辐照灭菌确认方案计划

#####有限公司

研发部

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辐

照

灭

菌

确

认

方

案

验证方案审批表

一、验证方案拟订表

二、验证方案审核

三、验证方案批准

批准人（签名）：批准日期：年月日

方案执行日期：年月日

四、验证执行小组成员

目录

1.主要内容和适用范围

2.辐照剂量测定

2.1原理

2.2选择SAL和获得产品样品

2.3测定初始污染菌

2.3.1初始污染菌的计算

2.3.2初始污染菌的测定

2.3.3校正系数的测定

2.3.4产品释出物的检验

2.4建立验证剂量

2.5完成验证剂量实验

2.6建立灭菌剂量

3.辐照灭菌加工确认

4.验证总结报告书

####辐照灭菌确认方案

1．主要内容和适用范围

本文对于###的灭菌确认过程做了详细描述，确认的内容包括辐照剂量的设定及辐照加工确认。本方案制定的目的在于证实产品辐照符合ISO11137-2006的要求，灭菌后的产品能达到10-6的无菌保证水平。

2．辐照灭菌剂量设定

2.1原理

验证的原理是基于ISO11137方法，即先对辐照前产品的初始污染菌进行测定，然后选择验证剂量。再用验证剂量对产品进行辐照，并测定存活微生物的样品件数，以此来确定最低灭菌剂量（SAL=10-6）。

2.2选择SAL和获得产品样品

该产品的SAL选定为10-6，收集常规生产的标准包装产品，于灭菌前对三个批号进行随机抽样，每批至少抽取10个样品，其中取样比例（SIP）为1。

2.3测定初始污染菌

2.3.1初始污染菌的计算

测定至少30个样品单元的每件样品的初始污染菌并计算，

a)三批中的每一批的平均的单元产品初始污染菌（批平均），和

b)所有的单元产品平均初始污染菌（总平均初始污染菌）。

ISO11137-2006或GB/T18280-2007中，7.2.1.3.2测定至少30个样品单元的每件样品的初始微污染菌并计算：批平均值和总平均值。当初始污染菌较低（如小于10）；允许集中检测单独一批中10个单元产品来确定批平均初始污染菌。

将三批产品的每批平均初始污染菌与总平均初始污染菌比较，确定是否有一批平均值是总平均值的两倍或两倍以上。

确定初始污染菌测定中是否提供了校正因子，建立测定校正因子的方法。

2.3.2初始污染菌测定

测定依据：ISO11737-1：1995

试验方法：（平板计数法）

1)洗脱液：

PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠

7.23g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，过

滤，灭菌。

2)样品处理：

取样品10cm2，剪碎，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml，浸泡，振摇，作为1:10的供试液。

3)需气菌培养：

取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。

4)霉菌培养：

取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的玫瑰红钠培养基，混匀，凝固，倒置培养。

5)计数：

除另有规定外，细菌培养48小时，逐日点计菌落数，一般以48小时的菌落数报告；霉菌、酵母菌培养72小时，逐日点计菌落数，一般以72小时的菌落数报告；必要时，可适当延长培养时间至5～7天进行菌落计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。

批平均初始污染菌为（cfu/件）

总平均初始污染菌为（cfu/件）

2.3.3校正系数的测定

根据ISO11737-1中描述的初始污染菌的确定方法进行试验，测定校正因子，该因子取自对活菌计数的初始污染菌检测技术的验证。

测定依据：ISO11737-1:1995

试验方法：

1）标准菌株准备：取枯草杆菌黑色变种（ATCC9372），传代培养，制成100cfu/ml备用。

2）洗脱液准备：pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，过滤，灭菌。

3）制备悬液稀释液，使0.1ml中含有100个芽孢。向随机抽取的10个产品上接种0.1mL该稀释悬液，并在层流下进行干燥。

4）用洗脱液对接种的产品进行洗脱，测定洗脱的芽孢数，并计算平均值。100除以平均芽孢数即为回收率的校正系数。

平均芽孢数： 校正系数： 2.3.4 产品释出物的检验 测定依据：ISO11737-1：1995 试验方法：

1)标准菌株准备：取枯草杆菌黑色变种（ATCC9372）,白色念珠菌（ATCC10231），传代培养，制成100cfu/ml 备用。

2)产品处理：取灭菌产品以无菌操作转移到100mlSCDB 培养基中，30

～35℃培养24h 。

3)接种：以无菌操作接种标准菌于上述产品SCDB 培养基中，28～32℃培养出现阳性结果或是至少培养7天。用标准平板计数法进行微生物计数（CFU ）。

结论： 。 2.4 建立验证剂量

根据初始污染菌的结果和ISO11137：2006方法1中的表5，建立合适的验证剂量。具体方法为：

a) 如果一批或更多批次平均初始污染菌等于或大于总平均初始污染菌的两

倍，则使用最高批次值；

b) 如果批次平均初始污染菌的每一个小于总平均初始污染菌的两倍，则使