黄连指纹图谱研究概况

黄连HPLC指纹图谱研究进展

姓名：方功学号：211134****班级：中药专硕3班

摘要：中药质量标准现代化的模式将是中药化学指纹图谱配合有效成分含量测定和必要的检查项目,较全面地整体控制中药质量，中药指纹图谱研究是中药质量标准现代化研究的关键技术。本文就黄连HPLC 指纹图谱研究的情况进行归纳综述。

关键词：黄连中药指纹图谱

中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。日本汉方药主要生产企业在20世纪80年代就已经在企业内部采用HPLC指纹图谱控制质量。我国自2000年8月国家药品监督管理局颁发《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求( 暂行) 》以来, 中药指纹图谱的研究已经成为中药研究的热点。高效液相色谱法( HPLC) 也在中药成份分离、分析中获得了广泛的应用, 特别是三维高效液相色谱近年来发展迅速, 使得HPLC在中药质量控制中占有重要地位, 被认为是目前检测中药指纹图谱的首选方法。

1.中药HPLC指纹图谱定义

中药HPLC指纹图谱系指中药材或中成药经适当处理后, 采取HPLC分析手段, 得到能够标示该中药材或中成药特性的共有峰的图谱。指纹图谱一般包含两层含义:（1）必须反映出该药材(或成药)有别于其他任何物质;（2）对于中药材,指纹图谱还能反应出产地和采收期不同而造成的差异; 对于中成药, 则能反映出同一产品不同批次间的质量差异, 差异越小说明药材(或成药) 的稳定性越好。

2.黄连HPLC指纹图谱的构建

2.1黄连HPLC法分离模式

黄连HPLC法分离模式有反相色谱法( RPC) , 正相色谱法( NPC) , 梯度洗脱法, 离子交换色谱法, 分子排阻色谱法( SEC) , 手性HPLC法等。RPC比较简单方便, 柱性能较好, 是应用最广泛的HPLC法。在HPLC方法建立时, 应首先试用RPC, 若初步试验证明样品不适合使用RPC分离, 则改为NPC。离子交换色谱法现在主要用于生物来源样品, 如氨基酸、肽、核酸等。SEC是获得聚合物分子量及其分布的基本方法,《中国药典》2000年版规定多糖的分子量分布测定采用这种方法。手性HPLC可用于具有不同物理化学性质的非对应异构体的分离方法[1]。

2.2 黄连HPLC指纹图谱方法构建

2.2.1 色谱条件的选择

选择色谱条件时, 首先应考虑到物质成份能在液相色谱中完全显示, 即特征峰数要尽量地多,且分离度要好, 主要的指标成份、活性成份或用于定量的成份的分离度应能达到有效的分离。进样量也应适宜, 应使最小成份特征峰的面积能达到4～5位数以上。能用等度洗脱就不用梯度洗脱, 即使用梯度洗脱也应尽量采用线性梯度。在保证专属性、重复性的前提下, 以选择简单实用, 便于实施的试验条件; 如果能用通用柱, 就不用特殊色谱柱; 为了使指纹图谱规范化, 最好能根据指纹谱评价的实际, 选择标准色谱柱。除此, 还应使系统适用性试验、稳定性试验、精密度试验等方法学考察内容符合HPLC指纹图谱的要求。

2.2.2 检测器的选择

HPLC指纹图谱中应用较多的有紫外检测器( UVD) , 二极管阵列检测器( DAD) , 荧光检测

器( FD) , 电化学检测器( ECD) , 蒸发光散射检测器( ELSD) ,示差折光检测器( RID) , 液谱联用技术等。

现今应用较多的是UVD, DAD, 液质联用等技术。

2.2.3 对照品的选择

选择参照物计算特征峰对参照物峰的相对保留时间和相对峰面积比, 来考察指纹图谱的稳定性和重复性[2]。

2.2.4 供试品的选择

一般来说, 黄连最好是选择规模化、规范化种植的品种, 且应确保所用原料的产地、品种、部位、采集期和加工方法, 同时应收集足够多的、不同批号的样本, 对图谱特征的重现性进行考察, 还应收集一些易混淆或曾出现的伪品, 依所确定的特征若能加以区别和辨认, 则更为理想。

2.2.5 制备方法

具体操作时选用有机溶剂或水提取不同的化学成份, 再利用溶剂萃取、柱色谱等手段, 使目标成份富集或与其他成份分离, 以有利于分析过程的顺利进行。在建立制备方法时,一般要考察提取溶剂、粗分或精制过程, 通过比较, 选择可以避免干扰, 同时又能全面反映成份信息的制备方法, 必要时,针对不同种类的成份分别选用不同的制备方法。

3.黄连HPLC指纹图谱数据处理[3]

3.1 直观分析比较

根据图谱外观和所得数据, 对供试品与对照指纹图谱的特征进行直观的分析、比较、判断。此法适用于样品的定性快速鉴别或图谱中数据比较少的情况, 是目前应用较多的方法之一。

3.2 计算机软件分析

基于化学模式识别技术, 开发出计算机分析软件。目前“ 中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件” 已用于中药HPLC指纹图谱研究和实际工作当中。其它还有诸如量化数据比较、化学模式识别技术、化学计量学方法等处理及评价技术。

4.黄连HPLC指纹图谱普的研究进展

4.1 二维HPLC

一维HPLC受固定波长的限制,导致中药中很多组分的吸收峰可能未被检出,而利用高效液相色谱二级阵列管检测器(HPLC/DAD)和数字图像识别技术为基础建立的二维高效液相色谱(2D-HPLC)指纹图谱可得到所有波长下的图谱,所以具有更高的可靠性和客观性。利用2D-HPLC的特征峰,也可对组分进行定量分析。Hong Lin Zhai 等[4]把2D-HPLC/DAD 法用于不同黄连样品的质量分析中,建立了黄连二维指纹图谱,同时利用灰度图像的密度,对小檗碱、药根碱、巴马汀3个成分进行定量分析。结果表明,聚类分析结果与样品真实情况一致,其组分浓度与灰度图像密度之间的相关系数大于0.999。

4.2 3D-HPLC指纹图谱

运用二极管阵列检测( DAD) 可得到三维图谱, 因而适用于成份比较复杂紫外光区有吸收的药物分析。马百平[5]和沈嘉[6]等采用三维HPLC指纹图谱, 对双黄连粉针剂和黄连解毒汤制剂进行了质控。岳清洪[7]等采用3D-HPLC建立了黄连的特征指纹图谱。

4.3 联用技术

在建立的指纹图谱基础上,为进一步对各指纹峰进行定性分析,又建立了HPLC-MS法。盛氏等[8]采用高效液相色谱紫外检测器(HPLC-UV)方法建立了黄连药材指纹图谱,同时用HPLC-MS 联用技术对7个主要色谱峰进行定性分析,并比较不同栽培条件、不同产地和不同炮制方法制备的黄连药材中小檗碱、巴马