体外抗菌药物抑菌试验(亦称细菌对药物的敏感试验-简称药...

❖ 敏感(S)：表示细菌可被常规剂量的药物在体内达到 的浓度所抑制或杀灭。
❖ 中度敏感(MS)：表示细菌可被该药物大剂量的浓度 所抑制或在药物生理性浓集的部位被抑制。
只有少数药物可报告中度敏感，如氨苄青霉素测肠 球菌。
❖ 中介度(1)：是为防止因技术因素失控导致结果误差 而设置的“缓冲域”因其临床意义难以确定，故不 应向临床医师报告。而应重做稀释法根据MIC结果 做出判断。
优缺点
❖ 稀释法是直接定量地检测抗菌药物在体 外对病原菌的抑制或杀灭浓度，有利于 临床根据MIC、药物代谢等拟定合理的 治疗方案，是目前厌氧菌的最佳测定方 法，琼脂稀释法还易于发现污染或耐药 突变菌。稀释法是新药开发，体外药敏 试验常用的经典参照标准，但操作相对 比较烦琐。
❖ 标准菌株的抑菌圈应落在表中所示的预期范 围内。如果超出该范围，应视为失控，须及 时查找原因，予以纠正。
❖ 培养基的质量、药敏纸片的质量、接种菌量、 试验操作质量、孵育条件、抑菌圈测量工具 的精度、质控菌株的药敏特性等均能影响结 果的准确性。
（二）肉汤稀释法 及琼脂稀释法
❖ 原理 是用水解酪蛋白肉汤(MH)或水解酪 蛋白琼脂（MHA）培养基作为稀释剂。 按《美国委员会临床实验室标准》作分 步倍比稀释抗菌药物，定量加入被检菌 株。经培养后观察抗菌药物的最小抑菌 浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。
❖ 根据本国国情，卫生部临床检验中心还制订了关于 临床微生物实验室室内质控要求。临床具体工作须 参照遵守。
❖ 原理 是将定量抗菌药物纸片贴在涂有细菌的 琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散， 其浓度逐渐递减，使纸片周围的敏感细菌受 到抑制生长，形成抑菌圈，测量抑菌圈的直 径来判定细菌对药物的敏感程度。此法简单 易行、价格便宜、药物选择灵活，适用对生 长快的细菌进行药敏试验。
4 质控菌 金黄色葡萄球菌（ATCC25923）、 大肠埃希菌（ATCC25922）
5 其它 无菌生理盐水、无菌棉拭、镊子、游 标毫微米卡尺、消毒小试管、1ml 、10ml 吸 管。
操作方板上，37℃孵育16～ 24h。
2 再将菌落接种至营养肉汤中，培养4～6 小时后用灭菌生理盐水校正菌液浓度至 0.5麦氏标准比浊管(相当于 1.5×108CFU／m1)。
3 用灭菌棉拭子蘸取相当于1.5×108CFU/m1 的金黄色葡萄球菌菌液，在试管内壁旋转挤 去多余菌液后，在MHA 平板表面上，从不同 方向均匀涂布3次，每次旋转平板60度，最后 沿平板内缘涂抹1圈。同样方法涂布大肠埃希 菌。
4 平板在室温下干燥3～5min后。根据试验菌 株选择抗菌谱。如阳性球菌:金黄色葡萄球菌 选择青霉素(PEN)、苯唑西林(OXA) 环丙沙 星(CIP)、万古霉素(VAN)、克林霉素(CLI)等。 大肠埃希菌选用氨苄西林(AMP)、头抱唑林 (FZN)、庆大霉素(GEN)、环丙沙星(CIP)、 亚胺配南(IMP)等。
材料
1 水解酪蛋白琼脂（Mueller-Hinton AgarMHA） 倾注成4mm厚的12～15cm平板，将其保存 于4℃冰箱可用1周。
2硫酸钡比浊管 1.175%氯化钡 （液B99a.C5ml2 l.,2充H分2O混）匀0.，5m每l加管04.3m6l其N(浊1%度)流相酸当溶于 0.5麦氏（McFarland standard）比浊管第一 管1/2（1.5亿/ml相当于1.5×108CFU／m1）, 使用期半年。
❖ 耐药(R)：表示细菌不能被常规剂量的药物所达到 的浓度所抑制。
药物在体外稀释的不同浓度对细菌 生长的影响，可分为二种：
❖ 最小抑菌浓度(MIC)：抗菌药物能抑制 被检菌生长的最小浓度。药物对同一菌 株MIC值越小，其抗菌力就越强， 细菌 对这种药物就越敏感。
❖ 最小杀菌浓度(MBC)：抗菌药物能完 全杀灭被检菌所需要的最小浓度。
3 抗菌素纸片 现有商品（阿米卡星(AMK)、庆 大霉素(GEN)、青霉素(PEN)、苯唑西林 (OXA)、氨苄西林(AMP)、氨苄西林／舒巴坦 (AMS)、呢拉西林(PIP)、头抱唑林(FZN)、头 孢呋辛(FRX)、头孢他啶(CAZ)、氨曲南 (ATM)、亚胺配南(1MP)、环丙沙星(CIP)、 万古霉素(VAN)、克林霉素(CLI)、复方新诺 明(SXT)
体外抗菌药物抑菌 试验（亦称细菌对 药物的敏感试验-
简称药敏试验）
病原生物学实验室 2009 3 4
一、概念
❖ 药物敏感试验是在体外检测抗菌药物对 细菌的抑制和杀灭的作用。根据药物的 常规剂量在体内所能达到的浓度对细菌 的影响，将被检菌株对该药的敏感程度 分为三级：敏感、中度敏感／中介度、 耐药。
5 用无菌镊子将含药纸片，紧贴于琼脂表面， 各纸片之间相距应大于24mm，纸片距平板 内缘应大于15mm，置37℃孵育18h～24h观 看结果。
结果
❖ 纸片周围的细菌受抑制，形成明显的抑菌圈， 用游标卡尺测量抑菌环直径的大小记录之。
❖ 参考表中的质量控制标准，报告敏感(S)、 耐药(R)。
注意事项
❖ 近年来，广谱和超广谱抗菌药物的应用 及滥用，造成耐药菌株数迅速增加，耐 药范围不断扩大，导致抗菌治疗效果严 重下降，耐药菌引起的内源性感染和医 院交叉感染已成为全球性的突出问题。 如何指导科学合理地抗菌治疗及耐药监 测已成为微生物实验室及临床微生物实 验室的重要任务之一。体外检测抗菌药 物对细菌的敏感试验作为实验室的主要 手段，在临床医学中有着重要的作用。
二、 药敏试验的常用方法
❖ K-B纸片扩散法、肉汤稀释法、琼脂稀 释法及 E-test法试验
前面讲过药物对同一菌株，MIC值越小， 其抗菌力就越强， K-B法的抑菌圈(环) 就越大，细菌对这种药物就越敏感，这 是K-B 纸片扩散法与稀释法的关系，呈 负相关。
（一） K-B纸片扩散法
❖ 是由Kirby和Bauer所创建，此方法属定性试验，是 药敏试验中最成熟的方法之一，但操作时影响因素 较多，需注意质控。经世界卫生组织推荐统一实验 条件，规定了统一用水解洛蛋白培养基及平板大小， 培养基厚度，标准菌株、菌龄及菌浓度，操作手法， 纸片质量及厚度，药敏纸片之间距离，观察量取结 果时间及工具，为各国广泛采用的方法。