【CN109700765A】一种靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体【专利】
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脂质体 ( 57 )摘要
本发明公开了一种靶向三阴性乳腺癌干细 胞的光敏纳米脂质体，脂质体的活性成分为2-硝 基咪唑类前药，脂质体含有活性成分、卵磷脂、胆 固醇 、标靶分子 和光敏剂 ；卵磷脂 和胆固醇形成 纳米球，活性成分和光敏剂被包裹在纳米球的内 侧，标靶分子连接在纳米球外侧。本发明的靶向 三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，具有粒 径均一、包封率高、稳定性良好的优点，并且具有 特异性靶向治疗的作用，提高了药物进入细胞的 能力，使药物可以特异性的聚集在肿瘤部位发挥 杀伤肿瘤的作用，而不对正常组织有毒副作用， 并 且可以 利 用光 动力治疗与乏 氧激活化疗药 物 激活的互补治疗，为临床应用研究提供可靠的实 验研究数据及理论基础。
5 .根据权利要求1～4任一项所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特 征在于，所述靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体通过以下步骤实现：
1)将EDC、NHS溶解于甲醇，然后加入油酸混合搅拌10～30min，得到第一混合溶液； 2)将壳寡糖溶解于1％醋酸溶液中，得到第二混合溶液； 3)将所述第一混合溶液滴加到第二混合溶液中 ，室温搅拌24～48h，得到第三混合溶 液； 4)将微量氨水加入第三混合溶液析出沉淀，离心、洗涤、透析、冻干得到油酸-壳寡糖； 5) 将卵磷脂 、胆固醇 、Ce6 、TH302 和油酸-壳寡糖溶解于混合溶剂中 ，得到第四混合溶 液； 6)将第四混合溶液置于旋转蒸发仪上，进行旋转蒸发，得到脂质薄膜； 7) 将脂 质薄膜加入到PBS缓冲液中 ，水化1～3h ，至薄膜脱落 ，放入高压均质机中反复挤 压，得到靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体。 6 .根据权利要求5所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所 述EDC和NHS的质量比为1～2：1。 7 .根据权利要求5所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所 述油酸和甲醇的体积比为1：200～300。 8 .根据权利要求5所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所 述透析所用溶剂为蒸馏水，透析时间为24～48h，每隔4h更换一次蒸馏水。 9 .根据权利要求5所述的靶向三Biblioteka Baidu性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所 述卵磷脂、胆固醇、Ce6、TH302和油酸-壳寡糖的质量比为36～40：4～6：1～3：0 .5～1：4～6。 10 .根据权利要求5所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于， 所述混合溶剂包括氯仿和甲醇，氯仿和甲醇的体积比为3：2。
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CN 109700765 A
说 明 书
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一种靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体
技术领域 [0001] 本发明涉及脂质体技术领域，特别是涉及一种靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳 米脂质体。
背景技术 [0002] 乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤，并且呈上升趋势，然而其死亡率则缓慢下 降 ，越来越多的病人在合理治疗的情况下长期存活。但是，乳腺癌是一种异质性很强的疾 病，其中占比约20％的三阴性乳腺癌由于其高侵袭、易复发、转移等恶性生物学行为以及缺 乏有效治疗靶点而在各个亚型里预后最差，极大地影响了乳腺癌总体预后。因此寻找适宜 的三阴性乳腺癌治疗靶点，探索新的三阴性乳腺癌治疗的方法是目前研究的热点。 [0003] 肿瘤干细胞CD44+CD24-/low被认为是经典的乳腺癌干细胞标记物之一。因此，可以 通过靶向CD44对三阴性乳腺癌干细胞进行杀伤。然而，CD44分子是一种广泛分布于细胞表 面的跨膜糖蛋白 ，正常组织表面存在的CD44蛋白会极大影响靶向效率与治疗效果。 [0004] 近年光动力是治疗肿瘤的一种有效手段。光动力治疗(PhotodynamicTherapy， PDT)因其独特的抗肿瘤作用已经开始应用于临床肿瘤治疗。与传统的化疗、手术治疗和放 疗相比 ，PDT有以下潜在优势：相对的非侵入治疗；无总剂量限制可以重复给药；整个治疗过 程不会或只带来很小的疤痕；操作相对方便并且副作用小等等。PDT需由光敏剂、光、氧三种 因素共同参与才能产生起治疗作用的活性氧或自由基，因此，足够浓度的组织氧是PDT所必 须的。而肿瘤组织微环境中散布着低氧区 和常氧区。在肿瘤深部低氧区 ，氧分压限 制了有效 的光敏反应并影响了PDT总体治疗效果 ；在常氧区 ，从PDT对组织微脉管系统起作用的瞬间 ， 就有可能因为光动力学反应消耗大量氧而产生氧压迅速和显著下降 ，从而影响PDT效果。 [0005] TH-302即是具高细胞毒性的选择性低氧激活型DNA烷化剂，可在肿瘤低氧区活化 而转化为具有抗肿瘤活性的二溴异磷酞胺氮芥，被激活后还可以进入常氧区进一步杀灭肿 瘤细胞。但TH-302的作用存在一定局限性：①在富氧环境下易失活，从而难以成为一个稳定 的 抗 肿瘤药物 ；②由 于缺乏 靶向 性 ，易诱发皮肤 、黏膜毒性及骨髓抑制。这些都是限 制其临 床应用的关键问题。
2 .根据权利要求1所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所 述标靶分子为壳寡糖。
3 .根据权利要求1所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所 述光敏剂为Ce6。
4 .根据权利要求1所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所 述活性成分为2-硝基咪唑类前药TH302。
(10)申请公布号 CN 109700765 A (43)申请公布日 2019.05.03 A61K 31/675(2006 .01) A61P 35/00(2006 .01)
权利要求书1页 说明书5页 附图2页
CN 109700765 A
CN 109700765 A
权 利 要 求 书
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1 .一种靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所述脂质体的活性 成分为2-硝基咪唑类前药，所述脂质体含有活性成分、卵磷脂、胆固醇、标靶分子和光敏剂； 所述卵磷脂 和胆固醇形成纳米球 ，所述活性成分 和光敏剂被包裹在所述纳米球的内 侧 ，所 以标靶分子连接在纳米球外侧。
( 19 )中华人民 共和国国家知识产权局
( 12 )发明专利申请
(21)申请号 201910002510 .5
(22)申请日 2019 .01 .02
(71)申请人 无锡市妇幼保健院 地址 214000 江苏省无锡市梁溪区槐树巷 48号
(72)发明人 杨蕊 唐秋莎 陈萱 陈钰 丁一楠 周洁 程凯 许涵洁
(74)专利代理机构 北京联瑞联丰知识产权代理 事务所(普通合伙) 11411
代理人 黄冠华
(51)Int .Cl . A61K 9/127(2006 .01) A61K 47/24(2006 .01) A61K 47/28(2006 .01) A61K 41/00(2006 .01)
( 54 )发明 名称 一种靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米
本发明公开了一种靶向三阴性乳腺癌干细 胞的光敏纳米脂质体，脂质体的活性成分为2-硝 基咪唑类前药，脂质体含有活性成分、卵磷脂、胆 固醇 、标靶分子 和光敏剂 ；卵磷脂 和胆固醇形成 纳米球，活性成分和光敏剂被包裹在纳米球的内 侧，标靶分子连接在纳米球外侧。本发明的靶向 三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，具有粒 径均一、包封率高、稳定性良好的优点，并且具有 特异性靶向治疗的作用，提高了药物进入细胞的 能力，使药物可以特异性的聚集在肿瘤部位发挥 杀伤肿瘤的作用，而不对正常组织有毒副作用， 并 且可以 利 用光 动力治疗与乏 氧激活化疗药 物 激活的互补治疗，为临床应用研究提供可靠的实 验研究数据及理论基础。
5 .根据权利要求1～4任一项所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特 征在于，所述靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体通过以下步骤实现：
1)将EDC、NHS溶解于甲醇，然后加入油酸混合搅拌10～30min，得到第一混合溶液； 2)将壳寡糖溶解于1％醋酸溶液中，得到第二混合溶液； 3)将所述第一混合溶液滴加到第二混合溶液中 ，室温搅拌24～48h，得到第三混合溶 液； 4)将微量氨水加入第三混合溶液析出沉淀，离心、洗涤、透析、冻干得到油酸-壳寡糖； 5) 将卵磷脂 、胆固醇 、Ce6 、TH302 和油酸-壳寡糖溶解于混合溶剂中 ，得到第四混合溶 液； 6)将第四混合溶液置于旋转蒸发仪上，进行旋转蒸发，得到脂质薄膜； 7) 将脂 质薄膜加入到PBS缓冲液中 ，水化1～3h ，至薄膜脱落 ，放入高压均质机中反复挤 压，得到靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体。 6 .根据权利要求5所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所 述EDC和NHS的质量比为1～2：1。 7 .根据权利要求5所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所 述油酸和甲醇的体积比为1：200～300。 8 .根据权利要求5所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所 述透析所用溶剂为蒸馏水，透析时间为24～48h，每隔4h更换一次蒸馏水。 9 .根据权利要求5所述的靶向三Biblioteka Baidu性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所 述卵磷脂、胆固醇、Ce6、TH302和油酸-壳寡糖的质量比为36～40：4～6：1～3：0 .5～1：4～6。 10 .根据权利要求5所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于， 所述混合溶剂包括氯仿和甲醇，氯仿和甲醇的体积比为3：2。
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CN 109700765 A
说 明 书
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一种靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体
技术领域 [0001] 本发明涉及脂质体技术领域，特别是涉及一种靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳 米脂质体。
背景技术 [0002] 乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤，并且呈上升趋势，然而其死亡率则缓慢下 降 ，越来越多的病人在合理治疗的情况下长期存活。但是，乳腺癌是一种异质性很强的疾 病，其中占比约20％的三阴性乳腺癌由于其高侵袭、易复发、转移等恶性生物学行为以及缺 乏有效治疗靶点而在各个亚型里预后最差，极大地影响了乳腺癌总体预后。因此寻找适宜 的三阴性乳腺癌治疗靶点，探索新的三阴性乳腺癌治疗的方法是目前研究的热点。 [0003] 肿瘤干细胞CD44+CD24-/low被认为是经典的乳腺癌干细胞标记物之一。因此，可以 通过靶向CD44对三阴性乳腺癌干细胞进行杀伤。然而，CD44分子是一种广泛分布于细胞表 面的跨膜糖蛋白 ，正常组织表面存在的CD44蛋白会极大影响靶向效率与治疗效果。 [0004] 近年光动力是治疗肿瘤的一种有效手段。光动力治疗(PhotodynamicTherapy， PDT)因其独特的抗肿瘤作用已经开始应用于临床肿瘤治疗。与传统的化疗、手术治疗和放 疗相比 ，PDT有以下潜在优势：相对的非侵入治疗；无总剂量限制可以重复给药；整个治疗过 程不会或只带来很小的疤痕；操作相对方便并且副作用小等等。PDT需由光敏剂、光、氧三种 因素共同参与才能产生起治疗作用的活性氧或自由基，因此，足够浓度的组织氧是PDT所必 须的。而肿瘤组织微环境中散布着低氧区 和常氧区。在肿瘤深部低氧区 ，氧分压限 制了有效 的光敏反应并影响了PDT总体治疗效果 ；在常氧区 ，从PDT对组织微脉管系统起作用的瞬间 ， 就有可能因为光动力学反应消耗大量氧而产生氧压迅速和显著下降 ，从而影响PDT效果。 [0005] TH-302即是具高细胞毒性的选择性低氧激活型DNA烷化剂，可在肿瘤低氧区活化 而转化为具有抗肿瘤活性的二溴异磷酞胺氮芥，被激活后还可以进入常氧区进一步杀灭肿 瘤细胞。但TH-302的作用存在一定局限性：①在富氧环境下易失活，从而难以成为一个稳定 的 抗 肿瘤药物 ；②由 于缺乏 靶向 性 ，易诱发皮肤 、黏膜毒性及骨髓抑制。这些都是限 制其临 床应用的关键问题。
2 .根据权利要求1所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所 述标靶分子为壳寡糖。
3 .根据权利要求1所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所 述光敏剂为Ce6。
4 .根据权利要求1所述的靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所 述活性成分为2-硝基咪唑类前药TH302。
(10)申请公布号 CN 109700765 A (43)申请公布日 2019.05.03 A61K 31/675(2006 .01) A61P 35/00(2006 .01)
权利要求书1页 说明书5页 附图2页
CN 109700765 A
CN 109700765 A
权 利 要 求 书
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1 .一种靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米脂质体，其特征在于，所述脂质体的活性 成分为2-硝基咪唑类前药，所述脂质体含有活性成分、卵磷脂、胆固醇、标靶分子和光敏剂； 所述卵磷脂 和胆固醇形成纳米球 ，所述活性成分 和光敏剂被包裹在所述纳米球的内 侧 ，所 以标靶分子连接在纳米球外侧。
( 19 )中华人民 共和国国家知识产权局
( 12 )发明专利申请
(21)申请号 201910002510 .5
(22)申请日 2019 .01 .02
(71)申请人 无锡市妇幼保健院 地址 214000 江苏省无锡市梁溪区槐树巷 48号
(72)发明人 杨蕊 唐秋莎 陈萱 陈钰 丁一楠 周洁 程凯 许涵洁
(74)专利代理机构 北京联瑞联丰知识产权代理 事务所(普通合伙) 11411
代理人 黄冠华
(51)Int .Cl . A61K 9/127(2006 .01) A61K 47/24(2006 .01) A61K 47/28(2006 .01) A61K 41/00(2006 .01)
( 54 )发明 名称 一种靶向三阴性乳腺癌干细胞的光敏纳米