3 计数和报告结果
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· 环境监测 ·
1. 2 滤膜法（ membrane filter，MF）〔1〕 1. 2. 1 原理
滤膜是一种微孔性滤膜。将水样注入已灭菌 的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后 将滤膜贴于 M － FC 培养基上，在 44. 5℃ 下进行培 养，粪大肠菌群在滤膜上长出具体有特征的菌落， 直接计数，通过公式计算每 1L 水样中含的粪大肠 菌群数。 1. 2. 2 检测方法 1. 2. 2. 1 水样的过滤
各检测方法的比较见表 1。
检测方法 多管发酵难度 易 易 易 难
表 1 粪大肠菌群各检测方法比较
操作步骤 繁琐 繁琐 简易 简易
确认实验 需要 需要
不需要 不需要
检测时间 48 ～ 72h 48 ～ 72h 18 ～ 24h 18 ～ 24h
实验室适用性 较准确、较便宜 较准确、较便宜 较准确、较便宜
粪大肠菌群菌落数（ 个 /L） = 滤膜上生长的 粪大肠菌群菌落数 × 1000 / 过滤水样量（ mL） 1. 3 纸片快速法（ rapid paper strip）〔2〕 1. 3. 1 原理
应用灭菌的 滤 纸 吸 收 选 择 性 培 养 基，细 菌 通 过滤纸纤维膨胀而被固定并生长繁殖，粪大肠菌 群在发育时伴随产生的琥珀酸脱氢酶将纸片上的 红四碳唑（ TTC） 还原成不可逆的甲膳，产生红色 色素，即粪大肠菌在纸片培养基上呈红色菌落，菌 落周围产生黄圈是粪大肠菌分解乳糖产酸使指示 剂变色的结果。
随着分子生 物 学 的 发 展 及 原 理 的 利 用，微 生 物的检测方法发生了质的变化，如仍然处于研究 阶段，技术的复杂性和检测费用较高的聚合酶链 式技术 （ polymerase chain reaction，PCR）〔5〕、荧 光 原位 杂 交 技 术 （ fluorescent in situ hybridization， FISH）〔6〕、自动化检测方法（ Automatization） 、利用 抗体与抗原特异性结合免疫荧光法〔5〕等目前还不 能广泛用于粪大肠菌群的日常检测。因此要实现 实际操作应用与普及还需要经历一个长期的反复
前言 粪大肠菌 群 是 水 质 污 染 的 重 要 指 标 之 一〔1〕。
对于水源水如 湖水、池水和溪水，一旦被粪便污 染，就可能也被肠道病原菌污染而引起肠道传染 病甚至流行病，如霍乱、伤寒、细菌性痢疾和阿米 巴性痢疾以及脊髓灰质炎和传染性肝炎等病毒疾 病。因此精确、快速、可靠的粪大肠菌群检测方法 对于准确及时地监测水源水粪大肠菌群的污染状 况对有效预报和控制流行疾病的发生与传播有重 要意义。
验证完善过程，需要在验证的过程中不断改进操 作细节，使 新 技 术 的 精 确 度 得 到 认 可。 相 信 在 新 技术的支持下，精确、快速、可靠、环保、低廉的检 测仪器将会研发和得到应用和普及。
参考文献：
〔1〕国家环境保护总局《水和废水监测分析方法》编委会． 水和废水监测分析方法〔M〕． 4 版． 北京： 中国环境科 学出版社，2002： 701 － 706
1. 1. 4 计算和报告结果
根据不同的接种量的发酵管所表现阳性结果
的数目，从 MPN 表中查得相应的 MPN 指数，计算
每升水中粪大肠菌群数的最近似值（ most probable