药品微生物限度检查法汇总

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洁净级别
洁净级别
尘粒数/m3
浮游菌
个/m2
微粒直径 微粒直径
≥0.5um ≥5um
100
≤3,500
≤0
≤5
沉降菌 个/0.5h
≤1
10000 ≤350,000 ≤2000 ≤100 ≤3
100000
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≤3,500,000 ≤20,000 ≤500
≤10
5
检验量
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特殊供试液制备方法
肠溶及结肠溶制剂供试品 取供试品10g，加至100ml pH6.8磷
酸盐缓冲液（肠溶制剂）中或pH7.6 磷酸盐缓冲液（结肠制剂），置 45℃水浴中，振摇，使溶解，作为 1:10的供试液。
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特殊供试液制备方法
具抑菌活性的供试品
当供试品有抑菌活性时，应消除其抑菌活性 后，再依法检查。
药品微生物限度检查法
微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原、 辅料受微生物污染程度的方法，也是评价生产企 业的药用原料、辅料、设备、器具、工艺流程、 环境和操作者卫生状况的重要手段和依据。检查 项目包括染菌量及控制菌检查。
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微生物限度检查法起草的指导思想
较完善检查法：也是目前国际上常用的 一种方法。是以琼脂平板上的细菌、霉 菌或酵母菌形成的一个独立可见的菌落 为计数依据。该法测定结果只反映在规 定条件下所生长的细菌、霉菌和酵母菌 的菌落数。
一个细菌、霉菌或酵母菌的菌落均可由一个 或多个菌细胞生长繁殖而成，因此供试品中 所测得的菌落数，实际为菌落形成单位数 （colony forming unity, cfu）
·供试品检验的全过程必须符合无菌技术要 求。
培养基、稀释剂、实验器具等的灭菌，按灭 菌法（见附录）的要求采用验证合格的灭菌 程序灭菌。
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操作要点
作供试品稀释时，每一稀释级都要更换吸管。 ·细菌培养48h，真菌培养72h，计数。如菌落极小，不
易辨认可适当延长培养时间。再点计菌落数。 含蜂蜜、王浆的液体制剂，用玫瑰红钠琼脂培养基测定
霉菌数，用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基测定酵菌数， 并且合并计数。 若同一稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两 个平板的菌落数不能相差1 倍或以上。 使用灭菌吸管时，管尖不要接触可能污染的任何容器或 用具。 供试液稀释及注皿时应振摇后取均匀的供试液，以免造 成实验误差。
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菌数报告规则
当同时有2个稀释级的菌落数符合上述规定时，视两者比 值（比值为高稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值除以 低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值 ）而定。若比 值不大于2，以两稀释级的菌落数乘以稀释倍数的均 值报告菌数；若比值大于2但不超过5时，以低稀释级 的菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。当出现比值大 于5或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌落 数等异常情况时，应查明原因再行检查，必要时，应 进行方法的重新验证。
1：10
不可计 不可计 不可计
39 24 0.5
1：102 1：103
164 20
295 46
271 60
41
4
19
0
比值
－ 1.6 2.2 10.2 － －
菌落数 报告
16400 37750 27100 异常
240 5
16000 38000 27000
240 ＜10
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操作要点
酸甘油酯3g、聚山梨酯80 10g的无菌溶化混 合物（温度低于45℃）的烧杯中，用无菌玻 棒搅拌成团后，慢慢加入45℃左右的稀释剂 至100ml，边加边搅拌，使供试品充分乳化， 作为1:20供试液。
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特殊供试液制备方法
取供试品10g，加至含玻璃珠和20ml的无 菌十四烷酸异丙酯的容器中，充分振摇， 使供试品溶解，再加入约45℃的稀释剂， 振摇5-10分钟，萃取，待油水明显分层， 取其水层作为1:10供试液。
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菌数报告规则
当各稀释级的平均菌落数均小于30， 以最低稀释级的平均菌落数乘以稀释 倍数的值报告菌数。
各稀释级的平板均无菌落生长，或仅 最低稀释级的平板有菌落生长，但平 均菌落数小于1时，以＜1乘以最低稀 释倍数的值报告菌数。
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菌数报告规则
各 各稀释级菌落平均数
十四烷酸异丙酯的灭菌方法：采用薄膜过 滤法除菌，选用孔径为0.22um的脂溶性滤 膜，在140℃干热灭菌2小时。
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特殊供试液制备方法
非水溶性膜剂供试品 取50cm2,剪碎，加 适量的稀释剂（通常为每1ml或每2ml含 1cm2）,浸泡，振摇，以供试品浸液作为 1:10或1:20供试品。
增加试验的可操作性 使方法更具科学性，保证检验结果的
准确性。
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操作环境
检验全过程应严格遵守无菌操作，在环境洁净 度10000级和局部洁净度100级单向流空气区域 内进行，以防止再污染。单向流空气区域、工 作台面及环境应定期按中华人民共和国国家标 准GB/T 16292～16294-1996 《医药工业洁净 室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方 法》进行洁净度验证。
常用的方法有： 培养基稀释法
离心沉淀集菌法 3000转/分离心20分钟，
500转/分离心5分
薄膜过滤法
中和法
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菌数报告规则
细菌数 酵母菌平均菌落数在30-300， 霉菌平均菌落数在30-100 之间的稀释级作 为菌数报告的依据。
当仅有１个稀释级的菌落数符合上述规定，以 该级的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。
202Fra Baidu bibliotek/10/3
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供试液的制备
根据供试品的理化特性与生物学特性，采 取适宜的方法制备供试液。供试液
制备若需用水浴加温时，温度不应超过 45℃。供试液从制备至加入检验用培 养基，不得超过1小时。
除另有规定外，常用的供试品制备方法如 下：
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特殊供试液制备方法
非水溶性供试品 取供试品5g(5ml)，加入司盘80 5g、单硬脂
检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或 cm2） 一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包
装单位）的3倍量供试品。 除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；
中药膜剂为50cm2 贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。 要求检查沙门菌的供试品其检验量应增加10g或
10ml