荧光分光光度法在药物分析中的应用
荧光测奎宁实验报告
一、实验目的1. 学习荧光光谱分析技术，掌握荧光分光光度计的使用方法。
2. 了解奎宁的荧光特性，通过荧光光谱分析测定奎宁的含量。
3. 掌握荧光定量分析的基本原理和实验操作步骤。
二、实验原理奎宁是一种生物碱类抗心率失常药物，具有喹啉环结构，在紫外光照射下可以产生较强的荧光。
荧光分光光度法是利用物质在特定波长光照射下发射荧光的特性进行定量分析的方法。
本实验通过测定奎宁的激发光谱和发射光谱，建立荧光定量分析的方法，利用标准曲线法测定样品中奎宁的含量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：荧光分光光度计、紫外可见分光光度计、电子天平、移液器、比色皿、恒温水浴锅等。
2. 试剂：硫酸奎宁标准溶液、乙醇、磷酸盐缓冲溶液、盐酸等。
四、实验步骤1. 标准曲线的制备（1）配制一系列不同浓度的硫酸奎宁标准溶液，浓度范围为0.1-1.0mg/mL。
（2）分别将标准溶液加入比色皿中，以磷酸盐缓冲溶液为空白对照，在激发波长为267nm、发射波长为405nm处测定荧光强度。
（3）以荧光强度为纵坐标，浓度对数为横坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定（1）准确称取一定量的样品，用乙醇溶解并定容至一定体积。
（2）将样品溶液加入比色皿中，以磷酸盐缓冲溶液为空白对照，在激发波长为267nm、发射波长为405nm处测定荧光强度。
（3）根据标准曲线，计算样品中奎宁的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制备以荧光强度为纵坐标，浓度对数为横坐标，绘制标准曲线，线性范围为0.1-1.0mg/mL，相关系数R²=0.998。
2. 样品测定根据标准曲线，计算样品中奎宁的含量为X mg/mL。
六、实验讨论1. 实验过程中，注意避免样品污染，确保实验结果的准确性。
2. 荧光分光光度法测定奎宁含量具有灵敏度高、选择性好、操作简便等优点，适用于奎宁的定量分析。
3. 本实验结果表明，荧光分光光度法是一种有效、可靠的测定奎宁含量的方法。
七、结论本实验通过荧光分光光度法测定了奎宁的含量，结果表明该方法具有灵敏度高、选择性好、操作简便等优点，适用于奎宁的定量分析。
分光光度法应用的例子
分光光度法应用的例子分光光度法是一种用于测量光的强度和颜色的技术。
它广泛应用于研究、工业和医学等领域。
本文将介绍一些分光光度法应用的例子。
一、药物分析药物的成分分析是药物研制和生产中的重要环节。
分光光度法可以用于分析药物中的化学成分、测定药物的浓度、检测药物是否纯净等。
例如，某种药物中含有多种成分，研究人员可以使用分光光度法来测定这些成分的浓度。
对于一些需要确定浓度的药品，如眼药水、口服液等，分光光度法也可以作为一种快速、准确的测量方法。
二、水质检测水的质量是人们关注的一个重点问题。
分光光度法可以用于测量水的水质指标，如总氮、总磷、COD等。
以测量总氮为例，首先采集样品，然后使用试剂使样品产生化学反应，再使用分光光度法测量样品中反应产物的吸收率，从而求出总氮的浓度。
三、环境检测环境污染问题日益突出，其中大气污染、土壤污染等成为人们关注的重点。
分光光度法可以用于环境检测。
例如，测量大气中的臭氧、氮氧化物等污染物的浓度，可以使用分光光度法。
同时，分光光度法还可以监测土壤中的重金属污染和有机污染物。
四、食品检测食品中的添加剂、防腐剂等成分是人们关注的问题。
分光光度法可以用于测量食品中的各种成分。
以测量甜味剂为例，食品样品首先与一种试剂反应生成色素，然后使用分光光度法测量样品中色素的吸收率，从而得出甜味剂的浓度。
五、生化研究生化研究是分子生物学、基因工程等领域的重要组成部分。
分光光度法可以用于测量DNA、RNA、蛋白质等生物大分子的吸收率和含量。
以DNA测量为例，首先将DNA样品与一种染料反应，然后使用分光光度法测量样品中染料的吸收率，从而求出DNA的浓度。
六、医学诊断在医学上，分光光度法在临床诊断中也有广泛应用。
以测量血红蛋白浓度为例，分光光度法可以用于测量血液中血红蛋白的含量，从而判断贫血症状。
综上所述，分光光度法已经成为各个领域中重要的分析方法之一。
无论是药物分析、水质检测、环境监测、食品检测、生化研究还是医学诊断，分光光度法都发挥了其独特的优势。
荧光光度分析法及药物分析
荧光光度分析法与药物分析化材院化工3班姚依弟10081224前言当紫外光照射到某些物质的时候，这些物质会发射出各种颜色和不同强度的光，而当紫外光停顿照射时，这种光线也随之很快地消失，这种光线称为荧光。
利用这种能够反映物质特性的荧光对该物质进展定性和定量分析的方法称为荧光分析法。
荧光是分子从激发态的最低振动能级回到它原来的基态时发射的光，激发的完成是由于光的吸收。
吸收与荧光密切相关，因为吸收必须先于荧光发射。
由于碰撞和热的耗散常使一局部吸收能丧失，剩余荧光的能量比吸收的能量小，因此荧光在更长的波长发射。
【一】荧光分光光度法的分析方法荧光分析的灵敏度一般都高过应用最广泛的比色法和分光光度法。
比色法及分光光度法的灵敏度通常在千万分之几；而荧光分析法的灵敏度常达亿分之几，甚至有千亿分之几的。
荧光分析法的另一优点是选择性高。
荧光分析法还有方法快捷，重现性好，取样容易，试样需要少等优点。
荧光分析法也有它的缺乏之处，主要是指它比起其它方法来说应用X围还不够广泛，因为有许多物质本身不会产生荧光。
为使荧光分析法的应用更加广泛，开展了各类荧光分析方法，如对不发荧光的物质可通过某类化学反响使其转变为适合测定的荧光物质，对荧光较弱的物质可采取荧光增敏分析法。
荧光分析法可分为直接荧光测定法和间接荧光测定法。
直接测定法是利用物质自身发射的荧光进展定量测定。
但是自身发荧光的药物寥寥无几，所以一般采用间接法测定。
1、直接荧光分析法直接荧光分析法适用于自身能产生荧光的药物。
因荧光性质与溶液的EF值有关，故荧光强度的测定需在适宜的EF缓冲溶液中进展。
对于成分复杂的生物供试品，为了防止干扰，有时需利用萃取、沉淀、色谱别离等方法除去干扰物，以降低荧光空白本底，提高分析灵敏度。
已用于直接荧光分析法的药物有盐酸洛哌丁胺、双水杨酯、左旋溶肉瘤素、叶酸等。
本身能发荧光的物质,可用荧光分光光度法直接测定。
鲍霞认为可用荧光分光光度法直接测定氧氟沙星胶囊的含量。
选最大吸收波长进行分光光度法的原因
选取最大吸收波长进行分光光度法的原因一、概述分光光度法是一种常用的分析化学方法，通过测量物质在特定波长光线下的吸光度来确定物质的浓度或者其他相关性质。
在进行分光光度法测定时，选择合适的吸收波长对于获得准确的测定结果至关重要。
本文将介绍选取最大吸收波长进行分光光度法的原因。
二、分光光度法的基本原理1.分光光度法的基本原理分光光度法是利用物质对于特定波长的光线的吸收来进行定量或者定性测定的方法。
当一束光通过包含待测物质的溶液时，物质会吸收与其特性相对应的波长的光线，从而使通过溶液的光线强度发生变化。
通过测量入射光和透射光之间的差异，可以计算出物质的吸光度，并通过吸光度和浓度的关系，确定物质的浓度。
2.最大吸收波长的选择最大吸收波长是指在特定波长范围内，物质对光的吸收达到最大值的波长。
分光光度法中，选择最大吸收波长进行测定可以提高测定的准确性和灵敏度。
选择最大吸收波长是进行分光光度法测定时需要考虑的重要因素。
三、选取最大吸收波长进行分光光度法的原因1.提高测定的准确性选择最大吸收波长进行分光光度法测定可以提高测定的准确性。
在最大吸收波长处，物质对光的吸收达到最大值，这意味着此时光线与物质的相互作用最强烈。
在最大吸收波长处测定能够获得最明显的吸光信号，减小测定误差，提高测定的准确性。
2.提高测定的灵敏度选择最大吸收波长进行分光光度法测定可以提高测定的灵敏度。
在最大吸收波长处，物质对光的吸收达到最大值，这意味着即使待测物质浓度较低，也能够获得明显的吸光信号。
在最大吸收波长处测定能够提高测定的灵敏度，使测定结果更加可靠。
3.克服干扰选择最大吸收波长进行测定可以克服干扰。
在最大吸收波长处，物质对光的吸收最强，而其他物质可能对同一波长的光没有吸收，或者吸收较小。
在最大吸收波长处进行测定可以有效地克服干扰，获得准确的测定结果。
4.简化实验过程选择最大吸收波长进行分光光度法测定可以简化实验过程。
在最大吸收波长处进行测定可以消除其他波长光线的干扰，简化了实验所需的步骤和条件，提高了实验的操作性和稳定性。
荧光分光光度法在中药学的应用
荧光分光光度法在中药学方面的应用荧光分析法在药物分析中主要用于微量或痕量物质的定性和定量测定,尤其是中药有效成分的检测,在这个领域上的探讨也越来越多,近几年也有报道用于测定脂质体的包封率。
但是荧光分析的干扰因素较多,测定时对环境因素敏感,对实验条件要求严格,因此荧光分析法在药物分析中的应用不够广泛,远少于紫外-可见分光光度法。
但荧光分析法具有灵敏度高、选择性强、试样量少和方法简便等优点,故荧光分光光度法在中医药上的应用越来越多[1]。
因为中药的化学成分复杂,有效成分难以确定,仅单方制剂亦为一多种成分的混合物,因此要求更严格和更先进的分离、分析手段进行鉴别和含量测定。
近年来,随着科学技术的发展及各种先进仪器的引进和应用,现代仪器分析技术在中药研究中大量应用,其中荧光分光光度法便是中药研究中最为广泛应用的一项技术。
1荧光分光光度法分析方法分类1.1直接荧光分析法本身能发荧光的物质,可用荧光分光光度法直接测定。
鲍霞[2]认为可用荧光分光光度法直接测定氧氟沙星胶囊的含量。
取氧氟沙星胶囊药粉用醋酸-醋酸钠缓冲溶液配溶液,2h后,室温,用试剂作空白,在RF-5301型荧光分光光度(日本岛津)上,以427nm为激发波长,500nm为发射波长测定荧光强度,计算其标示量的百分含量。
本法操作简单,快捷,灵敏度高,结果满意。
1.2间接荧光分析法本身荧光很弱的物质,常采用氧化还原反应、配位反应等化学反应将其变为能发荧光的物质,用荧光分光光度法间接测定。
1.3氧化还原反应叶酸本身荧光很弱,用KMnO4氧化叶酸,其氧化产物喋呤-6-羧酸能发荧光。
刘欣[3]等人认为通过测定叶酸氧化产物喋呤-6-羧酸的荧光强度,可间接测定叶酸的含量。
测定时,在日立850型荧光分光光度计上,以289nm为激发波长,440nm为发射波长,测定叶酸氧化产物喋呤-6-羧酸的荧光强度,同时做空白实验,间接测定叶酸的含量。
本法较直接荧光分析法测定叶酸的灵敏度提高12.5倍。
片剂含量测定的方法
片剂含量测定的方法片剂含量测定是药品质量控制中的一项重要内容，准确测定片剂的含量对于保障药物疗效和安全性具有重要意义。
现将片剂含量测定的方法进行详细介绍。
实验室中常用的片剂含量测定方法包括荧光分光光度法、高效液相色谱法、紫外分光光度法和重量法。
荧光分光光度法是一种常用的快速含量测定方法。
该方法利用荧光分析仪器对药物中的成分进行测定，通过受激发射和荧光衰减的原理，可以准确测定片剂中的药物含量。
具体操作步骤如下：首先，将待测片剂样品取适量，粉碎并溶解于适量的溶剂中。
然后，将溶液过滤并取适量于荧光分析仪器中，设置合适的激发波长和检测波长。
最后，进行测定并记录荧光强度值，通过标准曲线法计算出样品中的药物含量。
高效液相色谱法是一种常用的精确含量测定方法。
该方法利用高效液相色谱仪器对药物中的成分进行分离和测定，通过样品在柱上的保留时间和峰面积进行定量。
具体操作步骤如下：首先，将待测片剂样品取适量，溶解于适量的溶剂中。
然后，将溶液通过高效液相色谱仪器进行分离，根据不同成分在柱上的分离时间进行定性和定量分析。
最后，通过样品峰面积与标准曲线进行比对，计算出样品中的药物含量。
紫外分光光度法是一种常用的快速含量测定方法。
该方法利用紫外分光光度计对药物中的成分进行测定，通过吸收峰的强度和波长进行定量。
具体操作步骤如下：首先，将待测片剂样品取适量，溶解于适量的溶剂中。
然后，将溶液过滤并取适量于紫外分光光度计中，设置合适的波长进行测定。
最后，通过吸光度值与标准曲线进行比对，计算出样品中的药物含量。
重量法是一种常用且简单的含量测定方法。
该方法通过测量待测片剂的重量与已知浓度药物样品的重量进行比较，计算出样品中的药物含量。
具体操作步骤如下：首先，将待测片剂样品取适量，粉碎并称取固定重量。
然后，取已知浓度的药物样品，称取相同重量。
最后，通过比较不同样品的重量差异，计算出待测片剂中的药物含量。
以上是常用的片剂含量测定方法，不同的方法适用于不同的药物和实验需求。
分光光度法在药物分析中的应用研究
分光光度法在药物分析中的应用研究发布时间：2021-07-27T06:14:35.125Z 来源：《学习与科普》2021年6期作者：杨艳美[导读] 分光光度法是《中国药典》中药物分析常用的分析方法，该法一方面是化学药物的原料药、制剂分析常见的分析方法；另一方面，应用于中药生物制品、体内药物的分析。
本文主要概述了分光光度法在药物分析的应用现状，归纳该方法的类别及优缺点，展望其在药物分析中的发展前景。
杨艳美浙江晖石药业有限公司浙江省绍兴市 312000摘要：分光光度法是《中国药典》中药物分析常用的分析方法，该法一方面是化学药物的原料药、制剂分析常见的分析方法；另一方面，应用于中药生物制品、体内药物的分析。
本文主要概述了分光光度法在药物分析的应用现状，归纳该方法的类别及优缺点，展望其在药物分析中的发展前景。
关键词：分光光度法；药物分析；应用1.分光光度法原理分光光度法是以物质对光的选择性吸收及光的吸收定律为基础，通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度来对物质进行定性和定量分析的方法。
按测定时所用的光源不同，分光光度法分为可见、紫外及红外分光光度法。
许多物质的溶液都具有颜色，有色溶液所呈现的颜色是由于溶液中的物质对光的选择性吸收所致。
不同的物质有其特有的吸收光谱，这是因为不同的分子结构，对不同波长光的吸收能力不同。
在18世纪和19世纪，朗伯（Lambert）和比尔（Beer）分别研究了有色溶液的液层厚度L和溶液浓度c与吸光度A的定量关系，共同奠定了分光光度法的理论基础，被称为光的吸收定律或朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律。
朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律不仅适用于可见光，而且也适用于紫外光和红外光；不仅适用于均匀、无散射的溶液，而且也适用于均匀、无散射的固体和气体。
它是各类分光光度法进行定量分析的理论依据。
朗伯-比尔定律的提出，使分光光度分析法得到了快速发展。
特别是以分子吸收光谱为基础的紫外-可见分光光度法，因其具有灵敏度高、准确度高、操作简便、测定快速、应用范围广等特点，在食品，医学，环境，能源，材料，地质等领域得到广泛的应用并发挥了重要的作用。
药分实验总结
实验七药物的鉴别实验（老师）一、葡萄糖注射液理化性质：葡萄糖属于单糖，分子中具有醛基，伯醇基，仲醇基和邻二醇基结构，通常醛基最易被氧化，伯醇次之。
鉴别方法：1、用斐林试剂（0.1 g/ml的氢氧化钠和0.05 g/ml的硫酸铜试剂）反应生成砖红色沉淀加热的条件下原理：具有醛基，醛基遇斐林试剂有砖红色沉淀生成。
2、班氏试剂：在试管中加入葡萄糖注射液0.1mL，加入班氏糖定性试剂1mL，混合均匀后，将试管放入盛有开水的烧杯中，加热煮沸1min~2min，若试管中溶液在加热后产生了砖红色沉淀，说注射液中含有葡萄糖3、可用溴水来鉴别葡萄糖，葡萄糖能被溴水氧化成葡萄糖酸，使溴水褪色。
原理：葡萄糖的醛基具有还原性，溴水能将其氧化，使溴水褪色。
4.分光光度法：利用分光光度计测量容易的吸光度，与标准溶液吸光度比较。
5.红外光谱：测量样品溶液的红外光谱，与标准溶液的红外光谱图比较。
6.银镜反应：原理：葡萄糖分子中的醛基，有还原性，能与银氨溶液反应：CH2OH-（CHOH）4-CHO+2Ag（NH3)2OH==CH2OH-（CHOH）4-COOH+2Ag↓+H2O+4NH3，被氧化成葡萄糖酸。
7、比旋度测定法：偏振光透过1dm且每1ml中含有旋光性物质1g的溶液，在钠光源的D线（589.3nm），温度20℃下测定比旋度，比旋度在52.5~53.0，范围内。
原理：葡萄糖分子结构中有5个不对称碳原子，具有旋光性，为右旋体。
比旋度是旋光性物质的特性常数，测定葡萄糖的比旋度，可以鉴别药物。
优选：斐林反应和比旋度测定法。
该方法操作简便，现象易观察，所用试剂较少，环境污染小。
二、阿司匹林肠溶片理化性质：为白色结晶或结晶性粉末；无溴或微带醋酸臭，味微酸。
结构中有酯基，能够水解。
鉴别方法：原理:受热分解产生水杨酸和乙酸，水杨酸的酚羟基与三氯化铁，呈紫堇色。
1、三氯化铁法：本品水溶液加热放冷后，与三氯化铁溶液反应，呈紫堇色。
2、水解反应阿司匹林与碳酸钠溶液加热水解，得水杨酸钠及醋酸钠，加过量稀硫酸酸化后，则生成白色水杨酸沉淀，并产生醋酸的臭气。
体内药物分析方法和方法的设计和评价
为：毛细管区带电泳、胶束电动毛细管色谱、
毛细管凝胶电泳、毛细管等电聚焦、毛细管等
速电泳和毛细管电色谱法。上述这些方法近几
年来在体内药品分析中均得到不一样程度应
用。 体内药物分析方法和方法的设计和评价
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体内药物分析方法和方法的设计和评价
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• 选取何种方法进行体内药品分析为好呢？普通 要依据药品理化性质、结构持征、药品浓度大 小、干扰成份多少、预处理方法、试验目标以 及试验室条件等原因综合起来进行考虑。
体内药物分析方法和方法的设计和评价
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1、HPLC法
• HPLC法在体内药品分析中应用已大大超出其 它分析方法，成为体内药品分析中应用最广泛 技术之一。与GC法相比，它含有以下优点：
• (1)适用范围广，可在室温下进行检测。对于 挥发性低，热稳定性差，分子量大以及离子型和评价
（一）以纯品进行测定
• 取药品或其代谢物纯品适量，按确定方法测 定，求得浓度与测定响应值之间关系，进行线 性范围、最适测定浓度、检测灵敏度、测定最 适 条 件 ( 如 pH 值 、 温 度 、 反 应 时 间 等 ） 等 选 择。
体内药物分析方法和方法的设计和评价
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(二)空白样品测定
• 取空白生物样品，按确定方法进行处理，测定 空白值(或色谱图)。空白值高低或色谱图情况 将影响到方法灵敏度和专属性，应力争将空白 值降低。在色谱分析中应力争降低体内样品中 内源性杂质峰，对无法消除内源性杂质峰应设 法使其从待测物色谱区域内移开。能否取得良 好样品空白试验结果，是决定测定方法实际可 行性主要步骤，必须设法处理。
• 另外，还有一些含抗生素类药品生物样品，它 们可用微生物方法测定，利用抗生素在琼脂培 养基内扩散作用，比较样品与药品标准品二者 对接种试验菌产生抑菌圈大小，借以测定样品 内抗生素药品浓度。
药物分析总结期末题库答案
药物分析总结期末题库答案导论药物分析是药学专业中重要的一门课程，旨在培养学生掌握药物质量控制的基本理论和实践技能。
本期末题库答案将对该课程的重要知识点进行总结和归纳，以帮助学生更好地复习和掌握药物分析的核心内容。
本文将从药物分析的基本概念和原理、常用分析技术、药物分析法规要求、药物分析实验等四个方面展开论述。
一、药物分析的基本概念和原理药物分析是指将药物样品进行化学或生物学检测、测定其化学组成和含量的相关技术。
其基本原理是通过使用分析方法对药物样品进行分析，得到药物的质量或活性指标，从而评价药物的质量和有效性。
药物分析的目的是确保药物的质量控制，对药物的原料药和制剂进行质量监控，保证药物的安全性和疗效。
二、常用分析技术1. 分光光度法分光光度法是以物质对特定波长的电磁辐射吸收或发射的强度与其浓度成正比的原理进行分析的方法。
分光光度法可以用于测定药物的含量、纯度、荧光特性等。
常见的分光光度法包括紫外可见光谱法、荧光光谱法等。
2. 气相色谱法气相色谱法是将药物样品分离并测定其组分的一种分析技术。
该技术利用样品中化学物质与气相色谱柱上的固定相发生相互作用，通过控制样品分子在传感器中的传输速率进行浓度测定。
气相色谱法主要应用于挥发性物质的测定和分析。
3. 液相色谱法液相色谱法是一种将药物样品溶解在流动相中，通过与固定相相互作用而进行分离和测定的方法。
液相色谱法常见的种类有高效液相色谱法、气相色谱法等。
该技术广泛应用于药物成分的测定和定量分析。
4. 质谱法质谱法是一种通过对药物样品中分子的质量和相对丰度进行测定，判断样品的组成或结构的方法。
质谱法可用于测定药物的分子量、分子结构等。
常见的质谱法包括质子能谱法、质谱-质谱法等。
三、药物分析法规要求药物分析法规要求是药物分析的指导文件，包括国家药典、国家药品质量标准、国家食品药品监督管理总局发布的药品分析检验指标等。
药物分析法规要求对药物质量进行严格的监控和控制，确保药物的质量符合规定标准，以保证药物的安全和有效性。
光谱学在药物分析中的应用
光谱学在药物分析中的应用光谱学是一门研究物质光学性质和光谱现象的学科，它以各种光谱技术为手段，通过对物质的光谱特性进行分析和研究，了解物质的结构和性质，进而应用于药物分析中。
光谱学在药物分析中的应用，已成为一种重要的技术手段。
一、紫外分光光度法在药物分析中的应用紫外分光光度法是指利用物质吸收紫外光的方法进行定量分析的一种方法，它在药物分析中得到广泛的应用。
药物分析中常用的紫外分光光度法有三种：比色法、差示法和荧光法。
1、比色法：比色法是以色度学原理为基础，通过比较药物溶液和标准溶液对紫外光的吸收强度的差异，来推算出药物溶液中成分浓度的一种方法。
这种方法通常在药物的定量分析、药物制剂原料分析、药物残留量分析以及药物不良品质的判定等方面得到了广泛应用。
2、差示法：差示法是通过减除样品中干扰因素的影响，从而得到纯品的信息的一种方法。
在药物的结构鉴定和分离纯化中得到了广泛的应用。
3、荧光法：荧光法是利用药物分子在激发下向外发出荧光的物理性质进行检测的一种方法。
荧光法通常用于药物激发发光的测定，如药物的含量测定、药物残留量测定等方面。
二、红外光谱法在药物分析中的应用红外光谱法是一种用于分析物质结构的重要手段。
药物分析中的红外光谱法主要有FTIR光谱法、ATR光谱法和偏振式红外反射吸收光谱法等。
1、FTIR光谱法：FTIR光谱法是通过药物样品对不同波长的红外辐射吸收的强度进行分析，并将结果以谱图的形式显示出来。
这种方法非常适合于药物结构解析、质量控制及药物相互作用的研究等领域。
2、ATR光谱法：ATR光谱法是利用内部反射原理使样品与光学晶体相接触，从而产生被称为“内部反射光谱”的光谱。
该方法具有非常高的分辨率和准确性，特别适用于药物中的组成成分的快速测定。
3、偏振式红外反射吸收光谱法：偏振式红外反射吸收光谱法是将药物溶液或粉末样品置于表面，然后通过在不同方向的振动以获得高分辨率光谱。
该方法能够确定药物样品中的水分、以及判定药物的稳定性及药物生产中可能出现的问题。
荧光分光光度f7000细胞内钙离子浓度测定
荧光分光光度f7000细胞内钙离子浓度测定荧光分光光度法是一种常用的细胞内离子浓度测定方法之一，特别适用于测定细胞内钙离子浓度。
在本文中，将介绍荧光分光光度法测定细胞内钙离子浓度的原理、步骤和应用。
一、原理荧光分光光度法利用荧光探针与目标离子之间的相互作用，通过检测荧光强度来测定细胞内离子浓度。
荧光探针是一种能够与特定离子结合的化合物，当与离子结合时，荧光探针的荧光性质会发生改变，从而可以测量到荧光信号的强弱。
对于细胞内钙离子浓度的测定，通常会使用钙选择性荧光探针Fura-2或Fluo-3。
这两种荧光探针在与钙离子结合后，荧光发射峰会发生位移。
其中，Fura-2在结合钙离子后的荧光发射峰位移从380 nm至500 nm，而Fluo-3在结合钙离子后的荧光发射峰位移从510 nm至540 nm。
二、步骤1. 细胞处理：将待测细胞种植在培养皿中，使其附着于培养皿底部。
然后，用含有钙选择性荧光探针的培养基处理细胞，使荧光探针能够进入细胞内。
2. 荧光探针染色：将细胞孵育在荧光探针染色溶液中一段时间，确保荧光探针能够与细胞内的钙离子结合。
3. 荧光信号测定：使用荧光分光光度仪进行荧光信号测定。
将含有染色细胞的培养皿放置在荧光分光光度仪样品舱中，选择相应的激发波长和检测波长，然后开始记录荧光信号。
4. 数据分析：使用荧光分光光度仪软件对测得的荧光信号进行数据分析。
根据荧光信号的强度，可以计算出细胞内钙离子的浓度。
三、应用荧光分光光度法测定细胞内钙离子浓度在许多生物学研究领域都有广泛的应用。
1. 生物医学研究：钙离子是细胞内重要的信号转导分子，参与调节许多生理过程，如细胞增殖、迁移、分化等。
测定细胞内钙离子浓度可以揭示这些生理过程的调节机制。
例如，在研究神经元突触传递过程中，测定细胞内钙离子浓度可以了解神经元活动的程度和时间。
2. 药物筛选：荧光分光光度法可以在药物筛选过程中用于测定药物对细胞内钙离子浓度的影响。
执业药师《药物分析学》备考：分光光度法
执业药师《药物分析学》备考：分光光度法2017年执业药师《药物分析学》备考：分光光度法不放过每一个知识点，尤其对容易混淆的东西要下更大工夫搞清楚，基础要牢固，店铺为大家整理了2017年执业药师《药物分析学》备考：分光光度法，希望对你有所帮助!第一节可见—紫外分光光度法掌握可见--紫外分光光度法的基本原理和测定方法。
掌握可见—紫外分光光度法在药物鉴别、检查和含量测定中的应用。
熟悉仪器的校正和检定方法;紫外吸收光谱与物质结构的关系。
了解紫外分光光度计的基本结构。
一、基本原理波长200～400nm范围称为紫外光区，400～760nm称为可见光区。
物质吸收紫外和可见光区电磁波而产生的吸收光谱称为紫外-可见吸收光谱。
1.光源：紫外光区通常采用氢灯或氘灯，可见光区采用钨灯。
2.吸收池：玻璃池适用于370nm以上的可见光区，石英池适用于紫外、可见光区，通常仅在紫外光区使用。
三、紫外吸收光谱与物质结构的关系：紫外—可见吸收光谱属分子吸收光谱，是由分子的外层价电子跃迁产生的，也称电子光谱。
它与原子光谱的窄吸收带不同。
每种电子能级的跃迁会伴随若干振动和转动能级的跃迁，使分子光谱呈现比原子光谱复杂得多的宽带吸收。
当分子吸收紫外—可见区的辐射后，产生价电子跃迁。
这种跃迁有三种形式：(1)形成单键的σ电子跃迁。
(2)形成双键的π电子跃迁。
(3)未成键的n电子跃迁。
通常，未成键的孤对电子较易激发，成键电子中π电子较相应的σ电子具有较高的.能量，反键电子则相反。
故简单分子中n→π* 跃迁需能量最小，吸收带出现在长波方向;n→σ*及n→π* 跃迁的吸收带出现在较短波段;σ→σ*跃迁吸收带则出现在远紫外区。
例题：物质分子吸收紫外光后，电子跃迁的类型为：A. n→σ* B. n→π* C. π→π* D. σ→σ* E .σ→π* 答案ABCD四、吸收度的测定方法1.对溶剂的要求：能充分溶解样品，与样品无相互作用，挥发性小，在测定波长处的吸收要符合要求。
分光光度法的医学应用
分光光度法的医学应用
分光光度法在医学领域有广泛的应用，以下是其中一些常见的应用：1. 血液分析：分光光度法可以用于测量血液中不同成分的浓度，如血红蛋白、血糖、血脂等。
这些测量可以用于诊断和监测疾病，如贫血、糖尿病和高血脂等。
2. 药物测定：分光光度法可以用于测定药物在体液中的浓度，如血浆中的抗生素、抗癌药物等。
这些测定可以用于确定药物的疗效和剂量。
3. 毒物检测：分光光度法可以用于检测体液中的毒物浓度，如血液中的重金属、药物中的有毒成分等。
这些检测可以用于判断中毒程度和给予相应的治疗。
4. 体液分析：分光光度法可以用于分析尿液、唾液、汗液等体液中的成分，如蛋白质、酶、荷尔蒙等。
这些分析可以用于诊断和监测疾病，如肾功能损伤、口腔疾病和内分泌失调等。
5. 免疫分析：分光光度法可以用于测量体液中的免疫分子，如抗体和抗原。
这些测量可以用于诊断和监测免疫相关的疾病，如感染性疾病和自身免疫疾病等。
分光光度法在医学应用中发挥着重要作用，可以用于诊断、治疗和监测各种疾病。
它具有快速、准确、经济和非侵入性等优势，因此
被广泛应用于临床实践中。
应用化学药物分析作业 (1)
应用化学药物分析作业1单选使用化学分析法和仪器分析法测定药物的含量，在药品质量标准中称（）[单选题] *A.含量测定(正确答案)B.效价测定C.药品检验D.生物检定2单选用生物学原理测定药物的含量，称为（） [单选题] *A.生物检定B.药品检验C.纯度检验D.效价测定(正确答案)3单选滴定度是每1 ml规定浓度的滴定液所相当（） [单选题] *A.被测药物的质量(正确答案)B.被测药物的摩尔数C.反应物之间的摩尔比D.标准物质的质量4单选剩余滴定的一般要进行（） [单选题] *A.空白试验校正(正确答案)B.参比实验校正C.标准滴定液浓度校正D.对照实验校正5单选下面关于容量分析法用于含量测定的说法，错误的是（） [单选题] *A.耐用性好B.结果准确C.专属性高(正确答案)D.操作简便6单选容量分析法多用于（）的含量测定。
[单选题] *A.中药指标成分B.药用辅料C.化学原料药(正确答案)D.生物制品7单选按药典规定，精密标定的滴定液(如盐酸及其浓度)正确表示为（） [单选题] *A.盐酸滴定液(0.1520mol/L)(正确答案)B.0.1520mol/L盐酸滴定液C.盐酸滴定液(0.1520M)D.0.1520M盐酸滴定液8单选在容量分析中，滴定管读数可估计到±0.02ml，为使分析结果误差不超过0.1%，滴定液所用的体积应为（） [单选题] *A.15~20mlB.10mlC.>20ml(正确答案)D.<20ml9单选采用直接滴定法进行含量测定，若供试品的称取量为W、滴定液的消耗体积为V、滴定度为T、浓度校正因数为F，则被测药物的百分含量为(c) [单选题] *A.VT/W*100%B. .VF/WT*100%C. .VTF/W*100%(正确答案)D. .VT/WF*100%10单选阿司匹林的滴定采用（）为指示剂 [单选题] *A.甲基橙B.溴甲酚绿C.酚酞(正确答案)D.甲基红11单选碘量法是常用的（）滴定法 [单选题] *A.非水溶液滴定法B.络合滴定法C.酸碱滴定法D.氧化还原滴定法(正确答案)12单选非水碱量法可用于（）类药物测定 [单选题] *A.弱还原性B.有机弱酸C.两性化合物D.有机弱碱(正确答案)13单选非水碱量法滴定时，常使用（）为溶剂。
荧光分光光度法
荧光分光光度计的结构与操作
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荧光分光光度计的结构
荧光分光光度计由光源、单色器、样品池、检测 器等部分组成，各部分协同工作完成荧光光谱的 测量。
荧光分光光度计的操作步骤
操作步骤包括样品准备、仪器调试、参数设置、 数据采集与分析等，操作时应严格按照仪器说明 书进行。
荧光分光光度计的维护与保养
为了保持仪器的性能和延长使用寿命，应定期对 仪器进行维护和保养，如清洁光学元件、检查电 路连接等。
荧光分光光度法
目录
CONTENTS
• 荧光分光光度法简介 • 荧光分光光度法的基本原理 • 荧光分光光度法的实验技术 • 荧光分光光度法的应用实例 • 荧光分光光度法的挑战与展望
01 荧光分光光度法简介
CHAPTER
定义与原理
定义
荧光分光光度法是一种基于荧光物质与激发光的相互作用， 通过测量荧光光谱来研究荧光物质性质的分析方法。
利用荧光染料标记DNA或RNA，通过 荧光光谱法检测基因表达和突变，以 及DNA和RNA的定量分析。
在环境监测领域的应用
污染物检测
荧光分光光度法可用于检测水体、土壤和空气中的有 害物质，如重金属、农药、酚类化合物等。
饮用水安全
通过荧光光谱法检测饮用水中的消毒副产物，确保饮 用水安全。
生态毒理学研究
荧光光谱的定量分析方法
荧光光谱的定量分析原理
荧光光谱的定量分析基于荧光物质浓度与荧 光强度之间的线性关系，通过测量荧光强度 可以推算出荧光物质的浓度。
荧光光谱的定量分析方法
定量分析方法包括标准曲线法、内标法、外标法等 ，应根据实验需求选择合适的分析方法。
荧光光谱的定量分析误差 来源
误差来源包括仪器误差、样品不均匀性、操 作误差等，应采取相应措施减小误差，提高 分析精度。
法医在法医药物学中的药物分析方法
法医在法医药物学中的药物分析方法法医药物学是通过各种药物和化学分析方法，应用于法医实践中，以解决法医学上的一系列问题。
药物分析方法在法医药物学中起着重要的作用，可以帮助法医进行药物检验、毒物鉴定和药物代谢研究等。
一、常用的药物分析方法1. 质谱分析法：质谱分析法是一种高效灵敏的药物分析方法，通过对药物分子的离子化以及质荷比的测定，可以快速准确地确定分子的结构和组成。
例如，质谱分析法可以用于检测尿液中的药物代谢产物，从而判断个体是否使用了某种禁药。
2. 液相色谱法：液相色谱法是一种常用的分离和定量药物的方法，通过将药物溶解在溶剂中，并通过色谱柱分离不同成分，再通过检测器检测并计算出药物的浓度。
液相色谱法具有分离效率高、分析速度快、操作简便等特点，常用于毒物鉴定。
3. 气相色谱法：气相色谱法是一种常用的分析无机和有机化合物的方法，适用于分离及定量挥发性和热稳定性药物。
通过将药物蒸发成气体，采用气相色谱仪分离不同组分，再通过检测器检测并计算出药物的浓度。
气相色谱法具有分离效果好、灵敏度高等特点，广泛应用于毒物分析和药物代谢研究领域。
4. 紫外-可见分光光度法：紫外-可见分光光度法是一种常用的分析药物的方法，适用于药物含量的分析和质量控制。
通过测量药物在紫外和可见光波长下的吸收光强，可以计算出药物的浓度。
紫外-可见分光光度法具有操作简便、灵敏度高等特点，常用于检测药物在尸体、组织、体液中的浓度。
二、药物分析方法在法医中的应用1. 药物检验：药物检验是法医学中的重要课题之一，常用于判断个体体内是否服用了某种药物。
通过采集尸体、组织或体液样本，利用药物分析方法进行检验，可以确定是否存在药物残留，从而判断个体是否服用了禁药或药物滥用。
2. 毒物鉴定：毒物鉴定是法医学中的关键工作，含有毒物的尸体、组织或体液样本经过药物分析方法的检测，可以确认是否中毒以及中毒的毒物种类。
药物分析方法可以对毒物进行快速准确的分离和定量分析，从而为法医提供可靠的鉴定依据。
(第二章)药物分析-光谱分析法的应用
百分吸收系数：指100 m1溶液中含有1 g溶质，液层厚度1 cm时，
在指定波长和一定条件下所测得的吸收度，用 单位是克-1厘米-1。
或A1% 1c m
表示， E1% 1c m
摩尔吸收系数与百分吸收系数的相互关系为：
E1% 1cm
M
1 10
M：吸光物质的分子量（摩尔质量）。
紫外-可见分光光度法
物质的吸收系数与溶剂的种类、溶液的pH、温度以及波长有关， 测定时必需注意，表示吸收系数时这些条件应注明。 测定吸收系数时，将仪器的波长调至最大吸收波长（λmax）处。
紫外-可见分光光度法
可见分光光度法就是利用有色物质吸收光能的特性来测定物质含量 的方法。 药物内的各种有效成分或主成分，可用此方法进行分析的条件： 1. 成分本身有色； 2. 或与一定显色试剂作用后可形成有色物质； 3. 并且在一定浓度范围内，溶液的吸收度与浓度符合朗伯-比尔定律。
紫外-可见分光光度法
吸收光谱分析发射光谱分析散射光谱分析光谱分析可见分光光度法紫外分光光度法红外分光光度法原子吸收光谱法荧光分析法火焰光度法光是电磁波其能量辐射能可以用波长来表示物质吸收可见光和紫外光则引起价电子跃迁物质吸收红外光则引起分子振动紫外光谱又称为电子光谱红外光谱又称为分子振动光谱分子吸收光谱
第二章 光谱分析法的应用
液4.0ml，30%乙醇定容至刻度，
0.6
吸光度 Absorbance
摇匀，放置15min， 510nm处测定
0.5
吸光度，绘制标准曲线。
0.4
0.3
标准曲线方程为： 0.2
Y=0.0018+1.0926X
0.1
X：所测的吸光度 Y：总黄酮的浓度 R=0.9998
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荧光分光光度法在药物分析中的应用
【摘要】荧光分光光度法属于药物分析法中光化学分析法其中的可见分光光度法，它是利用物质所产生的荧光特性来定性或者定量分析物质样品的分析方法，其具有选择高、灵敏度高、检测限低以及信息量丰富等优点。
由于许多有机药物（如芳香化合物等）都具有特征性的荧光吸收光谱，因此荧光分光光度法在药物分析中得到了极广泛的应用。
【关键词】荧光分光光度法荧光分光光度计药物分析定量分析
一、荧光分光光度法的原理及荧光分光光度计简介
荧光是指物质分子接受紫外-可见光光子的能量被激发之后，从激发态返回基态时所发
射出来的光，任何荧光物质分子均具有两个特征光谱，分别是激发光谱和发射光谱，根据斯托克斯位移可知，荧光发射波长永远大于激发光波长。
荧光强弱用荧光效率来表示，即发射荧光的光子数与基态吸收激发光的光子数之比。
由上述可知，物质能发射荧光所必须具备的条件是：1、有较强的紫外-可见吸收；2、
有一定的荧光效率。
所以，物质能否发射荧光以及荧光强度与以下几个方面有关：1、有π-π跃迁的长共轭结构（较强的紫外-可见吸收）；2、具有刚性平面结构（具有较高的荧光效率）；3、具有给电子取代基（助色团，增加紫外吸收，提高荧光效率）。
而大多数的化学合成药物均具有以上结构，因此具有发射荧光特性，所以可以利用荧光分析法进行药物分析。
目前广泛使用的荧光分光光度计是由激发光源（常采用氙灯，发射谱线强度较大且连续），激发单色器（置于样品池前，与光源成90°），发射单色器（置于样品池后），样品池和检
测系统组成，使用前需进行包括灵敏度、波长、激发光谱和发射光谱的校正。
二、利用荧光分光光度法进行药物分析实例
1.应用定量分析法测定样品含量
1.1工作曲线法
以系列中某一对照品溶液为基准以荧光强度为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，将空白溶液荧光强度读数调为0，将对照品溶液荧
光强度读数调至100%或50%，之后测定待测样品的荧光强度。
在测定中药巴戟
天中蒽醌含量时，以，1, 8-二羟基蒽醌为对照品（丙酮做溶剂，在最大激发波
长425nm，最大发射波长513nm处测定）[1]。
1.2比例法
当标准工作曲线通过原点时，可以任选两个浓度用比例法测定，例如《中国药典》中对利血平含量的测定就采用了比例法进行荧光定量分析
1.3联立方程式
用于分析多组分的混合物。
2.应用其他荧光分析技术提高灵敏度和选择性
2.1激光诱导荧光分析
采用单色性极好、强度更大的激光作为光源，灵敏度提高，可进行单分子检测。
2.2同步荧光分析
同步荧光光谱法中恒定波长法使用较为广泛，指的是在扫描过程中保持发射波长和激发波长固定间距的分析方法，具有灵敏度高、干扰少等优点，用来
测定多环芳烃[2]并可以同时对氨基酸以及蛋白质等进行测定。
2.3胶束增敏荧光分析
胶束增敏荧光分析法能让荧光分子和表面活性剂在溶液中缔合，然后利用专属性荧光基团以及溶液化学等方法来改进荧光法专属性以及检测精度，具有
操作简便、灵敏度高以及选择性好等优点，主要用来测定药物中氟罗沙星的含
量。
三、荧光分析法的发展
荧光分析法具有简便、灵敏度高以及经济等优点，是一种应用非常广泛的光谱分析手段。
但是随着新型药物的不断出现，常规的荧光分析法已经无法满足当今时代不断升高的药物检测要求，激光诱导荧光分析，同步荧光光谱法以及胶束增敏荧光法等新型荧光分析法的出现为更高要求的分析检测提供了可能，但同时也是具有一定局限性的。
今后荧光分析法的发展方向是需要投入更大的力度研究新型的荧光分析法并将其更好地应用于药物分析中。
【参考文献】
[1]. Nakano T, Ikawa N, Ozimek L. An economical method to extrac tchondroitin sulphate-peptide from bovine nasal cartilage[J]. Can Agric Eng, 2000, 42(4) : 205-208．
[2]. Welschmeyer, N.A. Flurometric analysis of chlorophyll a in the presence of chlorophyll b and phaeopigments [J] . Limnology and Oceanography. 1994, 39: 1985-1992.。