动物性食品中克伦特罗残留量的测定
高效液相色谱法检测克伦特罗的探讨
弱 阳离子 交换 柱 （ Ｃ ｗｃ （ Ｕ Ｅ Ｃ Ｌ — ｘ） Ｓ Ｐ Ｌ Ｏ）
罗进入机体后 具有半 衰期 长 ， 代谢 和排泄缓慢 的特
点， 其性质稳定不 易破坏 ， 人若食用含瘦肉精残 留量
过高的肉制品后 ，５ｒｎ到 ６ｈ内可 出现肌痛、 １ ｉ ａ 心动
过速 、 头晕 目眩 等 中毒 症 状 。近 几 年 来 ， 内外 接 连 国 发 生人 食用 有瘦 肉精残 留的 肉制 品 中毒事 件 ， 因此 引 起 人们 高度 的关 注 。
纯 ） 去 离子 水 、
其余 试 剂都 是分 析纯 如 ：． ｌＬ高 氯酸 、 ０ １ｍｏ ／ 异丙 醇、 乙酸 乙酯 、． ｍｏ Ｌ磷 酸 二氢 钠 ０１ ｌ ／
加 速动物 生 长 ， 增 加 瘦 肉率 ， 而 将 其 广 泛应 用 于 并 从 养殖 业 ， 随后 我 国也将 此方 法用 于养殖 业 。但 克 伦 特
流速 ： ｍＬ ｍ ｎ １ ／ ｉ
般 的基 层 单 位 都 有 Ｈ Ｌ 所 以选 用 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ， Ｐ Ｃ法 来 进
行检测 较为适用 ， 而建立快速、 从 准确 、 有效 的检测 方法 。
１材 料 与方 法
进样量 ：０ ｌ ２
１５ 标 准 曲线 称 取盐 酸 克伦 特 罗 （ ． 纯度 ９ ． ） ９ １
［ 摘要 ］ 目的 建 立高效液相色谱法检测动物性食 品中克伦特罗 残 留量 的方法。方法 样 品经预处理 后 ， 分别 以 甲醇
＋ ４ ＋ ５ 和乙腈 ＋ ．２ｍｌＬ乙酸铵（０＋ ０ 作为流动相对样品进行检测。结果 以乙腈 ＋ 水（５ ５ ） ００ ｏ ／ ３ ７） 乙酸铵作为流动相
对样 品进行检测有较好 的峰形 ， 回收率为 ７．％ 一 ６４ ， ９５ ８．％ 浓度在 ０５ ５０ ＃Ｌ 围内的线 性为 ０９９ ， ．０～ ． ｍ 范 ．９ 检出限为 ９
43. 牛羊尿液中盐酸克伦特罗残留的测定DB21／T 1833-2010
试剂盒使用前恢复到室温。
标准和样品做平行试验以增加准确性。
14.5
以空白溶液（浓度为
绘制标准相对吸光度与浓度
14.6
本方法在牛、羊等动物尿液中的检测限为0.5μg/L。
15
15.1
调节样品的pH值为5.2，用乙酸乙酯-异丙醇提取，蒸干后用乙酸铵溶解，经固相萃取小柱净化，氮气吹干后经双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)衍生，气相色谱-质谱仪测定。
-As——标准工作液中经衍生化盐酸克伦特罗m/z 86碎片离子的峰面积；
-V0——供试试样体积，单位为升（mL）
-V——试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
-P——稀释倍数。
注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留小数点后2位。
15.6
灵敏度
本方法在牛、羊等动物尿液中的定量限为1.0μg/L。
天平：感量
冷冻
离心管：
阳离子交换固相萃取柱
固相萃取装置。
氮气吹干仪。
涡旋混合器。
振荡器。
恒温干燥箱。
15.4
提取
准确量取尿样5.0 mL于50 mL离心管中，用乙酸调pH至5.2，加入乙酸铵缓冲液（5.2.3）1 mL混匀，再加入乙酸乙酯-异丙醇混合提取液（5.2.10）10 mL，涡旋30 s使其充分混匀，中速振荡提取5 min，静置分层，用滴管收集上层有机相，再用乙酸乙酯-异丙醇混合提取液10 mL重复提取一次，合并有机相，50℃水浴旋转蒸发至近干，加入3 mL乙酸铵缓冲液（5.2.3）振荡溶解后备用。
1
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则并起草。
本标准由辽宁省畜牧兽医局提出并归口。
肉原料肉中激素(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺)的测定—气质联用技术
2 液质联用法检测瘦肉精 2.2实验方法与主要步骤
2.2.4结果计算
计算结果小于本标准检出限0.5ug/kg时，视为未检出
2 液质联用法检测瘦肉精
备注 在检测实验室，确证和定量瘦肉精时，相对于气质联用，更
多使用液质联用。
2 液质联用法检测瘦肉精 2.2实验方法与主要步骤
2.2.3主要步骤 5.振荡均匀，放入37℃水浴 锅震荡16h 放置一夜 （备注：样品中有油脂，需要加入正己烷；若无油脂，无需加入正己烷） 6.离心 9000r/min 7min 7.上清液过滤（用漏斗、定量滤纸）到另一新管,用乙酸铵冲洗滤纸
详细过程参考实训指导书或国标GB-T22286-2008
2 液质联用法检测瘦肉精
2.2实验方法与主要步骤
2.2.2主要仪器: 高效液相色谱-串联质谱联用仪:配有电喷雾离子源（ESI）、 均质器、 漩涡混合器 离心机 氮吹仪、 真空过柱装置。
2 液质联用法检测瘦肉精 2.2实验方法与主要步骤
2.2.3主要步骤 （1）提取 1.称取5g样品（均匀取样）于50ml离心管中，
2.1原理
试样中的残留物经酶解，用高氯酸调节pH值，沉淀蛋白后离心， 上清液用异丙醇-乙酸乙酯提取，再用阳离子交换柱净化，液相色谱串联质谱法测定，内标法定量。
2 液质联用法检测瘦肉精
2.2实验方法与主要步骤
2.2.1主要试剂 甲醇（液相色谱纯） 乙酸钠 高氯酸 氨水甲醇溶液 标准储备溶液； 混合标准储备溶液； 同位素内标物:克仑特罗-D9， 沙丁胺醇-D3，纯度大于98%等
2 液质联用法检测瘦肉精 2.2实验方法吹干样液，吹到似干非干干为止； （6）用1ml 0.1 甲酸/水—甲醇定容； （7）超声后放沃悬器沃悬30s-1min； （8）用注射器吸需要样液，经0.22微米滤膜除杂，转入进样瓶 3.液相色谱串联质谱测定
优化试验条件测定动物性食品中盐酸克伦特罗残留含量
２１ 提取 ．
称 取 （０４００） 试 料 ， ０２ｍ ｌＬ盐 １ － ．１ｇ 用 ． ｏ ／
酸溶 液 ２ Ｌ匀浆 ， 于离 心管 超声 振 荡 ３ ｉ， ０ｍ 置 ０ｍｎ 取 出 ，０ ８ ℃水 浴加 热 ２ ｉ， 却后 ４０ ｍｎ离心 ２ ５ｍｎ冷 ５０ｒ ｉ ／ ５ ｍｎ取上 清 液 ， 淀 用 ０ ２ｍ ｌＬ盐 酸 ５ｍ ｉ， 沉 ． ｏ ／ Ｌ洗 涤 ， ４０ ｍｎ离心 １ ｉ， 并 上 清 液 。用 １ｍ ｌＬ氢 ５０ｒ ｉ ／ ５ｍｎ合 ｏ ／ 氧化 钠调 ｐ Ｈ值 至 ９ ５ ０ １若 有 沉淀 产 生 ， ５０ ． ．， － ４ 再 ００ ｒｍｎ离 心 １ ｉ， ／ｉ ０ｍｎ 取上 清液 加人 １ ０ｇ氯化 钠 ， 混匀 ， 加人 ２ Ｌ异丙 醇 一乙酸 乙酯 （０６ ）振荡 提 取 ２ ５ ｍ ４ ：０ ， ０
１ 材 料与 方 法
分 别用 ５ｍ Ｌ水 和 ３ｍ Ｌ乙醇 冲洗 柱子 ， 去流 出液 ， 弃 用 ６ｍ Ｌ乙 醇 一浓 氨 水 （８ ２ 冲 洗 柱 子 ， 集 流 出 ９ ：） 收 液 ， 流 出液浓 缩 至干 。于 净化 、 干 的残 渣 中加 人 将 吹 ０ １ｍ ｌＬ 盐 酸 １０ ， 残 渣 充 分 溶 解 。 用 ． ｏ ／ ０ 使 ０４ ￣ ＇ 膜 过滤 ， ．５ｍｎ Ｌ 滤 收集 滤液 作 为供试 液 。 ２ ３ 色谱 条 件 色 谱 柱 ： Ｄ ． Ｏ Ｓ—Ｃ ８ ２０ ｎ ｌ １，５ ｌ × ｎ
ｍｎ ｉ 。提取 完毕 ， 放置 ５ｍｎ 若有 乳化 层再离 心 ） ｉ（ 。 用 １ Ｌ异 丙 醇 一乙 酸 乙 酯 （ ：０ 再 重 复 萃 取 １ ５ｍ ０ ４ ６）
次 ， 并 有 机 相 ，０ 合 ６ ℃旋 转 蒸 发 仪 浓 缩 至 近 干 。用
瘦肉精ELISA法 - 2018 - 2
四、酶标仪使用
五、结果判定
标准曲线的绘制 以标准品百分吸光率为纵坐标，以克伦特罗标准品浓度（
ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线。将样本的百分 吸光率代入标准曲线，从标准曲线上读出样本所对应的浓度 ，乘以对应的稀释倍数即为样本浓度。
克伦特罗检测（ELISA检测法）
《 GB/T 5009.192-2003 动物性食品中克伦特罗 残留量的测定》
实验的目的
1、通过本次试验同学们能够掌握ELISA法Fra bibliotek测瘦肉精 的原理
2、掌握快速检测的基本程序及操作，具有独立进行快
速检测的基本技能。
一、实验原理
间接竞争ELISA方法
在酶标板孔条上预包被克伦特罗 抗原，
30min，反之则减少反应时间 7.最佳反应温度是25℃，温度过高或过低将导致结果误差。
如何进行半对数作图
六、注意事项
1.试剂使用前要回复到室温否则影响结果（室温放置30min 以上）
2.洗版拍干后要立即进行下一步否则影响结果 3.每加一种试剂前需轻轻摇匀 4.终止液为2M浓硫酸，避免接触皮肤 5. 0号标准的吸光值小于0.5时，试剂可能变质 6.加入底物A和B显色放应，若颜色较浅，可延长反应时间到
试剂：
0.1M HCI、0.1MNaOH溶液、乙腈-0.1MHCI 溶液 克伦特罗酶标物、克伦特罗抗试剂、去离子水、底物A、底
物B、终止液 标准品：浓度为0、0.1、0.3、0.9、2.7、8.1ppb（10-3ug/ml） 对照品：浓度为100ppb
三、操作过程
1、样品前处理
酶联免疫吸附法(ELISA)检测猪肉中盐酸克伦特罗
酶联免疫吸附法（ELISA）检测猪肉中盐酸克伦特罗作者：薛金英来源：《中国动物保健》2014年第10期盐酸克伦特罗（俗称瘦肉精）为一种人工合成的β-肾上腺素兴奋剂，具有扩张支气管的作用，常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病。
当其应用量达到治疗量的5～10倍时，其有能量重分配作用，可使肌肉合成增加，脂肪沉积减少，因此俗称为“瘦肉精”。
在畜牧业生产中一些非法使用者将其作为一种和生长促进剂添加到动物饲料中，用以改善胴体的品质，同时也造成食品中盐酸克伦特罗（瘦肉精）的残留。
当人们食用盐酸克伦特罗残留的产品后会出现一系列的中毒症状。
动物源性食品药物残留问题逐渐引起人们的重视。
本法用于定量、定性检测猪肉中盐酸克伦特罗的残留。
1试验原理采用间接竞争ELISA法，在微孔板上包被抗盐酸克伦特罗检测抗原，样品中的盐酸克伦特罗将和酶标板上的盐酸克伦特罗检测抗原竞争结合盐酸克伦特罗抗体，盐酸克伦特罗检测抗原结合的盐酸克伦特罗抗体再与同时加入的酶标二抗结合，洗涤后，用TMB底物系统显色，微孔板吸光值与样品中盐酸克伦特罗含量成负相关，与标准曲线比较再乘以浓度比值即可得出盐酸克伦特罗在样品的实际含量。
2试验方法（稀释倍数为4倍）称取1.0 g（±0.05 g）均质样品于50 mL聚苯乙烯离心管中，加入1 mL 0.1 M盐酸，再加入2 mL提取工作液，充分振荡混匀5 min，4 000 rpm（20～25℃）离心10 min。
取1 mL上清液加入约25 μL 1 M 氢氧化钠调节pH至6.5～7.5之间，充分振荡混匀，取50 μL用于分析。
如果上层中存在白色脂肪层，取样时应避开。
试剂准备：将10×浓缩洗涤液和蒸馏水（或去离子水）按1∶9充分混匀，即为1×洗涤液。
编号：将盐酸克伦特罗标准溶液和待测样品对应微孔按序编号，建议每个标准溶液和待测样品均做重复孔。
加样：加入标准溶液或样品50 μL，然后每孔分别加入盐酸克伦特罗酶标二抗50 μL和盐酸克伦特罗抗体溶液50 μL。
酶联免疫吸附法测定猪肉中盐酸克伦特罗的方法
酶联免疫吸附法测定猪肉中盐酸克伦特罗的方法作者：张清超来源：《现代食品》 2017年第11期盐酸克伦特罗俗称瘦肉精，是人工合成类的β- 肾上腺素兴奋剂的一种，在治疗支气管扩张方面有显著效果，用量适当时，是防治哮喘、肺气肿等肺部疾病的有效物质；但当其用量为正常治疗量的5 ～ 10 倍时，在能量重分配的作用下，将导致脂肪沉积异常减少、肌肉合成异常增加，部分非法使用者往往将其添加到动物饲料中，用以改善动物胴体品质。
当动物食用盐酸克伦特罗后，其体内将残留不同程度的盐酸克伦特罗，用其制作的食品一旦被人们食用，将引发一系列中毒症状，严重危害人体生命安全。
调查显示，盐酸克伦特罗一次摄入量过大，人体将产生呕吐、心跳骤然加速等异常生理反应，严重者甚至直接死亡，因此被世界上大多数国家禁用。
近年来，在我国的严厉打击下，非法生产销售添加盐酸克伦特罗食品的现象显著减少，但畜产品抽检的实际工作显示，瘦肉精仍时有检出，加强对畜产品中盐酸克伦特罗的检测势在必行。
在多种检测方法中，胶体金免疫层析法、酶联免疫吸附法较为常见，广泛应用于畜牧业中，具有准确率高、操作简便、耗时短等优点。
下面本文将就酶联免疫吸附法测定猪肉中盐酸克伦特罗的方法进行进一步分析和总结。
1 原料与方法1.1 原料到附近市场随机抽取一批剔除杂质、脂肪的无皮精肉，使用高速捣碎机对无皮精肉进行处理，彻底捣碎后将所有精肉混合均匀并置于冰箱冷冻备用。
检测时，从冰箱冷冻室抽取5 g 捣碎样品，将25 mL 的50 mmol/L HCl与样品混合，持续摇动至均质。
在离心管中加入5 g 均质物，以10 000 r/min 的速度高速离心15 min，分离血清，提取上清液，在上清液中加入300μL 的1 mol/L NaOH，混匀并静置15 min。
15 min 后，在混合上清液中加入4 mL 的500 mmol/L KH2PO4，混匀静置，保存在温度为4 ℃左右的环境中。
90 min 后，取出混合液，以10 000 r/min的速度高速离心15 min，分离上清液，待检，待检标本共10 份[1]。
瘦肉精相关检测标准汇总
瘦肉精相关检测标准汇总央视曝光双汇济源分公司收购含“瘦肉精”猪肉，瘦肉精再次引起人们的关注，因此汇总整理出瘦肉精相关检测标准，供大家参考。
GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定本标准规定了动物性食品中克伦特罗的测定方法。
本标准适用于新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中克伦特罗残留的测定。
本标准也适用于生物材料(人或动物血液、尿液)中克伦特罗的测定。
本方法检出限：第一法气相色谱—质谱法为0.5μg/kg;第二法高效液相色谱法为0.5μg/kg；第三法酶联免疫法为0.5μg/kg。
线性范围：第一法气相色谱—质谱法为0.025ng～2.5ng；第二法高效液相色谱法为0.5ng～4ng；第三法酶联免疫法为0．004ng～0.054ng。
GB/T20189-2006饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法本标准规定了检测动物饲料中莱克多巴胺含量的高效液相色谱（HPLC）方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中莱克多巴胺含量的测定。
GB/T21036-2007饲料中盐酸多巴胺的测定高效液相色谱法本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中盐酸多巴胺含量的测定。
GB/T22147-2008饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法本标准规定了同步测定饲料中β-激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的液相色谱质谱联用法。
GB/T21313-2007动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法本标准规定了β-受体激动剂类兽药残留检测的制样方法和高效液相色谱/质谱确证方法。
本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾等动物源性食品以猪屎中克伦特罗、沙丁胺醇、妥布特罗、特布它林、非诺特罗、福莫特罗、莱克多巴胺、异丙喘宁等8种β-受体激动剂类残留量的高效液相色谱-质谱/质谱测定。
GB/T22286-2008动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法本标准规定了动物源性食品中沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林（terbutaline）、塞曼特罗（cimat-erol）、塞布特罗（cimbuterol）、莱克多巴胺（ractompamine）、克仑特罗（clenbuterol）、溴布特罗（brombu-terol）、苯氧丙酚胺（isoxsuprine）、马布特罗（mabuterol）、马贲特罗（mapenterol）、溴代克仑特罗（brom- chlorbuterol）残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。
气相质谱法测定瘦肉中的克伦特罗
气相质谱法测定瘦肉中的克伦特罗罗杰鸿 邓建文｜文克伦特罗，又名瘦肉精，是一种对动物具有促进生长，减少脂肪含量的兴奋剂类物质，曾经广泛应用于生猪的饲养。
然而由于克伦特罗易在动物组织形成残留,当人们食用后,就会发生中毒,所以我国已禁止作为生长促进剂使用。
但由于其经济效益，非法使用克伦特罗的现象依然存在，因此，建立有效的克伦特罗检测方法具有重要意义。
气相质谱法测定克伦特罗的方法比较多，例如GB/T 5009.192-2003，但有些方法步骤多，繁琐，在实验的基础上，我们改进了克伦特罗的测定方法。
材料与方法试剂与仪器。
克伦特罗标准品购自德国Dr.E。
N,O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）/三甲基氯硅烷（TMSCl）购自sigma，材料为市场常见的瘦肉。
正己烷，乙酸乙酯等为色谱纯，高氯酸，氢氧化钠等为分析纯。
气相质谱联用仪。
色谱条件。
色谱柱：HP-5MS，30 m x 0.25 mm x 0.25μm;进样口温度：240o C ；进样量：1μL，不分流；柱温程序：70o C 保持1min，以18o C/min 速度升至200o C，以5o C/min 的速度再升至245o C，再以25o C/min 升至280o C 并保持2min。
EI 源：电子轰击能量：70eV ；离子源温度：200o C ；接口温度：285o C ；溶剂延迟：12min ；EI 源检测特征峰：86、187、243、262。
分析过程提取。
称取10.0 g 瘦肉，用20mL 0.1mol/L 高氯酸溶液，匀浆后，超声萃取20min,取出置于80o C 水浴中加热30min。
取出冷却后离心15min。
倒出上清液，沉淀用5mL 0.1mol/L 高氯酸溶液洗涤，再离心。
合并高氯酸溶液后，加入10mL 正己烷，震荡，分层后弃掉正己烷，用10mL 正己烷重复萃取油脂一次。
用1mol/L 的氢氧化钠溶液调节水相的PH 至9.5左右，加入8g 氯化钠，混匀后加入10mL 乙酸乙酯，涡旋振荡提取20min。
动物性食品中盐酸克伦特罗(瘦肉精)残留的检测
阴性 ： Ｃ线条显色， Ｔ线条肉眼可见， 无论颜色深浅均判
人（ 女性） 经口Ｔ Ｌ （ Ｄ ｏ 最低中毒剂量）４６０ ｇｋ 。小鼠静 ： ０ ／ｇ ｎ 脉 Ｌ Ｓ（ Ｄ ０半数致死剂量） ２ ６０ｖ ／ｇ ：７ ０ ｇｋ 。所 以盐酸克伦特 罗早期仅在医学上用于急救和肺科病（ 主要是平喘） 。因副 作用较大已被禁用。 ２ 样品快速判断方法 看该猪肉是否具有脂肪（ 猪油）如该猪肉在皮下就是瘦 ， 肉或仅有少量脂肪， 则该猪肉就存在含有“ 精” 瘦肉 的可能。 喂过“ 瘦肉精” 的瘦肉外观特别鲜红， 后臀较大， 纤维比 较疏松， 切成 ２ 指宽的猪肉比较软， ～３ 不能立于案， 瘦肉与 脂肪间有黄色液体流出， 脂肪特别薄； 而一般健康的瘦猪肉 是淡红色， 肉质弹性好， 瘦肉与脂肪间没有任何液体流出。
为阴性。
对高血压、 心脏病、 甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更
大， 严重的可导致死亡。
１１２ 预防方法 ： ．． 控制源头， 加强法规的宣传， 禁止在饲料
阳性 ： Ｃ线条显色， Ｔ线条不显色， 判为阳性。 无效 ： Ｃ线条不显色 ， 无论 Ｔ线条是否显色， 该试纸均
食 品 质 量 与 安 全
４ ｇ次， 次／ 儿童 ５ ０ ／ ３ 日； ｖ 岁以上 ５ ～２ ｇ次， 次／ ｇ Ｏ ｉ ｂ ／ ３ 日。
达到提高瘦 肉率的效果。它用量大、 使用的时间长、 代谢 慢， 所以在屠宰前到上市， 在猪体内的残留量都很大。这个
残留量通过食物进入人体， 就使人体渐渐地， 积蓄中毒。如 果一次摄入量过大， 就会产生异常生理反应的中毒现象， 因 此而被禁用。国内养猪户不顾农业部的规定， 为了使猪肉 不长肥膘， 在饲料中掺入瘦肉精。猪食用后在代谢过程中 促进蛋白质合成， 加速脂肪的转化和分解， 提高了猪肉的瘦
猪肉中克伦特罗的检测
猪肉中克伦特罗的检测作者：来源：《食品安全导刊》2011年第05期盐酸克伦特罗是一种β－兴奋剂，猪食用该物质后可在代谢过程中促进体内蛋白质的合成，加速脂肪的转化和分解，从而提高猪肉的瘦肉率，因此其被称为“瘦肉精”。
瘦肉精由于使用量大、使用时间长，加之在猪体内代谢慢，所以其在猪体内的残留量很大。
如果这些残留的瘦肉精通过食物链进入人体，便可导致人体食物中毒，因此一直被禁用。
然而一些养猪户不顾相关部门的规定，在饲料中掺入大量瘦肉精，视人们的食用安全而不顾，严重扰乱了肉类食品市场的秩序，给人们的日常生活带来很大影响。
在这种情境之下，如何采用科学快速的方法对猪肉中的瘦肉精进行检测，实现有效监管成为亟待解决的问题。
对于猪肉中克伦特罗的检测而言，样品前处理显得尤为重要。
为此，本文介绍了一种快速准确的检测方案，该方案使用LabTech公司全自动固相萃取仪一定量浓缩系统进行样品前处理工作，样品经提取、初步净化后，全自动完成猪肉样品的固相萃取一洗脱液浓缩一溶剂置换过程，最终样品可直接用于液相检测，极大地简化了实验人员的工作步骤，液相色谱检测准确、样品测定平行性好。
回收率高。
仪器与试剂仪器：LabTech PrepElite-VS全自动固相萃取一定量浓缩仪，LabTechLC600二元梯度高效液相色谱系统；试剂：乙酸乙酯，10％碳酸钠溶液、0.1 mol／L的盐酸溶液、2.5mol／L氢氧化钠溶液、甲醇(色谱级)、4％氨水甲醇、去离子水。
实验方法样品前处理1.提取方法：将50g猪肉平均分成10份，准确进行称重。
取其中5份加入15mL乙酸乙酯，3mL10％碳酸钠溶液置于50mL离心管中，10000rpmT均质2min，6000 rpm下离心2min，将上清液转入另一离心管中。
用15mL乙酸乙酯重复提取残渣，合并乙酸乙酯。
向乙酸乙酯提取液中加入5mL、0.1moI／L的盐酸溶液，涡旋混合1min，然后在6000rpmT离心lmin，收集下层水相。
猪肉中克伦特罗的检测
38 食品安全导刊 2011年5月刊ANAlySIS & TEST 分析与检测□ 莱伯泰科有限公司 供稿盐酸克伦特罗是一种β-兴奋剂，猪食用该物质后可在代谢过程中促进体内蛋白质的合成，加速脂肪的转化和分解，从而提高猪肉的瘦肉率，因此其被称为“瘦肉精”。
瘦肉精由于使用量大、使用时间长，加之在猪体内代谢慢，所以其在猪体内的残留量很大。
如果这些残留的瘦肉精通过食物链进入人体，便可导致人体食物中毒，因此一直被禁用。
然而一些养猪户不顾相关部门的规定，在饲料中掺入大量瘦肉精，视人们的食用安全而不顾，严重扰乱了肉类食品市场的秩序，给人们的日常生活带来很大影响。
在这种情境之下，如何采用科学快速的方法对猪肉中的瘦肉精进行检测，实现有效监管成为亟待解决的问题。
对于猪肉中克伦特罗的检测而言，样品前处理显得尤为重要。
为此，本文介绍了一种快速准确的检测方案，该方案使用LabTech公司全自动固相萃取仪-定量浓缩系统进行样品前处理工作，样品经提取、初步净化后，全自动完成猪肉样品的固相萃取-洗脱液浓缩-溶剂置换过程，最终样品可直接用于液相检测，极大地简化了实验人员的工作步骤，液相色谱检测准确、样品测定平行性好、回收率高。
猪肉中克伦特罗的检测——猪肉中的瘦肉精检测整体解决方案仪器与试剂仪器：LabTech Prep Elite-VS全自动固相萃取-定量浓缩仪，LabTech LC600二元梯度高效液相色谱系统；试剂：乙酸乙酯、10%碳酸钠溶液、0.1mol/L的盐酸溶液、2.5mol/L氢氧化钠溶液、甲醇（色谱级）、4%氨水甲醇、去离子水。
实验方法样品前处理1.提取方法：将50g猪肉平均分成10份，准确进行称重。
取其中5份加入15mL乙酸乙酯、3mL10%碳酸钠溶液置于50mL离心管中，10000rpm下均质2min，6000rpm下离心2min，将上清液转入另一离心管中。
用15m L乙酸乙酯重复提取残渣，合并乙酸乙酯。
瘦肉精相关检测标准汇总
瘦肉精相关检测标准汇总央视曝光双汇济源分公司收购含“瘦肉精”猪肉，瘦肉精再次引起人们的关注，因此汇总整理出瘦肉精相关检测标准，供大家参考。
GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定本标准规定了动物性食品中克伦特罗的测定方法。
本标准适用于新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中克伦特罗残留的测定。
本标准也适用于生物材料(人或动物血液、尿液)中克伦特罗的测定。
本方法检出限：第一法气相色谱一质谱法为0.5pg/kg第二法高效液相色谱法为0.5pg/kg；第三法酶联免疫法为0.5pg/kg。
线性范围：第一法气相色谱一质谱法为0.025ng〜2.5ng；第二法高效液相色谱法为0.5ng〜4ng；第三法酶联免疫法为0. 004ng〜0.054ng。
GB/T20189-2006饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法本标准规定了检测动物饲料中莱克多巴胺含量的高效液相色谱(HPLC)方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中莱克多巴胺含量的测定。
GB/T21036-2007饲料中盐酸多巴胺的测定高效液相色谱法本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中盐酸多巴胺含量的测定。
GB/T22147-2008饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法本标准规定了同步测定饲料中P -激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的液相色谱质谱联用法。
GB/T21313-2007动物源性食品中6-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法本标准规定了P -受体激动剂类兽药残留检测的制样方法和高效液相色谱/ 质谱确证方法。
本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾等动物源性食品以猪屎中克伦特罗、沙丁胺醇、妥布特罗、特布它林、非诺特罗、福莫特罗、莱克多巴胺、异丙喘宁等8种P -受体激动剂类残留量的高效液相色谱-质谱/质谱测定。
GB/T22286-2008动物源性食品中多种B -受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法本标准规定了动物源性食品中沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林(terbutaline)、塞曼特罗(cimat-erol)、塞布特罗(cimbuterol)、莱克多巴胺(ractompamine)、克仑特罗(clenbuterol)、漠布特罗(brombu-terol)、苯氧丙酚胺(isoxsuprine)、马布特罗(mabuterol)、马贲特罗(mapenterol)、漠代克仑特罗(brom- chlorbuterol)残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。
关于“动物性食品中克伦特罗(瘦肉精)残留的检测”的实验分析
关于“动物性食品中克伦特罗(瘦肉精)残留的检测”的实验分析LINK链接猪肉是否含瘦肉精的迅速推断办法看该猪肉的脂肪(猪油)，如该猪肉在皮下就是瘦肉或仅有少量脂肪，则该猪肉就可能含有“瘦肉精(CLB)”。
含有“瘦肉精”的瘦肉外观特殊鲜红，纤维比较疏松，切成二三指宽的猪肉比较软，不能立于案，瘦肉与脂肪间有黄色液体流出，脂肪特殊薄。
而普通健康的瘦猪肉是淡红色，肉质弹性好，瘦肉与脂肪间没有任何液体流出。
购买时一定要看清该猪肉是否盖有检疫印章和检疫合格证实。
一、样品迅速检测办法 1.胶体金检测卡法(1)特点①操作容易、检测速度快，尿样检测时光约5min，组织约10min。
②无需其他仪器设备。
③样品量需求少。
④适用于大量样本的迅速步筛。
⑤结果推断容易明白。
(2)推断结果①阴性:C线条显色，T线条肉眼可见，无论色彩深浅均判为阴性。
②阳性:C线条显色，T线条不显色，判为阳性。
③无效:C线条不显色，无论T线条是否显色，该试纸均判为无效。
(3)检测对象猪尿液、组织；猪饲料；猪肉制品。
(4)适用单位生殖养殖场、屠宰场，农业、贸易等主管部门。
2.酶联免疫(ELISA)法(1)检测原理测定的基础是抗原抗体反应。
微孔板包被有针对克伦特罗IgG的包被抗体。
克伦特罗抗体被加入，经过孵育及洗涤步骤后，加入竞争性酶标志物、标准或试样溶液。
克伦特罗与竞争性酶标志物竞争克伦特罗抗体，没有与抗体衔接的克伦特罗酶标志物在洗涤步骤中除去。
将底物(过氧化尿素)和发色剂(四甲基联苯胺)加入孔中孵育，结合的标志酶将无色的发色剂转化为蓝色产物。
加入反应停止液后使色彩由蓝色改变为黄色。
在450nm处测量吸光度值，吸光度壁纸与克伦特罗浓度的自然对数成反比。
(2)试剂磷酸二氢钠、高氯酸、异丙醇、乙酸乙酯、0.1mol/L高氯酸溶液、1mol/L氢氧化钠溶液、pH=6的0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液、异丙醇+乙酸乙酯(40+60)、针孔式微孔过滤膜(0.45μm，水相)、克伦特罗酶联免疫试剂盒、96孔板(12调×8孔)包被有针对克伦特罗IgG的包被抗体、克伦特罗系列标准液(最少5倍比稀释第1页共4页。
猪肉中瘦肉精的检测
猪肉中瘦肉精的检测高峰101279012摘 要鉴于盐酸克伦特罗(瘦肉精)在动物性食品中的残留对人体和国民经济造成了巨大的危害，本文介绍了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗(瘦肉精) 的几种分析检测方法，并对未来的发展方向作了展望。
关键词：瘦肉精GC-MS HPLC ELISA1 引言瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。
在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗(Clenbuterol，CLB)，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。
当它们以超过治疗剂量5—10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此，β—受体激动剂被大量非法用于畜牧生产，其中最常用的有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等。
长期食用含有β—受体激动剂残留的食品将对人体健康产生极大的危害，可诱发和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏，四肢、脸、颈部骨骼肌震颤；另外还能引起代谢紊乱，对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒。
[1]盐酸克伦特罗(Clenbuteerol，CLB) ，又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺，俗名瘦肉精，化学名为α—[ (叔丁氨基) 甲基]—4—氨基—3，5—二氯苯甲醇盐酸盐，分子式为C12 H18Cl12N2O•HCl ，相对分子质量为313.65。
目前，检测瘦肉精残留常用的色谱技术有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱—质谱联用法(GC—MS)、高效液相色谱—质谱联用法(HPLC—MS) 、毛细管电泳法(CE)等。
中国已将高效液相色谱法（HPLC）作为检测饲料中盐酸克伦特罗残留的半确证法，将GC—MS 法定为确证性方法，主要用于最后确认和仲裁。
对于动物性食品，GB/T 5009.192—2003 “动物性食品中克伦特罗残留量的测定”规定的第一法为气相色谱—质谱法，第二法为高效液相色谱法，第三法为酶联免疫法。
肉类及饲料中克伦特罗快速检测ELISA试剂盒 使用说明书(中文版)
致所有样品的 ＯＤ 值偏低。使用之后立即将所有试剂放回 ２—８℃冰箱。 ３． 严格控制反应温度和时间 ，并尽量使用移液器加样； 结果判定以酶标仪读数为准 。 ４． 试剂混合要均匀 ，否则会出现重复性不好的现象。 ５． 在所有恒温孵育过程中， 避免光线照射，用封板膜封住微孔板 。 ６． 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。 所
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美国信合免疫诊断公司 AccuAffinity, Inc.
【注意事项】 １． 保存试剂盒于 ２—８℃，不要冷冻；将不用的微孔板放进自封袋重新密封；无色的显色液对光敏感，因
此要避免直接暴露在光线下。 ２． 使用之前将所有试剂温度回升至室温（２０—２５℃）。室温低于 ２０℃或试剂及样本没有回到室温可能导
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２． 定量测定 ａ）计算 Ｂ／Ｂ０ 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（Ｂ）除以第一个标准品 Ａ（零标准品）的吸光度值（ Ｂ０） 再乘以 １００％，即百分吸光度值。 百分吸光度值（％）＝Ｂ／Ｂ０×１００％ Ｂ — 标准溶液或样本溶液的平均吸光度值 Ｂ０ — ０ ｎｇ／ｍＬ 标准溶液的平均吸光度值 ｂ）绘制标准曲线，计算样本中瘦肉精浓度 以克伦特罗标准品浓度为 Ｘ 轴，对应的百分吸光度值为 Ｙ 轴，在半对数坐标纸上绘制标准曲线图。相对应 每一个样品的浓度可以从标准曲线上读出 。也可以用回归方程法，计算出样本溶液浓度 。利用计算机专业 软件，更便于大量样品的快速分析。 【产品技术指标】 标准曲线范围：０ – ８．１ ｎｇ／ｍＬ 试剂盒定量区间：０．１ – ８．１ ｎｇ／ｍＬ 检测时间：４０ 分钟 样本最低检测限： 肉类…………………………… １ ｐｐｂ 饲料 ………………………… ０．２ ｐｐｂ 尿样…………………………… ０．５ ｐｐｂ 回收率 ……………………… ７０－１３０％ 交叉反应： 沙丁胺醇……………………… ３．８％ 莱克多巴胺…………………… ＜０．２％ 灵敏度（Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，定义为 ６ 个零标准品吸光度值的平均值减去 ３ 倍标准方差所对应的浓度）： ０．１ ｎｇ／ｍＬ （０．１ ｐｐｂ） 精密度（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ）： 板内变差系数（ Ｉｎｔｒａ －ａｓｓａｙ ＣＶ）＜１２％ 板间变差系数（Ｉｎｔｅｒ－ａｓｓａｙ ＣＶ）＜１５％
进出口饲料中克伦特罗、沙丁安醇残留量的检验方法：液相色谱法
进出口饲料中克伦特罗、沙丁胺醇残留量的检验方法液相色谱法Determination of clenbuterol and salbutamol residues in animal feed for import and export—Liquid chromatographic methodSN／T 1116—2002 前言本标准是按照GB／T 1. 1—2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》及SN／T 0001—1995<<出口商品中农药、兽药残留量及生物毒紊检验方法标准编写的基本规定》的要求进行编写的。
其中测定方法是参考了国内外有关文献，经研究、改进和验证后制定的。
本标准同时制定了抽样和制样方法。
测定低限是根据液相色谱测定饲料中克伦特罗、沙丁胺醇残留量方法的灵敏度而制定的。
本标准的附录A和附录B为资料性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准由中华人民共和国湖南出入境检验检疫局负责起草。
本标准主要起草人：戴华、袁智能、黄志强、陈新焕。
本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。
1 范围本标准规定了进出口饲料中克伦特罗、沙丁胺醇残留量检验的抽样、制样和液相色谱测定方法。
本标准适用于进出口全价饲料和预混饲料中克伦特罗、沙丁胺醇残留量的检验。
2 抽样和制样2.1 检验批以不超过2 000件为一检验批。
同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。
2.2 抽样数量(见表1)批量最低抽样数500以下15501～l 000 251 001～2 000 302.3 抽样工具2.3.1 取样勺。
2.3.2 分样板。
2.3.3 分样布。
2.3.4 盛样器：筒或袋，可密封。
2.4 抽样方法按2.2规定的应抽样袋数从堆垛的各部位随机抽取样袋，逐件开启。
从每袋中用取样勺抽取代表性样品约500 g。
将抽取样品立即倒入盛样器内。
每袋所取样品的量应基本一致，每批所抽取的样品总量应不少于4 kg。
气相色谱-质谱法测定动物性食品中三种β-激动剂的残留量
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宋永青 郭文萍 赵蓉 牛晋阳
三
（ 中国肉类食 品综合研 究中心 北京 １ ０ ６ ） ０ ８ ０
摘 要 ：建立 了用气相 色谱 一 质 谱同时测 定动物
性 食品 中克伦特 罗、 沙丁胺 醇和 莱克 多
巴胺 残 留 量 的检 测 方 法 。 样 品 用 乙酸 胺
ｂ ｆ ｅ ｆ ｐ ５． ｎ ｈ ｘ ｒ ｃ ｉ ｗ ｓ ｈ ｄ Ｏ ｕ ｆ ｒ ｏ Ｈ ２ ａ ｄ ｔｅ ｅ ｔ ａ ｔ ｎ ａ ｙ ｒ — ｏ
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酶联免疫法测定猪肉、猪肝和猪尿中盐酸克伦特罗
酶联免疫法测定猪肉、猪肝和猪尿中盐酸克伦特罗何红梅;张春荣;李锐;李振;张昌朋【摘要】Four native-made and imported testing cases for enzyme-linked immunoassay（ELIA） were studied comparatively for their efficiency in determination of residual amount of clenbuterol in pork,pork liver and pig urine.Standard solutions of clenbuterol at concentration levels of 1,2,3,5 and 10 μg·kg-1（or μg·L-1） were added to 3 different samples mentioned above and tested separated.As shown by the results of testing,① quite obvious deviations were found between the native-made and imported testing cases,and ② the testing cases were relatively suitable for use in the ELIA of pig urine samples,while for the ELIA of the tissuesamples,modifications for the methods used in some of the testing cases were found to be necessary.%对4种国产及进口的酶联免疫法测试盒测定猪肉、猪肝及猪尿中克伦特罗残留量的性能及效果作了对比试验。
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分 子 式：Cl2H18Cl2N2O 分 子 量：277.19
二、国家限量标准
肉制品的国家标准中没有注明瘦 肉精的限值。不过国家禁止使用瘦肉 精，也就是说，限量是不得检出。根 据仪器的精密程度和检测方法，国内 一般是0.5ppb，国外（日本）是 0.05ppb。
动物性食品中克伦特罗残留量的测定
食品1302班24号 彭岭
CONTENTS 目 录
01 克伦特罗的简介 02 限量标准及检出限 03 检测方法 04 检测方法的评价
一、克伦特罗的简介
克伦特罗（Clenbuterol）既不是兽药，也不属于饲料添 加剂，而是一种激素类物质，有极强的热稳定性。并严重 危害畜牧业健康发展和畜产品安全。
酶联免疫法(ELISA) 高效液相色谱法(HPLC) 气相色谱—质谱法(GC-MS) 二级质谱法(GC-MS/MS)
GC-MS/MS法的检测步骤
样品提取
称取样品5g
置离心管中
加高氯酸10mL
置混匀管中
80℃超声提取30min
冷却至室温
6000r/min离心20min
倾出上清液
样品净化
甲醇、超纯水各3mL
固相提取柱活化
高氯酸、超纯水和含5%氨 水的甲醇各3mL
洗涤
去除杂质
样品的衍生
加入美托洛尔内标试剂
氮气流吹干
迅速加入衍生剂，
1 min后
微波炉中低档衍生化反应
冷却到室温
氮气流吹干
加入甲苯
供GC-MS分析。
四、检测方法的评价
检测方法
优点
缺点
高效液相色谱法 检测精确度高，假阳性率低， 检测过程烦琐、检测时间
克伦特罗的检出限
气相色 谱—质谱
法
高效液相 色谱法
酶联免疫 法
检出限：0.5μg/kg 线性范围：0.025ng—2.5ng
检出限：0.5μg/kg 线性范围：0.5ng—4ng
检出限：0.5μg/kg 线性范围：0．004ng—0.054ng
三、克伦特罗的检测方法
NO.1 NO.2 NO.3 NO.4
样品不必衍生
长，需贵重仪器同时存在情 况下对某种特定的残留物进 行定性、定量分析。灵敏度 更高，假阳性率更低
同 HPLC 法一样
酶联免疫法
灵敏度高、操作简便、检测 不能实现在线检测,而假阳
迅速
性率较高。
谢