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大肠菌群检测方法

进入无菌室步骤

1．进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。 5—1 小时。

2．关灯后 0?5 小时后放可进入。

3．进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套

实验步骤

1，进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。（酒精棉是用 75% 的酒精加入脱脂棉中制成）

2，准备双料管 3 根，单料管 6 根，培养皿7 个。

3，直接从原液中吸取 10ml 放入双料管，（ 3 根每根各 10ml）

4，再吸取原液 1ml 放入单料管中（ 3 根每根各 1ml ）

5，再吸取原液 1ml 放入培养皿中（ 2 个培养皿各 1ml）

6，再吸取原液 1ml 放入盐水管中制成－ 1 梯度的样液

7，更换一根吸管，从－ 1 梯度的样液吸取1ml 样液放入单料管中（ 3 根每根各 1ml ）

8，再吸取－ 1 梯度样液 1ml 放入培养皿中（ 2 个培养皿各 1ml ）

9，再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作 3 个培养皿：空气空白，把培养

皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。盐水空白，吸 1ml 生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀。）

10，把全部作好的放入培养箱中，温度 36C＋－ 1×C，大肠 24H＋－ 2H ，菌落 48H＋－ 2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中）

11，梯度：－ 1 梯度为 1ml 原液加入 9ml 生理盐水配成

－2 梯度为 1ml － 1 梯度样液加入 9ml 生理盐水配成

－3 梯度－ 4 梯度配制方法和－ 1、－ 2 梯度的配制方法一样

12，如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后

放入培养箱中 36C，24H＋－ 2H 。（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。所画之形不

能划破伊红美兰琼脂表面）

13，取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中，然后再培养36C＋－ 1C ， 24H＋＋－ 2H 。

14，再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。（方法见标准）

15，只有镜检成紫红色和乳糖复发酵管产气同时成立的情况下，才能断定这根管是不合格。16，清洗消毒这根试管前必须进行消毒霉菌，121C，0。 5 小时同时不能放气。