植物根系PI染色方法
pi染色原理
pi染色原理
pi染色原理，也称为π−π交叉染色原理，是一种复杂的生物染色原理。
它是一种以π键为媒介的紫外光诱发的染色过程，由于π键具有较高的紫外吸收能力，使得染色物质能够在紫外光的照射下发生反应，从而达到染色的目的。
pi染色原理通常与荧光增强技术结合在一起使用。
它可以在细胞和组织样品中观察到染色物质的分布，从而探索细胞结构和功能的变化。
pi染色原理的关键是使用适当的荧光增强剂，即抗体-抗原复合物，增加紫外光的照射强度，从而提高染色效果。
pi染色是一种高灵敏度、高特异性、低破坏性的染色原理，可以用于检测细胞和细胞核内的抗原及其位点，以及其他物质的分布。
它的主要优点是可以快速、准确的检测抗原的位点，得到非常清晰的结果，同时可以检测抗原在胞内的特异性分布，特别是在细胞发生变化时，可以及时、准确的检测出抗原的变化。
pi染色原理的应用非常广泛，在细胞和组织免疫组化、抗原定位、药物筛选、细胞生物学研究等领域都有重要的作用。
它可以被用于研究细胞内抗原的分布情况，也可以用来检测药物对细胞的影响，以及抗体结合物对细胞的效果。
同时，它还可以用来检测细胞结构和功能的变化，以及分子水平上的生物学过程。
总之，pi染色原理是一种非常有效的染色技术，在研究细胞结构和功能及其他物质的分布上发挥了重要作用。
它的优点是高灵敏度和特异性，可以更好的检测出细胞内的抗原位点，更好的了解细胞的变化，从而更好地了解细胞的功能和结构。
pi染色原理
pi染色原理
PI染色原理。
PI染色是一种常用的核酸染色方法，它可以将DNA和RNA染色成红色，用于细胞核酸的定量和定位分析。
PI染色原理主要基于PI（Propidium Iodide）分子的特性，下面将详细介绍PI染色的原理和应用。
PI染色原理的核心是PI分子的荧光特性。
PI是一种具有DNA亲和力的荧光染料，它可以通过插入DNA的双螺旋结构中而发出红色荧光。
PI在水溶液中呈现橙红色，而当与DNA结合后则呈现红色荧光。
这种荧光的发射波长在600-700nm之间，可以被常见的激光激发，因此非常适合在流式细胞仪等设备中使用。
在实际应用中，PI染色主要用于细胞核酸的检测和分析。
细胞在进行PI染色前通常需要经过固定和透化处理，以保证PI能够穿透细胞膜并与细胞内的核酸结合。
在染色完成后，可以利用荧光显微镜或流式细胞仪等设备观察并记录细胞的荧光信号，从而进行核酸含量的定量分析和细胞周期的研究。
除了用于细胞核酸的定量分析外，PI染色还可以用于细胞死亡的检测。
在细胞凋亡或坏死的过程中，细胞膜通透性会增加，PI可以进入细胞内并与裸露的DNA 结合，从而发出红色荧光。
因此，通过PI染色可以快速、直观地检测细胞的存活状态和死亡比例。
总之，PI染色原理是基于PI分子的DNA亲和性和荧光特性，通过将DNA和RNA染色成红色荧光来进行核酸的定量和定位分析。
它在细胞生物学和分子生物学研究中具有广泛的应用，为科研工作者提供了重要的实验手段和数据支持。
希望本文的介绍能够帮助读者更好地理解PI染色的原理和应用，为相关研究工作提供参考和指导。
pi染色原理
pi染色原理
染色是一种在生物学和化学实验室中常用的技术，用于标记或分离特定分子或细胞结构。
其中，一种常见的染色方法是使用具有特定色素的化学试剂将样品染色。
其中一种被广泛应用的染色方法是使用pi染色。
pi染色是通过使用一种称为“pi染色剂”的化学试剂来标记DNA或RNA分子。
这种染色剂可以结合在DNA或RNA的磷酸骨架上，形成稳定的染色复合物。
之所以称为“pi染色”，是因为染色剂中的化学结构含有“pi键”（也称为共轭键），这种键可以与DNA或RNA分子中的磷酸部分发生相互作用。
pi染色的原理是基于染色剂与DNA或RNA分子的特异性结合。
在pi染色实验中，首先将待染色样品固定在载玻片上，然后加入pi染色剂溶液。
染色剂会穿过细胞膜进入细胞内，然后与DNA或RNA结合。
通过适当的后处理步骤，如洗涤和封片，可以去除无关的染色剂，并固定细胞样品。
最后，使用荧光显微镜观察样品中的pi染色剂，并根据染色剂的荧光信号来分析DNA或RNA的分布和定位。
pi染色可以广泛应用于许多生物学和医学研究领域。
例如，在细胞生物学中，pi染色可用于检测细胞周期的不同阶段，因为DNA在不同细胞周期阶段的含量不同。
在肿瘤学研究中，pi 染色可用于评估细胞的DNA含量，从而了解肿瘤细胞的生长状态和恶性程度。
此外，pi染色还可以与其他染色方法结合使用，以实现更全面的细胞和组织结构分析。
总的来说，pi染色是一种重要且广泛应用的染色方法，它通过使用特定的染色剂与DNA或RNA结合，为生物学和化学实验室中研究分子和细胞结构提供了有效而可靠的工具。
2014 根系活力测定(4种)
2. TTC又名红氮四唑，标准氧化还原电位为-80mv。 3. 三苯基甲腙（TTF triphenyl formazan）红色 4. TTC是用HCl配制的，当它溶于水中，pH为3~5，因此要
加入等体积的0.1M pH7.5的磷酸缓冲液（该实验用的为 1/15）。这样反应液的pH为6.8左右。如不用，TTC反应 液过酸，会杀死根。另外TTC加磷酸缓冲液后要避光，最 好临时配制使用，在暗处保存时间要短。否则见光会变红， 影响反应的准确性。
在试管中加入95%乙醇至5 mL刻度线 ，沸水水浴抽提10 min，冷却后用95%乙醇定容至5mL刻度线 （如果颜色深可 以增加体积，以便比色，两个处理定容体积一致），溶液混 匀后，在530 nm处测定吸光值（水为空白比色）。根据OD 值计算根系相对活力（B÷A) ×100%。
2. Evans blue ： A、B两组分别0.3 g根尖段放入15ml试管中 （标号为EA、EB），加入6 mL0.125％ Evans blue 染色液 染色，15min后将Evans blue染色液倾倒回公用烧杯（回 收！！），随后用水充分洗净根系表面色素（冲洗3-5次）。
实验原理
1. TTC法：
氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准的氧化还原色素， 其氧化态无色并溶于水，还原态则是不溶于水的三苯 基甲腙（TTF）红色物质，它在空气中不会自动氧化、 相当稳定。根系细胞中脱氢酶（如琥珀酸脱氢酶） （或活细胞的NADH，NADPH）可பைடு நூலகம்为TTC的氢供体， 从而将TTC还原为TTF。外加琥珀酸可增强TTC的还原。
3. FDA方法※
FDA ：二乙酸荧光素（Fluoresencein diacetate，母液为 5 mg/mL的FDA DMSO溶液，储存在0℃） FDA是一种非极性酯类物质，可以通过质膜进入细胞质， 在细胞内酯酶的作用下水解脱去酯基团后在490-500 nm 激发光下产生绿色荧光。 FDA （2µg/mL）被普遍用于细胞活力的测定 活力低的细胞具有较低的酯酶活性，因此绿色荧光较弱
Cell：植物根系如何允许有益微生物定植的
Cell：植物根系如何允许有益微生物定植的损伤和微生物模式的共同作用控制着根部的局部免疫反应Co-incidence of Damage and Microbial Patterns Controls Localized Immune Responses in RootsImpact Factor：36.216/10.1016/j.cell.2020.01.013发表日期：2020-02-06第一作者：Feng Zhou1通讯作者：Feng Zhou(*****************)1, Niko Geldner(LeadContact)(********************)1合作作者：Aure´ lia Emonet,Vale´ rie De´ nervaud Tendon,Peter Marhavy,Dousheng Wu,Thomas Lahaye主要单位：1瑞士洛桑大学植物分子生物学系(Department of Plant Molecular Biology, Biophore, UNIL-Sorge, University of Lausanne, 1015 Lausanne, Switzerland)写在前面分享标题：Cell：植物根系如何允许有益微生物定植的关键字：拟南芥，根免疫力，微生物模式，模式识别受体，局部反应，损伤门控点评：微生物相关分子模式（microbe-associated molecular patterns, MAMPs）的识别对于植物的免疫反应至关重要。
如何将这种复杂的感知系统有效地部署在不断暴露于微生物的根中仍然是一个谜。
本文通过分析拟南芥中单细胞分辨率下的MAMP受体表达和应答，观察到分化的外细胞层显示出模式识别受体(pattern-recognitionreceptors, PRRs)的低表达并且缺乏MAMP应答。
PI染色检测细胞周期实验步骤
P I染色检测细胞周期实
验步骤
标准化工作室编码[XX968T-XX89628-XJ668-XT689N]
p r o t o c o l：P I染色检测细胞周期1、收集细胞：胰酶（含EDTA）消化收集对数生长期细胞（加热处理后损失多的组宜多收集细胞保证细胞有0.5-2×10*6个），吸取旧培养基到一个新离心管里；少量常温PBS（根据培养皿大小决定量，PBS洗可以保证消化效率）洗2次，清洗的PBS也要收集到上述离心管内【检测凋亡才需收集旧培养基及清洗的PBS】；然后胰酶消化（注意一定要消化完全，显微镜下观察细胞呈单个，而不是成片脱落）后利用旧培养基中和胰酶；离心(1000r/300g5min)收集细胞沉淀。
2、用预冷的PBS清洗细胞两次。
3、固定细胞：用0.5ml预冷的PBS重悬细胞沉淀，使细胞充分悬浮成单细胞，再将重悬细胞加入1.2ml预冷的99.7%无水乙醇(乙醇终浓度70%)，吹打混匀以免细胞团聚，4℃固定2H至过夜。
4、细胞染色：离心（1000r/300g5min）收集固定的细胞，以1.8mL 的PBS洗细胞一次，离心(第一次实验时用7000rpm才把细胞离心下来，但最后流式结果显示细胞没有碎)再次获取细胞沉淀后加入100μlRNaseA于37℃水浴30min，最后加入400μlPI避光染色30min （常温或4℃均可）
【有的试剂盒说明是：每个样本加入500uL染色剂（据样本数，用PBS临时配好总量，其中PI50ug/ml、RNaseA100ug/mL、TritonX-10 00.2%）4℃避光染色30分钟】
5、流式分析
以标准程序用检测，一般计数2-3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。
分析时，使用FL2-w和FL2-A显示，去除联体细胞。
anneinv和pi染色步骤及注意事项
磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法）磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于细胞膜内侧，但在细胞凋亡早期，PS可从细胞膜内侧翻转到细胞膜表面，暴露在细胞外环境中。
磷脂酰丝氨酸的转位发生在凋亡早期阶段，先于细胞核的改变、DNA断裂、细胞膜起泡。
体内的吞噬细胞可通过识别磷脂酰丝氨酸来清除凋亡细胞。
Annexin-V（green）是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合，细胞处于调亡或坏死时，Annexin-V可为阳性（早期坏死细胞可能为阴性），是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。
将Annexin-V进行荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测的发生。
PI和Annexin-V双标：碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。
因此将Annexin-V与PI 匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。
*注意：时其DNA可染性降低被认为是凋亡细胞标志之一，但这种DNA可染性降低也可能是因为DNA含量的降低，或者是因为DNA结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。
在分析结果时应该注意。
活细胞不能被Annexin V-FITC或PI染色（右图左下象限）。
早期凋亡细胞因磷脂酰丝氨酸的暴露及具有完整细胞膜，故呈Annexin V-FITC染色阳性及PI染色阴性（右图右下象限）。
坏死或晚期凋亡的细胞呈Annexin V-FITC及PI染色双阳性（右图右上象限）。
*注意：未处理的对照细胞进行常规培养的过程中也有一小部分的细胞死亡发生。
悬浮细胞的染色：Ⅰ、将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞（×106）用PBS洗2次，加入200μlBinding Buffer和FITC标记的Annexin-V(20ug/ml)10μl及PI(50ug/ml)5μl,室温避光30min,加入400μlPBS，立即用FACScan进行流式细胞术定量检测（一般不超过1小时），同时以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照。
流式上机前操作（PI染色）
流式上机前操作（PI染色）流式检测细胞周期（PI染色法）准备：1.75%乙醇，由无水乙醇（分析纯）+DDW配制，实验前一天放入4度冰箱预冷保存2.外用PBS（置于4度保存），细胞室PBS3．流式管在公共平台流式机器处领取4．PI粉末用PBS配制成5mg/ml的储存浓度，RNaseA作用终浓度为20ug/ul. PI位于负二十冰箱第一层保存。
步骤：（以LN229 对照组为例）第一天：1．取生长状态良好，细胞活力佳的LN229细胞，6cm dish 中细胞密度约90~95%。
此时细胞密度约在106个/ml.2．用胰酶进行常规细胞消化（注意不要过度），用含血清的培养液终止（尽量将贴壁的细胞吹落下来，动作要轻柔）。
将细胞悬液（15ml离心管中）进行1000rmp离心5分钟.3．用移液器将上层培养液吸取干净，弃去。
加入约7ml的PBS 重悬细胞沉淀，制成单细胞悬液，再次1000rmp,离心5min.4．取出离心管，于外部试验台上用移液器将上层PBS吸取干净，弃去。
再加入50ulPBS，重悬细胞，注意动作轻柔。
重悬要充分，整体呈不透明的浑浊状。
5．先取100ul预冷的75%乙醇沿着管壁缓慢加入（可绕着管壁螺旋加液），重复上述，一共三次，共加入300ul。
期间用移液器进行混匀，防止细胞聚集抱团。
再取700ul的预冷75%乙醇，加入上述约350ul的细胞悬液中，轻轻吹匀。
6．置于试管架上，4度冰箱过夜第二天：7．将4度过夜的细胞沉淀进行再重悬转入1.5ml的EP管中，进行离心：800转/分，5-10min，转速不能太高（用台式低速离心机也可以,约30s）。
弃去乙醇8．加PBS至1ml，将细胞沉淀重悬，再次离心800转/分，5-10min，（用台式低速离心机也可以，约30s）弃去上清，吸干净。
再加入PBS 300ul重悬细胞沉淀。
9加入RNaseA（终作用浓度20μg/ml）0.6ul，用手将沉淀弹匀，37度下作用30min10．向300ul细胞悬液中，加入PI（1mg/ml）10ul左右，用手将沉淀弹匀，使得细胞悬液整体呈粉红色。
(完整版)PI染料
(完整版)PI染料(完整版) PI染料引言PI染料，即聚酰亚胺染料(Polyimide Dyes)，是一类具有高色牢度和耐光性的有机染料，广泛应用于纺织、化妆品、塑料、油墨等领域。
本文将介绍PI染料的基本特性、制备方法、应用领域等内容。
一、基本特性PI染料具有以下基本特性：1. 高色牢度：PI染料具有优异的色彩稳定性，不易退色或褪色。
2. 耐光性：PI染料能够在阳光暴晒下保持鲜艳的色彩，不受紫外线的影响。
3. 色差小：PI染料能够在不同基材上呈现相似的色彩效果，具有较小的色差。
4. 耐高温：PI染料能够在高温环境下保持稳定性和色彩效果。
5. 与基材的亲和性强：PI染料与各种基材（如纺织品、塑料等）具有良好的亲和性，易于使用和应用。
二、制备方法目前，PI染料的制备方法主要包括以下几种：1. 离子聚合法：通过阳离子或阴离子聚合反应，将聚酰亚胺染料合成为可溶性高分子化合物。
2. 化学反应法：通过合成反应，将合成染料分子与聚酰亚胺基材结合，形成PI染料。
3. 溶液染色法：将PI染料溶解于适量溶剂中，然后将染料溶液均匀涂布到基材上，通过蒸发或烘干使染料固化于基材表面。
4. 无水合成法：通过无水条件下的化学反应，将合成染料与聚酰亚胺基材直接反应，形成PI染料。
三、应用领域由于其独特的特性和优越的性能，PI染料被广泛应用于以下领域：1. 纺织品：PI染料能够给纺织品带来鲜艳的色彩，并具有长久的色牢度，适合于制作高级服装、家居用品等。
2. 化妆品：PI染料可用于化妆品中的眼影、唇膏等产品，给人以独特的妆容效果。
3. 塑料：PI染料可以为塑料制品提供各种色彩选择，使其具有更好的视觉效果和市场竞争力。
4. 油墨：PI染料可用于油墨的配方中，使印刷品具有饱满的色彩和高度的色牢度。
5. 其他：PI染料还可以应用于电子产品、激光打印、染料浓缩等领域，具有广阔的市场前景。
结论通过本文的介绍，我们了解了PI染料的基本特性、制备方法和应用领域。
植物染色方法
植物染色方法
植物染色是一种古老而又环保的染色方法，它利用植物中的天然色素对纺织品
进行染色，不仅能够给纺织品赋予美丽的色彩，还能够保持纺织品的天然质感。
下面将介绍几种常见的植物染色方法。
首先，最常见的植物染色方法之一是利用植物的叶子进行染色。
选择新鲜的植
物叶子，将其捣碎并加入适量的水中煮沸，然后将待染的纺织品浸泡在煮沸的水中，经过一段时间的浸泡后，纺织品就会呈现出植物叶子所具有的颜色。
这种方法简单易行，且成本低廉。
其次，利用植物的根茎进行染色也是一种常见的方法。
选取植物的根茎，将其
切碎并加入水中煮沸，然后将待染的纺织品浸泡在煮沸的水中，同样可以获得丰富的颜色。
不同种类的植物根茎所产生的颜色也会有所不同，可以根据需要选择合适的植物材料。
另外，利用植物的花朵进行染色也是一种常用的方法。
将植物花朵加入水中煮沸，然后将待染的纺织品浸泡在煮沸的水中，同样可以获得漂亮的颜色。
植物花朵所产生的颜色鲜艳明亮，非常适合用于染色。
最后，利用植物的树皮进行染色也是一种常见的方法。
将植物树皮加入水中煮沸，然后将待染的纺织品浸泡在煮沸的水中，同样可以获得深沉的颜色。
植物树皮所产生的颜色具有一定的稳定性，适合用于染色。
总的来说，植物染色方法简单易行，且对环境友好。
通过选择不同的植物材料，可以获得丰富多彩的颜色，满足不同人群的需求。
因此，植物染色方法在现代社会中仍然具有一定的应用前景，也是一种值得推广的环保染色方法。
PI 染色操作步骤
PI 染色操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。
2、加入PBS 1ml离心洗涤1次，弃上清。
3、加入2ml预冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定过夜。
4、离心，弃上清液。
5、用1×PBS 1ml洗涤1次，离心。
6、加入RNase A (工作浓度20ug/ml)于500ul 1×PBS中，37℃孵育30min，离心。
7、用1×PBS 1ml洗涤1次，离心。
8、加入PI(工作浓度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中，室温避光孵育30min。
9、混匀，过300目筛网，置流式管中， 4℃冰箱保存，待测。
GFP PI染色操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。
2、加入PBS 1ml离心洗涤1次，弃上清。
3、加入2ml预冷PFA，PFA的浓度根据细胞的特点进行调节，4℃固定30min。
以下步骤同PI 染色操作步骤的（4-9）细胞表面直接免疫荧光染色操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm，5min，弃上清液。
2、以冷PBA 1ml，离心洗涤，弃上清液。
3、加入用PBA稀释的荧光素标记的抗体200ul。
用微量移液器轻轻吹打混匀，4℃或置冰上孵育30min-1h。
4、离心弃上清液。
5、加入冷PBS1ml,离心洗涤2次，以除去未结合的多余抗体成分。
6、向细胞中加入冷PBS 500ul,吹打混匀，置流式管中，4℃避光保存，待测。
细胞表面间接免疫荧光染色操作步骤1-2、同细胞表面直接免疫荧光染色操作步骤3、用PBA稀释的第一抗体200ul，对照管加入对应于一抗的正常实验动物IgG，轻轻吹打混匀，4℃或置冰上孵育1.5-2h。
离心，弃上清。
4、 BS1ml离心洗涤1次，以去除多余的未结合的特异性抗体。
5、 PBA适当稀释的荧光素标记的第二抗体200ul。
植物常规染色体制片-染色和镜检
实验三植物常规染色体制片Ⅲ染色和镜检--染色和镜检（综合性实验）遵义师范学院生命科学学院韦若勋实验目的1掌握植物根尖染色体制片过程中染色的方一、实验目的1、掌握植物根尖染色体制片过程中染色的方法；2、观察各分裂时期染色体形态,测量典型染察时期染,染色体长臂和短臂；3、熟悉染色液的配制；4、了解植物染色体核型分析的标准。
二实验原理二、实验原理主缢痕二、实验原理2、核型分析原理因着丝粒在染色体上的位置差异导致了各染色因着丝粒在染色体上的位置差异导致各染色体形态差异。
Denver将人体染色体划分成四大类型请问：Denver划分如下4类染色体的臂比临界请问D值标准是多少？三实验器具及试剂三实验器具及试剂(二)实验试剂1、45%醋酸量取45ml冰醋酸，蒸馏水定溶至100ml。
2姬姆萨母液2、姬姆萨母液姬姆萨3.8g与甘油250ml研磨15分钟，60℃水浴2小时，加60℃预热甲醇250m1，混匀、过滤，棕色瓶室温长期保存。
3磷酸缓冲液3、磷酸缓冲液称Na2HPO44.735g，少许蒸馏水溶解后，定溶500ml；称KH2PO45.35g ，少许蒸馏水溶解后，定溶500ml，等量混合。
四实验材料四、实验材料涂片法得到的蚕豆或其它植物根尖制片。
五实验方法与步骤1、染色实（1）方法①Giemsa母液︰缓冲液= 1 ︰7，配成稀释液；浸没全部材料室温染色1530i②浸没全部材料，室温染色15-30min；③染色后,用小流量自来水冲洗玻片至无色，晾干。
（2）注意事项染色前材料要定要干否则着色不佳①染色前材料要一定要干，否则着色不佳；②植物固定时间长易着色,反之则反。
第一部分植物染色体标本制备物种：蚕豆根尖细胞有丝分裂.2014.6.5姓名：×××五、实验方法与步骤五实验方法与步骤2、镜检观察（1）分裂细胞观察低倍镜找分裂细胞区,高倍镜观察染色体形态。
估计染色体数目。
40倍下观察，记录3个视野的细胞总数、分裂细胞和典型染色体细胞数；计算出分裂细胞及典型染色体图象细胞频率。
(完整版)PI染色
PI 染色荧光染料PI（碘化丙啶）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测，英文全称是Propidium Iodide。
它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。
尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。
PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。
PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535 nm 和615 nm。
PI可以用来进行活细胞、死细胞的双重染色钙黄绿素-AM(Calcein-AM)和碘化丙啶(PI)溶液，它们分别可对活细胞和死细胞染色。
Calcein -AM的乙酸甲基酯亲脂性很高，使其可透过细胞膜。
尽管Calcein -AM本身并不是荧光分子，但通过活细胞内的酯酶作用，Calcein -AM能脱去AM 基，产生的Calcein能发出强绿色荧光（激发：490 nm，发射：515 nm）。
因此Calcein -AM仅对活细胞染色。
另一方面，作为核染色染料的PI不能穿过活细胞的细胞膜。
它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光（激发：535 nm，发射：617 nm）。
由于Calcein和PI-DNA 都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。
用545 nm 激发，仅可观察到死细胞。
由于不同细胞系的最佳染色条件不同，我们建议个别确定PI和Calcein -AM的合适浓度。
I．试剂Calcein-AMPIII．用荧光显微镜观察细胞形态以HeLa细胞染色为例,请注意不同的细胞种类、不同浓度有不同的观察条件。
根据细胞条件，摸索不同条件下的细胞贴壁情况和试剂浓度的配制等最佳条件。
１．染色溶液的配制1）用1 ml无水DMSO溶解1 mg Calcein-AM，制备成1 mmol/l 的Calcein-AM储备液，-20℃下密闭冷冻保存。
O溶解1 mg PI，制备成1.5 mmol/l的PI储备液（1 mg PI/1 ml 2）用1 ml ddH2O），-20℃下密闭冷冻保存。
FDA-PI染色精要
大肠埃希氏菌CMCC44752
肺炎克雷伯氏菌CMCC46117
大肠埃希氏菌ATCC35218
金黄色葡萄球菌ATCC29213
金黄色葡萄球ATCC25923
大肠埃希氏菌ATCC25922
大肠埃希代菌ATCC44102
金黄色葡萄球菌ATCC26113
FDA/PI染色操作步骤
1、溶液配制
（1）0.65mol/L甘露醇配制：称1.1841g甘露醇加入10mL蒸馏水。
（2）5mg/mL FDA配制：称25mgFDA加入1mL丙酮酸溶解，再加入4mL甘露醇，摇匀，避光4℃保存。
（3）2mg/mL PI配制：称2mgPI加入1mL甘露醇，摇匀，4℃保存。
2、染色
（1）从冰箱中取出FDA及PI，复温摇匀，FDA尽量避光。
（2）取羊膜放置于有0.5 ml生理盐水的EP管中，加入8μL PI和10μL FDA，后用0.6ml生理盐水冲洗管壁，室温放置15min.，要求尽量避光；
（3）1.5ml PBS冲洗，取出羊膜，置于载玻片上，用镊子整平，滴加少量PBS，盖上盖玻片。
3、镜检
（1）染色完成后，将片子放于小盒中避光，迅速送去检验。
（2）由于荧光显微镜是倒置显微镜，所以，盖玻片面要朝下放置。
PI单染实验设计
实验设计实验方法：PI单染色法实验仪器：流式细胞仪实验材料：INS1细胞实验目的：撤血清情况下细胞凋亡情况实验原理：1、细胞凋亡是指有核细胞在一定条件下通过启动其内部自身机制，主要是通过内源性DNA内切酶的激活而发生的细胞死亡过程。
凋亡的细胞，由于DNA正在降解，所以含量比正常细胞要少。
碘化丙啶(PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。
细胞固定后用PI染色，因为PI特异性结合于细胞DNA，荧光强度与PI的结合量呈良好的线性关系。
由于凋亡细胞核酸内切酶活化，DNA降解，细胞DNA减少，因而可在G0/G1峰前出现一个亚二倍体峰，也就是凋亡峰。
2、流式细胞仪工作原理：经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。
仪器首先要对光散射信号进行测量。
当光散射分析与荧光探针联合使用时，可鉴别出样品中被染色和未被染色细胞。
实验步骤：1、细胞处理：培养2组细胞，实验组细胞进行相对长时期撤血清处理，对照组正常培养。
2、PI染液的配置（100ml）：PI 5mg、RNase 2mg、1％Triton X-100、PBS 65ml、枸橼酸钠100mg，加蒸馏水至100ml，调pH至7.2-7.6,用棕色瓶分装，4℃避光保存。
3、0.25%胰酶（不含EDTA）消化、收集细胞。
冷PBS洗2次，buffer 液重悬，计数细胞，细胞为1×106个。
加入适量生理盐水，1000rpm，离心5min，去上清，加入预冷的70％乙醇，4℃过夜。
4、离心除去固定液，适量生理盐水重悬细胞，采用筛网过滤一次，离心弃去上清，加入1mlPI染液，4℃避光孵育30min。
5、PI用488nm的氩离子激光器激发，由630nm的带通滤光片接收，通过FSC/SSC 散点图收集10000个细胞，采用设门技术排除粘连细胞和细胞碎片，分析PI荧光直方图上细胞各周期的百分率和凋亡细胞百分率。
PI染色法
流式细胞仪检测细胞凋亡——PI单染色法碘化丙啶（propidium iodide,PI）检测早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞凋亡和坏死的一个重要指标，凋亡细胞在进入最终溶解阶段前，细胞膜通透性无明显改变，相对分子质量大的与DNA结合的荧光染料（如PI）不能进入凋亡细胞内，而相对分子质量小的荧光染料（如Hoechest 3342或33258等）仍能被细胞摄取。
应用流式细胞仪或荧光显微镜可区分和坏死细胞，细胞内DNA出现Hoechest 3342标记而不出现PI标记的为凋亡细胞。
基本原理其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。
这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性，主要包括以下几个方面：1. 细胞核的改变：由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。
研究表明，用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色，其DNA可染性降低。
许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。
2. 光散射特性：凋亡细胞形态上的改变影响它们的光散射特性。
在流式细胞仪上，前散射光与细胞的大小有关，而侧散射光反映的是光在细胞内的折射作用，与细胞内的颗粒多少有关。
在细胞凋亡时，细胞固缩，体积变小，故前散射光降低，这一特性往往被认为是凋亡细胞的特点之一。
此外细胞凋亡时由于染色体降解，核破裂形成，细胞内颗粒往往增多，故凋亡细胞侧散射光常增加。
细胞坏死时，由于细胞肿胀，其前散射光增大；侧散射光在细胞坏死时也增大，因此可根据前散射光和侧散射光区别凋亡细胞和坏死细胞。
但需要注意的是，根据前散射光和侧散射光判断凋亡细胞的可靠性受被检测细胞形态上的均一性和核胞浆比率影响很大。
因此在某些淋巴细胞凋亡中，用光散射特性检测凋亡的可靠性较好，而在肿瘤细胞凋亡中，其可靠性就较差。
根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞的表面免疫荧光分析结合起来，用以区别经这些特殊处理发生选择性凋亡的淋巴细胞亚型。
芹菜根染色实验报告
一、实验背景植物通过根系吸收水分和无机盐，这些物质通过导管运输到植物体的各个部位。
为了验证导管在水分和无机盐运输中的作用，我们进行了芹菜根染色实验。
二、实验目的1. 观察芹菜根部的导管结构；2. 验证导管在水分和无机盐运输中的作用；3. 探讨芹菜根吸收水分和无机盐的机制。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜芹菜、红墨水、蒸馏水、培养皿、镊子、剪刀、载玻片、盖玻片、显微镜、滴管。
2. 实验仪器：显微镜、培养皿、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、滴管。
四、实验步骤1. 准备实验材料：将新鲜芹菜洗净，用剪刀剪去叶片，保留茎和根。
2. 将红墨水稀释：取一定量的红墨水，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀。
3. 染色处理：将稀释后的红墨水倒入培养皿中，将芹菜的根部插入红墨水中，使根部充分浸泡。
4. 浸泡时间：将芹菜根部浸泡在红墨水中，时间为2-3小时。
5. 取出芹菜：将浸泡好的芹菜取出，用蒸馏水冲洗干净。
6. 制片观察：将芹菜根部剪成薄片，放在载玻片上，加入适量的蒸馏水，盖上盖玻片。
7. 显微镜观察：将制片放在显微镜下观察，观察芹菜根部的导管结构。
五、实验结果与分析1. 观察到芹菜根部的导管结构：在显微镜下观察到芹菜根部存在明显的导管组织，导管呈管状，直径较细，分布均匀。
2. 验证导管在水分和无机盐运输中的作用：通过染色实验，观察到芹菜根部的导管内充满红墨水，证明导管在水分和无机盐运输中起到重要作用。
3. 探讨芹菜根吸收水分和无机盐的机制：芹菜根部通过根毛吸收水分和无机盐，导管负责将这些物质运输到植物体的各个部位。
六、实验结论1. 芹菜根部的导管在水分和无机盐运输中起到重要作用；2. 导管组织在芹菜根部呈管状，直径较细，分布均匀；3. 芹菜根通过根毛吸收水分和无机盐，导管负责将这些物质运输到植物体的各个部位。
七、实验反思1. 实验过程中，要注意红墨水的浓度，避免过浓或过淡影响实验结果；2. 染色处理时间不宜过长，以免影响芹菜根部的正常生理功能；3. 实验过程中，要注意观察和记录，以便对实验结果进行分析和总结。
PI染色方法
PI染色方法.txt对的时间遇见对的人是一生幸福；对的时间遇见错的人是一场心伤；错的时间遇见对的人是一段荒唐；错的时间遇见错的人是一声叹息。
PROPIDIUM IODIDE STAINING OF DEAD CELLS FOR FLOW CYTOMETRYPropidium iodide (PI) intercalates into double-stranded nucleic acids. It is excluded by viable cells but can penetrate cell membranes of dying or dead cells.I. MATERIALS:1. Propidium iodide (e.g., Cat #537059, Calbiochem, San Diego, CA)2. Buffer: 1 X PBS (Ca2+ and Mg2+ free, e.g., Cat #9240, Irvine Scientific, Santa Ana, CA)+2% newborn calf serum (or 0.2% BSA)+0.1% sodium azideA) PI buffer:Dissolve PI in buffer at a concentration of 1 microgram/ml. Keep the solution tightly closed at 4°C protected from light. Discard after 1 month.B) PI stock buffer:Dissolve PI in buffer at a concentration of 500 micrograms/ml. Keep the solution tightly closed at 4°C protected from light. We have kept this solution for several months and did not observe loss in staining activity.II. METHOD:Stain your cells as outlined in the protocol for single-color staining with FITC-labeled monoclonal antibodies.A) After the last washing step resuspend your cell pellet in the PI buffer and keep your samples in that solution at 4°C protected from light until analysis on the flow cytometer.B) After the last washing step resuspend your cells as usual for analysis. If you want to assess viability of your samples add 2 microliters of the PI stock solution to each tube and mix well. Keep the samples in this solution at 4°C protected from light until analysis on the flow cytometer.NOTE: This method cannot be used on formaldehyde-fixed samples. It is possible touse it on samples that are stained with PE (phycoerythrin)-conjugated antibodies according to a method by Sasaki et al. (Cytometry 8:413, 1987). However, because of the extensive overlap of the emission spectra of PI and PE it is preferable to use dead cell discrimination with 7-amino-actinomycin D (see the appropriate protocol).。
植物根系染色方法,标准制作
植物根系染色方法,标准制作
植物根系染色方法主要有几种常用的技术，包括酚洗法、醋酸洗法和酶解法。
下面是每种方法的标准制作步骤：
1. 酚洗法：
- 准备一定浓度的酚溶液，通常为10%或20%的酚溶液。
- 将需要染色的植物根系样品放入酚溶液中浸泡，时间视实验需要而定，一般为数小时至过夜。
- 取出样品后，用去离子水彻底冲洗，以去除多余的酚。
- 将样品转移到甘油或甘油琼脂溶液中浸泡，以防止样品干燥和变形。
- 可以使用显微镜观察染色结果或进行进一步的分析。
2. 醋酸洗法：
- 准备一定浓度的醋酸溶液，通常为1%或3%的醋酸溶液。
- 将需要染色的植物根系样品放入醋酸溶液中浸泡，时间视实验需要而定，一般为数小时至过夜。
- 取出样品后，用去离子水彻底冲洗，以去除多余的醋酸。
- 将样品转移到甘油或甘油琼脂溶液中浸泡，以防
止样品干燥和变形。
- 可以使用显微镜观察染色结果或进行进一步的分析。
3. 酶解法：
- 准备适当的酶解液，常用的酶包括纤维素酶和果胶酶等。
- 将需要酶解的植物根系样品放入酶解液中，时间和温度视实验需要而定，一般为数小时至过夜，并要轻轻摇动培养皿以促进酶解作用。
- 酶解完成后，用去离子水彻底冲洗样品，以去除酶解液。
- 将样品转移到甘油或甘油琼脂溶液中浸泡，以防止样品干燥和变形。
- 可以使用显微镜观察染色结果或进行进一步的分析。
这些方法可以根据实际需要进行调整和优化，例如使用不同的染料或增加其他步骤来改善染色效果。
同时，注意在操作过程中保持实验环境的清洁和卫生，以避免样品受到外界污染。
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水稻幼苗根尖PI染色
一、原理
PI：英文名：Propidium iodide 中文名：碘化丙啶
染色原理：碘化丙啶(PI)是一种溴化乙啶（EB）的类似物。
PI在540nm波长（绿色光）的激发下，会在600nm（红色光）处发出明亮的荧光。
PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。
它能与细胞壁上的碳水化合物共价结合，对细胞壁进行标记。
Standard confocal laser microscopy was performed using a Leica SP5laser point scanning microscope. propidium iodide was excited using the 488 nm argon laser, and fluorescence emissions were captured between 580 nm and 640 nm for propidium iodide.
二、染色过程
1 固定：材料置于固定液（50%甲醇+10%醋酸）中，4℃放置至少12h (最长可放置1个月)
2 用水清洗材料，置于1%高碘酸溶液中，室温放置40min。
（使细胞壁上的碳水化合物形成醛基）
3 用水清洗材料，置于希夫试剂（含PI）1-2h或直至肉眼可见材料染上红色为止（醛基与PI共价结合）
希夫试剂(含PI)：焦亚硫酸100mM
HCl 0.15N
PI 100μg/ml（现加）
4 取出样品置于载玻片上，用水合氯醛溶液覆盖样品，室温放置过夜（置于密闭容器中，防止溶液挥发）
水合氯醛溶液：水合氯醛4g
甘油1ml
H2O 2ml
5 除去多余水合氯醛溶液，滴数滴Hoyer’s solution，盖上盖玻片，放置3天后显微镜下观察。
Hoyer’s solution：水溶性阿拉伯胶30g
水合氯醛200g
甘油20g
H2O 50ml
三、注意事项：
（1）由于PI可能具有致癌性，请小心操作。
（2）保存条件：4℃避光保存
（3）对人体有刺激性，请注意适当防护。