一种测定酸性多糖中糖醛酸和中性糖含量的改良方法_许会生
活性多糖_论文-医学论文
第三章活性多糖本章要点1.膳食纤维的定义与分类2.膳食纤维的化学组成与物化性质3.膳食纤维的生理功能4.膳食纤维的副作用5.膳食纤维的加工、应用及推荐摄入量6.真菌多糖的物理性质与功效的关系7.真菌多糖的生理功能多糖是由糖甙键连接起来的醛糖或酮糖组成的天然大分子。
多糖是所有生命有机体的重要组成成分并与维持生命所必需的多种功能有关，大量存在于藻类、真菌、高等陆生植物中。
具有生物学功能的多糖又被称为“生物应答效应物”(biological response modifier，BRM)或活性多糖（active polysaccharides）。
很多多糖都具有抗肿瘤、免疫、抗补体、降血脂、降血糖、通便等活性。
第一节膳食纤维一、膳食纤维的定义与分类（一）膳食纤维的定义1. 膳食纤维的定义膳食纤维(Dietary fiber)这一名词是在1972年，Trowell等人在测定食品中各种营养成分时给出了膳食纤维的定义，即食物中不被消化吸收的植物成分。
1976年TroweII博士又将膳食纤维的定义扩展为“不被人体消化吸收的多糖类碳水合物和木质素”。
主要是指那些不被人体消化吸收的多糖类碳水化合物与木质素，以及植物体内含量较少的成分如糖蛋白、角质、蜡等。
1979年第93届美国职业分折化学家学会(AOAC)年会上Prosky和Harland提出，希望能统一膳食纤维的定义和分类方法，同时为了营养改良及食品标签而定量膳食纤维的目的，他也着手从事于符合膳食纤维定义的分析方法的统一工作。
并听取了世界范围内100多位科学家的意见。
1981年在加拿大渥太华进行的春季工作会议上，按照Trowell等在l976年提出的定义，就膳食纤维定量方法达成共识。
其中Asp、Furda和Schweizer等提出的测定方法被认为是较好的研究方法，在Prosky的倡导下，这些研究者(包括Devries和Harland)建立了一种适合国际间合作研究的简单方法，约有29个国家的43个实验室成功地完成这项研究。
多糖含量测定的几种不同方法比较
多糖含量测定的几种不同方法比较系别:信息学院专业:生物工程学号:姓名:指导教师:指导教师职称: 讲师多糖含量测定的几种不同方法比较摘要：本文综述了多糖含量测定的几种常用方法，主要有苯酚-硫酸法、3, 5-二硝基水杨酸法(简称DNS法)、蒽酮-硫酸法、色谱法、红外光谱定量分析多糖法等。
并对这些方法的优缺点进行了分析和比较。
这些方法可为多糖含量测定提供一定的参考，并为多糖含量测定的更深入研究提供一定的理论基础。
关键词：多糖；含量；测定；方法A review of different methodsto the determination of polysaccharidesAbstract: Paper reviewed some different methods to the determination of polysaccharides, in it phenol-vitriol method, 3, 5-two nitro salicylic acid (DNS) method, anthrone-vitriol method, chromatography, infrared spectrum quantitative analysis and etc had been dealed with. And the advantages and disadvantages of these methods are analyzed and compared. It provided some related information and based theories to the determination of polysaccharides content.Key words：polysaccharides; content; determination; methods目录中文摘要 (I)英文摘要 (II)1前言 (1)2化学法测定多糖含量 (1)2.1苯酚-硫酸法 (1)2.2 3, 5-二硝基水杨酸法(简称DNS法) (2)2.3蒽酮-硫酸法 (2)3色谱法测定多糖含量的研究 (3)3.1气相色谱法(GC) (3)3.2 液相色谱法(HPLC) (3)3.3薄层色谱法(TLC) (4)4其他方法 (4)4.1红外光谱定量分析多糖法 (4)4.2生物传感器法 (5)5结论 (5)6展望 (6)参考文献 (6)致谢 (9)1前言多糖(polysaccharides，PS)是由10个以上的单糖聚合而成的生物高分子[1]。
人参多糖中糖醛酸含量测定方法的建立
人参多糖中糖醛酸含量测定方法的建立一、本文概述人参多糖作为一种具有广泛药理活性的天然产物，近年来在医药、保健品等领域的应用日益受到关注。
其中，糖醛酸作为人参多糖的重要组成成分，对于其生物活性的发挥起着至关重要的作用。
因此，建立一种准确、可靠的人参多糖中糖醛酸含量测定方法，对于人参多糖的质量控制、药效研究以及开发利用具有重要意义。
本文旨在建立一种适用于人参多糖中糖醛酸含量测定的方法，并对其进行系统的验证和应用研究。
通过对多种测定方法的比较和优化，最终确定了一种基于高效液相色谱法的糖醛酸含量测定方法。
该方法具有操作简便、准确性高、重现性好等优点，可广泛应用于人参多糖的质量控制、生产工艺优化以及药效研究等领域。
本文首先对人参多糖的提取方法进行了优化，以提高糖醛酸的提取效率。
然后，通过比较不同色谱柱、流动相、检测波长等条件，优化了高效液相色谱法的测定条件。
在此基础上，建立了糖醛酸含量测定的标准曲线，并对方法的准确性、精密度、稳定性等进行了系统的验证。
将该方法应用于实际样品的分析，为人参多糖的质量控制提供了可靠的技术支持。
通过本文的研究，不仅建立了一种准确、可靠的人参多糖中糖醛酸含量测定方法，而且为人参多糖的开发利用提供了有力的技术支持。
本文的研究结果也为其他天然产物中糖醛酸含量的测定提供了一定的参考和借鉴价值。
二、材料与方法本实验所需的试剂包括标准糖醛酸、人参多糖样品、硫酸、咔唑等。
所有试剂均为分析纯，购自国内知名试剂供应商。
实验所用仪器包括紫外可见分光光度计、电子天平、恒温水浴锅、离心机等。
所有仪器均经过校准，确保实验结果的准确性。
准确称取适量标准糖醛酸，用去离子水配制成不同浓度的标准溶液。
分别取各浓度标准溶液适量，加入咔唑试剂和浓硫酸，摇匀后在沸水浴中加热一定时间，冷却后测定其在特定波长下的吸光度。
以糖醛酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
将人参多糖样品研细，精确称取适量样品，加入去离子水，在恒温水浴锅中加热溶解。
金东纸业年产120万t高级信息特种纸项目(一期)正式破土动工
［ ３ ］ Ｓ ｊ ｔ ｉ ｓ ｔ ｒ ｔ ￣ ｍ Ｊ ． Ｆ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｏ ｒ ｇ ａ ｎ ｉ ｃ
１ ３１— １ ３ ６．
［ １ １ ］ Ｔ ｈ ｏ ｒ ｎ ｔ ｏ ｎ Ｊ ， Ｒ Ｈ ｏ ｌ ｍｂ ｏ ｍ Ｂ， Ｐ ｅ ｔ ｔ ｅ ｒ ｓ ｏ ｎ Ｃ ． Ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ ａ ｌ ｋ ａ —
ｌ ｉ ｎ ｅ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｎ ｄ ｉ ｓ ｓ ｏ ｌ ｖ ｅ ｄ ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｈ ｙ ｄ ｒ ａ ｔ ｅ ｓ ｉ ｎ ｓ ｕ ｓ ｐ ｅ ｎ ｓ ｉ ｏ ｎ
的溶 出主要 受体 系碱 度 的影 响 。高碱 度 下 ， Ｈ ： Ｏ ： 的 加 入会 在一 定程 度 上 阻碍糖 醛 酸 的溶 出。 中高浓 漂 白时 ， 浆浓 对糖 醛酸 溶 出 的影 响不很 明显 。 ３ ． ２ 高温 （ ７ ０℃ 以 上 ） 会加剧糖醛酸的溶出； 一 定 温度 下 ， 糖 醛 酸 的溶 出主要 在反 应初 始 阶段较 剧 烈 。 ３ ． ３ 总体 看来 ， 因碱性 过氧 化氢 对糖 醛 酸 的溶 出 的 影 响不是 特别 剧 烈 ， 在 考 虑 纸浆 物 理性 能 的情 况 下 选择 合 适 的 漂 白 工 艺 ， 碱 性 过 氧 化 氢 应 用 于 杨 木 Ｃ Ｔ ＭＰ浆 漂 白还 是非 常适 合 的 。
３ 结论
ｌ ｉ ｎ ｅ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ：ｋ ｉ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ ｓ ｏ ｆ ｄ ｅ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ［ Ｊ ］ ． Ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｈ ｙ —
ｄｒ ａ ｔ ｅ Ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ，１ ９ ９６， ２ ８ ６： １ ３ ９—１ ５ ０．
多糖总结——精选推荐
多糖（polysaccharides）=聚糖(glycans)第一节序言多糖具有储存能量、结构支持、防御等功能；80 年代又发现其可控制细胞的分裂和分化，调节细胞的生长和衰老。
近年发现糖及其缀合物是细胞识别的主要标记物，在细胞间物质运输、信号传导、免疫功能调节等方面都有相当重要的作用。
第二节多糖及其分类与结构一、定义:十个以上单糖聚合而成的糖属于多糖，DP (degreepolymerization):10-105。
二、分类:分植物多糖和动物多糖，又从来源、功能和化学结构分类。
三、结构1.化学化学结构分类简单多糖结合多糖（蛋白多糖）均多糖(homosaccharides) 杂多糖(heterosaccharides) 直链多糖(liner PS) 支链多糖(branch PS)2.表示方法均多糖：glucan fructan xylan 杂多糖：galactomamnan glucomannan3.糖的组成Gal、glc、xyl、ara、rha、fru、fuc，rib（核糖）mannose(甘露糖)糖醛酸：如Glucuronic acid = glu A 去氧糖、氨基糖、糖醇、酰基糖、磺酰酯糖、磷酸基糖4. 四级结构一级：糖的组成；（种类，glc, xyl......）糖的构型（ɑ、ß、D、L）连接方式（连接位置、支链、直链）连接顺序二级：以氢键结合的聚合体（糖骨架间）三级：一级结构重复顺序（有规则）四级：糖链间以非共价键结合形成聚集体的立体结构可拉伸的带状结构皱纹型带状结构屈曲状螺旋结构曲屈线圈状结构第三节多糖的提取、纯化和分离方法一、提取方法1.易溶于热水的多糖：90-100℃水提三次，也有用盐水提; 浓缩后加EtOH沉淀。
2.难溶于水，可溶于稀碱液的多糖：0.5N NaOH提两次，酸中和沉淀。
酸性糖？3.糖复合物：与蛋白质形成的糖复合物，需断裂糖和蛋白质的结合，常用的断裂法有碱解法和酶解法。
华中农业大学生物化学考研试题糖类附答案
第一章糖类一、教学大纲基本要求糖的分类、结构、性质和分析方法，以及部分的生物学功能。
主要内容有：单糖的结构和性质，重要的单糖及其衍生物。
还原性二糖和非还原性二糖的结构和性质；均一多糖和不均一多糖的结构和性质；结合糖（肽聚糖、糖蛋白、蛋白聚糖）的结构和性质等。
二、本章知识要点（一）糖的概述1、糖类的存在与来源糖类广泛的存在于生物界，特别是植物界。
糖类物质按干重计算占植物的85%~90%，占细菌的10%~30%，动物的小于2%。
动物体内糖的含量虽然不多，但其生命活动所需能量主要来源于糖类。
2、糖类的生物学作用(1) 提供能量。
植物的淀粉和动物的糖原都是能量的储存形式。
(2) 物质代谢的碳骨架，为蛋白质、核酸、脂类的合成提供碳骨架。
(3) 细胞的骨架。
纤维素、半纤维素、木质素是植物细胞壁的主要成分，肽聚糖是细胞壁的主要成分。
(4) 细胞间识别和生物分子间的识别。
细胞膜表面糖蛋白的寡糖链参与细胞间的识别。
一些细胞的细胞膜表面含有糖分子或寡糖链，构成细胞的天线，参与细胞通信。
3、糖类的元素组成和分类糖类物质是多羟基(2个或以上)的醛类或酮类化合物，以及它们的衍生物或聚合物，绝大多数的糖类化合物都可以用通式Cn (H2O)n表示。
据此可分为醛糖和酮糖。
还可根据碳原子数分为丙糖，丁糖，戊糖、己糖等。
最简单的糖类就是丙糖(甘油醛和二羟丙酮)。
糖的通俗名称一般是根据来源进行命名。
4、糖的种类根据糖的结构单元数目多少分为：（1）单糖：不能被水解称更小分子的糖。
（2）寡糖：2-6个单糖分子脱水缩合而成，以双糖最为普遍，意义也较大。
（3）多糖：均一性多糖：淀粉、糖原、纤维素、半纤维素、几丁质(壳多糖)。
不均一性多糖：糖胺多糖类(透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素等)。
（4）结合糖(复合糖，糖缀合物)：糖脂、糖蛋白(蛋白聚糖)、糖-核苷酸等。
（5）糖的衍生物：糖醇、糖酸、糖胺、糖苷等。
（二）旋光异构1、异构现象同分异构或称异构是指存在两个或多个具有相同数目和种类的原子并因而具有相同相对分子量的化合物的现象。
植物多糖中糖醛酸和中性糖分析检测方法的研究进展
植物多糖中糖醛酸和中性糖分析检测方法的研究进展陈辉;和娴娴;李浩然【摘要】综述植物多糖组分中糖醛酸和中性糖定性及定量的各种分析检测方法,并进行分类比较.【期刊名称】《食品工程》【年(卷),期】2011(000)002【总页数】4页(P50-53)【关键词】糖醛酸;中性糖;检测方法;研究进展【作者】陈辉;和娴娴;李浩然【作者单位】河北科技大学,石家庄050018;河北科技大学,石家庄050018;河北科技大学,石家庄050018【正文语种】中文【中图分类】TS236.2随着生物技术的发展，多糖组分检测方法的研究日益受到重视。
多糖是由10个以上的单糖，并通过糖苷键聚合而成的一种生物大分子，其相对分子质量为数万甚至数百万。
多糖一般分为均多糖和杂多糖，在天然多糖类中以杂多糖为主。
在多糖组分结构中除单糖外，还含有糖醛酸、去氧糖、氨基糖、糖醇等基团。
按照化学性质，植物多糖可以分为中性多糖和酸性多糖。
其中后者引入了糖醛酸等基团而有酸性和一些相应的药效，通常有葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸。
定量测定时，其中的糖醛酸与中性糖两种组分会相互干扰而影响到实验准确性。
由于植物多糖中组分性质的不同，使组分的分析条件不同，增加了其分析测定的难度。
分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。
按照显色剂的不同，检测糖醛酸的方法可以分为间羟基联苯法和硫酸-咔唑法两种。
两种具体方法的检测步骤类似，均是加入四硼酸钠硫酸溶液后，置于冰水浴中预冷。
然后分别取空白溶液（蒸馏水）和不同浓度的标准品各l mL加入到试管里，之后轻轻的震荡，直至充分混匀，期间不断用冰水浴冷却，并将试管置沸水中加热数分钟，冷却至室温。
最终加入显色试剂，摇匀，并沸水中再加热若干分钟后，冷却至室温，在指定处测定吸光度，以吸光度对浓度作图即可得出标准曲线。
以上两种方法的主要区别在于显色试剂的种类和用量，分别加入的间羟基联苯的氢氧化钠溶液和咔唑的乙醇溶液，具体的显色剂用量和衍生处理时间则是依照实验过程而定。
08多糖的提取、分离纯化和结构分析
包括离子交换色谱柱和凝胶柱色谱。
特点：分离效率高、设备简单、操作方便、条件温和 、不易造成物质变性等优点。 应用：物质分离纯化、分析鉴定最重要的方法之一； 分离/有机化合物及生物大分子不可缺少的手段。
多糖的结构分析
多糖的结构：
多糖的结构是其生物活性的基础，多糖的结构分析 在多糖的研究中具有非常重要的地位，是糖化学的核心 所在。 与蛋白质、核酸大分子相比，糖链的结构也包括一
主要是超滤法和柱色谱分离法。
多糖的分离纯化
超滤法：
在常规微粒过滤的基础上发展起来的细微粒子过滤 技术，是膜法分离的一种，其原理是，不同孔径的超过 滤膜排阻不同分子量和形状的多糖而得到分离。 规格：超滤孔径1~100 nm，截留分子量103~106
特点：受渗透压的阻碍作用小，在相当低的压力差
多糖的结构分析
3、糖链中糖残基间的连接位置分析
（2）酶水解法：由于酶促反应具有高度专一性且副产物少 的特点，酶水解法是糖链的结构分析中的一种重要手段，利
用α-糖苷酶和β-糖苷酶对多糖底物的催化反应来确认多糖链
中糖苷键类型，还可以利用酶学方法分析糖肽连接方式。 美国Maley和Tarention发现内切β-N-乙酰氨基葡萄糖糖 苷酶作为稀释放酰胺连接的糖链的工具酶，为研究与天冬酰 胺连接的寡糖结构开辟了新纪元。
多糖的结构分析
3、糖链中糖残基间的连接位置分析
（1）甲基化分析方法：确定糖链中糖基间的连接位置常用 方法。该法首先将多糖链全甲基化，使所有的游离羟基变为
甲氧基。目前最常用的甲基化方法是改良Hakomori法。
Hakomori法先将样品溶于无水二甲基亚砜中，然后与 甲基亚磺酰甲基钠SMSM反应，使得多糖上游离羟基离子化 ，多糖成为阴离子后，易于CH3I反应，该法通常需重复数次 。以α-(1-4)葡聚糖为例说明甲基化过程。
多糖中糖醛酸含量测定方法的研究进展
多糖中糖醛酸含量测定方法的研究进展李亚平; 周鸿立【期刊名称】《《食品研究与开发》》【年(卷),期】2019(040)017【总页数】5页(P207-211)【关键词】多糖; 糖醛酸; 中性糖; 含量测定; 光谱法; 色谱法【作者】李亚平; 周鸿立【作者单位】吉林化工学院化学与制药工程学院吉林吉林132022; 吉林省农业资源综合开发与利用工程研究中心吉林吉林132022【正文语种】中文糖醛酸[1]又名透明质酸，它作为多糖分子中6位的羟甲基氧化成羧基的产物，是一种酸性的黏多糖。
其中，某些多糖本身或具有糖醛酸结构的多糖常表现出十分重要的生物活性，例如，免疫调节活性、抗病毒活性[2-3]，而这类具有特殊生理活性的多糖中糖醛酸含量一般较高。
由于含有糖醛酸结构的多糖一般存在于植物中，因此，对于从天然植物中提取的多糖，确定其分子结构中是否含有糖醛酸残基具有极其重要的意义，所以有必要对糖醛酸含量测定方法进行研究。
因为糖类物质大都没有紫外吸收，须将其衍生化后方可进行测定。
但在实际工作中，特别是在测定天然多糖产物中糖醛酸含量时，发现测得的结果往往与实际情况有偏差，这是由于糖醛酸和中性单糖并不是独立存在，它们可能存在于同一个糖链中，无法将它们分离。
例如，很多多糖以酸性杂多糖的形式存在，这在测定糖醛酸含量时可能存在相互干扰的情况[4]。
因此探索准确测定天然多糖化合物中糖醛酸含量的方法是十分有必要的。
目前多糖中糖醛酸含量测定的方法有光谱法和色谱法。
本文对目前的国内外糖醛酸的含量测定方法进行了综述，以期为糖醛酸的质量控制提供参考。
1 糖醛酸含量的检测方法1.1 光谱法1.1.1 咔唑-硫酸法咔唑-硫酸法[5]是测定糖醛酸含量的方法之一，糖醛酸在浓硫酸的作用下水解成带有-COOH的糠醛或糠醛衍生物，与咔唑试剂发生缩合反应，生成紫红色化合物，其呈色强度与糖醛酸含量成正比，可比色定量。
采用咔唑-硫酸法测定糖醛酸含量见如表1所示。
一种多糖测定分析方法及其应用[发明专利]
![一种多糖测定分析方法及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/5cd7fb2fa200a6c30c22590102020740be1ecda2.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810767034.1(22)申请日 2018.07.13(71)申请人 李绍平地址 230000 安徽省合肥市蜀山区绩溪路210号36幢307室(72)发明人 李绍平 赵静 邓勇 (74)专利代理机构 广州三环专利商标代理有限公司 44202代理人 张艳美 郝传鑫(51)Int.Cl.G01N 30/88(2006.01)(54)发明名称一种多糖测定分析方法及其应用(57)摘要本发明提供一种多糖测定分析方法，包括以下步骤：(1)多糖酶解，使用内切酶对多糖样品进行酶解，获得酶解产物；(2)衍生化，使用衍生化试剂对所述酶解产物进行衍生化处理；(3)测定分析，采用UPLC -MS或/和UPLC -FLR对衍生化处理后的酶解产物进行分离、得到色谱图，随后对色谱峰特征信息进行分析，获得多糖信息。
本发明提供的多糖的测定方法可以克服现有技术中对水解得到的特征寡糖片段分离度差、易受共流出组分影响等不足。
权利要求书2页 说明书7页 附图3页CN 110715997 A 2020.01.21C N 110715997A1.一种多糖测定分析方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)多糖酶解，使用内切酶对多糖样品进行酶解，获得酶解产物；(2)衍生化，使用衍生化试剂对所述酶解产物进行衍生化处理；(3)测定分析，采用UPLC-MS或/和UPLC-FLR对衍生化处理后的酶解产物进行分离、得到色谱图，随后对色谱峰特征信息进行分析，获得多糖信息。
2.如权利要求1所述的多糖测定分析方法，其中，步骤(1)中所述内切酶选自β-1,3(4)-葡聚糖内切酶、β-1,3-葡聚糖内切酶、β-1,4-半乳聚糖内切酶、右旋糖酐酶、阿拉伯聚糖酶、纤维素酶、果胶酶、α-淀粉酶和异淀粉酶中的一种或多种。
3.如权利要求1所述的多糖测定分析方法，其中，步骤(2)中所述衍生化试剂选自2-AB (2-氨基苯甲酰胺)、2-AA(2-氨基苯甲酸)、ABBE(对氨基苯甲酸酯)、AMAC(2-氨基吖啶酮)、ANTS(8-氨基萘-1,2,6-三磺酸)、APTS(8-氨基芘-1,3,6-三磺酸盐)、3-AQ(3-氨基喹啉)或2-AP(2-氨基吡啶)。
多糖分离纯化及含量测定
• 影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸 提固液比、提取时间以及提取次数等。
• 该种方法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低， 安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
• 但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的 成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后 续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也 不高。
三氟三氯乙烷法
• 将多糖溶液与三氟三氯乙烷等体积混合，低温搅拌10 min 左右，离心分离得上层水层，水层继续用上述方 法反复处理几次，得无蛋白质的多糖溶液，此法效率 较Seavg 法高，但溶剂沸点低，易挥发，不宜大量应 用。
2. 色素的去除
• 中草药来源的多糖, 可能含有酚型化合物而颜色较深, 这类色素大多呈负性离子,不能用活性炭吸附剂脱色, 可以用弱碱性树脂DEAE-纤维素来吸附色素,这样不仅 可以达到脱色的目的, 而且可以进行多糖的分离。
• 除蛋白的方法传统上有Sevage 法、三氯乙酸法、三氟 三氯乙烷法等。
Sevage 法
• 根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特点，用V(氯 仿)∶V(戊醇或正丁醇)为5∶1 或4∶1，混合物剧烈振 摇20～30 min，蛋白质变性生成凝胶，离心分离，分 去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质。
• 一般按多糖水溶液的1/5~1/4体积加入。
• 在微波协助浸取过程中，萃取剂种类、微波剂量、物 料含水量、温度、萃取时间及pH值等都对萃取效果产 生影响。其中，萃取剂种类、微波作用时间和温度对 萃取效果影响较大。
• 微波辅助提取多糖和其他的萃取方法比较，微波萃取 效率高，操作简单，且不会引入杂质，多糖纯度高， 能耗小，操作费用低，符合环境保护要求，是很好的 多糖提取方法。
多糖分离纯化及含量测定
枸杞多糖中中性糖的含量测定
枸杞多糖中中性糖的含量测定
何进;梁运祥;阎淳泰
【期刊名称】《中草药》
【年(卷),期】1996(27)2
【摘要】采用苯酚─硫酸法显色，探讨了测定波长的选择、标准品的配制以及半乳糖醛酸干扰的校正等问题，建立了测定枸杞多糖中中性糖含量的简便方法。
【总页数】2页(P84-85)
【关键词】枸杞多糖;中性糖;含量测定
【作者】何进;梁运祥;阎淳泰
【作者单位】华中农业大学生命科学技术学院
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.一种测定酸性多糖中糖醛酸和中性糖含量的改良方法 [J], 许会生;张铁军;赵广荣;龚苏晓;杨俊红;吴延吉;王文芳
2.不同水解方法对土壤中性糖和氨基糖含量测定的影响 [J], 张威;何红波;解宏图;白震;张旭东;张明
3.中性糖对古糖酯含量测定的影响 [J], 张真庆;赵峡;于广利;管华诗
4.比色法测定滇黄精的中性糖和酸性糖含量 [J], 顾健;羌苏锐;刘江云
5.毛细管气相色谱法测定人血红细胞膜上中性糖、氨基糖及唾液酸的含量 [J], 章满;杨桦;何君;李斌
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０ ０．０２ ０．０４ ０．０６ ０．０８ ０．１０ ０．１２ 时间（ ｍＬ）
图 ３ 间羟基联苯用量对吸光度的影响
２．２．６ ＧｌｃＡ 标 准 曲 线 的 制 备 精 密 吸 取 ＧｌｃＡ 储 备 液 １．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０ｍＬ， 于 ５０ｍＬ 量 瓶 中 ， 加 水 稀 释 至 刻 度 ， 得 ＧｌｃＡ 浓 度 分 别 为 １０、２０、３０、４０、５０、 ６０μｇ·ｍＬ－ １ 的 ＧｌｃＡ 标准溶液。分别取 ＧｌｃＡ 标准溶液 ０．５ｍＬ 加 入 试 管 中 ， 置 冰 水 浴 中 ， 分 别 加 入 ４．５ｍＬ 四 硼酸钠－ 硫酸溶液， 继续冷却， 充分振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １０ｍｉｎ， 然后立即放入冰水浴至冷； 加 入 ０．０５ｍＬ ０．１５％间 羟 基 联 苯 溶 液 ， 充 分 振 荡 ， 显 色 ， 超 声 除 去 气 泡 ， 静 置 ２０ｍｉｎ， 以 ０．５ｍＬ 蒸 馏 水 同 上 制 得 空 白 液 调 零 ， 在 ５２５ｎｍ 处 测 定 吸 光 度 。 以 ＧｌｃＡ 浓 度 对 吸 光 度 做 图 制 备 标 准 曲 线 ， 得 回 归 方 程 为 Ａ２＝０．０１２４６Ｃｕｒｏｎｉｃ － ａｃｉｄ ０．００２２， ｒ＝０．９９９９（ｎ＝６）， 葡 萄 糖 醛酸浓度在 １０～６０μｇ·ｍＬ－ １ 范 围 内 ， 与 吸 光 度 呈 良 好 的线性关系。
２００７ 年第 ０７ 期 １９７
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Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔ ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｉ ｎｄｕｓｔｒｙ
ＧｌｃＡ ５０ｍｇ， 于 １００ｍＬ 量瓶中， 加水稀释至刻度， 摇 匀， 作贮备液。 ２．２．２ 最大吸收波长的选择 取 ＧｌｃＡ 浓度为 ５０μｇ·ｍＬ－１ 的 ＧｌｃＡ标准溶液 ０．５０ｍＬ， 置 １０ｍＬ 具塞试管中， 置冰 水 浴 中 ， 加 入 四 硼 酸 钠－ 硫 酸 溶 液 ４．５ｍＬ， 继 续 冷 却 ， 充分振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １０ｍｉｎ， 然后 立即放入冰水浴至冷； 加入 ０．０５ｍＬ ０．１５％间羟基联 苯溶液， 充分振荡， 显色， 超声除去气泡， 静置 ２０ｍｉｎ， 于 ２００～８００ｎｍ 波长范围内扫描， 确定最大吸收波长 为 ５２５ｎｍ。 ２．２．３ 四硼酸钠－ 硫酸溶液用量考察 取 ＧｌｃＡ 浓度为 ５０μｇ·ｍＬ－１ 的 ＧｌｃＡ 标准溶液 ０．５０ｍＬ， 置 １０ｍＬ 具塞 试管中， 置冰水浴中， 加入四硼酸钠－ 硫酸溶液 ２～６ ｍＬ， 继续冷却， 充分振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １０ｍｉｎ， 然 后 立 即 放 入 冰 水 浴 至 冷 ； 加 入 ０．０５ｍＬ ０．１５％间 羟 基联苯溶液， 充分振荡， 显色， 超声除去气 泡， 静置 ２０ｍｉｎ， 于 ５２５ｎｍ 处测定吸收度， 结果见图 １。 四硼酸钠－ 硫酸溶液用量为 ４．５ｍＬ 时吸光度达峰值。
２．２ 糖醛酸的含量测定
２．２．１ 溶 液 配 制 四 硼 酸 钠－ 硫 酸 溶 液（Ａ 液）： 称 取 四 硼酸钠 １．９１ｇ， 溶于 ４００ｍＬ 浓硫酸中； ０．１５％间羟基联 苯溶液（Ｂ 液）： 精密称取 １５０ｍｇ 间羟基联苯于 １００ｍＬ 量瓶中， 用 ０．５％ＮａＯＨ 溶液稀释至刻度； 葡萄糖醛酸 （ＧｌｃＡ）贮 备 液 的 配 制 ： 精 密 称 取 １０５℃干 燥 至 恒 重 的
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2007.07.058
分析检测
Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．０７，２００７
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一种测定酸性多糖中糖醛酸和
中性糖含量的改良方法
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０．６
０．１
２
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用量（ ｍＬ）
图 １ 四硼酸钠－ 硫酸溶液用量对吸光度的影响
２．２．４ 加 酸 后 沸 水 浴 加 热 时 间 考 察 取 ＧｌｃＡ 浓 度 为 ３０μｇ·ｍＬ－１ 的 ＧｌｃＡ 标准溶液 ０．５０ｍＬ， 置 １０ｍＬ 具塞 试管中， 置冰水浴中， 加入四硼酸钠－ 硫酸溶液 ４．５ｍＬ， 继续冷却， 充分振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １～２０ｍｉｎ， 然 后 立 即 放 入 冰 水 浴 至 冷 ； 加 入 ０．０５ｍＬ ０．１５％间羟基联苯溶液， 充分振荡， 显色， 超声除去气 泡， 静置 ２０ｍｉｎ， 于 ５２５ｎｍ 处测定吸收度， 结果见图 ２。 加热时间在 １０ｍｉｎ 时吸光度达峰值， 以后趋于稳定。
收稿日期： ２００６－ １１－ ２０ ＊ 通讯联系人 作者简介： 许会生（ １９８１－ ） ， 男， 在读硕士研究生， 主要从事多糖研究。 基金项目： 国家自然科学基金资助项目（ ３０３７１７１２） 。
１ 材料与仪器
葡萄糖、苯酚、硫酸 分析纯， 天津市化学试剂一 厂； 葡萄糖醛酸 生物试剂， 国药集团化学试剂有限 公司； 间羟基联苯 Ｆｌｕｋａ； 其它试剂 均为分析纯。
天然产物中提取的多糖通常是含有中性糖和糖 醛酸的杂多糖， 对于中性糖的含量测定一般采用苯 酚－ 硫酸法和蒽酮－ 硫酸法， 糖醛酸的含量测定一般 采 用 咔 唑 法 和 间 羟 基 联 苯 法 。但 在 实 际 工 作 中 发 现 ， 在测定中性糖含量时糖醛酸对测定结果有很大的干 扰， 而在测定糖醛酸含量时中性糖同样干扰测定结 果 。为 建 立 一 种 准 确 、快 速 测 定 酸 性 杂 多 糖 中 中 性 糖 和糖醛酸含量的方法， 本文对现有的含量测定方法 进行了改良， 提出了一种消除中性糖和糖醛酸相互 干扰的方法， 现报道如下。
ＵＶ－ １６０１ 型 可 见 紫 外 分 光 光 度 计 日 本 岛 津 ； ＡＢ－ １０４ 型 电 子 分 析 天 平 梅 特 勒－ 托 利 多 上 海 仪 器 有限公司。
２ 方法与结果
２．１ 中性糖的含量测定
２．１．１ 标准葡萄糖 溶 液 的 配 制 精 密 称 取 １０５℃干 燥 至恒重的葡萄糖 １００ｍｇ 于 １００ｍＬ 量瓶中， 加蒸馏水 溶解并稀释至刻度， 吸取此溶液 １０ｍＬ 置于 １００ｍＬ 量 瓶中， 加水稀释至刻度， 摇匀， 制成浓度为 １００μｇ·ｍＬ－１ 的标准葡萄糖溶液。 ２．１．２ 苯酚试剂的配制 取苯酚 １００ｇ， 加铝片 ０．１ｇ 和 碳 酸 氢 钠 ０．０５ｇ， 蒸 馏 ， 收 集 １８２℃馏 分 ， 称 取 此 馏 分 ５ｇ， 加 ９５ｍＬ 水溶解， 置棕色瓶中存冰箱备用。 ２．１．３ 葡萄糖标准曲线的制备 精密吸取标 准 葡 萄 糖 溶 液 ０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２ｍＬ 于 １０ｍＬ 具 塞 试 管 中， 补加蒸馏水至 ２ｍＬ； 另精密吸取 ２ｍＬ 蒸馏水作空 白 对 照 ， 分 别 加 入 ５％苯 酚 溶 液 １ｍＬ， 混 合 均 匀 后 快 速加入浓硫酸 ５．０ｍＬ， 即 刻 摇 匀 ， 室 温 静 置 ２０ｍｉｎ， 于 分光光度计 ４９０ｎｍ 处测定吸收度。以吸收度 Ａ１ 为纵 坐 标 ， 葡 萄 糖 浓 度 Ｃｎｅｕｔｒａｌ 为 横 坐 标 绘 制 标 准 曲 线 ， 可 得 回 归 方 程 ： Ａ１＝０．０１４３６Ｃｎｅｕｔｒａｌ＋０．０１９７３， ｒ＝０．９９９５ （ｎ＝ ６）。葡萄糖浓度在 １０～６０μｇ·ｍＬ－ １ 范围内， 与吸光度呈 良好的线性关系。
２．３ 中性糖、糖醛酸测定时相互间的影响
２．３．１ ＧｌｃＡ 的 苯 酚－ 硫 酸 法 标 准 曲 线 的 制 备 精 密 吸 取 ＧｌｃＡ 浓 度 分 别 为 １０、２０、３０、４０、５０、６０μｇ·ｍＬ－ １ 的 ＧｌｃＡ 标准溶液 ２．０ｍＬ 于 １０ｍＬ 具塞试管中 ， 另 精 密 吸取蒸馏水 ２．０ｍＬ 作空白对照， 分别加入 ５％苯酚溶 液 １ｍＬ， 混 合 均 匀 后 快 速 加 入 浓 硫 酸 ５．０ｍＬ， 即 刻 摇 匀， 室 温 静 置 ２０ｍｉｎ， 于 分 光 光 度 计 ４９０ｎｍ 处 测 定 吸 收度。以 吸 收 度 Ａ３ 为 纵 坐 标 ， ＧｌｃＡ 浓 度 Ｃｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ 为 横 坐 标 绘 制 标 准 曲 线 ， 可 得 回 归 方 程 ： Ａ３ ＝ ０．００６４９Ｃｕｒｏｎｉｃ － ａｃｉｄ ０．０００６， ｒ＝０．９９９１（ｎ＝６）。 ２．３．２ 葡萄糖的间羟基联苯法标准曲线的制 备 精 密 吸 取 浓 度 为 ２５、５０、７５、１００、１２５μｇ·ｍＬ－ １ 的 葡 萄 糖 标 准溶液 ０．５ｍＬ 于 １０ｍＬ 具塞试管中， 置冰水浴中， 分 别 加 入 ４．５ｍＬ 四 硼 酸 钠－ 硫 酸 溶 液 ， 继 续 冷 却 ， 充 分 振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １０ｍｉｎ， 然后立即
Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ：ｕｒｏｎｉｃ ａ ｃ ｉｄ ； ｎｅ ｕｔｒａ ｌ ｓ ｕｇ ａ ｒ； ｐ ｏｌｙｓ ａ ｃ ｃ ｈａ ｒｉｄ ｅ ｓ ； ｄ ｅ ｔｅ ｒｍｉｎａ ｔｉｏｎ ｍｅ ｔｈｏｄ
中图分类号： ＴＳ２０７．３ 文献标识码： Ａ 文 章 编 号 ： １００２－ ０３０６（ ２００７） ０７－ ０１９７－ ０３
０．４０
０．３５
０．３０
０．２５
０．２０
０．１５ ０ ５ １０ １５ ２０ 时间（ ｍｉｎ） 图 ２ 水浴时间对吸光度的影响
２．２．５ 间羟基联苯用量考察 取 ＧｌｃＡ 浓度为 ５０μｇ·ｍＬ－１
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分析检测
的 ＧｌｃＡ 标准溶液 ０．５０ｍＬ， 置 １０ｍＬ 具塞试管中， 置冰 水 浴 中 ， 加 入 四 硼 酸 钠－ 硫 酸 溶 液 ４．５ｍＬ， 继 续 冷 却 ， 充分振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １０ｍｉｎ， 然后 立即 放 入 冰 水 浴 至 冷 ； 加 入 ０．０１～０．１２ｍＬ ０．１５％间 羟 基联苯溶液， 充分振荡， 显色， 超声除去气泡， 静置 ２０ｍｉｎ， 于 ５２５ｎｍ 处测定吸收 度 ， 结 果 见 图 ３。间 羟 基 联 苯 溶 液 用 量 为 ０．０５ｍＬ 时 吸 光 度 达 峰 值 ， 以 后 趋 于稳定。