8 水的卫生细菌学检查
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样品稀释后，选 择三个稀释度， 每个稀释度接种 三管乳糖蛋白胨 液体培养基发酵 管。37℃培养24h， 观察是否产酸产 气。
平板分离
将产气发酵管培 养物转种于伊红 美蓝琼脂平板上， 37℃培24h，观察 菌落形态。进行
复发酵
接种乳糖发酵管 37℃培养24h，观 察产气情况。
根据证实为 大肠杆菌阳 性的管数， 计算每升水 样中大肠菌 群的MPN 值。
上浮，应考虑可能有气体产生，需进一步试验。
挑选菌落特征：黑紫色、有光泽或无光泽菌落；
红色、粉红色菌落。 抑制剂：胆盐、煌绿、十二烷基硫酸钠。
计算方法
MPN＝
1000×为阳性结果的发酵管（瓶）的数目 为阴性结果的水样体积（mL）×全部水样体积（mL）
如对一自来水厂出水进行检验，初发酵一般在10支小发酵 管和两支大发酵瓶内进行，复发酵在 5 支小发酵管内进行。 以 300mL 进行初发酵实验，其中 100mL 的水样 2 份（分状 于2个大发酵瓶中），10mL水样10份，（分状于10支个小 发酵管中）。实验结果： 100mL 的 2 份水样为阴性结果， 无大肠杆菌存在；10mL的水样中有5份为阳性结果，存在 大肠杆菌。则：MPN=?
大肠菌群(MPN)/100ml 不得检出
细菌总数(CFU)/1ml饮水≤ 100个
细菌学指标（4项）2006年《生活饮用水卫生标准》 细菌总数 100 (CFU/mL) 总大肠菌群 每100mL水样中 不得检出 耐热大肠菌群（CFU/100mL） 每100mL水样中 不得检出 大肠埃希氏菌（CFU/100mL） 每100mL水样中不得检出
生化反应
对理化因素的抵抗力
60℃下，半小时可杀死 5％石炭酸５钟后致死
第一节 水体中的微生物
痢疾志贺氏菌 副痢疾志贺氏菌
志贺氏菌
形态 生化反应
无荚膜、无鞭毛，有菌毛
多数不分解乳糖
对理化因素的低抗力
60℃ 10分钟 死亡 0.1％石炭酸仅生存10～15min。
第一节 水体中的微生物
志贺氏菌 引起的中 毒性痢疾 病
第二节 大肠菌群和生活饮用水的细菌标准
二、大肠菌群作为卫生指标的意义 大肠杆菌 大肠菌群 肠道正常细菌 肠球菌群 产气荚膜杆菌群 产气杆菌 枸椽酸盐杆菌 副大肠杆菌
比较：形态、数量、培养、水体存活时间
大肠杆菌
第二节 大肠菌群和生活饮用水的细菌标准
三、我国生活饮用水卫生标准（GB 5749—2006 ）
第一节 水体中的微生物
霍乱弧菌
形态
弧型或逗点状菌体，具鞭毛，革兰氏阴性，无荚膜
生化反应 兼性厌氧，使硝酸盐还原成亚硝酸盐。 对理化因素的低抗力
60℃ 10 min杀死
1％石炭酸 ５min 霍乱弧菌 （V.cholerae）
第一节 水体中的微生物
霍乱病人
第二节 大肠菌群和生活饮用水的细菌标准
一、选作卫生指标的要求 生理特性的相似性 数量多 检验技术简单
4~183
— — 12~92 0.5~92
1.5~107
— — — 1~92
水中病原微生物： 存在于水中或通过水的传播引起疾病的病原微生物。
第一节 水体中的微生物
水温对伤寒杆菌在水中生存的影响
温度（℃） 一周后细胞存活率（%） 细菌灭绝时间（周）
0
5 10 18
46.0
14.0 0.07 0.04
第三节 水的卫生细菌学检验
二、大肠菌群的测定 ２、滤膜法
第四节 水中微生物的控制
一、病原微生物的防治措施 • 1、污水的处理 • 2、做好水源的卫生防护 • 3、生活饮用水的消毒 • 加氯消毒 • 臭氧消毒 • 紫外线消毒
氯消毒原理
Ｃl ２+ Ｈ２Ｏ ＨＯＣl 问题：
.游离性余氯 ≮０.３mg/l；≮０.０５mg/l
水体不同层次微生物分布
阳光
层次化湖泊生态 Ecology of a Stratified lake
表层输入(河流) 产氧光合
表层输出
蓝细菌、藻、水生植物 好氧层 动物、原生动物、好氧细菌 嗜甲烷菌、无机化能细菌 不产氧光合 厌氧层 发酵 厌氧呼吸菌 产甲烷菌 沉积物
第一节 水体中的微生物
病原菌在各种水中生存时间（d）
第四节 ห้องสมุดไป่ตู้中微生物的控制
二、水体富营养化的防治 • 水体富营养化的危害
水质恶化 影响水厂供水 影响水产养殖 对旅游业的影响
第四节 水中微生物的控制
二、水体富营养化的防治 • 水体富营养化的监测
含氮量 含磷量 BOD5 ﹥0.3mg/l ﹥0.02mg/l ﹥10mg/l
9
7 6 4
第一节 水体中的微生物
伤寒沙门氏菌 伤寒杆菌 水 中 病 原 微 生 物 副伤寒沙门氏菌 乙型副伤寒沙门氏菌 痢疾杆菌 副痢疾杆菌
痢疾杆菌
霍乱弧菌
第一节 水体中的微生物
沙门氏菌
伤寒沙门氏菌 副伤寒沙门氏菌 乙型副伤寒沙门氏菌
人畜共患病
形态
革兰氏阴性菌，杆菌无芽孢，无荚膜，具周生鞭毛。 不分解乳糖；可以柠檬酸盐作为唯一碳源
革兰氏染色观 察。阴性
三步法图示
37℃ 培养48h 37℃培养24h 取产酸产气的发酵管 中培养液在伊红美兰 平板上进行划线 取有核心和带金 属光泽的深紫色 菌落进行革兰氏 染色
镜检（革兰氏阴性菌）
37℃ 培养24h
证实产气 （阳性） 结果与否
乳糖蛋白胨培养液
大肠菌群测定
产酸判断：紫色培养液变成黄色 产气判断：发酵导管内有小气泡，如轻轻打动试管有气泡沿管壁
第八章 水的卫生细菌学
第一节 水体中的微生物 第二节 大肠菌群和生活饮用水的细菌标准 第三节 水的卫生细菌学检验 第四节 水中微生物的控制方法
第一节 水体中的微生物
来源：土壤、空气、污水及有机残体 影响微生物在淡水中分布的因子：营养物质、温度、溶解氧等。
• • • • • • • •
微生物的种类、分布 清水型水生微生物：少，以自养型为主 腐败型水生微生物：异养微生物占优势 分布 水平分布规律：近岸多，离岸远的少 垂直分布规律：上层：好氧细菌 中层：光合细菌、厌氧细菌 底层：厌氧细菌
细菌总数 ﹥105个/l 叶绿素a ﹥10*10-3mg/l
第四节 水中微生物的控制
二、水体富营养化的防治
• 水体富营养化的防治 截外源 除内源 抑制藻类利用营养物 凝集沉淀 抑藻杀藻 硫酸铜：杀藻，去活藻体的臭味
漂白粉：去死亡藻体的臭味
明矾：
第四节 水中微生物的控制
二、水体富营养化的防治
• 什么是水体富营养化 • 水体富营养化的危害 • 水体富营养化的监测与防治
含磷量大于0.02mg/l，含氮量大于0.3mg/l,藻类大量生长繁殖
水体富营养化
藻类等过量生长，产生大量的有机物
异养微生物氧化这些有机物，耗尽水中的氧， 使厌氧菌开始大量生长和代谢 分解含硫化合物，产生H2S，从而导致水有 难闻的气味 鱼和好氧微生物大量死亡，水体出现大量沉淀物和异常颜色
第三节 水的卫生细菌学检验
一、细菌总数测定
制作培养基平板 定量接 种水样 37℃下培养24h 计数菌落
第三节 水的卫生细菌学检验
二、大肠菌群的测定
•发酵法、滤膜法
１、发酵法 初步发酵试验（产气否？）
平板分离（伊红美蓝鉴别培养基）革兰氏阴性
复发酵试验（可疑菌落是否产气菌？）
实验操作步骤
初步发酵试验
ＨＣl+ＨＯＣl Ｈ+ + ＯＣl-
ＨＯＣl和ＯＣl-起主要消毒作用的是？ 与细菌的带电性有关。
影响消毒效果的因素
ＰＨ Ｔ
臭氧消毒
1、 臭氧特性 常温常压下呈淡蓝色、强烈的刺激性气体 密度为空气的1.7倍，易溶于水。臭氧对人体健康有影响。 2、 臭氧的产生 臭氧发生器，在现场用空气或纯氧通过臭氧发生器高压 放电产生。 3、臭氧消毒的特点 既是氧化剂，又是消毒剂 主要靠·OH的作用，它的氧化作用极强。但作为消毒剂，由于 臭氧在水中不稳定，易散失，因此在O3消毒之后，往往需要投 加少量的氯等以维持水中剩余消毒剂。臭氧消毒的副产物比氯 消毒时少，但也有可能产生三卤甲烷，溴酸盐等副产物，此外 臭氧消毒的生产设备复杂，投资较大，电耗也较高，目前我国 很少应用。
菌名 大肠杆菌 灭过菌的水 8~365 被污染的水 — 自来水 2~262 河水 21~183 井水 —
伤寒杆菌
甲型副伤寒杆菌 乙型副伤寒杆菌 痢疾杆菌 霍乱弧菌
6~365
22~55 39~167 2~72 3~392
2~42
— 2~12 2~4 0.5~213
2~93
— 27~37 15~27 4~28
平板分离
将产气发酵管培 养物转种于伊红 美蓝琼脂平板上， 37℃培24h，观察 菌落形态。进行
复发酵
接种乳糖发酵管 37℃培养24h，观 察产气情况。
根据证实为 大肠杆菌阳 性的管数， 计算每升水 样中大肠菌 群的MPN 值。
上浮，应考虑可能有气体产生，需进一步试验。
挑选菌落特征：黑紫色、有光泽或无光泽菌落；
红色、粉红色菌落。 抑制剂：胆盐、煌绿、十二烷基硫酸钠。
计算方法
MPN＝
1000×为阳性结果的发酵管（瓶）的数目 为阴性结果的水样体积（mL）×全部水样体积（mL）
如对一自来水厂出水进行检验，初发酵一般在10支小发酵 管和两支大发酵瓶内进行，复发酵在 5 支小发酵管内进行。 以 300mL 进行初发酵实验，其中 100mL 的水样 2 份（分状 于2个大发酵瓶中），10mL水样10份，（分状于10支个小 发酵管中）。实验结果： 100mL 的 2 份水样为阴性结果， 无大肠杆菌存在；10mL的水样中有5份为阳性结果，存在 大肠杆菌。则：MPN=?
大肠菌群(MPN)/100ml 不得检出
细菌总数(CFU)/1ml饮水≤ 100个
细菌学指标（4项）2006年《生活饮用水卫生标准》 细菌总数 100 (CFU/mL) 总大肠菌群 每100mL水样中 不得检出 耐热大肠菌群（CFU/100mL） 每100mL水样中 不得检出 大肠埃希氏菌（CFU/100mL） 每100mL水样中不得检出
生化反应
对理化因素的抵抗力
60℃下，半小时可杀死 5％石炭酸５钟后致死
第一节 水体中的微生物
痢疾志贺氏菌 副痢疾志贺氏菌
志贺氏菌
形态 生化反应
无荚膜、无鞭毛，有菌毛
多数不分解乳糖
对理化因素的低抗力
60℃ 10分钟 死亡 0.1％石炭酸仅生存10～15min。
第一节 水体中的微生物
志贺氏菌 引起的中 毒性痢疾 病
第二节 大肠菌群和生活饮用水的细菌标准
二、大肠菌群作为卫生指标的意义 大肠杆菌 大肠菌群 肠道正常细菌 肠球菌群 产气荚膜杆菌群 产气杆菌 枸椽酸盐杆菌 副大肠杆菌
比较：形态、数量、培养、水体存活时间
大肠杆菌
第二节 大肠菌群和生活饮用水的细菌标准
三、我国生活饮用水卫生标准（GB 5749—2006 ）
第一节 水体中的微生物
霍乱弧菌
形态
弧型或逗点状菌体，具鞭毛，革兰氏阴性，无荚膜
生化反应 兼性厌氧，使硝酸盐还原成亚硝酸盐。 对理化因素的低抗力
60℃ 10 min杀死
1％石炭酸 ５min 霍乱弧菌 （V.cholerae）
第一节 水体中的微生物
霍乱病人
第二节 大肠菌群和生活饮用水的细菌标准
一、选作卫生指标的要求 生理特性的相似性 数量多 检验技术简单
4~183
— — 12~92 0.5~92
1.5~107
— — — 1~92
水中病原微生物： 存在于水中或通过水的传播引起疾病的病原微生物。
第一节 水体中的微生物
水温对伤寒杆菌在水中生存的影响
温度（℃） 一周后细胞存活率（%） 细菌灭绝时间（周）
0
5 10 18
46.0
14.0 0.07 0.04
第三节 水的卫生细菌学检验
二、大肠菌群的测定 ２、滤膜法
第四节 水中微生物的控制
一、病原微生物的防治措施 • 1、污水的处理 • 2、做好水源的卫生防护 • 3、生活饮用水的消毒 • 加氯消毒 • 臭氧消毒 • 紫外线消毒
氯消毒原理
Ｃl ２+ Ｈ２Ｏ ＨＯＣl 问题：
.游离性余氯 ≮０.３mg/l；≮０.０５mg/l
水体不同层次微生物分布
阳光
层次化湖泊生态 Ecology of a Stratified lake
表层输入(河流) 产氧光合
表层输出
蓝细菌、藻、水生植物 好氧层 动物、原生动物、好氧细菌 嗜甲烷菌、无机化能细菌 不产氧光合 厌氧层 发酵 厌氧呼吸菌 产甲烷菌 沉积物
第一节 水体中的微生物
病原菌在各种水中生存时间（d）
第四节 ห้องสมุดไป่ตู้中微生物的控制
二、水体富营养化的防治 • 水体富营养化的危害
水质恶化 影响水厂供水 影响水产养殖 对旅游业的影响
第四节 水中微生物的控制
二、水体富营养化的防治 • 水体富营养化的监测
含氮量 含磷量 BOD5 ﹥0.3mg/l ﹥0.02mg/l ﹥10mg/l
9
7 6 4
第一节 水体中的微生物
伤寒沙门氏菌 伤寒杆菌 水 中 病 原 微 生 物 副伤寒沙门氏菌 乙型副伤寒沙门氏菌 痢疾杆菌 副痢疾杆菌
痢疾杆菌
霍乱弧菌
第一节 水体中的微生物
沙门氏菌
伤寒沙门氏菌 副伤寒沙门氏菌 乙型副伤寒沙门氏菌
人畜共患病
形态
革兰氏阴性菌，杆菌无芽孢，无荚膜，具周生鞭毛。 不分解乳糖；可以柠檬酸盐作为唯一碳源
革兰氏染色观 察。阴性
三步法图示
37℃ 培养48h 37℃培养24h 取产酸产气的发酵管 中培养液在伊红美兰 平板上进行划线 取有核心和带金 属光泽的深紫色 菌落进行革兰氏 染色
镜检（革兰氏阴性菌）
37℃ 培养24h
证实产气 （阳性） 结果与否
乳糖蛋白胨培养液
大肠菌群测定
产酸判断：紫色培养液变成黄色 产气判断：发酵导管内有小气泡，如轻轻打动试管有气泡沿管壁
第八章 水的卫生细菌学
第一节 水体中的微生物 第二节 大肠菌群和生活饮用水的细菌标准 第三节 水的卫生细菌学检验 第四节 水中微生物的控制方法
第一节 水体中的微生物
来源：土壤、空气、污水及有机残体 影响微生物在淡水中分布的因子：营养物质、温度、溶解氧等。
• • • • • • • •
微生物的种类、分布 清水型水生微生物：少，以自养型为主 腐败型水生微生物：异养微生物占优势 分布 水平分布规律：近岸多，离岸远的少 垂直分布规律：上层：好氧细菌 中层：光合细菌、厌氧细菌 底层：厌氧细菌
细菌总数 ﹥105个/l 叶绿素a ﹥10*10-3mg/l
第四节 水中微生物的控制
二、水体富营养化的防治
• 水体富营养化的防治 截外源 除内源 抑制藻类利用营养物 凝集沉淀 抑藻杀藻 硫酸铜：杀藻，去活藻体的臭味
漂白粉：去死亡藻体的臭味
明矾：
第四节 水中微生物的控制
二、水体富营养化的防治
• 什么是水体富营养化 • 水体富营养化的危害 • 水体富营养化的监测与防治
含磷量大于0.02mg/l，含氮量大于0.3mg/l,藻类大量生长繁殖
水体富营养化
藻类等过量生长，产生大量的有机物
异养微生物氧化这些有机物，耗尽水中的氧， 使厌氧菌开始大量生长和代谢 分解含硫化合物，产生H2S，从而导致水有 难闻的气味 鱼和好氧微生物大量死亡，水体出现大量沉淀物和异常颜色
第三节 水的卫生细菌学检验
一、细菌总数测定
制作培养基平板 定量接 种水样 37℃下培养24h 计数菌落
第三节 水的卫生细菌学检验
二、大肠菌群的测定
•发酵法、滤膜法
１、发酵法 初步发酵试验（产气否？）
平板分离（伊红美蓝鉴别培养基）革兰氏阴性
复发酵试验（可疑菌落是否产气菌？）
实验操作步骤
初步发酵试验
ＨＣl+ＨＯＣl Ｈ+ + ＯＣl-
ＨＯＣl和ＯＣl-起主要消毒作用的是？ 与细菌的带电性有关。
影响消毒效果的因素
ＰＨ Ｔ
臭氧消毒
1、 臭氧特性 常温常压下呈淡蓝色、强烈的刺激性气体 密度为空气的1.7倍，易溶于水。臭氧对人体健康有影响。 2、 臭氧的产生 臭氧发生器，在现场用空气或纯氧通过臭氧发生器高压 放电产生。 3、臭氧消毒的特点 既是氧化剂，又是消毒剂 主要靠·OH的作用，它的氧化作用极强。但作为消毒剂，由于 臭氧在水中不稳定，易散失，因此在O3消毒之后，往往需要投 加少量的氯等以维持水中剩余消毒剂。臭氧消毒的副产物比氯 消毒时少，但也有可能产生三卤甲烷，溴酸盐等副产物，此外 臭氧消毒的生产设备复杂，投资较大，电耗也较高，目前我国 很少应用。
菌名 大肠杆菌 灭过菌的水 8~365 被污染的水 — 自来水 2~262 河水 21~183 井水 —
伤寒杆菌
甲型副伤寒杆菌 乙型副伤寒杆菌 痢疾杆菌 霍乱弧菌
6~365
22~55 39~167 2~72 3~392
2~42
— 2~12 2~4 0.5~213
2~93
— 27~37 15~27 4~28