一种测定酸性多糖中糖醛酸和中性糖含量的改良方法_许会生
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图 ３ 间羟基联苯用量对吸光度的影响
２．２．６ ＧｌｃＡ 标 准 曲 线 的 制 备 精 密 吸 取 ＧｌｃＡ 储 备 液 １．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０ｍＬ， 于 ５０ｍＬ 量 瓶 中 ， 加 水 稀 释 至 刻 度 ， 得 ＧｌｃＡ 浓 度 分 别 为 １０、２０、３０、４０、５０、 ６０μｇ·ｍＬ－ １ 的 ＧｌｃＡ 标准溶液。分别取 ＧｌｃＡ 标准溶液 ０．５ｍＬ 加 入 试 管 中 ， 置 冰 水 浴 中 ， 分 别 加 入 ４．５ｍＬ 四 硼酸钠－ 硫酸溶液， 继续冷却， 充分振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １０ｍｉｎ， 然后立即放入冰水浴至冷； 加 入 ０．０５ｍＬ ０．１５％间 羟 基 联 苯 溶 液 ， 充 分 振 荡 ， 显 色 ， 超 声 除 去 气 泡 ， 静 置 ２０ｍｉｎ， 以 ０．５ｍＬ 蒸 馏 水 同 上 制 得 空 白 液 调 零 ， 在 ５２５ｎｍ 处 测 定 吸 光 度 。 以 ＧｌｃＡ 浓 度 对 吸 光 度 做 图 制 备 标 准 曲 线 ， 得 回 归 方 程 为 Ａ２＝０．０１２４６Ｃｕｒｏｎｉｃ － ａｃｉｄ ０．００２２， ｒ＝０．９９９９（ｎ＝６）， 葡 萄 糖 醛酸浓度在 １０～６０μｇ·ｍＬ－ １ 范 围 内 ， 与 吸 光 度 呈 良 好 的线性关系。
２００７ 年第 ０７ 期 １９７
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Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔ ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｉ ｎｄｕｓｔｒｙ
ＧｌｃＡ ５０ｍｇ， 于 １００ｍＬ 量瓶中， 加水稀释至刻度， 摇 匀， 作贮备液。 ２．２．２ 最大吸收波长的选择 取 ＧｌｃＡ 浓度为 ５０μｇ·ｍＬ－１ 的 ＧｌｃＡ标准溶液 ０．５０ｍＬ， 置 １０ｍＬ 具塞试管中， 置冰 水 浴 中 ， 加 入 四 硼 酸 钠－ 硫 酸 溶 液 ４．５ｍＬ， 继 续 冷 却 ， 充分振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １０ｍｉｎ， 然后 立即放入冰水浴至冷； 加入 ０．０５ｍＬ ０．１５％间羟基联 苯溶液， 充分振荡， 显色， 超声除去气泡， 静置 ２０ｍｉｎ， 于 ２００～８００ｎｍ 波长范围内扫描， 确定最大吸收波长 为 ５２５ｎｍ。 ２．２．３ 四硼酸钠－ 硫酸溶液用量考察 取 ＧｌｃＡ 浓度为 ５０μｇ·ｍＬ－１ 的 ＧｌｃＡ 标准溶液 ０．５０ｍＬ， 置 １０ｍＬ 具塞 试管中， 置冰水浴中， 加入四硼酸钠－ 硫酸溶液 ２～６ ｍＬ， 继续冷却， 充分振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １０ｍｉｎ， 然 后 立 即 放 入 冰 水 浴 至 冷 ； 加 入 ０．０５ｍＬ ０．１５％间 羟 基联苯溶液， 充分振荡， 显色， 超声除去气 泡， 静置 ２０ｍｉｎ， 于 ５２５ｎｍ 处测定吸收度， 结果见图 １。 四硼酸钠－ 硫酸溶液用量为 ４．５ｍＬ 时吸光度达峰值。
２．２ 糖醛酸的含量测定
２．２．１ 溶 液 配 制 四 硼 酸 钠－ 硫 酸 溶 液（Ａ 液）： 称 取 四 硼酸钠 １．９１ｇ， 溶于 ４００ｍＬ 浓硫酸中； ０．１５％间羟基联 苯溶液（Ｂ 液）： 精密称取 １５０ｍｇ 间羟基联苯于 １００ｍＬ 量瓶中， 用 ０．５％ＮａＯＨ 溶液稀释至刻度； 葡萄糖醛酸 （ＧｌｃＡ）贮 备 液 的 配 制 ： 精 密 称 取 １０５℃干 燥 至 恒 重 的
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2007.07.058
分析检测
Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．０７，２００７
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一种测定酸性多糖中糖醛酸和
中性糖含量的改良方法
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用量（ ｍＬ）
图 １ 四硼酸钠－ 硫酸溶液用量对吸光度的影响
２．２．４ 加 酸 后 沸 水 浴 加 热 时 间 考 察 取 ＧｌｃＡ 浓 度 为 ３０μｇ·ｍＬ－１ 的 ＧｌｃＡ 标准溶液 ０．５０ｍＬ， 置 １０ｍＬ 具塞 试管中， 置冰水浴中， 加入四硼酸钠－ 硫酸溶液 ４．５ｍＬ， 继续冷却， 充分振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １～２０ｍｉｎ， 然 后 立 即 放 入 冰 水 浴 至 冷 ； 加 入 ０．０５ｍＬ ０．１５％间羟基联苯溶液， 充分振荡， 显色， 超声除去气 泡， 静置 ２０ｍｉｎ， 于 ５２５ｎｍ 处测定吸收度， 结果见图 ２。 加热时间在 １０ｍｉｎ 时吸光度达峰值， 以后趋于稳定。
收稿日期： ２００６－ １１－ ２０ ＊ 通讯联系人 作者简介： 许会生（ １９８１－ ） ， 男， 在读硕士研究生， 主要从事多糖研究。 基金项目： 国家自然科学基金资助项目（ ３０３７１７１２） 。
１ 材料与仪器
葡萄糖、苯酚、硫酸 分析纯， 天津市化学试剂一 厂； 葡萄糖醛酸 生物试剂， 国药集团化学试剂有限 公司； 间羟基联苯 Ｆｌｕｋａ； 其它试剂 均为分析纯。
天然产物中提取的多糖通常是含有中性糖和糖 醛酸的杂多糖， 对于中性糖的含量测定一般采用苯 酚－ 硫酸法和蒽酮－ 硫酸法， 糖醛酸的含量测定一般 采 用 咔 唑 法 和 间 羟 基 联 苯 法 。但 在 实 际 工 作 中 发 现 ， 在测定中性糖含量时糖醛酸对测定结果有很大的干 扰， 而在测定糖醛酸含量时中性糖同样干扰测定结 果 。为 建 立 一 种 准 确 、快 速 测 定 酸 性 杂 多 糖 中 中 性 糖 和糖醛酸含量的方法， 本文对现有的含量测定方法 进行了改良， 提出了一种消除中性糖和糖醛酸相互 干扰的方法， 现报道如下。
ＵＶ－ １６０１ 型 可 见 紫 外 分 光 光 度 计 日 本 岛 津 ； ＡＢ－ １０４ 型 电 子 分 析 天 平 梅 特 勒－ 托 利 多 上 海 仪 器 有限公司。
２ 方法与结果
２．１ 中性糖的含量测定
２．１．１ 标准葡萄糖 溶 液 的 配 制 精 密 称 取 １０５℃干 燥 至恒重的葡萄糖 １００ｍｇ 于 １００ｍＬ 量瓶中， 加蒸馏水 溶解并稀释至刻度， 吸取此溶液 １０ｍＬ 置于 １００ｍＬ 量 瓶中， 加水稀释至刻度， 摇匀， 制成浓度为 １００μｇ·ｍＬ－１ 的标准葡萄糖溶液。 ２．１．２ 苯酚试剂的配制 取苯酚 １００ｇ， 加铝片 ０．１ｇ 和 碳 酸 氢 钠 ０．０５ｇ， 蒸 馏 ， 收 集 １８２℃馏 分 ， 称 取 此 馏 分 ５ｇ， 加 ９５ｍＬ 水溶解， 置棕色瓶中存冰箱备用。 ２．１．３ 葡萄糖标准曲线的制备 精密吸取标 准 葡 萄 糖 溶 液 ０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２ｍＬ 于 １０ｍＬ 具 塞 试 管 中， 补加蒸馏水至 ２ｍＬ； 另精密吸取 ２ｍＬ 蒸馏水作空 白 对 照 ， 分 别 加 入 ５％苯 酚 溶 液 １ｍＬ， 混 合 均 匀 后 快 速加入浓硫酸 ５．０ｍＬ， 即 刻 摇 匀 ， 室 温 静 置 ２０ｍｉｎ， 于 分光光度计 ４９０ｎｍ 处测定吸收度。以吸收度 Ａ１ 为纵 坐 标 ， 葡 萄 糖 浓 度 Ｃｎｅｕｔｒａｌ 为 横 坐 标 绘 制 标 准 曲 线 ， 可 得 回 归 方 程 ： Ａ１＝０．０１４３６Ｃｎｅｕｔｒａｌ＋０．０１９７３， ｒ＝０．９９９５ （ｎ＝ ６）。葡萄糖浓度在 １０～６０μｇ·ｍＬ－ １ 范围内， 与吸光度呈 良好的线性关系。
２．３ 中性糖、糖醛酸测定时相互间的影响
２．３．１ ＧｌｃＡ 的 苯 酚－ 硫 酸 法 标 准 曲 线 的 制 备 精 密 吸 取 ＧｌｃＡ 浓 度 分 别 为 １０、２０、３０、４０、５０、６０μｇ·ｍＬ－ １ 的 ＧｌｃＡ 标准溶液 ２．０ｍＬ 于 １０ｍＬ 具塞试管中 ， 另 精 密 吸取蒸馏水 ２．０ｍＬ 作空白对照， 分别加入 ５％苯酚溶 液 １ｍＬ， 混 合 均 匀 后 快 速 加 入 浓 硫 酸 ５．０ｍＬ， 即 刻 摇 匀， 室 温 静 置 ２０ｍｉｎ， 于 分 光 光 度 计 ４９０ｎｍ 处 测 定 吸 收度。以 吸 收 度 Ａ３ 为 纵 坐 标 ， ＧｌｃＡ 浓 度 Ｃｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ 为 横 坐 标 绘 制 标 准 曲 线 ， 可 得 回 归 方 程 ： Ａ３ ＝ ０．００６４９Ｃｕｒｏｎｉｃ － ａｃｉｄ ０．０００６， ｒ＝０．９９９１（ｎ＝６）。 ２．３．２ 葡萄糖的间羟基联苯法标准曲线的制 备 精 密 吸 取 浓 度 为 ２５、５０、７５、１００、１２５μｇ·ｍＬ－ １ 的 葡 萄 糖 标 准溶液 ０．５ｍＬ 于 １０ｍＬ 具塞试管中， 置冰水浴中， 分 别 加 入 ４．５ｍＬ 四 硼 酸 钠－ 硫 酸 溶 液 ， 继 续 冷 却 ， 充 分 振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １０ｍｉｎ， 然后立即
Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ：ｕｒｏｎｉｃ ａ ｃ ｉｄ ； ｎｅ ｕｔｒａ ｌ ｓ ｕｇ ａ ｒ； ｐ ｏｌｙｓ ａ ｃ ｃ ｈａ ｒｉｄ ｅ ｓ ； ｄ ｅ ｔｅ ｒｍｉｎａ ｔｉｏｎ ｍｅ ｔｈｏｄ
中图分类号： ＴＳ２０７．３ 文献标识码： Ａ 文 章 编 号 ： １００２－ ０３０６（ ２００７） ０７－ ０１９７－ ０３
０．４０
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０．１５ ０ ５ １０ １５ ２０ 时间（ ｍｉｎ） 图 ２ 水浴时间对吸光度的影响
２．２．５ 间羟基联苯用量考察 取 ＧｌｃＡ 浓度为 ５０μｇ·ｍＬ－１
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分析检测
的 ＧｌｃＡ 标准溶液 ０．５０ｍＬ， 置 １０ｍＬ 具塞试管中， 置冰 水 浴 中 ， 加 入 四 硼 酸 钠－ 硫 酸 溶 液 ４．５ｍＬ， 继 续 冷 却 ， 充分振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １０ｍｉｎ， 然后 立即 放 入 冰 水 浴 至 冷 ； 加 入 ０．０１～０．１２ｍＬ ０．１５％间 羟 基联苯溶液， 充分振荡， 显色， 超声除去气泡， 静置 ２０ｍｉｎ， 于 ５２５ｎｍ 处测定吸收 度 ， 结 果 见 图 ３。间 羟 基 联 苯 溶 液 用 量 为 ０．０５ｍＬ 时 吸 光 度 达 峰 值 ， 以 后 趋 于稳定。
许会生 １， 张铁军 ２， ＊， 赵广荣 １， 龚苏晓 ２， 杨俊红 ３， 吴延吉 １， 王文芳 １ （ １．天津大学化工学院制药工程系， 天津 ３０００７２； ２．天津药物研究院， 天津 ３００１９３；
３．天津大学机械工程学院， 天津 ３０００７２）
摘 要： 目的：建立一种操作简单、快速、准确地测定酸性多糖中糖 醛酸和中性糖含量的方法。方法： 通过制备葡萄糖醛酸和 葡萄糖的标准曲线和相互干扰曲线， 联立方程来计算糖 醛酸和中性糖含量。结果： 在测定糖含量时糖醛酸和中性 糖相互干扰， 而本方法可以消除干扰， 得出糖醛酸和中性 糖的真实含量。结论： 该方法简便易行、结果准确、专属性 强， 是理想的糖醛酸和中性糖含量测定方法。
关键词： 糖醛酸， 中性糖， 多糖， 含量测定方法
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ：Ｏｂ ｊｅ ｃ ｔｉｖｅ ： Ｔｏ ｅ ｓ ｔａ ｂ ｌｉｓ ｈ ａ ｓ ｉｍｐ ｌｅ ， ｒａ ｐ ｉｄ ， ａ ｃ ｃ ｕｒａ ｔｅ ｍｅ ｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄ ｅ ｔｅ ｒｍｉｎａ ｔｉｏｎ ｏｆ ｕｒｏｎｉｃ ａ ｃ ｉｄ ａ ｎｄ ｎｅ ｕｔｒａ ｌ ｓ ｕｇ ａ ｒ ｉｎ ａ ｃ ｉｄ ｉｃ ｐ ｏｌｙｓ ａ ｃ ｃ ｈａ ｒｉｄ ｅ ｓ ． Ｍｅ ｔｈｏｄ ｓ ： Ｔｈｅ ｓ ｔａ ｎｄ ａ ｒｄ ｃ ｕｒｖｅ ｓ ， ｉｎｔｅ ｒｆｅ ｒｅ ｎｃ ｅ ｃ ｕｒｖｅ ｓ ａ ｎｄ ｅ ｑ ｕａ ｔｉｏｎｓ ｗａ ｒｅ ｅ ｓ ｔａ ｂ ｌｉｓ ｈｅ ｄ ｔｏ ｃ ａ ｌｃ ｕｌａ ｔｅ ｔｈｅ ｃ ｏｎｔｅ ｎｔｓ ｏｆ ｎｅ ｕｔｒａ ｌ ｓ ｕｇ ａ ｒ ａ ｎｄ ｕｒｏｎｉｃ ａ ｃ ｉｄ． Ｒｅ ｓ ｕｌｔｓ： Ｔｈｅ ｍｕｔｕａ ｌ ｉｎｔｅ ｒｆｅ ｒｅ ｎｃ ｅ ｗａ ｓ ｅ ｘｉｓ ｔｅ ｄ ｂ ｅ ｔｗｅ ｅ ｎ ｎｅ ｕｔｒａ ｌ ｓ ｕｇ ａ ｒ ａ ｎｄ ｕｒｏｎｉｃ ａ ｃ ｉｄ， ｈｏｗｅ ｖｅ ｒ， ｔｈｉｓ ｍｅ ｔｈｏｄ ｃ ａ ｎ ｙｉｅ ｌｄ ｔｈｅ ａ ｃ ｔｕａ ｌ ｃ ｏｎｔｅ ｎｔｓ ｂ ｙ ｔｈｅ ｗａ ｙ ｏｆ ｅ ｌｉｍｉｎａ ｔｉｎｇ ｉｎｔｅ ｒｆｅ ｒｅ ｎｃ ｅ． Ｃｏｎｃ ｌｕｓ ｉｏｎ： Ｔｈｉｓ ｍｅ ｔｈｏｄ ｉｓ ｅ ａ ｓ ｙ， ａ ｃ ｃ ｕｒａ ｔｅ， ｓ ｐ ｅ ｃ ｉｆｉｃ， ａ ｎｄ ｔｈｕｓ ｉｔ ｉｓ ａ ｎ ｉｄ ｅ ａ ｌ ｍｅ ｔｈｏｄ ｔｏ ｄ ｅ ｔｅ ｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃ ｏｎｔｅ ｎｔｓ ｏｆ ｎｅ ｕｔｒａ ｌ ｓ ｕｇ ａ ｒ ａ ｎｄ ｕｒｏｎｉｃ ａ ｃ ｉｄ．
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图 ３ 间羟基联苯用量对吸光度的影响
２．２．６ ＧｌｃＡ 标 准 曲 线 的 制 备 精 密 吸 取 ＧｌｃＡ 储 备 液 １．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０ｍＬ， 于 ５０ｍＬ 量 瓶 中 ， 加 水 稀 释 至 刻 度 ， 得 ＧｌｃＡ 浓 度 分 别 为 １０、２０、３０、４０、５０、 ６０μｇ·ｍＬ－ １ 的 ＧｌｃＡ 标准溶液。分别取 ＧｌｃＡ 标准溶液 ０．５ｍＬ 加 入 试 管 中 ， 置 冰 水 浴 中 ， 分 别 加 入 ４．５ｍＬ 四 硼酸钠－ 硫酸溶液， 继续冷却， 充分振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １０ｍｉｎ， 然后立即放入冰水浴至冷； 加 入 ０．０５ｍＬ ０．１５％间 羟 基 联 苯 溶 液 ， 充 分 振 荡 ， 显 色 ， 超 声 除 去 气 泡 ， 静 置 ２０ｍｉｎ， 以 ０．５ｍＬ 蒸 馏 水 同 上 制 得 空 白 液 调 零 ， 在 ５２５ｎｍ 处 测 定 吸 光 度 。 以 ＧｌｃＡ 浓 度 对 吸 光 度 做 图 制 备 标 准 曲 线 ， 得 回 归 方 程 为 Ａ２＝０．０１２４６Ｃｕｒｏｎｉｃ － ａｃｉｄ ０．００２２， ｒ＝０．９９９９（ｎ＝６）， 葡 萄 糖 醛酸浓度在 １０～６０μｇ·ｍＬ－ １ 范 围 内 ， 与 吸 光 度 呈 良 好 的线性关系。
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Ａ５２５ Ａ５２５
Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔ ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｉ ｎｄｕｓｔｒｙ
ＧｌｃＡ ５０ｍｇ， 于 １００ｍＬ 量瓶中， 加水稀释至刻度， 摇 匀， 作贮备液。 ２．２．２ 最大吸收波长的选择 取 ＧｌｃＡ 浓度为 ５０μｇ·ｍＬ－１ 的 ＧｌｃＡ标准溶液 ０．５０ｍＬ， 置 １０ｍＬ 具塞试管中， 置冰 水 浴 中 ， 加 入 四 硼 酸 钠－ 硫 酸 溶 液 ４．５ｍＬ， 继 续 冷 却 ， 充分振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １０ｍｉｎ， 然后 立即放入冰水浴至冷； 加入 ０．０５ｍＬ ０．１５％间羟基联 苯溶液， 充分振荡， 显色， 超声除去气泡， 静置 ２０ｍｉｎ， 于 ２００～８００ｎｍ 波长范围内扫描， 确定最大吸收波长 为 ５２５ｎｍ。 ２．２．３ 四硼酸钠－ 硫酸溶液用量考察 取 ＧｌｃＡ 浓度为 ５０μｇ·ｍＬ－１ 的 ＧｌｃＡ 标准溶液 ０．５０ｍＬ， 置 １０ｍＬ 具塞 试管中， 置冰水浴中， 加入四硼酸钠－ 硫酸溶液 ２～６ ｍＬ， 继续冷却， 充分振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １０ｍｉｎ， 然 后 立 即 放 入 冰 水 浴 至 冷 ； 加 入 ０．０５ｍＬ ０．１５％间 羟 基联苯溶液， 充分振荡， 显色， 超声除去气 泡， 静置 ２０ｍｉｎ， 于 ５２５ｎｍ 处测定吸收度， 结果见图 １。 四硼酸钠－ 硫酸溶液用量为 ４．５ｍＬ 时吸光度达峰值。
２．２ 糖醛酸的含量测定
２．２．１ 溶 液 配 制 四 硼 酸 钠－ 硫 酸 溶 液（Ａ 液）： 称 取 四 硼酸钠 １．９１ｇ， 溶于 ４００ｍＬ 浓硫酸中； ０．１５％间羟基联 苯溶液（Ｂ 液）： 精密称取 １５０ｍｇ 间羟基联苯于 １００ｍＬ 量瓶中， 用 ０．５％ＮａＯＨ 溶液稀释至刻度； 葡萄糖醛酸 （ＧｌｃＡ）贮 备 液 的 配 制 ： 精 密 称 取 １０５℃干 燥 至 恒 重 的
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2007.07.058
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用量（ ｍＬ）
图 １ 四硼酸钠－ 硫酸溶液用量对吸光度的影响
２．２．４ 加 酸 后 沸 水 浴 加 热 时 间 考 察 取 ＧｌｃＡ 浓 度 为 ３０μｇ·ｍＬ－１ 的 ＧｌｃＡ 标准溶液 ０．５０ｍＬ， 置 １０ｍＬ 具塞 试管中， 置冰水浴中， 加入四硼酸钠－ 硫酸溶液 ４．５ｍＬ， 继续冷却， 充分振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １～２０ｍｉｎ， 然 后 立 即 放 入 冰 水 浴 至 冷 ； 加 入 ０．０５ｍＬ ０．１５％间羟基联苯溶液， 充分振荡， 显色， 超声除去气 泡， 静置 ２０ｍｉｎ， 于 ５２５ｎｍ 处测定吸收度， 结果见图 ２。 加热时间在 １０ｍｉｎ 时吸光度达峰值， 以后趋于稳定。
收稿日期： ２００６－ １１－ ２０ ＊ 通讯联系人 作者简介： 许会生（ １９８１－ ） ， 男， 在读硕士研究生， 主要从事多糖研究。 基金项目： 国家自然科学基金资助项目（ ３０３７１７１２） 。
１ 材料与仪器
葡萄糖、苯酚、硫酸 分析纯， 天津市化学试剂一 厂； 葡萄糖醛酸 生物试剂， 国药集团化学试剂有限 公司； 间羟基联苯 Ｆｌｕｋａ； 其它试剂 均为分析纯。
天然产物中提取的多糖通常是含有中性糖和糖 醛酸的杂多糖， 对于中性糖的含量测定一般采用苯 酚－ 硫酸法和蒽酮－ 硫酸法， 糖醛酸的含量测定一般 采 用 咔 唑 法 和 间 羟 基 联 苯 法 。但 在 实 际 工 作 中 发 现 ， 在测定中性糖含量时糖醛酸对测定结果有很大的干 扰， 而在测定糖醛酸含量时中性糖同样干扰测定结 果 。为 建 立 一 种 准 确 、快 速 测 定 酸 性 杂 多 糖 中 中 性 糖 和糖醛酸含量的方法， 本文对现有的含量测定方法 进行了改良， 提出了一种消除中性糖和糖醛酸相互 干扰的方法， 现报道如下。
ＵＶ－ １６０１ 型 可 见 紫 外 分 光 光 度 计 日 本 岛 津 ； ＡＢ－ １０４ 型 电 子 分 析 天 平 梅 特 勒－ 托 利 多 上 海 仪 器 有限公司。
２ 方法与结果
２．１ 中性糖的含量测定
２．１．１ 标准葡萄糖 溶 液 的 配 制 精 密 称 取 １０５℃干 燥 至恒重的葡萄糖 １００ｍｇ 于 １００ｍＬ 量瓶中， 加蒸馏水 溶解并稀释至刻度， 吸取此溶液 １０ｍＬ 置于 １００ｍＬ 量 瓶中， 加水稀释至刻度， 摇匀， 制成浓度为 １００μｇ·ｍＬ－１ 的标准葡萄糖溶液。 ２．１．２ 苯酚试剂的配制 取苯酚 １００ｇ， 加铝片 ０．１ｇ 和 碳 酸 氢 钠 ０．０５ｇ， 蒸 馏 ， 收 集 １８２℃馏 分 ， 称 取 此 馏 分 ５ｇ， 加 ９５ｍＬ 水溶解， 置棕色瓶中存冰箱备用。 ２．１．３ 葡萄糖标准曲线的制备 精密吸取标 准 葡 萄 糖 溶 液 ０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２ｍＬ 于 １０ｍＬ 具 塞 试 管 中， 补加蒸馏水至 ２ｍＬ； 另精密吸取 ２ｍＬ 蒸馏水作空 白 对 照 ， 分 别 加 入 ５％苯 酚 溶 液 １ｍＬ， 混 合 均 匀 后 快 速加入浓硫酸 ５．０ｍＬ， 即 刻 摇 匀 ， 室 温 静 置 ２０ｍｉｎ， 于 分光光度计 ４９０ｎｍ 处测定吸收度。以吸收度 Ａ１ 为纵 坐 标 ， 葡 萄 糖 浓 度 Ｃｎｅｕｔｒａｌ 为 横 坐 标 绘 制 标 准 曲 线 ， 可 得 回 归 方 程 ： Ａ１＝０．０１４３６Ｃｎｅｕｔｒａｌ＋０．０１９７３， ｒ＝０．９９９５ （ｎ＝ ６）。葡萄糖浓度在 １０～６０μｇ·ｍＬ－ １ 范围内， 与吸光度呈 良好的线性关系。
２．３ 中性糖、糖醛酸测定时相互间的影响
２．３．１ ＧｌｃＡ 的 苯 酚－ 硫 酸 法 标 准 曲 线 的 制 备 精 密 吸 取 ＧｌｃＡ 浓 度 分 别 为 １０、２０、３０、４０、５０、６０μｇ·ｍＬ－ １ 的 ＧｌｃＡ 标准溶液 ２．０ｍＬ 于 １０ｍＬ 具塞试管中 ， 另 精 密 吸取蒸馏水 ２．０ｍＬ 作空白对照， 分别加入 ５％苯酚溶 液 １ｍＬ， 混 合 均 匀 后 快 速 加 入 浓 硫 酸 ５．０ｍＬ， 即 刻 摇 匀， 室 温 静 置 ２０ｍｉｎ， 于 分 光 光 度 计 ４９０ｎｍ 处 测 定 吸 收度。以 吸 收 度 Ａ３ 为 纵 坐 标 ， ＧｌｃＡ 浓 度 Ｃｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ 为 横 坐 标 绘 制 标 准 曲 线 ， 可 得 回 归 方 程 ： Ａ３ ＝ ０．００６４９Ｃｕｒｏｎｉｃ － ａｃｉｄ ０．０００６， ｒ＝０．９９９１（ｎ＝６）。 ２．３．２ 葡萄糖的间羟基联苯法标准曲线的制 备 精 密 吸 取 浓 度 为 ２５、５０、７５、１００、１２５μｇ·ｍＬ－ １ 的 葡 萄 糖 标 准溶液 ０．５ｍＬ 于 １０ｍＬ 具塞试管中， 置冰水浴中， 分 别 加 入 ４．５ｍＬ 四 硼 酸 钠－ 硫 酸 溶 液 ， 继 续 冷 却 ， 充 分 振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １０ｍｉｎ， 然后立即
Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ：ｕｒｏｎｉｃ ａ ｃ ｉｄ ； ｎｅ ｕｔｒａ ｌ ｓ ｕｇ ａ ｒ； ｐ ｏｌｙｓ ａ ｃ ｃ ｈａ ｒｉｄ ｅ ｓ ； ｄ ｅ ｔｅ ｒｍｉｎａ ｔｉｏｎ ｍｅ ｔｈｏｄ
中图分类号： ＴＳ２０７．３ 文献标识码： Ａ 文 章 编 号 ： １００２－ ０３０６（ ２００７） ０７－ ０１９７－ ０３
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２．２．５ 间羟基联苯用量考察 取 ＧｌｃＡ 浓度为 ５０μｇ·ｍＬ－１
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分析检测
的 ＧｌｃＡ 标准溶液 ０．５０ｍＬ， 置 １０ｍＬ 具塞试管中， 置冰 水 浴 中 ， 加 入 四 硼 酸 钠－ 硫 酸 溶 液 ４．５ｍＬ， 继 续 冷 却 ， 充分振荡； 将试管置于 １００℃水浴上加热 １０ｍｉｎ， 然后 立即 放 入 冰 水 浴 至 冷 ； 加 入 ０．０１～０．１２ｍＬ ０．１５％间 羟 基联苯溶液， 充分振荡， 显色， 超声除去气泡， 静置 ２０ｍｉｎ， 于 ５２５ｎｍ 处测定吸收 度 ， 结 果 见 图 ３。间 羟 基 联 苯 溶 液 用 量 为 ０．０５ｍＬ 时 吸 光 度 达 峰 值 ， 以 后 趋 于稳定。
许会生 １， 张铁军 ２， ＊， 赵广荣 １， 龚苏晓 ２， 杨俊红 ３， 吴延吉 １， 王文芳 １ （ １．天津大学化工学院制药工程系， 天津 ３０００７２； ２．天津药物研究院， 天津 ３００１９３；
３．天津大学机械工程学院， 天津 ３０００７２）
摘 要： 目的：建立一种操作简单、快速、准确地测定酸性多糖中糖 醛酸和中性糖含量的方法。方法： 通过制备葡萄糖醛酸和 葡萄糖的标准曲线和相互干扰曲线， 联立方程来计算糖 醛酸和中性糖含量。结果： 在测定糖含量时糖醛酸和中性 糖相互干扰， 而本方法可以消除干扰， 得出糖醛酸和中性 糖的真实含量。结论： 该方法简便易行、结果准确、专属性 强， 是理想的糖醛酸和中性糖含量测定方法。
关键词： 糖醛酸， 中性糖， 多糖， 含量测定方法
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ：Ｏｂ ｊｅ ｃ ｔｉｖｅ ： Ｔｏ ｅ ｓ ｔａ ｂ ｌｉｓ ｈ ａ ｓ ｉｍｐ ｌｅ ， ｒａ ｐ ｉｄ ， ａ ｃ ｃ ｕｒａ ｔｅ ｍｅ ｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄ ｅ ｔｅ ｒｍｉｎａ ｔｉｏｎ ｏｆ ｕｒｏｎｉｃ ａ ｃ ｉｄ ａ ｎｄ ｎｅ ｕｔｒａ ｌ ｓ ｕｇ ａ ｒ ｉｎ ａ ｃ ｉｄ ｉｃ ｐ ｏｌｙｓ ａ ｃ ｃ ｈａ ｒｉｄ ｅ ｓ ． Ｍｅ ｔｈｏｄ ｓ ： Ｔｈｅ ｓ ｔａ ｎｄ ａ ｒｄ ｃ ｕｒｖｅ ｓ ， ｉｎｔｅ ｒｆｅ ｒｅ ｎｃ ｅ ｃ ｕｒｖｅ ｓ ａ ｎｄ ｅ ｑ ｕａ ｔｉｏｎｓ ｗａ ｒｅ ｅ ｓ ｔａ ｂ ｌｉｓ ｈｅ ｄ ｔｏ ｃ ａ ｌｃ ｕｌａ ｔｅ ｔｈｅ ｃ ｏｎｔｅ ｎｔｓ ｏｆ ｎｅ ｕｔｒａ ｌ ｓ ｕｇ ａ ｒ ａ ｎｄ ｕｒｏｎｉｃ ａ ｃ ｉｄ． Ｒｅ ｓ ｕｌｔｓ： Ｔｈｅ ｍｕｔｕａ ｌ ｉｎｔｅ ｒｆｅ ｒｅ ｎｃ ｅ ｗａ ｓ ｅ ｘｉｓ ｔｅ ｄ ｂ ｅ ｔｗｅ ｅ ｎ ｎｅ ｕｔｒａ ｌ ｓ ｕｇ ａ ｒ ａ ｎｄ ｕｒｏｎｉｃ ａ ｃ ｉｄ， ｈｏｗｅ ｖｅ ｒ， ｔｈｉｓ ｍｅ ｔｈｏｄ ｃ ａ ｎ ｙｉｅ ｌｄ ｔｈｅ ａ ｃ ｔｕａ ｌ ｃ ｏｎｔｅ ｎｔｓ ｂ ｙ ｔｈｅ ｗａ ｙ ｏｆ ｅ ｌｉｍｉｎａ ｔｉｎｇ ｉｎｔｅ ｒｆｅ ｒｅ ｎｃ ｅ． Ｃｏｎｃ ｌｕｓ ｉｏｎ： Ｔｈｉｓ ｍｅ ｔｈｏｄ ｉｓ ｅ ａ ｓ ｙ， ａ ｃ ｃ ｕｒａ ｔｅ， ｓ ｐ ｅ ｃ ｉｆｉｃ， ａ ｎｄ ｔｈｕｓ ｉｔ ｉｓ ａ ｎ ｉｄ ｅ ａ ｌ ｍｅ ｔｈｏｄ ｔｏ ｄ ｅ ｔｅ ｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃ ｏｎｔｅ ｎｔｓ ｏｆ ｎｅ ｕｔｒａ ｌ ｓ ｕｇ ａ ｒ ａ ｎｄ ｕｒｏｎｉｃ ａ ｃ ｉｄ．