高中生物 专题1 第2课时 目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定检测(含解析)新人教版选修3
20-21版：3.2.2 将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定（创新设计）
第2课时将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定将目的基因导入受体细胞———————————————自主梳理———————————————提醒：农杆菌转化法中的两次拼接、两次导入(1)两次拼接：第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的TDNA上；第二次拼接(非人工操作)指被插入目的基因的TDNA拼接到受体细胞染色体的DNA上。
(2)两次导入：第一次导入是将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌；第二次导入(非人工操作)是指含目的基因的TDNA导入受体细胞。
(1)花粉管通道法是我国科学家独创的一种方法，主要适用于双子叶植物和裸子植物。
(×)提示：农杆菌转化法主要适用于双子叶植物和裸子植物。
(2)农杆菌侵入植物细胞后，其Ti质粒上的T－DNA能转移到被侵染的细胞，并且整合到该细胞的染色体DNA上。
(√)(3)培育转基因动物时，常选择受精卵作为受体细胞，利用显微注射法将目的基因直接注入受精卵中。
(√)(4)将目的基因导入原核细胞时，通常用大肠杆菌作为受体细胞，并需要用Ca2＋处理大肠杆菌，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的状态。
(√)[典型例题](2020·黑龙江哈尔滨三中高二期末)下列关于目的基因导入受体细胞的方法中，不正确的是()A.我国利用花粉管通道法培育了转基因抗虫棉B.用Ca2＋处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞C.将目的基因导入动物细胞最常用、最有效的方法是显微注射法D.利用农杆菌转化法培育大多单子叶转基因植物解析目前我国的转基因抗虫棉是利用花粉管通道法培育的，A正确；为使大肠杆菌易吸收DNA分子，应先用氯化钙溶液进行处理，使大肠杆菌处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态，B正确；显微注射技术是将目的基因导入动物细胞最为有效的一种方法，C正确；农杆菌转化法可将目的基因导入双子叶植物细胞，D错误。
答案D[变式训练](2020·郑州一中高二期末)下列关于农杆菌转化法的叙述，错误的是()A.农杆菌是一种生活在土壤中的微生物，能在自然情况下侵染双子叶植物和裸子植物B.可以将新鲜的从叶片上取下的圆形小片与农杆菌共同培养，然后筛选转化细胞，并再生成植株C.可以将花序直接浸没在含有农杆菌的溶液中一段时间，然后培养植物并获得种子，再进行筛选鉴定D.由于农杆菌自然状态下对大多数单子叶植物没有侵染能力，所以不可能利用农杆菌转化法转化玉米、水稻等单子叶植物细胞解析随着转化方法的突破，用农杆菌侵染水稻、玉米等多种单子叶植物也取得了成功，D错误。
人教高中生物选修三提分教程：专题1 将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定 含解析(1)
微专题突破基因工程一、与核酸有关的各种酶的比较作用位点示意图二、易混概念辨析1．基因文库、基因组文库、部分基因文库(1)从定义上区分①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。
基因文库是指储存有某种生物基因的菌群的总称。
②基因组文库：如果基因文库中含有一种生物的所有基因，这种基因文库叫做基因组文库。
③部分基因文库：指含有一种生物的一部分基因的基因文库，如cDNA文库。
(2)从范围上区别：基因文库包含基因组文库和部分基因文库。
基因组文库有某一种生物的全部基因，它的范围要大于部分基因文库。
2．启动子、终止子、起始密码子、终止密码子(1)从定义上区分①启动子：位于编码区上游紧靠转录起点的位置。
它的主要功能是引导RNA 聚合酶与基因的正确部位结合。
只有在启动子存在时，RNA聚合酶才能准确地从转录起点开始，沿着编码区正常地进行转录。
②终止子：位于编码区下游紧靠转录终点的位置。
它的特殊的碱基排列顺序能够阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来。
③密码子：指信使RNA上决定一个氨基酸的三个相邻的碱基。
信使RNA 上四种碱基的组合方式有64种，其中，决定氨基酸的密码子有61种，3种是终止密码子。
④终止密码子：是信使RNA上能够终止蛋白质合成的密码子。
⑤起始密码子：位于信使RNA上，是蛋白质合成开始的信号，有两种：AUG、GUG。
(2)从本质上区别启动子和终止子都是DNA分子中具有调控作用的脱氧核苷酸序列，而起始密码子和终止密码子都位于信使RNA上，分别是翻译的起始位置和终止位置，终止密码子不能决定任何一种氨基酸。
1．下列关于各种酶作用的叙述，不正确的是()A．DNA连接酶能使不同脱氧核苷酸的磷酸与脱氧核糖连接B．RNA聚合酶能与基因的特定位点结合，催化遗传信息的转录C．一种限制酶能识别多种核苷酸序列，切割出多种目的基因D．限制酶将一个DNA分子片段切割成两个片段需消耗两个水分子[解析]DNA连接酶能在磷酸与脱氧核糖之间形成磷酸二酯键；RNA聚合酶可以识别基因上的特定位点；一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列；限制酶切割一个DNA分子时需水解两个磷酸二酯键。
高中生物课件《将目的基因导入受体细胞 和目的基因的检测与鉴定 》
知识点一
知识点二
课时精练
(1)一般情况下农杆菌不能感染的植物是____________，利用农杆菌自然 条件下感染植物的特点，能实现____________________。具体原理是在农杆 菌的 Ti 质粒上存在 T-DNA 片段，它具有可转移至受体细胞并整合到受体细 胞____________上的特点，因此只要将携带外源基因的 DNA 片段插入到 ____________(部位)即可。
知识点一
知识点二
课时精练
(3)花粉管通道法：我国科学家独创的方法花粉管通道法，就是在植物受
粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去□14 ____柱__头________；然后，滴加 □15 ____D_N__A_______(含目的基因)，使目的基因借助□16 __花__粉__管_通__道_____进入
受体细胞。该方法十分简单经济。我国的转基因抗虫棉就是用此种方法获得 的。
知识点一
知识点二
课时精练
3．将目的基因导入动物细胞
(1)方法：□01 ___显__微__注__射_____技术，采用最多、最有效的方法。 (2)受体细胞：动物的□02 __受__精__卵________。 (3)操 作 过程 ：将含 有□03 __目__的__基_因__的__表__达_载__体______提 纯―→ 取 卵 (□04 ___受__精__卵_______)―→□05 ____显__微_注__射_____―→受精卵经胚胎早期培养后，□06 ___移__植_________ 到 雌 性 动 物 的 □07 输__卵__管__或__子_宫__内___―→ 获 得 □08
_受__体__细__胞__染_色__体__的__D_N__A___上―→目的基因表达。
课时作业4：3.2.2 将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定
第2节第2课时将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定一、单选题1.科学家已能运用基因工程技术,让羊合成并由乳腺分泌抗体,下列叙述正确的是()①该技术将导致定向变异②DNA连接酶把目的基因与运载体黏性末端的氢键与磷酸二酯键都连接起来③蛋白质中的氨基酸序列可为合成目的基因提供资料④受精卵是理想的受体A.①②③B.①③④C.②③④D.①②④2.目的基因与运载体结合所需的条件有()①同一种限制酶②具有抗性基因的质粒③RNA 聚合酶④目的基因⑤DNA 连接酶⑥四种脱氧核苷酸⑦A TPA.①②③④⑤⑥B.①②④⑤⑥⑦C.①②③④⑤D.①②④⑤3.将重组DNA分子导入动物细胞的常用方法是()A.花粉管通道法B.氯化钙处理法C.显微注射法D.土壤农杆菌转化法4.进行生物工程设计,选择好的实验材料是成功的一半,下表中选择的实验材料与实验目的不当的一项是()。
5.判断基因工程是否成功的根本标志是( )。
A.目的基因能否在受体细胞中检测到B.目的基因转录产生的mRNA能否在受体细胞中检测到C.目的基因表达产生的蛋白质能否在受体细胞中检测到D.受体生物个体是否表现出目的基因控制的性状6.下列有关基因工程的叙述正确的是( )。
A.用同种限制性核酸内切酶切割载体与含目的基因的DNA片段可获得相同黏性末端B.以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列相同C.检测到受体细胞中含有目的基因就标志着基因工程育种已经成功D.质粒上的抗生素抗性基因有利于质粒与外源基因连接7.下列均为基因工程技术中常用的基因运载工具的一组是()。
A.大肠杆菌、X噬菌体的衍生物B.蓝藻、质粒C.动植物病毒、X噬菌体的衍生物D.线粒体、质粒8.有关基因工程的叙述中,错误的是()T DNA连接酶只能缝合互补的黏性末端A.4B.限制性核酸内切酶可用于目的基因的获得C.目的基因可由载体导入受体细胞D.人工合成目的基因时不用限制性核酸内切酶9.下列不属于获取目的基因的方法的是( )A.利用DNA合成仪人工直接进行合成B.利用PCR技术扩增实现大量生产C.利用DNA连接酶在受体细胞中获得D.从基因文库中获取10.基因工程操作步骤的正确顺序是( )①目的基因与载体结合②将目的基因导入受体细胞③目的基因的检测与鉴定④提取目的基因A.④①②③B.②④①③C.③②④①D.③④①②11.基因工程的正确操作步骤是()①构建基因表达载体②将目的基因导入受体细胞③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求④提取目的基因A.③②④①B.②③①③C.④①②③D.③④①②12.如图表示基因工程中获取水稻某目的基因的不同方法。
3.2.2将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定课件高二下学期生物人教版选择性必修3
吸收
感受态细胞
(4)过程：
Ca2+处理细胞
感受态细胞
实例：利用转基因大肠杆菌生产药物
表达载体与感受 态细胞混合
感受态细胞吸 收DNA分子
为何导入的不是胰岛素基因而是cDNA? 大肠杆菌生产出的胰岛素具有生物活性？
➢ 原因：①原核生物细胞里没有相应的酶来去除内含子； ②原核生物没有真核的蛋白质加工系统（如内质网、高尔基体等）
2.目的基因导入动物细胞
（1）常用方法：显微注射法 （2）受体细胞: 受精卵
（3) 过程：
构建基因表达载体并提纯
利用显微注射将基因表达 载体注入动物的受精卵中
早期胚胎培养 胚胎移植
获得具有新性状的动物
①体积大，易操作。②易表现出全能性。
3.目的基因导入微生物细胞
（1）常用方法： Ca2+处理 Ca2+的作用：增加细胞壁的通透性，可使细胞处于一种能吸 收周围环境中DNA分子的生理状态（感受态细胞）。 （2）受体细胞： 原核细胞（常选择大肠杆菌）
√D．通过与受体细胞的基因组序列比对，可确定T-DNA的插入位置
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课后达标检测
(2023·黑龙江哈尔滨高二月考)据研究，新冠病毒表面的S蛋白是主要的病毒 抗原，在康复病人的血清中有抗S蛋白的特异性抗体。下图为某机构研制疫 苗的部分过程。请回答下列相关问题：
课后达标检测
农杆菌Ti质粒上的T-DNA可以转移并随机插入被侵染植物的染色体DNA中。 研究者将图示中被侵染植物的DNA片段连接成环，并以此环为模板进行 PCR，扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列，以此可确定T-DNA插入的 具体位置。下列说法不正确的是( ) 注：子链从引物的3′端开始延伸。 A．PCR扩增利用的是DNA热变性的原理 B．进行PCR扩增需要耐高温的DNA聚合酶 C．利用图中的引物②③组合可扩增出两侧的未知序列
3.2基因工程的基本操作程序(第2课时)
第三章基因工程第2节第2课时将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定（课前+课中+课后，三案一体）课前案【预习新知】一、将目的基因导入受体细胞1.转化目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
2.转化方法（1）导入植物细胞常用方法：花粉管通道法、农杆菌转化法（适用于双子叶植物或裸子植物）。
（2）导入动物细胞①常用方法：显微注射技术。
②常用受体细胞：受精卵。
（3）导入微生物细胞①方法：用Ca+处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。
②受体细胞：原核生物（使用最广泛的是大肠杆菌）。
③原核生物的特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。
二、目的基因的检测与鉴定三、DNA片段的扩增及电泳鉴定1.实验原理（1）PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合。
（2）在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象有关。
（3）电泳：在一定的pH下，DNA分子中具有的可解离基团可以带上正电荷或负电荷。
在电场的作用下，这些带电分子向着与它所带电荷相反的电极移动的过程。
（4）PCR产物的鉴定方法：琼脂糖凝胶电泳。
2.目的要求（1）了解PCR的电泳鉴定的基本原理。
（2）尝试进行PCR的基本操作并用电泳鉴定PCR的产物。
3.方法步骤（1）用微量移液器按照PCR反应体系的配方或PCR试剂盒说明书，在微量离心管中依次加入各组分。
（2）待所有的组分都加入后，盖严离心管的盖子。
将微量离心管放入离心机里，离心约10s，使反应液集中在管的底部。
（3）设置好PCR仪的循环程序，将装有反应液的微量离心管放入PCR仪中进行反应。
（4）根据待分离DNA片段的大小，用电泳缓冲液配制琼脂糖溶液，在沸水浴或微波炉内加热至琼脂糖融化。
稍冷却后，加入适量的核酸染料混匀。
（5）将温热的琼脂糖溶液迅速导入模具，并插入合适大小的梳子，以形成加样孔。
（6）待凝胶电泳溶液完全凝固，小心拔出梳子，取出凝胶放入电泳槽内。
人教版高中生物选修3检测目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定
第2课时将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定一、选择题题型一目的基因导入受体细胞1．受体细胞不同，将目的基因导入受体细胞的方法也不相同，下列受体细胞与导入方法匹配错误的是()选项受体细胞导入方法A 棉花细胞花粉管通道法B 大肠杆菌农杆菌转化法C 羊受精卵显微注射技术D 小麦细胞基因枪法答案 B解析花粉管通道法是一种十分简便、经济的方法，我国的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的，A正确；将目的基因导入微生物细胞，常采用感受态细胞法(Ca2＋处理法)，这种方法能使大肠杆菌细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，B错误；显微注射技术是将目的基因导入动物细胞(如羊受精卵)的最常用、最有效的方法，C正确；双子叶植物和裸子植物常用农杆菌转化法导入目的基因，单子叶植物(如小麦)可用基因枪法导入目的基因，D正确。
2．农杆菌转化法转移目的基因进入受体细胞后，目的基因插入的位置是() A．Ti质粒上B．受体细胞染色体的DNA上C．T-DNAD．农杆菌的拟核答案 B解析在农杆菌转化法中利用农杆菌的T-DNA将目的基因整合到受体细胞染色体的DNA上。
3．目前将目的基因导入动物细胞最常用、最有效的方法是()A．显微注射法B．农杆菌转化法C．基因枪法D．花粉管通道法答案 A解析显微注射法是迄今为止将目的基因导入动物细胞中采用最多、最有效的一种方法。
4．在基因工程技术中，需要用氯化钙处理的环节是()A．目的基因的提取和导入B．目的基因与载体结合C．将目的基因导入受体细胞D．目的基因的表达答案 C解析如果载体是质粒，受体细胞是细菌，一般是将细菌用氯化钙处理，使其成为感受态细胞，使含有目的基因的重组DNA分子更容易进入受体细胞，目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的复制而复制。
5．基因工程中科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞的主要原因是()A．结构简单，操作方便B．繁殖速度快C．遗传物质含量少，易操作D．性状稳定，变异少答案 B解析微生物一般具有以下几个特点：①个体微小，结构简单；②繁殖快，在实验室培养条件下细菌几十分钟至几小时可以繁殖一代；③代谢类型多，活性强；④易变异，相对于高等生物而言，较容易发生变异。
学案1：3.2.2 将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定
第2节第2课时将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定【课标要求】阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定。
【核心素养】1．科学思维：结合生产实例，举例说出基因工程的基本操作程序。
2．科学探究：针对人类生产和生活的某一需求，尝试提出初步的基因工程构想，完成初步设计。
【新知探究】三、将目的基因导入受体细胞1．转化：目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内________和________的过程。
2．目的基因导入受体细胞的方法(1)目的基因导入植物细胞①花粉管通道法Ⅰ.用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入________中。
Ⅱ.在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借________________进入________。
②农杆菌转化法Ⅰ.农杆菌的特点：农杆菌自然条件下侵染________植物和________植物；农杆菌的Ti质粒上的________能够整合到所侵染细胞的________________上。
Ⅱ.转化方法：将目的基因插入农杆菌________________中，让农杆菌侵染植物细胞。
(2)目的基因导入动物细胞①常用方法：________法。
②常用受体细胞：________。
(3)目的基因导入微生物细胞①方法：用________处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后将重组表达载体导入其中。
②常用受体细胞：原核细胞(使用最广泛的是大肠杆菌)。
四、目的基因的检测与鉴定1．分子水平检测(1)通过________等技术检测受体细胞染色体DNA上是否插入了目的基因或检测目的基因是否转录出mRNA。
(2)从转基因生物中提取蛋白质用相应的抗体进行________________杂交，检测目的基因是否翻译成了蛋白质。
2．个体水平鉴定包括抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性及抗性程度。
高中生物《将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定》导学案+课后练习题
第2课时将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定[学习目标] 1.熟悉目的基因导入受体细胞的方法。
2.了解农杆菌转化法。
3.画出DNA分子杂交示意图。
4.目的基因的检测方法的比较。
知识点一将目的基因导入受体细胞知识梳理1.转化的含义：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内□01维持稳定和表达的过程。
2．将目的基因导入植物细胞(1)□01农杆菌转化法：将目的基因导入□02双子叶植物和裸子植物最常用的方法①农杆菌特点：当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的□03酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的□04Ti质料上的T－DNA(可转移的DNA)可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的□05DNA上。
②受体细胞：植物□06体细胞或受精卵。
③操作过程：将目的基因插入到□07Ti质粒的T-DNA上―→转入□08农杆菌―→导入□09植物细胞―→目的基因整合到□10受体细胞染色体的DNA上―→目的基因表达。
(2)基因枪法：适用于□11单子叶植物，成本较高。
是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的□12表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并□13表达的方法。
(3)花粉管通道法：我国科学家独创的方法花粉管通道法，就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去□14柱头；然后，滴加□15DNA(含目的基因)，使目的基因借助□16花粉管通道进入受体细胞。
该方法十分简单经济。
我国的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的。
3．将目的基因导入动物细胞(1)方法：□01显微注射技术，采用最多、最有效的方法。
(2)受体细胞：动物的□02受精卵。
(3)操作过程：将含有□03目的基因的表达载体提纯―→取卵(□04受精卵)―→□05显微注射―→受精卵经胚胎早期培养后，□06移植到雌性动物的□07输卵管或子宫内―→获得□08新性状的动物。
4．将目的基因导入微生物细胞(1)方法①用□01Ca2＋处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态(这种细胞称为□02感受态细胞)。
高中生物第3章基因工程第2节基因工程的基本操作程序第2课时将目的基因导入受体细胞并进行检测与鉴定课件
视角2 农杆菌转化法的原理和特点 3.(2022浙江山水联盟高二开学考)植物基因工程可以改造农作物性状,使 农作物变得更加高产。如图是培育良种水稻的有关原理和步骤,有关叙述 错误的是( A )
A.图中表达载体中的T-DNA插入外源基因后将失去作用 B.图中②过程需要在无菌环境下用Ca2+处理土壤农杆菌 C.需要用除草剂检测转基因植株是否具有抗除草剂性状 D.该过程需要用到固体和液体培养基
考题点睛
主题二 目的基因的检测与鉴定
【情境探究】
抗虫棉中的“杀虫基因”就是培育转基因抗虫棉的目的基因——Bt抗虫蛋 白基因。Bt基因进入受体细胞后,是否稳定维持和表达其遗传特性,只有通 过检测与鉴定才能知道。下图为抗虫棉的接种实验,结合图示(下图为转基 因抗虫棉使虫体发育不正常)探究以下问题。
1.图中抗虫棉的接种试验属于哪种水平的鉴定? 提示 属于个体生物学水平的鉴定。 2.分子水平的鉴定包括哪些内容? 提示 目的基因的检测与鉴定在分子水平包括:目的基因是否插入受体 DNA,目的基因是否转录出mRNA和目的基因是否翻译出蛋白质三个层次。 3.实际操作中只有部分Bt基因能够进入受体细胞并表达出抗虫蛋白。用 什么方法检测棉花的染色体DNA上是否插入了Bt基因或检测Bt基因是否 转录出了mRNA?请提出你的思路。 提示 利用PCR等技术检测棉花的染色体DNA中是否插入Bt基因或检测Bt 基因是否转录出了mRNA。
解析 T-DNA可将T-DNA之间的DNA序列转移并整合至受体细胞的染色体 DNA上,使目的基因能够稳定遗传,故T-DNA插入外源基因后不会失去作 用,A项错误;用Ca2+处理农杆菌,使农杆菌处于感受态,利于农杆菌吸收目的 基因完成转化过程,故图中②将载体导入农杆菌过程需要在无菌环境下用 Ca2+处理土壤农杆菌,B项正确;为从个体生物学水平上检测图中植株是否 具有抗除草剂性状,可采用的方法是用相应除草剂喷洒待测植株,C项正确; 筛选含重组质粒的农杆菌时用的是固体培养基,扩大培养时应该用液体培 养基,故该过程需要用到固体和液体培养基,D项正确。
人教版高中生物学选择性必修3生物技术与工程精品课件 第3章 将目的基因导入受体细胞并进行检测与鉴定
关键点拨 将目的基因导入不同细胞的方法
项目 常用 方法 受体 细胞
植物细胞 农杆菌转化法 花粉管通道法
体细胞
体细胞
动物细胞 显微注射法
微生物细胞
受精卵
原核细胞
转化 过程
致用
1. [2023江苏扬州高二期中改编]我国科学家在进行抗虫棉的培育过程中独创了“花粉 管通道法”，该方法有多种操作方式。下图表示花粉管通道法介导植物基因转移，下 列说法错误的是( )
3. 如果目的基因是抗虫基因，在个体水平上怎么检测？如果目的基因是耐盐基因呢？ 提示 如果目的基因是抗虫基因，则要通过抗虫接种实验来检测；如果目的基因是耐盐 基因，则要用一定浓度的盐水浇灌来检测。
Байду номын сангаас
知新
1. 分子水平的检测
抗原—抗体杂交
2.个体生物学水平的鉴定:抗虫、抗病接种实验等。 关键点拨 1.目的基因的检测与鉴定
第3章 基因工程
第2节 基因工程的基本操作程序
第2课时 将目的基因导入受体细胞并进行检 测与鉴定
学习 目标
01 考点一 将目的基因导入受体细胞 02 考点二 目的基因的检测与鉴定
03
01 考点一 将目的基因导入受体细胞
导入
2. 将基因表达载体导入农杆菌细胞时，应怎样处理农杆菌细胞？
3. 植物的受精卵或体细胞都可以作为受体细胞，如果将目的基因导入动物细胞，选用 体细胞是否可行？ 提示 动物体细胞分化程度高，全能性受到限制，因此一般采用受精卵作为受体细胞。
旁栏边角 想一想
提示 在分子水平上提高转基因抗虫棉的抗虫性和抗虫持久性，包括在棉花中转入多个 杀虫基因、构建组织特异性表达的启动子、提高杀虫基因的表达量等。
20-21版：3.2.2 将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定（步步高）
思考延伸拓展 强化素养
若获得的转基因植株(几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中)抗真菌 病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是什么？ 提示 几丁质酶基因没有转录或转录的mRNA没有翻译。
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解析 在自然条件下，农杆菌对大多数单子叶植物没有侵染能力，可侵 染双子叶植物和裸子植物，利用其侵染性，可实现将目的基因导入植物 细胞的目的。真正可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体的DNA上 的是农杆菌T-DNA片段，因此目的基因必须插入到该部位。
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(2)根据T-DNA这一转移特点，推测 该DNA片段上可能含有控制D__N_A__连_ 接__酶__、__限__制__酶____( 酶 的 种 类 ) 合 成 的 基因。
②农杆菌转化法：将目的基因导 入 双子叶植物 和裸子植物时最 常用的方法。
a.农杆菌的特点：农杆菌细胞内含有 Ti 质粒，当它侵染植物细胞后，能 将Ti 质粒上的 T-DNA (可转移的DNA)转移到被侵染的细胞，并且将其整 合到该细胞的 染色体DNA 上。 b.方法步骤： 目的基因 插入Ti质粒的T-DNA 中→转入农杆菌 →导入植物 细胞→目的基因插入植物细胞中的染色体DNA上→目的基因表达。
5.科学家将外源基因导入绵羊的受精卵中，由于外源基因可能随机插入 到受精卵的DNA中，因而有时会导致早期胚胎死亡，请分析可能的原因 是什么？ 提示 外源基因的插入可能使受精卵内生命活动必需的某些基因不能正 常表达，因而有时会导致早期胚胎死亡。 6.将胰岛素基因的表达载体导入大肠杆菌，从大肠杆菌中获得的“胰岛 素”未能达到期待的生物活性，导致这种差异的原因可能是什么？
课时作业1：3.2.2 将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定
第2课时将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定A组基础对点练题组一将目的基因导入受体细胞1．基因工程中因受体细胞不同，目的基因导入的方法也不同，下列叙述不正确的是() A．将目的基因导入棉花细胞内常用花粉管通道法B．将目的基因导入老鼠细胞内常用显微注射技术C．将目的基因导入大肠杆菌内常用Ca2＋处理法D．将目的基因导入酵母菌内常用农杆菌转化法答案 D2．某实验小组将人生长激素基因导入大肠杆菌细胞制备工程菌，下列相关叙述正确的是()A．人生长激素基因可以通过从下丘脑细胞获得的mRNA为模板经逆转录获得B．将人的生长激素基因导入大肠杆菌常采用Ca2＋处理细胞C．在生长激素基因的上游插入终止子的目的是保证目的基因成功转录D．利用工程菌制备的和人体细胞合成的生长激素具有相同的空间结构答案 B解析生长激素基因在垂体细胞中表达，在下丘脑细胞不表达，因此下丘脑细胞没有生长激素基因转录的mRNA，A错误；在生长激素基因的上游插入启动子的目的是保证目的基因成功转录，C错误；人体细胞合成的生长激素要在内质网、高尔基体中进行加工，大肠杆菌没有内质网、高尔基体，因此利用工程菌制备的生长激素和人体细胞合成的生长激素的空间结构不同，D错误。
3．抗菌肽对治疗癌症有一定作用，如图表示抗菌肽的合成过程。
下列相关说法正确的是() 克隆目的基因→导入毕赤酵母菌→筛选菌种→甲醇诱导抗菌肽表达→分离纯化→功能研究A．用PCR技术克隆目的基因不需要DNA解旋酶B．基因表达载体包含起始密码子和终止密码子C．用显微注射法导入基因表达载体D．筛选菌种时用基因探针检测相关蛋白质答案 A解析PCR技术中采用高温变性使DNA解旋，因此用PCR技术克隆目的基因不需要DNA解旋酶，A正确；基因表达载体包含启动子和终止子，而起始密码子和终止密码子在mRNA 上，B错误；将基因表达载体导入酵母菌细胞时应用Ca2＋处理法，C错误；筛选菌种时可用基因探针检测相关基因或mRNA，不能用基因探针检测蛋白质，D错误。
2019-2020生物人教版选修3检测：专题1 1.2 第2课时 目的基因导入受体细胞 目的基因的
姓名，年级：时间：第2课时将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定一、选择题题型一目的基因导入受体细胞1．受体细胞不同,将目的基因导入受体细胞的方法也不相同，下列受体细胞与导入方法匹配错误的是( ）选项受体细胞导入方法A 棉花细胞花粉管通道法B 大肠杆菌农杆菌转化法C 羊受精卵显微注射技术D 小麦细胞基因枪法答案B解析花粉管通道法是一种十分简便、经济的方法，我国的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的，A正确；将目的基因导入微生物细胞,常采用感受态细胞法(Ca2＋处理法),这种方法能使大肠杆菌细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，B错误；显微注射技术是将目的基因导入动物细胞(如羊受精卵）的最常用、最有效的方法,C正确；双子叶植物和裸子植物常用农杆菌转化法导入目的基因，单子叶植物(如小麦）可用基因枪法导入目的基因，D正确。
2．农杆菌转化法转移目的基因进入受体细胞后，目的基因插入的位置是( ）A．Ti质粒上B．受体细胞染色体的DNA上C．T.DNAD．农杆菌的拟核答案B解析在农杆菌转化法中利用农杆菌的T。
DNA将目的基因整合到受体细胞染色体的DNA上。
3．目前将目的基因导入动物细胞最常用、最有效的方法是( )A．显微注射法B．农杆菌转化法C．基因枪法D．花粉管通道法答案A解析显微注射法是迄今为止将目的基因导入动物细胞中采用最多、最有效的一种方法.4．在基因工程技术中，需要用氯化钙处理的环节是( )A．目的基因的提取和导入B．目的基因与载体结合C．将目的基因导入受体细胞D．目的基因的表达答案C解析如果载体是质粒，受体细胞是细菌,一般是将细菌用氯化钙处理,使其成为感受态细胞,使含有目的基因的重组DNA分子更容易进入受体细胞，目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的复制而复制。
5．基因工程中科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞的主要原因是( )A．结构简单，操作方便B．繁殖速度快C．遗传物质含量少，易操作D．性状稳定，变异少答案B解析微生物一般具有以下几个特点：①个体微小，结构简单;②繁殖快,在实验室培养条件下细菌几十分钟至几小时可以繁殖一代；③代谢类型多，活性强;④易变异,相对于高等生物而言，较容易发生变异。
【生物】目的基因的检测与鉴定课件-2023-2024学年高二下学期生物人教版(2019)选择性必修3
A.蓝色 白色 白色 B.蓝色 蓝色 白色 C.蓝色 白色 蓝色 D.白色 蓝色 白色
重组体的筛选方法
利用特定表型：蓝白斑筛选——个体水平
重组体的筛选方法
双酶切法——分子水平
载体和CD14片段的酶切位点及相应的酶切抗性基因序列如图1所示。用XhoI和
SalI分别酶切CD14和载体后连接，CD14接入载体时会形成正向连接和反向连
重组体的筛选方法
双抗性实验——个体水平
(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件
有
。而作为基因表达载体,除满足上述基本
条件外,还需具有启动子和终止子。
(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述
四种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含环状目的基因
的细胞是不能区分的,其原因是
;并且含有质粒载
cDNA
PCR操作 是否扩增出 目的基因
转基因 生物
提取RNA
标记的基 因探针
RNA分子杂交(Northern Blot)流程图
目的基因的检测与鉴定
基因是否翻译（蛋白质） 抗原-抗体杂交技术
苏云金芽孢杆 菌
提取 Bt毒蛋白
注射小鼠体内
抗体
脱分化
提取蛋白 电泳分离
标记抗体 杂交
(Western Blot)流程图
（3）筛选方法： ①将转化后的细菌放在含氨苄青霉素培养基上培养，能生长的是含重组质粒的细菌、含 质粒的细菌和含质粒—质粒的细菌，如图1、2、3、4、5菌落； ②再利用灭菌的绒布影印到含四环素培养基上，不生长的即为含目的基因的菌落，如图 1、5。最后，可在含氨苄青霉素的培养基上挑取1、5菌落进行培养。
BCD
小结
1.目的基因的筛选和获取-前提
2020高中生物专题将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定课时精练含解析新人教版
将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定[基础对点]知识点一将目的基因导入受体细胞1.下列关于基因表达载体导入微生物细胞的叙述中，不正确的是( )A．常用原核生物作为受体细胞，是因为原核生物繁殖快，且多为单细胞，遗传物质相对较少B．受体细胞所处的一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态称为感受态C．感受态细胞吸收DNA分子需要适宜的温度和酸碱度D．感受态细胞吸收重组表达载体DNA分子的液体只要调节为适宜的pH即可，没必要用缓冲液答案 D解析将基因表达载体导入微生物细胞时，需在一定条件(如适宜的温度、pH等)下，将基因表达载体和感受态的微生物细胞混合培养，在培养过程中，可能会影响pH的变化，因此要加入缓冲液，以保持适宜的pH，D错误。
2．将目的基因导入玉米茎尖分生区细胞和小鼠受精卵，常用的方法分别是( )A．显微注射技术农杆菌转化法B．基因枪法花粉管通道法C．农杆菌转化法显微注射技术D．基因枪法显微注射技术答案 D解析玉米是单子叶植物，目的基因导入单子叶植物常用的方法是基因枪法；对于动物细胞来说，常用的方法是显微注射技术，D正确。
3.农杆菌中含有一个大型的Ti质粒(如右图所示)，在侵染植物细胞的过程中，其中的T-DNA片段可以转入植物的基因组。
若想用基因工程并通过农杆菌向某种植物中导入抗旱基因，以下分析不合理的是( )A．若用Ti质粒作为抗旱基因的载体，目的基因的插入位置应该在T-DNA片段内，且要保证复制起始点和用于转移T-DNA的基因片段不被破坏Ti质粒导入农杆菌中时，可以用Ca．将重组B C．转基因抗旱植物培育是否成功的＋2处理细菌最简单检测方法是看该植物是否具有抗旱性状 D．若能够在植物细胞中检测到抗旱目的基因，则说明该基因工程项目获得成功D答案片段内，且质粒作为抗旱基因的载体，目的基因的插入位置应该在T-DNATi解析若用正确；将重组A的基因片段不被破坏，否则不会成功，T-DNA要保证复制起始点和用于转移DNATi质粒导入农杆菌中时，可以用Ca转＋2分子的状态，处理细菌，使细菌处于易于吸收周围基因抗旱植物培育是否成功的最简单检测方法是看该植物是否具有B正确；便于完成转化，正确；能够在植物细胞中检测到抗旱目的基因，并能成功表达出抗旱性状，则说抗旱性状，C D错误。
2017届高中生物专题1基因工程1.3基因工程的基本操作程序__将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定课后
专题1 基因工程 1.3 基因工程的基本操作程序——将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定一、选择题1．基因工程中科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，主要原因是( ) A．结构简单，操作方便B．繁殖速度快C．遗传物质含量少D．性状稳定，变异少解析：本题考查基因工程的受体细胞。
目的基因导入受体细胞后，随着受体细胞的繁殖而复制，由于细菌等微生物繁殖速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因，所以基因工程常用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞。
解答这类题目应结合受体细胞的特点回答。
答案：B2．目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测和鉴定才能知道。
下列属于目的基因的检测的是( )①检测受体细胞是否含有目的基因②检测受体细胞是否有致病基因③检测目的基因是否转录出信使RNA ④检测目的基因是否翻译出蛋白质A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④解析：本题考查目的基因检测的相关知识。
目的基因的检测包括：检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因，方法是用DNA探针与基因组DNA杂交；检测目的基因是否转录出了信使RNA，方法是用基因探针与信使RNA杂交；最后检测目的基因是否翻译出了蛋白质，方法是进行抗原—抗体杂交。
答案：C3．如图为某科研小组采用“基因靶向”技术先将小鼠的棕褐毛色基因导入黑色纯种小鼠的胚胎干细胞(ES细胞)中，再将改造后的胚胎干细胞移植回囊胚继续发育成小鼠的过程。
据图分析不正确的是( )A．该过程使用的工具酶是DNA连接酶以及限制性核酸内切酶B．完成第Ⅱ步操作得到的由两个DNA切段连接成的产物，必定是载体与棕褐毛色基因形成的重组DNA分子C．第Ⅲ步操作后，还需经过筛选目的基因已成功转移的胚胎干细胞的过程，才能将该胚胎干细胞注射到囊胚中D．改造后的胚胎干细胞移植回囊胚能继续发育成小鼠，其根本原因是细胞核中含有一整套的遗传物质解析：图中的第Ⅱ步为形成重组DNA过程，在DNA连接酶的作用下，目的基因和具有黏性末端的质粒形成重组DNA，与此同时还会发生质粒和质粒的重组，以及目的基因和目的基因的重组。
学案2：3.2.2 将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定
第2节第2课时将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定【学习目标】生命观念：阐明基因工程的原理和基本操作程序。
科学思维：针对人类生产或生活中的某一需求，选取适当的基因工程的技术和方法，尝试设计获得某一转基因产品的方案。
科学探究：尝试进行PCR的基本操作并用电泳鉴定PCR的产物。
【重点难点】教学重点：1.基因工程基本操作程序的四个步骤。
2.DNA片段的扩增及电泳鉴定。
教学难点：1.利用PCR获取和扩增目的基因。
2.DNA片段的扩增及电泳鉴定。
【学习过程】三、将目的基因导入受体细胞1.将目的基因导入植物细胞（1）花粉管通道法（受体细胞：__________）①用微量注射器将含__________的DNA溶液直接注入_____中；②在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助__________通道进入胚囊。
（2）农杆菌转化法①转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程。
此处“转化”与肺炎链球菌转化实验中的“转化”含义相同，实质都是__________。
②特点：a.能在自然条件下侵染_____植物和_____植物，而对大多数_____植物没有侵染能力。
b.农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的_________（_______的DNA）转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的__________上。
③实验思路（过程）：将目的基因插入Ti质粒的_____中，通过农杆菌的_____作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并整合到受体细胞的__________上，使目的基因能够维持_____和_____。
④具体转化方法：a.可以将新鲜的从叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，然后筛选__________，并再生成植株。
b.可以将_____直接浸没在含有农杆菌的溶液中一段时间，然后培养植株并获得种子，再进行筛选、鉴定等。
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第2课时将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定一、选择题题型一目的基因导入受体细胞1．受体细胞不同，将目的基因导入受体细胞的方法也不相同，下列受体细胞与导入方法匹配错误的是( )答案 B解析花粉管通道法是一种十分简便、经济的方法，我国的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的，A正确；将目的基因导入微生物细胞，常采用感受态细胞法(Ca2＋处理法)，这种方法能使大肠杆菌细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，B错误；显微注射技术是将目的基因导入动物细胞(如羊受精卵)的最常用、最有效的方法，C正确；双子叶植物和裸子植物常用农杆菌转化法导入目的基因，单子叶植物(如小麦)可用基因枪法导入目的基因，D 正确。
2．农杆菌转化法转移目的基因进入受体细胞后，目的基因插入的位置是( )A．Ti质粒上B．受体细胞染色体的DNA上C．TDNAD．农杆菌的拟核答案 B解析在农杆菌转化法中利用农杆菌的TDNA将目的基因整合到受体细胞染色体的DNA 上。
3．目前将目的基因导入动物细胞最常用、最有效的方法是( )A．显微注射法B．农杆菌转化法C．基因枪法D．花粉管通道法答案 A解析显微注射法是迄今为止将目的基因导入动物细胞中采用最多、最有效的一种方法。
4．在基因工程技术中，需要用氯化钙处理的环节是( )A．目的基因的提取和导入B．目的基因与载体结合C．将目的基因导入受体细胞D．目的基因的表达答案 C解析如果载体是质粒，受体细胞是细菌，一般是将细菌用氯化钙处理，使其成为感受态细胞，使含有目的基因的重组DNA分子更容易进入受体细胞，目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的复制而复制。
5．基因工程中科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞的主要原因是( ) A．结构简单，操作方便B．繁殖速度快C．遗传物质含量少，易操作D．性状稳定，变异少答案 B解析微生物一般具有以下几个特点：①个体微小，结构简单；②繁殖快，在实验室培养条件下细菌几十分钟至几小时可以繁殖一代；③代谢类型多，活性强；④易变异，相对于高等生物而言，较容易发生变异。
在基因工程中，主要是利用它快速繁殖的特点，可以提供更多的基因工程的产物。
6．目的基因整合到某作物DNA片段上后( )A．改变了原DNA的碱基排列顺序B．改变了原DNA上各基因的碱基排列顺序C．改变了原DNA上各基因的复制过程D．改变了原DNA上各基因的转录过程答案 A解析目的基因整合到某作物的DNA片段上后，不能改变其他基因的碱基序列，也不能改变基因的复制和转录过程，B、C、D错误；只能改变原DNA的碱基排列顺序，A正确。
7．人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体加工合成。
通过转基因技术，可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( )A．大肠杆菌 B．酵母菌C．T2噬菌体 D．质粒DNA答案 B解析糖蛋白必须经内质网和高尔基体加工合成，而大肠杆菌属于原核生物，不含内质网和高尔基体，A错误；酵母菌属于真核生物，含有内质网和高尔基体，可以作为使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞，B正确；T2噬菌体没有细胞结构，不能作为基因工程的受体细胞，C错误；质粒DNA能作为基因工程的载体，但不能作为受体细胞，D错误。
8．采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的作法正确的是( )①将毒素蛋白注射到棉受精卵中②将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中③将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养④将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒重组，借助花粉管进入棉的子房，并进入受精卵中A．①② B．②③ C．③④ D．④①答案 C解析将毒素蛋白直接注射到棉受精卵中，没有获得目的基因，子代细胞不会有抗虫性状，故①错误；将编码毒素蛋白的DNA序列，直接注射到棉受精卵中而没有将目的基因与载体结合，目的基因将不能稳定存在，很容易被水解，不能遗传给下一代，②错误；当受体细胞是植物细胞时，采用最多的转化方法是农杆菌转化法，该方法可将目的基因导入受体细胞，然后通过植物组织培养技术将植物细胞培养成完整植株，③正确；当受体细胞是植物细胞时，还可以利用花粉管通道法将目的基因导入受精卵中，然后发育为转基因植株，④正确。
所以选C。
题型二目的基因的检测与鉴定9．要检测受体DNA中是否成功插入了目的基因，需要用基因探针，这里的基因探针是指( )A．用于检测疾病的医疗器械B．带标记的含目的基因的DNA片段C．带标记的蛋白质分子D．人工合成的免疫球蛋白答案 B解析本题中基因探针是指用放射性同位素或荧光分子标记的含目的基因的DNA片段，利用碱基互补配对原则，检测目的基因是否导入受体细胞的DNA中。
10．目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。
下列属于目的基因检测与鉴定的是( )①检测受体细胞中是否有目的基因②检测受体细胞中是否有致病基因③检测目的基因是否转录出mRNA ④检测目的基因是否翻译成蛋白质A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②④答案 C解析目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传性状，只有通过检测与鉴定才能知道，包括检测转基因生物的DNA上是否插入目的基因，检测目的基因是否转录出mRNA，检测目的基因是否翻译成蛋白质。
基因工程中无需检测受体细胞中是否有致病基因，故②不属于目的基因的检测与鉴定。
11．棉花产业在我国国民经济发展中占有举足轻重的地位，为了抵抗虫害，我国育成了拥有自主知识产权的转基因抗虫棉，棉田生态环境得到改善。
在判断抗虫基因是否成功转入棉花基因组的方法中，不属于分子检测的是( )A．通过观察害虫吃棉叶是否死亡B．检测目的基因片段与DNA探针能否形成杂交带C．检测目的基因转录形成的mRNA与DNA探针能否形成杂交带D．检测目的基因表达产物蛋白质能否与特定抗体形成杂交带答案 A解析检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，方法是DNA分子杂交技术；检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是分子杂交技术；检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是抗原—抗体杂交技术。
通过观察害虫吃棉叶是否死亡属于个体生物学水平的鉴定，而不是分子检测，A符合题意。
12．利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需要的产品。
下列选项中说明目的基因完成了在受体细胞中表达的是( )A．棉花体细胞中检测到细菌的抗虫基因B．大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNAC．山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列D．酵母菌细胞中提取到人干扰素答案 D解析基因表达包括转录和翻译过程。
棉花体细胞中检测到细菌抗虫基因，说明目的基因已经导入受体细胞，但不能说明目的基因完成了表达过程，A错误；大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNA，说明目的基因已经成功导入受体细胞并转录，但不能说明目的基因完成了表达过程，B错误；山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列，说明目的基因已经成功导入受体细胞，但不能说明目的基因在受体细胞中已经完成表达，C错误；酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白，说明目的基因已经在受体细胞中完成了表达，D正确。
二、非选择题13．科学家设法将人的生长激素基因导入其他生物体(细胞)内，从而获取大量的人的生长激素，应用于侏儒症的早期治疗，如图所示。
请据图回答下列问题：(1)过程①采用的方法是________，过程②之前需用____________处理含目的基因的DNA 片段和质粒。
(2)过程③需事先对大肠杆菌用________处理，使其处于感受态，接着____________________________________________________________，从而完成转化过程。
(3)过程⑤重组载体导入动物细胞一般使用________法。
答案(1)反(逆)转录同种限制酶(2)Ca2＋将重组表达载体溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定温度下促进感受态细胞吸收DNA分子(合理即可)(3)显微注射解析(1)过程①是由mRNA到DNA的过程，利用了反转录法，过程②是将质粒和目的基因拼接在一起，在拼接前要用同种限制酶对含目的基因的DNA片段和质粒进行切割，以形成相同的黏性末端。
(2)过程③是将重组质粒导入大肠杆菌细胞，需要事先用Ca2＋处理，使大肠杆菌细胞成为感受态细胞，接着将重组质粒与感受态细胞混合，在一定温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。
(3)将目的基因导入动物细胞常采用显微注射法。
14．科学家发现胡萝卜中存在冷诱导的抗冻蛋白，克隆其cDNA，通过基因工程可用来改良植物的抗寒性。
下图为利用胡萝卜的AFP基因培育抗寒性强的番茄植株的过程。
请据图回答下列问题。
(1)以幼小胡萝卜植株细胞中的mRNA为材料获得抗冻蛋白cDNA，要依据______________原则。
利用PCR技术扩增AFP基因时，需要加入两种引物，原因是________________酶只能从引物的3′端延伸DNA链，用两种引物才能确保DNA的两条链同时被扩增，该酶只能特异地复制处于________之间的DNA序列，一个DNA分子经三轮复制以后，含有两种引物的DNA分子有________个。
(2)将AFP基因导入植物细胞时，目前常用的目的基因载体是Ti质粒，AFP基因必须插入该基因载体的________上。
将重组AFP基因的表达载体导入农杆菌，再感染番茄细胞，可经过________________技术形成转基因植株。
(3)若要在个体水平上检测抗寒性强的番茄植株是否培育成功，请写出检测思路。
______________________________________________________________________________________________________________________________________________ __。
答案(1)碱基互补配对热稳定DNA聚合(Taq) 两个引物 6 (2)TDNA植物组织培养(3)将获得的转基因植株放在低温(寒冷)环境中培养，若该植株能正常生长繁殖，则表明抗寒性强的番茄植株培育成功解析(1)以mRNA为模板获得cDNA的过程为逆转录过程，该过程遵循碱基互补配对原则，需要逆转录酶的催化。
利用PCR技术扩增AFP基因时，需要加入两种引物，原因是热稳定DNA 聚合酶只能从引物的3′端延伸DNA链，用两种引物才能确保DNA的两条链同时被扩增，该酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，一个DNA分子经三轮复制以后，含有两种引物的DNA分子有23－2＝6个。
(2)农杆菌Ti质粒上的T－DNA可转移至受体细胞染色体DNA上，根据农杆菌的这一特点，利用农杆菌的Ti质粒作为载体时，必须将目的基因插入其TDNA上。