BD Calibur流式细胞分析仪工作指南

流式细胞分析仪(BD Calibur)

工作指南

暨南大学生物医药研究院：周玉英

2012年06月

第一章流式细胞仪管理使用守则

1. 优先权原则：

本流式细胞分析分选仪器由暨南大学“211”重点学科“生物技术与生物工程

药物”学科组所用并使用，故在同一时间段内：

● 本校优先于外校使用；

● 学科组优先于外单位使用；

● 学科组内各单位使用优先权采用轮流制，相关单位优先权周可优先使用。

2. 专人使用原则：

● 流式细胞分析仪（Calibur）必须由已培训合格的的实验技术老师或学生严

格按照操作规程进行操作。

● 对于流式分选仪Influx，只能由培训合格的课题组负责老师操作，严禁学生

操作。

● 课题组负责老师或学生需定期接受培训，培训后合格后若两个月之内未使

用仪器，必须再次培训合格后才可使用流式仪。

3. 预约原则：

● 请与操作老师沟通后至少提前一天预约，预约时先提交有导师签字的预约表，再

由管理人员统一在网上预约。

●不能按预约时间使用流式时，至少提前一天取消预约，否则将正常收费。

●不接受提前超过2周以上的预约。

4. 做好使用登记：

仪器使用完毕后，切记进行仪器使用记录登记，管理人员会核对是否与预约记

录的一致性。

5. 随时保持清洁：

●进入流式房请更换拖鞋，离开流式房时，请将拖鞋放回鞋柜内。

●禁止随手乱放杂物（如一次性手套、塑胶手套，用完的样品等）。

●走前请带走制造的垃圾（包括细胞垃圾、耗材垃圾和生理盐水瓶等）。

●实验老师在课题组的优先权周实验老每周二、周五下午清洁流式房卫生，包括清洁地面、桌面、倒掉除湿机水箱中的水。

7. 刻录数据：

刻录数据只能用一次性的CD盘或DVD盘，严禁用自备U盘或可擦写光盘进行数据刻录。

8. 安全使用原则：

● 必须严格按照培训时的流式使用规程操作仪器，严禁违规操作。

● 对有毒或者有污染的样品需提前对操作老师说明，严禁随处乱放有毒、有污染的样品。

● 仪器使用完毕后，离开房间时，一定要锁好门窗，包括流式房门和725房间的玻璃门。

6. 处罚措施：

请遵守上述规则，管理人员将对使用者进行监督和规范，对违规将进行登记并通报，连续三次违规者，停用整个课题组使用权一周。

第二章流式细胞分析仪（Calibur）操作手册）

1. 仪器参数介绍

可检测四色，FL1通道用来检测FITC、AlexaFluor 488荧光信号，FL2可检测PE、PI荧光信号，FL3可检测7-AAD、Percp、Pe-Cy7、Percp-Cy5.5，FL4可以检测APC、Alexfluor 647荧光信号

2. 准备工作：

●检查鞘液桶中鞘液是否足够，若鞘液不足，先将气阀位置扳到VENT状态，打

开鞘液桶桶盖，添加鞘液至鞘液桶体积的4/5，并确保旋紧桶盖，以防漏气造成无法提供上样压力。

●确保废液桶中的废液清空，并加入2ml次氯酸钠溶液，旋紧桶盖。。

●开机之提前20min开空调，使流式房内温度预冷20min。

3. 开机

1）确保UPS一直处于运行状态。

2）打开稳压电源开关。

3）打开Calibur流式细胞仪的开机按钮（位于流式仪右侧的绿色按钮），此时流式细胞仪功能控制钮的显示STANDBY。

4）电脑开机，输入密码，待仪器自检成功后（仪器自检时），方可使用。

注：必须流式细胞仪开机后，再对电脑开机，否则容易引起不能正常联机

5）将鞘液桶附近的气阀位置扳至RUN状态。

6）仪器预热10分钟，将流式管中盛有1ml超纯水，放置于进样针上，并将上样管支撑架移至中位，执行仪器PRIME功能键，使得功能键自动恢复到STANDBY 状态，重复一次，以排除液路中的气泡。

4. 仪器设定或调整

1）进入CELLQuest软件，将出现一个“Untitled”窗口，将窗口最大化。

2）按下快捷键：+B，完成流式仪和软件之间的联机（或者从Acquire→Connect to Cytometer）。

3）按下快捷键：+1，+2，+3，+4，打开Detectors/Amps、Threshold、Compensation、Status四个对话框，将对话框窗口依次排列至合适位置。

4）建立模式文件，利用工具，根据样品特点设计模板。

A．例如对单染FITC的样品，可以先用（右下角标记2的工具）散点图工具设FSC-SSC双参数流式散点图，(FSC参数反应细胞的大小，SSC反应细胞内组成成分的复杂度)，再用直方图工具（右上角标记1的工具）设一个FL1-Counts 流式直方图。

散点图直方图

B．对双染样品，如FITC-AnnexinV和PI双染的样品，设计FSC-SSC,FL1-SSC,FL2-SSC,FL1-FL2四个流式图。

5）激活流式图，出现

对话框，Plot Source选项中选择Acquisition→Analysis,并根据样品管的不同

选择X与Y轴参数。

（首先要明确样本的荧光染料是在哪个通道获取：如FITC/GFP荧光染料在FL1 通道检测，PI、PE 在FL2通道检测、Percp在FL3通道检测、APC在FL4通

道检测）

6）调取数据：激活想分析数据的目的流式图，

选中激活

7）建立储存数据的位置及文件名：→出现对

话框，点击位置1的change键，创建文件夹。