枸杞多糖含量的准确检测
枸杞多糖测定
枸杞多糖测定稀释至刻度，备用。
2.6 样品中多糖的测定吸取适量样品液，加蒸馏水至2 ml，按标准曲线下的方法测吸光度A为0.2343，查标准曲线得样品液中葡萄糖含量4.69（μg/ml）。
2.7 结果计算多糖含量%=p?D?F?100 m式中：p：样液葡萄糖浓度（μg/ml）；D：样品液稀释因素；F：换算因素；m：样品质量（μg）。
测量结果代入得：多糖含量%=12.51%3 实验讨论（1）苯酚-硫酸比色法测定枸杞多糖的原理是枸杞多糖成分在H2SO4的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，再用分光光度法测定其枸杞多糖含量。
本法操作简单，显色稳定，灵敏度高，重现性好，可作为枸杞及其它多糖含量的测定方法。
（2）枸杞子水提物中含有单糖、低聚糖等杂质, 且呈红色, 因此在测定之前要先用乙醇除去单糖、低聚糖等杂质并以丙酮-石油醚脱脂脱色, 才不至于对测定产生干扰。
（3）试验中发现，浓硫酸的加入方式对实验的结果影响较大，采取移液管悬空，垂直加入浓硫酸，立即摇匀的方式，显色反应充分，且显色结果稳定。
（4）各种单糖的标准曲线均只在0～30 μg含量范围内呈较好的线形关系，因此制作标准曲线时，单糖浓度不宜太大。
（5）本法采用精制的枸杞多糖作为对照品，计算出枸杞多糖与葡萄糖的换算因子，再乘以用硫酸-苯酚法显色测出多糖相当于葡萄糖的含量，这样可避免直接用葡萄糖作为标准引起的系统误差，结果更准确。
(6) 多糖提取工艺以及分离、纯化方法决定了产品的纯度, 另外枸杞子产地的不同也可能对研究结果有影响。
由于目前市场枸杞多糖产品主要作为保健产品,需较高的收率和较低的成本。
而采用乙醇沉淀法提取的枸杞多糖含量较高,收率可达8%左右,并且乙醇可回收,既使成本进一步降低,又减少了对环境的污染，且取得了很好的经济效益。
本实验所测得枸杞含糖量高，实验材料为上好的宁夏枸杞。
枸杞中总糖的测定
枸杞中总糖的测定1(实验原理在沸热条件下，用还原糖溶液滴定一定量的菲林试剂时，将菲林试剂中的二价铜还原为一价铜，以亚甲基蓝为指示剂，稍过量的还原糖立即使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。
2.仪器设备? 实验室用样品粉碎机? 电热恒温水浴? 1000W调温电炉? 玻璃仪器:200ml、250ml容量瓶，250ml锥形瓶，50ml碱式滴定管 3.试剂配制? 碱性酒石酸铜甲液:称取15g硫酸铜及0.05g次甲基蓝溶于水中并稀释至1000ml。
? 碱性酒石酸铜乙液:称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾完全溶解后稀释至1000ml，贮存于橡胶塞棕色瓶中? 乙酸锌溶液:称取21.9g乙酸锌，加入3ml冰乙酸，加水溶解并稀释至100ml。
10.6%亚铁氰化钾溶液:称取10.6g亚铁氰化钾溶于水中并稀释至100ml?即得。
? 6mol?L盐酸:量取247ml浓盐酸(相对密度1.19)，加水稀释至500ml即得。
? 30%氢氧化钠溶液:称取30g氢氧化钠溶于水中定容100ml。
? 0.2%甲基红溶液:称取0.2g甲基红溶于水中，定容100ml。
? 葡萄糖标准溶液:精密称取1.000g(精确到0.0001g)经过98?~100?干燥至恒重的纯葡萄糖，加水溶解后加入5ml盐酸并用水稀释至1000ml容量瓶中，此溶液每毫升相当于mg葡萄糖。
4.样品提取液制备用四分法取样，粉碎至均匀(枸杞可以先冷冻再粉碎)，精密称取5.00g~10.00g 样品，转入250ml容量瓶中，加水至容积约为200ml，置80??2?水浴保温30min，期间摇动数次，取出加入乙酸锌及亚铁氰化钾溶液各5ml摇匀，冷却至室温用蒸馏水定容。
过滤(初滤液抛弃约30ml)，滤液备用。
吸取滤液50ml与100ml容量瓶中，加入6mol?L盐酸10ml，在80??2?水浴中加热水解15min，取出用冷水冷却至室温，加甲基红指示剂一滴，用30%氢氧化钠溶液中和，然后用蒸馏水定容，备用。
枸杞多糖的提取与含量测定
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实验试剂仪器
实验试剂
干燥枸杞子、葡萄糖标准溶液、蒽酮、浓硫酸、95% 乙醇、无水乙醇、三氯甲烷‐正丁醇（4:1）。
实验仪器
分析天平、托盘天平、离心机（大）、离心机（小）、 水浴锅、电炉、漩涡震荡仪、真空烘箱、分光光度计、 800ml烧杯、100ml烧杯、离心管、分液漏斗、50ml容量瓶、 玻璃棒、量筒、加盖试管若干。
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实验数据记录与处理
标准曲线的绘制
以下表格是不同浓度的标准葡萄糖溶液吸光度的实验数据。
即可得到如下标准曲线。
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实验数据记录与处理
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实验数据记录与处理
枸杞多糖的含量测定
根据标准曲线可以查得枸杞多糖样液吸光度的数值。
样液1含0.02367mg枸杞多糖， 样液2含0.04735mg枸杞多糖。
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实验内容
标准曲线的绘制
取干燥试管6 支，按下表数据配置一系列不同浓度的葡萄糖溶液 。
在620nm波长下以第一管为空白试验，迅速测量吸光值，以葡 萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘出标准曲线。
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实验内容
枸杞多糖的含量测定
精密称定20mg 多糖粗品，溶于50ml 蒸馏水中，制成样品液。 分别吸取0.5ml，1ml 多糖溶液至试管中，加蒸馏水至总体积为 1ml。冰浴中冷却，再加入4ml 蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min ，取出后自来水冷却，620nm 比色，其他条件与作标准曲线同 。测得吸光度值由标准曲线查出样品液的糖含量。
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实验内容
枸杞子多糖含量的测定实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除枸杞子多糖含量的测定实验报告篇一：实验三多糖含量的测定实验三多糖含量的测定一、实验目的1、分光光度法测多糖的原理和方法2、用officeexcel作标准曲线二、仪器与试剂1、仪器：7200分光光度计、水浴锅、电子天平2、试剂：1水葡萄糖、5%苯酚溶液、浓h2so4、dh2o3、器皿：50ml容量瓶、10ml量筒、玻棒、洗耳球、烧杯、试管三、步骤1、标准曲线的绘制①取1水葡萄糖0.551g于50ml容量瓶，加入蒸馏水溶解并小心稀释至刻度，再取5ml于50ml容量瓶，加蒸馏水稀释,即1.0mg/ml。
②分别量取0.25ml,0.5ml,1.0ml,1.5ml,2.0ml,2.5ml分别置于已编号的50ml容量瓶，加蒸馏水定容。
③分别吸取上述溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4，摇匀后，室温5min，90oc水浴15min，冷却至室温。
空白对照：2ml蒸馏水+1ml5%苯酚+5ml浓硫酸吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程y=ax+b④准确量取多糖溶液（待测）2.0ml于50ml容量瓶中，加蒸馏水定容，方法同上述。
四结果①计算浓度（待测液）本组所测得多糖溶液（待测）的吸光度为的0.385，代入根据吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程y=14.255x+0.0309，可得待测液的浓度为0.025*25=0.625mg/ml.。
②实验主要步骤（记录）步骤记录：Ⅰ首先配制浓度分别为0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的葡萄糖溶液；然后取配好的溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4，；不断震荡，溶液逐渐变为褐色，放出热量，且随着葡萄糖浓度的增加，溶液的颜色也不断变深；室温5min，90oc水浴15min，反应更为充分，溶液颜色有稍微加深，冷却至室温；最后用7200分光光度计一一测量其吸光度，得到的的数据是0.098、0.19、0.337、0.412、0.584、0.774。
关于不同枸杞子中枸杞多糖的含量分析
关于不同枸杞子中枸杞多糖的含量分析关于不同枸杞子中枸杞多糖的含量分析摘要：不同枸杞当中多糖含量存在着较大的区别，以此可作为枸杞品质鉴别参考。
本研究通过相关实验提取方法对枸杞多糖进行了提取，取得了一定的成果，供以参考。
关键词：枸杞;多糖;含量作为一种常见的中药药材枸杞不仅仅能够药用，同时具有良好的保健成效。
它具有补肾保肝、抗脂肪肝、抗疲劳、抗肿瘤、延缓衰老等作用。
不同产地、批次枸杞在组分含量上有着一定的区别，特别的在多糖含量上存在着较大的差异。
枸杞对免疫功能有着显著的影响，可让巨噬细胞的吞噬功能得以提升，同时能够让血清当中溶菌酶作用得以增强，由此可促进抗绵羊红细胞抗体效价上升【1】。
枸杞提取物具有较好的降血糖效果且持续性较长、毒性较小，可促进机体的糖耐量提升。
在相关研究中发现实验大鼠食用枸杞当中的甜菜碱可促进磷脂水平提升，胆固醇呈降低太，对碱性磷酸脂酶、胆碱酯酶等都有明显的改善作用【2】。
另外枸杞具有抗癌成效，可对癌细胞DNA合成产生抑制作用并对有丝分裂产生显著的干扰作用，从而降低癌细胞的实际生殖能力。
从产地来看目前我国优质的枸杞大局部来自宁夏，在相关研究中也证实宁夏地区及周边产地枸杞多糖含量较其他地区更高，这也表达了不同地域环境下枸杞果实的差异。
本研究通过相关实验对不同类别的枸杞进行了鉴定，并以多糖含量对枸杞的品质进行了分析。
一、实验样品、器材及试剂实验样品：市场上的交易的不同批次的宁夏枸杞。
实验试剂：苯酚、碳酸氢钠、石油醚、乙醚、乙醇、丙酮等，上述试剂均为分析纯，基准试剂为葡糖糖溶液。
实验仪器：紫外分光管度计、旋转蒸发仪、电子分析天平、恒温枯燥箱、水浴锅等。
二、实验方法先制备苯酚试剂，用分析天平准确称取100g苯酚、0.05g碳酸氢钠以及0.01g铝，三者均至于圆底烧瓶当中，加热蒸馏，蒸馏温度控制在180摄氏度左右，冷却后将馏分提出，并用蒸馏水溶解，密封保存。
然后制备标准曲线，先配置标准葡萄糖溶液，取枯燥后葡萄糖0.1006g置入100ml容量瓶配制标准也。
枸杞中枸杞多糖含量的测定
枸杞中枸杞多糖含量的测定一、实验内容用分光光度法测定枸杞中枸杞多糖的含量。
二、实验目的与要求(1)掌握用分光光度法测定枸杞中枸杞多糖含量的原理及方法。
(2)熟练掌握分光光度计的原理及使用方法。
三、实验原理用80%乙醇溶液提取以除去单糖、低聚糖、苷类及生物碱等干扰性成分，然后用水提取其中所含的多糖类成分。
多糖类成分在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法于适当波长处测定其多糖含量。
四、试剂80%乙醇溶液：用95%乙醇或无水乙醇加适量蒸馈水配制。
硫酸。
苯酚液：取苯酚100g，加铝片O.lg与碳酸氢钠0.05g，蒸馏收集1721馏分，称取此馏分10g，加水150mL，置于棕色瓶中即得。
葡萄糖标准溶液：精密称取105T：干燥至恒重的标准葡萄糖O.lOOOg，加水溶解并定容至lOOOmL即得。
五、仪器)实验室用样品粉碎机、分光光度计、电热恒温水浴。
六、操作步骤1-样品处理精密称取样品粉末0.4g (精确到0.000lg)置于圆底烧瓶中，加80%乙醇溶液 200ml回流提取lh，趁热过滤，残渣用80%热乙醇溶液洗涤（约10mL x 10次），残渣连同滤纸置于烧瓶中，加蒸馏水l00ml，加热提取1h，趁热过滤，残渣用热蒸馏水充分洗涤（约lOmLxl0次），洗液并入滤液，冷却后移入250mL容量瓶中，用水定容，待Ho2•标准曲线的绘制 %精密吸取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1-OmL 中，各加蒸馏水使体积为2. OmL，再各加苯酚液l.OmL，摇匀，迅速滴加硫酸5.0mL,摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出冷却至室温;另以蒸馏水 2mL，加苯酚和硫酸，同上操作为空白对照。
于490nm处测定吸光度，绘制标淮曲线。
3.试样的测定准确吸取待测液一定量（视待测液含量而定），加蒸馏水至2niL,以下操作按标准曲线绘制下的方法测定吸光度，根据标准曲线查出显色液中葡萄糖含量。
枸杞多糖的超声法提取法
枸杞多糖的超声法提取法及抗氧化性研究1、枸杞多糖的含量测定1）、标准曲线的绘制精密称取于105％干燥至恒重的无水葡萄糖对照品100 mg，加入100 ml容量瓶中，用纯化水溶解至刻度。
分别精密移取对照品储备液0．5，1．0，2．0，3．0，4．0，5．0 ml于100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，然后各取1．0 ml于10 ml比色管中，分别加入5％的苯酚溶液1．0 ml，摇匀后加入5．0 ml浓硫酸，立即摇匀，在沸水浴中加热15 min，冷却至室温。
以纯化为空白对照，在487 nm处测吸光度值A。
以吸光度值为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线。
2）、样品含量的测定取干燥的枸杞多糖供试品，按实际实验结果将其稀释至合适浓度。
精密吸取待测液1．0 ml，置于10 ml比色管中，按“2．1．1”方法显色，测定A值，按公式计算多糖含量。
按下式计算多糖含量(% ) = 3. 17C ×D /W×100％,式中C为样品溶液的葡萄糖质量浓度(mg／m1)，D为样品溶液的稀释倍数，f为换算因子(f=3．17) ，w为样品质量(mg)2、正交试验考察提取工艺（单因素试验）1）、料液比的影响称取枸杞样品4份，均为5g，分别加入lO、20、30、40倍水量，在50℃，pH=7，超声提取30 min，浓缩至20 ml左右，加5倍95％乙醇沉淀，沉淀再溶解，测定吸光度，从而比较多糖含量的提取率。
2）、时间的影响称取枸杞样品4份，均为5 g，加入10倍水量，在50~C，pH=7，分别超声提取10 min、20 min、30 min、40min，浓缩至20 ml左右，加5倍95％乙醇沉淀，沉淀再溶解，测定吸光度，从而比较多糖含量的提取率。
3）、温度的影响称取枸杞样品4份，均为5 g，加入10倍水量，分别在40℃、50℃、60℃、70℃，pH=7，超声提取从而比较多糖含量的提取率。
4)、pH值的影响称取枸杞样品4份，均为5 g，分别加入10倍水量，分别在pH=7、8、9、10，50℃，超声提取30 min，浓缩至20 ml左右，加5倍95％乙醇沉淀，沉淀再溶解，测定吸光度，从而比较多糖含量的提取率。
枸杞多糖的提取与鉴定
枸杞多糖的提取与鉴定1242818杨立君实验原理强酸可以使糖类脱水生成糠醛。
生成的糠醛或羟甲基糠醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
颜色的深浅可以作为定量的标准。
这一方法具有很高的灵敏度，糖含量在30μg左右就能进行测定，所以可以作为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适]1[。
实验试剂1.标准葡萄糖试剂：将葡萄糖105℃烘干至恒重（2h），准确称取50mg,无离子水定容至500mL,终浓度为0.1mg/mL.2.蒽酮-浓硫酸试剂：称取0.1997g蒽酮，溶于100mL浓硫酸，现用现配。
3.葡萄糖，阿拉伯糖，甘露糖]3[],2[4.硫代硫酸钠溶液，活性炭，正丁醇，无水乙醇，丙酮。
三氯甲烷，甲苯胺乙醇溶液实验器材分光光度计，超速离心机，电炉，烧杯，试管，干燥器，滤纸，层析缸以及其他相关玻璃仪器实验流程(一) 提取枸杞干果粉碎，氯仿- 甲醇（2∶1）回流脱脂8~10 h 近无色，挥干溶剂以后将脱脂后的枸杞样品放入烧杯中，分3次加15、12、10 倍量的蒸馏水于90 ℃水浴提取，每次2 h；收集3 次的滤液减压浓缩至约200 mL，转移到大烧杯中，加4 倍量的95%乙醇，沉淀12 h 后抽滤，并依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，干燥后便得到枸杞多糖的粗制品。
]4[（二）纯化多糖粗品加水溶解，4 000 r/min 离心10 min 后取上清液，加30%双氧水适量，40 ℃保温4～6 h 后，加三氯甲烷-正丁醇（4∶1，Sevag 法）溶液沉淀蛋白，取上清液；此步骤反复多次，直到无白色絮状沉淀出现。
将除去蛋白的多糖溶液浓缩后，转移到分子排阻为8 000～10 000 Da 的透析袋中，流水透析24 h 后，蒸馏水透析过夜，溶液颜色变淡，浓缩后真空干燥得枸杞多糖精制品。
]4[(三) 理化性质分析将枸杞多糖精品分别加入水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和正丁醇中，观察其溶解性。
另在浓硫酸存在下观察枸杞多糖与α-萘酚的作用，于界面处观察颜色变化。
紫外分光光度法测定枸杞中多糖含量
紫外分光光度法测定枸杞中多糖含量摘要:目的：提供一种测定枸杞制品中功效成分多糖的方法，同时合理筛选枸杞品种。
方法：运用苯酚-硫酸紫外分光光度法测定3种枸杞品种中多糖的含量。
结果：宁夏枸杞中的多糖含量为4.01%，新疆枸杞中的多糖含量为3.85%，青海枸杞中的多糖含量为4.01%；同时发现使用紫外分光光度法测定精密度好、重复性好、方法简便。
结论：宁夏枸杞中多糖含量明显高于新疆枸杞和青海枸杞，差异达到显著水平；紫外分光光度法是一种测定枸杞多糖质量分数的理想方法，亦可为其它类多糖质量分数的测定提供依据。
关键词：苯酚-硫酸；紫外分光光度法；枸杞；多糖枸杞(Lycium Barbrum L.)属茄科枸杞，为落叶灌木植物干燥成熟果实。
近年的医学研究表明，枸杞含有多种营养成分和微量元素，其有效成分枸杞多糖(LBP)具有广泛的药理学作用，可促进造血、降血脂、保肝及治疗神经衰弱等。
枸杞多糖(LBP)是由多个单糖或衍生物聚合而成的大分子活性化合物，是枸杞生物学作用的主要有效成分之一，其结构按LBP-Ⅰ、LBP-Ⅱ、LBP-Ⅲ、LBP-Ⅳ的顺序水溶性依次递减，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。
枸杞多糖对机体具有非特异性免疫调解功能，可调节机体免疫力、抑制肿瘤生长和细胞突变、延缓衰老、提高适应能力，并具有抗疲劳和加速消除疲劳的作用，已成为保健食品中的一种重要功能性添加剂，显示出良好的应用前景。
为了进一步开发新疆黑枸杞的药用价值，本文采用紫外分光光度法测定了几种枸杞叶中的多糖含量。
1 材料与方法1.1 原理多糖在80%乙醇溶液中沉淀，与单糖和低聚糖及甙类物质分离。
沉淀用水溶解后，再用碱性二阶铜试剂选择性地从其它高分子物质中沉淀出具有葡聚糖结构的多糖。
苯酚-硫酸可与其中的多糖起显色反应，生成橙黄色化合物，可于485nm 处比色，定量。
1.2 材料与仪器TU-1901型紫外-可见分光光度计(北京普析通用)、岛津CS-9301PC薄层扫描仪、定量毛细管(美国Dummond)、手动点样仪(CAMAGIII型)、硅胶G(青岛海洋化工集团公司)自制板；D-无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所生产，批号110833200302)；试剂：所用试剂均为分析纯。
枸杞多糖组成及含量测定方法的改进
枸杞多糖组成及含量测定方法的改进1. 方法原理该研究旨在改进枸杞多糖组成及含量的测定方法。
将枸杞多糖进行水解衍生化处理，然后利用气相色谱法（GC）和高效液相色谱法（HPLC）测定单糖组成。
通过分析单糖组成结果，可以判断枸杞多糖的真伪。
在此基础上，根据各单糖组成物质的量比，配制单糖混合溶液，并使用苯酚硫酸比色法绘制标准曲线，从而建立枸杞多糖含量的测定方法。
通过该方法测定的枸杞多糖含量为30，而仅以葡萄糖作为标准溶液，使用硫酸苯酚法绘制标准曲线时，枸杞多糖含量仅为14。
这种改进的方法可以更准确地测定枸杞多糖的含量，并区分真伪枸杞多糖。
2. 实验材料和仪器枸杞样本：选用宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）为实验材料，购买自当地市场，经鉴定为优质品种。
试剂：包括但不限于葡萄糖、硫酸、苯酚、盐酸、乙醇等，均为分析纯。
高效液相色谱仪（HPLC）：配备示差折光检测器，用于枸杞多糖的定性和定量分析。
多糖纯化：通过Sevage法去除蛋白质，然后用透析法去除小分子杂质。
多糖含量测定：采用改进的苯酚硫酸法，通过紫外可见分光光度计测定多糖含量。
这个段落详细列出了实验所需的材料和仪器，并简要介绍了实验方法，为后续实验结果的准确性和可靠性提供了基础。
3. 实验步骤本实验选用宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）为原料。
将枸杞样品在40下烘干至恒重，粉碎后过80目筛。
准确称取0g枸杞粉末，置于圆底烧瓶中。
采用改进的超声波辅助水提法提取枸杞多糖。
将枸杞粉末加入100mL去离子水中，在功率为200W、频率为40kHz的超声波辅助下提取30分钟。
提取完成后，离心（4000 rpm, 10 min）取上清液，残渣重复提取两次，合并上清液。
在上清液中加入Sevage试剂（三氯甲烷正丁醇 51，vv），剧烈振荡后静置分层，重复此步骤至无蛋白层出现，收集上清液。
将上清液减压浓缩至原体积的15，加入4倍体积的无水乙醇，置于4冰箱中醇沉过夜。
枸杞子中多糖含量的测定(1)
枸杞子中多糖含量的测定柳婷，胡浩斌(陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳 745000)摘要：本文是用分光光度法测定枸杞子中的含糖量[1]。
先用80%乙醇提取以除去单糖、低聚糖、生物碱等干扰成分，然后用蒸馏水提取其中所含的多糖类成分。
多糖在硫酸作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物。
用紫外分光光度法[2]测定其枸杞子多糖含量，本法简便，显色稳定，灵敏度高重现性好。
关键词:枸杞子；多糖；紫外分光光度计Detection of Polysaccharide in Lycium barbarumLiu Ting, Hu Hao-Bin(College of Chemistry & Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 74500, China) Abstract:This paper is utilized spectrophotometry to detect Polysaccharide in Lycium barbarum..First,use 80% ethanol to remove simple sugars, oligosaccharides, alkaloids etc interference ingredients, and then extracted the ingredients. Of polysaccharose with distilled water. In Sulfuric acid condition, polysaccharide hydrolysis into monosaccharides, and rapidly dehydrated to furfural derivatives, then condense with phenol into colored compounds. Using spectrophotometry to detect polysaccharide in Lycium barbarum,the method is simple, color stability, high sensitivity and good reproducibility.Key words:Lycium barbarum; polysaccharose; spectrophotometry枸杞子（Lycium barbarum是我国传统的中药材和重要经济作物，性状呈类纺锤形，略扁，长6～21 mm,直径3～10 mm。
枸杞多糖的测定
枸杞多糖的测定一、实验原理：用80%乙醇溶液提取以除去单糖，低聚糖等干扰成分，然后用水提取其中所含的多糖类成分，多糖类成分在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物，用分光光度计法于适当波长处测其多糖。
二、仪器设备:可见光分光光度计，电炉，烘箱，回流装置，蒸馏装置等三、试剂配制：1.葡萄糖标准溶液:称取0.1g(精确到0.1000)105度混干恒重的样品，溶解后转移到1000ml容量瓶中，定容。
2.苯酚液：称取苯酚100g,铝片0.1g 碳酸氢钠0.05g与蒸馏瓶中，收集172度六份，称取溜出液10g 加入150ml蒸馏水。
四、实验步骤：1.样品的制备：称取0.4g样品用80%乙醇回流反应一个小时后，过滤，用热乙醇冲洗后用收集残渣，加蒸馏水100ml回流一小时后过滤收集滤液，转移至250ml 容量瓶中定容。
2.标准曲线的绘制：吸取配置好的葡萄糖标准溶液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml于试管中，加蒸馏水至2ml，加入苯酚液1ml，迅速加入硫酸5m后水浴锅煮沸15min。
等冷却后495纳米处测定吸光度。
另吸取2ml蒸馏水做空白试验。
3.试样的测定：吸取一定量的样品溶液，按标准曲线溶液方法配制后测吸光度。
五、测定结果的记录及计算：1.标准曲线的制定：葡萄糖标准液吸光度2.试样的检测：样品吸光光度值代入公式得x=59.6计算公式：W=(ρ×250×∫(3.19)/m×v×106)×100=19.8% (ρ:显色中葡萄糖的含量，单位为μg。
)检测结果：粗多糖含量为19.8%。
枸杞多糖测定实验报告
一、实验目的1. 掌握枸杞多糖提取的基本原理和方法；2. 学习使用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖含量的操作步骤；3. 分析实验数据，评估枸杞多糖的含量。
二、实验原理枸杞多糖是一种生物活性物质，具有多种生物功能，如抗衰老、抗氧化、抗肿瘤等。
本实验采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖含量，其原理是：在酸性条件下，多糖与苯酚反应生成蓝色化合物，该化合物的吸光度与多糖含量成正比。
三、实验材料1. 材料与试剂：枸杞子、苯酚、硫酸、葡萄糖标准品、蒸馏水等。
2. 仪器：电子天平、电热恒温水浴锅、分光光度计、离心机、研钵等。
四、实验方法1. 枸杞多糖提取（1）将枸杞子洗净，晾干，研磨成粉末；（2）称取一定量的枸杞子粉末，加入适量蒸馏水，煮沸提取；（3）提取液过滤，取滤液备用。
2. 标准曲线制备（1）精密称取一定量的葡萄糖标准品，配制成不同浓度的溶液；（2）按照苯酚-硫酸法测定吸光度，以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 枸杞多糖含量测定（1）取一定量的枸杞多糖提取液，按照苯酚-硫酸法测定吸光度；（2）根据标准曲线，计算枸杞多糖的含量。
五、实验结果1. 标准曲线制备根据实验数据，绘制标准曲线，得出回归方程为：y = 0.0018x + 0.0016，相关系数R² = 0.9988。
2. 枸杞多糖含量测定取一定量的枸杞多糖提取液，测定吸光度为0.521，根据标准曲线计算枸杞多糖含量为1.24mg/mL。
六、实验讨论1. 本实验采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖含量，操作简便，结果准确可靠。
2. 在实验过程中，要注意控制提取条件，以确保提取液的纯度和含量。
3. 标准曲线的绘制是本实验的关键环节，应严格控制实验条件，保证标准曲线的准确性和可靠性。
4. 本实验结果初步表明，枸杞中含有较高的多糖含量，具有一定的生物活性。
七、实验结论本实验成功提取了枸杞多糖，并采用苯酚-硫酸法测定了枸杞多糖含量。
实验结果表明，枸杞中含有较高的多糖含量，具有潜在的开发价值。
分光光度法测定发酵型枸杞酒中的枸杞多糖含量
分别准确吸取 5 份葡聚糖标准溶液 1.00 mL 于 5 支 25 mL 具塞试管中，再在具塞试管中分别加入 0.6 mL、0.8 mL、 1.0 mL、1.2 mL 和 1.4 mL 的苯酚溶液，各加水至 3.0 mL，小 心加入浓硫酸 10.0 mL，摇匀后放置 5 min，置沸水浴中煮沸 2 min，冷却后于 485 nm 处以试剂空白为参比，1 cm 比色皿 测定吸光度，选择较适合苯酚用量。随着苯酚用量增加吸光 值相应增加，在 1.0 mL 时出现最大值，后随着苯酚继续增加 吸光值有所下降。因此，最终选择苯酚用量为 1.0 mL。 2.2 硫酸用量的选择
（2）样 品 的 测 定。 准 确 吸 取 样 品 测 定 液 2.00 mL 置 于 25 mL 具 塞 试 管 中， 加 入 苯 酚 溶 液 1.0 mL， 小 心 加 入 浓 硫 酸 10.0 mL， 摇 匀 后 放 置 5 min， 置 沸 水 浴 中 煮 沸 2 min， 冷 却 后 于 485 nm 处 以 试 剂 空 白 为 参 比，1 cm 比 色皿测定吸光度，根据标准曲线查出吸取的待测液中葡聚 糖 的 含 量， 计 算 样 品 中 枸 杞 多 糖 含 量， 同 时 做 样 品 空 白 实验。
分别准确吸取 5 份葡聚糖标准溶液 1.00 mL 于 5 支 25 mL 具塞试管中，各加入苯酚溶液 1.0 mL，小心加入浓硫酸 6.0 mL、8.0 mL、10.0 mL、12.0 mL 和 14.0 mL, 摇匀后放置 5 min，置沸水浴中煮沸 2 min，冷却后于 485 nm 处以试剂 空白为参比，1 cm 比色皿测定测定吸光度，选择较适合硫 酸用量。随着硫酸用量增加吸光值相应增加，在 10.0 mL 时 出现最大值，后随着硫酸继续增加吸光值有所下降。因此， 最终选择硫酸用量为 10.0 mL。
新疆枸杞子中多糖的提取及含量测定
新疆枸杞子中多糖的提取及含量测定库尔班江（伊犁师范学院化学与生物科学学院，新疆伊宁835000）摘要：对新疆枸杞子进行多糖的提取及含量测定. 用水提醇沉法从新疆枸杞子中提取水溶性多糖，通过苯酚-硫酸比色法在490n m波长处测定多糖含量. 提取过程中通过单因素试验分析了乙醇浓度、浸提温度、料液比及浸提时间等因素对多糖提取率的影响. 在单因素试验的基础上，通过正交设计法优化新疆枸杞子中多糖提取工艺条件，确定了多糖的最佳提取工艺条件为：乙醇浓度为80％、浸提温度为90℃、料液比为l∶50、浸提时间为2.5h、浸提次数为3次. 在此条件下，回归方程A = 6.8316C + 0.03 ，R=0.9993，葡萄糖在7～49μg/m L范围内，呈良好的线性关系，f因子为3.79（RSD=1.24%，n=3），多糖含量为7.37%（R SD=0.38%，n=3），回收率为中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1673—999X（2014）03—0043—05枸杞子（Fructus Lycii）为茄科（Solanaceae）植物枸杞（Lycium chinense Mill.）的成熟果实，是我国传统的滋补中药材. 新疆枸杞为灌木，高1.5 米，多分枝，枝条坚硬，呈淡黄色或淡灰色，具条纹老枝有长0.6～6 厘米的硬棘刺，棘刺无叶或生叶和花. 新疆枸杞主要分布在海拔1200～2700 米的天山山前荒漠、河谷、山地草原、干山坡，伊犁地区主要分布在霍城县. 我国甘肃、宁夏、青海等省区，中亚地区也有分布[1].枸杞子含有钙、粗纤维、碳水化合物、磷、铁、粗脂肪、抗坏血酸、粗蛋白、尼克酸、甜菜碱、维生素B1、维生素B2、维生素C、硫氨酸、核磺酸、胡萝卜素等[2]，还含有丰富的钾、钠、钙、镁、铁、铜、锰、锌等元素以及22 种氨基酸[3]. 枸杞子多糖是一种糖和蛋白质结合的糖蛋白高分子聚合体，其中糖量占糖蛋白总量的70%，主要含有木糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖、阿拉伯糖和鼠李糖6 种单糖[4].《本草纲目》中记载枸杞子具有坚筋骨、补精气之不足、明目安神、令人长寿等功效[2]. 近年来研究发现，植物多糖具有抗肿瘤、增强机体免疫力等功效，已是当前国内外研究的热点[5～7]. 人们对枸杞子多糖的研究发现，枸杞子多糖具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗疲劳、护肝、防辐射、抗缺氧、滋补肝肾、益精明目等功效[8～11]. 目前已有不少研究报道枸杞子多糖具有抗癌[11]、增强免疫力[12]、降血糖[13]、防衰老、抑制肿瘤生长和细胞突变等作用[14]. 多糖应用前景广阔，开发和研究多糖不仅有重要的理论和经济价值，还具有非常显著的社会效益.多糖是来自于高等植物、动物细胞膜、微生物的细胞壁中的天然大分子物质，是所有生命有机体的重要组成成分与维持生命所必需的营养物质. 目前，国际上对多糖的研究以日本、美国、加拿大、德国处于领先地位. 我国对多糖的研究起步较晚，但近年来发展非常迅猛. 其研究对象包括真菌类、植物类、动物类、地衣类等，见诸报道的主要以微生物多糖和植物多糖为主，动物多糖较少[15]. 关于枸杞子的研究，对宁夏、甘肃等地的枸杞子的研究文献报道较多，但对于新疆枸杞子的研究文献报道收稿日期：2014-05-21作者简介：库尔班江（1962—），男（维吾尔族），新疆伊宁人，教授，研究方向为中药与天然药物.伊犁师范学院学报（自然科学版）2014 年44很少. 本文对新疆枸杞子的多糖提取和含量测定进行研究，为新疆枸杞子多糖的深入研究及枸杞子资源更好地开发应用提供依据.1 仪器与试药1.1 仪器7230G 可见分光光度计（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；RE-52 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；精细鼓风干燥箱（旋都凯仪器设备有限公司）；DF-101S 集热式恒温加热磁力搅拌器（上海羌强仪器设备有限公司）；QE-10A 型500 克装高速中药粉碎机（武义县屹立工具有限公司）；JD-2003 电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）.1.2试药枸杞子于2009 年11 月22 日采自新疆精河县，并通过我院有关专家鉴定为茄科（Solanaceae）植物枸杞（Lycium chinense Mill.）的成熟干燥果实.葡萄糖（A.R.，天津市天新精细化工开发中心）；苯酚（A.R.，天津市化学试剂三厂）；浓硫酸（A.R.，乌鲁木齐迪城化工有限公司）；无水乙醇（A.R.，成都市科龙化工试剂厂）；茚三酮（A.R.，天津市科密欧化学试剂开发中心）.2 方法与结果2.1 溶液的配制2.1.1 5%苯酚溶液的配制精确称取苯酚100g ，加0.1g 铝片和0.05g NaHCO3，蒸馏收集186℃时的馏分，精密称取5g 溶液移至100mL 容量瓶中定容，置棕色瓶中避光保存备用.2.1.2 葡萄糖标准溶液的配制精密称取真空干燥至恒重的葡萄糖7mg，溶解至100mL 容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，备用.2.2 枸杞子多糖的提取及纯化精密称取枸杞子样品20.00g 至250mL 容量瓶中，加160mL 蒸馏水，90℃水浴提取2h，过滤，提取液静置12h 后，减压浓缩，浓缩液以无水乙醇调制使溶液含醇80%，静置过夜，过滤，得沉淀物为枸杞子多糖粗品，分别以无水乙醇、丙酮、乙醚回流洗涤，得棕褐色枸杞子多糖，于60℃烘干，密封备用.2.3 最大吸收波长的选择准确称取枸杞子多糖3.5mg 于100mL 容量瓶中，稀释至刻度线，摇匀. 取2mL 枸杞子多糖溶液于锥形瓶中，迅速加入1mL 苯酚溶液和5mL 浓硫酸，摇匀，冷却至室温，以蒸馏水做空白，测其在不同波长下的吸光度.0.190.180.170.160.150.140.130.12400 450 500 550 600波长（nm）图1 波长与吸光度的关系由图1 可知，波长在490nm 处有最大吸收峰，因此，波长选择490nm 为最大吸收波长.2.4 线性范围的考察分别精密吸取葡萄糖标准溶液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL 至10mL 容量瓶中定容，制成系列浓度的标准溶液. 再分别精密吸取系列浓度的标准溶液各2.0mL，各加入1mL 5%苯酚溶液，摇匀，迅速滴入5mL 浓硫酸，摇匀，放置，冷却至室温，另取2.0mL 蒸馏水作空白对照，于490nm 波长处比色，测定吸光度，以葡萄糖标准液浓度C（mg/mL）为横坐标，以吸光度A 为纵坐标，进行线性回归，得到葡萄糖标准溶液的回归方程式为：A = 6.8316C + 0.03 ，R=0.9993，由此可见，葡萄糖标准溶液的浓度在7～49μg/mL 范围内，呈良好的线性关系.0.300.250.200.150.100.050.000.00 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05标准液浓度（mg/mL）图2 葡萄糖标准曲线2.5 换算因子的测定准确称取60℃干燥至恒重的枸杞子多糖吸光度吸光度第3 期 库尔班江：新疆枸杞子中多糖的提取及含量测定453.4mg ，加适量水溶解后转移至50mL 容量瓶中定容，摇匀，作为多糖储备液，精确吸取多糖储备液 2.00mL ，按2.4法测定吸光度，由回归方程计算出多 糖液中葡萄糖的浓度（C ），按下式计算其换算因子：℃为最佳.4.2 4.0 3.8 m f CD ， 3.6 式中：m 为样品的质量（mg ），C 为多糖液中葡萄糖的浓度（mg/mL ），D 为多糖的稀释因数. 测定结果 为，枸杞子多糖的换算因子f=3.79（RSD=1.24%， n=3）.2.6 枸杞子多糖的提取工艺优化2.6.1 料液比对枸杞子多糖提取率的影响准确称取枸杞子粉末 5 份（每份 1g ），分别加入 40mL 80%乙醇，在 85℃下回流提取 1h ，抽滤， 将滤渣分别加入料液比为 1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50 的蒸馏水 90℃水浴提取 1.5h ，抽滤，将 3.4 3.2 3.0 2.8 2.64050 60 70 80 90 100 110温度（℃）提取温度对多糖提取率的影响图 4 2.6.3 提取时间对多糖提取率的影响 准确称取枸杞子粉末 5 份（每份 1g ），分别加 入 40mL 80%乙醇溶液，在 85℃下回流提取 1h ，抽 滤，将滤渣各加入 80mL 蒸馏水，在 90℃水浴下分别提取 0.5h 、1h 、1.5h 、2h 、2.5h ，抽滤，将滤液 置于 250mL 容量瓶中定容. 按 2.6.2 项下同法操作， 测定不同水浴时间提取液的吸光度，得到水浴提取时间对多糖提取率的影响（见图 5）.滤液置于 250mL 容量瓶中定容. 定多糖的含量.按2.4 项下同法测 2.82.72.63.62.53.43.2 2.43.0 2.32.8 2.6 2.21:101:201:301:401:502.4 料液比料液比对多糖含量的影响2.2 图 3 2.0 1.8从图3可知，随着提取液用量的增加，所测得的枸杞子多糖含量也随之增加，当料液比为1∶40时达到最高，以后随着提取液用量的增加，所测得的枸杞子多糖的含量不再增加. 因此，料液比以1∶40最佳.2.6.2 温度对枸杞子多糖提取率的影响准确称取枸杞子粉末 5 份（每份 1g ），分别加入 40mL 80%乙醇溶液，在 85℃下回流提取 1h ，抽滤，将滤渣各加入 80mL 蒸馏水，分别在 45℃、60℃、75℃、90℃、105℃下水浴提取 1.5h ，抽滤，将滤液置于 250mL 容量瓶中定容. 按 2.4 项下同法测定多糖的含量（见图 4）.由图 4 可知，随着温度的升高，所测得的多糖含量不断增大，并在 90℃时达到最大值，继续提高温度，所测多糖含量反而下降. 因此，浸提温度 900.51.01.52.02.5时间（h ）提取时间对多糖提取率的影响图 5 由图 5 可知，随着浸提时间的增长，所测得的多糖含量也随着增加，当时间为 2h 时，其所测多糖含量最大，之后基本保持不变. 因此，浸提时间选取 2h.2.6.4 提取次数对多糖提取率的影响准确称取枸杞子粉末 4 份（每份 1g ），分别加入 40mL 80%乙醇溶液，在 85℃下回流提取 1h ，抽滤，将滤渣各加入 80mL 蒸馏水，在 90℃水浴下提取 2h ，分别提取 1 至 4 次，抽滤，将滤液置于 250mL容量瓶中定容. 分别吸取 1mL 于 50mL 容量瓶中定容，按 2.4 项下同法操作，测定不同水浴次数提取多糖含量 多糖含量 多糖含量 %%%伊犁师范学院学报（自然科学版） 2014 年46液的吸光度，得到提取次数对多糖提取率的影响 （见图 6）.基本不再增加. 因此，提取3次为最佳次数.2.6.5 正交试验及结果通过单因素试验对上述不同提取条件参数进 行了初步的筛选，为了分析参数影响主次因素，得 到最佳的提取条件，进行了正交试验. 参照单因素 试验结果，以影响多糖含量测定的乙醇浓度、料液 比、浸提温度、浸提时间为四个影响因素，三个水 3.0 2.9 2.8 2.7 2.6 平L 9（34）进行正交试验，优选最佳提取条件. 素水平L 9（34）见表1，试验结果见表2.因 2.5 2.4 4表 1 因素水平L 9（3 ）表2.3水 平A 乙醇浓度 （%）B 料液比 （g/mL ）C 浸提温度 （℃）D 浸提时间（h ）1.01.52.02.53.03.54.0浸提次数图 6 提取次数对多糖提取率的影响由图6可知，随着提取次数的增加，所测多糖 含量也逐步增加，当提取3次以后，所测多糖1∶30 1∶40 1∶50 1 2 3 80 95 100 75 90 105 1.5 2 2.54表 2 L 9（3 ）正交试验结果试验组水平AB C D 吸光度 多糖含量（%）1 23 4 5 6 7 8 9 K 1 K 2 K 3 R1 1 12 2 23 3 3 0.121 0.117 0.117 0.0041 2 3 1 2 3 1 2 3 0.102 0.097 0.155 0.0581 2 3 2 3 1 3 1 2 0.113 0.122 0.119 0.0091 2 3 3 1 2 2 3 1 0.126 0.090 0.139 0.0490.107 0.076 0.179 0.125 0.104 0.121 0.073 0.112 0.1662.141 1.137 4.033 2.634 2.047 2.520 1.194 2.2743.771通过数理统计的极差分析法进行分析可知，乙 醇浓度、料液比、浸提温度、浸提时间四因素对枸 杞子多糖含量影响主次的顺序为 B ＞D ＞C ＞A ，并 且最佳的提取条件为 A 1B 3C 2D 3，即：乙醇浓度为 80％，料液比为 1∶50，浸提温度为 90℃，浸提时 间为 2.5h. 2.7 加样回收率试验精密称取精制的枸杞子多糖10mg ，加水溶解至 100mL 容量瓶中定容，摇匀，得0.1mg/mL 的多糖精 品溶液，精密吸取5份（每份1mL ）溶液，分别加入 标准葡萄糖溶液1mL 、2mL 、3mL 、4mL 、5mL ， 计算回收率（见表 3 ），得到平均加样回收率为96.96%（RSD=1.87%，n=5）.表 3 加样回收率试验取样量 （mL ） 多糖含量 （mg ） 加标量 （mg ） 测得量 （mg ） 回收率 （%） 序号12 3 45 平均值11 1 110.10.1 0.1 0.10.10.070.14 0.21 0.280.350.3710.442 0.501 0.5730.64597.199.3 94.3 96.4 97.796.962.8 样品多糖含量的测定称取枸杞子2g ，置于250mL 圆底烧瓶中，加入 40mL 80% 乙醇85 ℃回流1h ，抽滤，将滤渣置于多糖含量 %第3 期库尔班江：新疆枸杞子中多糖的提取及含量测定47量瓶中定容，备用.精密量取样品溶液1mL 于50mL 容量瓶中，加蒸馏水稀释定容，摇匀. 再分别吸取2mL 于锥形瓶中，加入1mL 苯酚溶液，迅速滴入5mL 浓硫酸，摇匀，放置至室温，测其吸光度，由回归方程计算试液中葡萄糖的含量，按下式计算样品中多糖的含量：多糖含量(%)=(CDf m)⨯100 ，式中：C 为样品溶液中葡萄糖的含量（mg/mL），D 为样品溶液的稀释倍数，f 为换算因子，m 为样品的质量（mg），测得提取结果见表4.表4 多糖含量的测定本实验中测得的枸杞子多糖含量为7.37% （n=3，RSD=0.38%）.3 结果与讨论3.1 本文采用枸杞子提取纯化所得多糖为样品测定f 因子为3.79（RSD=1.24%，n=3），计算多糖含量为7.37%（RSD=0.38%，n=3），减小了系统误差，结果更准确.3.2 《中国药典》2005 年版，枸杞子项下只收集宁夏枸杞子一种，并规定枸杞子多糖含量不得低于1.8%. 然而，在市场上除出现较多的宁夏枸杞子外，还有新疆枸杞子、北方枸杞子等. 其中，新疆枸杞子多糖含量可达7.37%，结果表明，新疆枸杞子可望作为枸杞子的新来源.3.3 此法具有仪器方便、操作简单、快速、溶剂用量小、成本低、无毒害、准确等优点，可提高新疆枸杞子的使用价值，为进一步开发利用新疆枸杞子提供参考依据.葡萄糖浓度（mg/mL）多糖含量（%）序号吸光度1 2 0.5600.5620.07760.07797.357.383 平均值0.563 0.0780 7.39 0.562 0.0778 7.37参考文献：[1][2][3][4] 潘晓玲，米吉提·胡达拜尔地. 新疆植物志第四卷[M]. 乌鲁木齐：新疆科学技术出版社，2004. 357.段昌令，乔善义，王乃利，等. 枸杞子活性多糖的研究[J]. 药报，2001，36（3）：196.刘乃珩. 药食兼用之枸杞子[J]. 食品与健康，2007（3）：311.田庚元，王晨，冯宇澄. 枸杞子糖蛋白的分离纯化，物化性质及糖肽键特征[J]. 生物化学与生物物理学报，1995，27 （5）：493-498.韩果萍，段玉峰. 我国天然活性多糖药理研究进展[J]. 中药材，2003，26（2）：128. 韦巍，李雪华. 多糖的研究进展[J]. 国外医学·药学分册，2005，32（3）：179. 吴梧桐，高美凤，吴文俊. 多糖的抗肿瘤作用研究进展[J]. 中国天然药物，2003（3）：182.朱彩平，张声华. 枸杞多糖对高脂血症小鼠血脂及脂质过氧化的影响[J]. 营养学报，2005，27（1）：79.苏箐，徐宗佩. 中药防止脂肪肝实验研究进展[J]. 时珍国医国药，2006，17（7）：1287. 齐春会，张永祥，赵修南. 枸杞粗多糖的免疫活性[J]. 中国药理学与毒理学杂志，2001，15（3）：180. 方建国，丁水平，田庚元. 枸杞多糖药理作用与临床应用[J]. 医药报道，2004，23（7）：484-485.ZH0 J, ZHAO L H, ZHAO X P, et al. Lychan barba non polysaccharides regulate phenotypic and functional matunation of murine dendritic[J]. cellsCell B D l Int, 2007, 31(6): 615.ZHAO R, L I Q, XIAO B. Effect of Lychon barba non polysaccharide on the inprovenent of insulin rnsulin resistance in N DDM rats[J]. Y akugaku Zasshi, 2005, 125(12): 981.陈庆伟，陈至桃. 枸杞多糖药理作用研究进展[J]. 海峡药学，2005，17（4）：4-6.张晶，韩喜江. 东北枸杞多糖提取分离工艺优化[J]. 黑龙江大学自然科学学报，2007，24（6）：770-777.吕海英，林丽，潘云，等. 黑果枸杞总黄酮抗氧化和降血脂成分测定[J]. 新疆师范大学学报（自然科学版），2012 （2）：43-48.[责任编辑：张建国][5][6][7][8][9][10][11][12][13][14][15][16]。
枸杞多糖检测方法研究
枸杞多糖检测方法研究
HPLC色谱条件
• 色谱柱：C18色谱柱 • 检测器：紫外检测器 • 检测波长：250nm • 柱温：室温 • 进样量：20ul • 流动相(流速：1.2ml/min) 溶剂A：15%乙腈+20mm/L乙酸铵水溶液 溶剂B: 40%乙腈+20mm/L乙酸铵水溶液 梯度模式： 时间梯度：0min→25min→50min
枸杞多糖检测方法研究
选题背景（三）
质量不易控制 枸杞多糖是一个水溶性的大分子物 质, 不能如小分子物质那样, 通过熔点测定、 元素 分析, 四大光谱等鉴定后, 制定质量标准。
分子量测定 决定了枸杞多糖的生物活性，分子量 过大不易透过细胞膜，影响活性，分子量小一般 是没有活性的，因此分子量数据可以作为枸杞多 糖质量标准的重要指标。
枸杞多糖检测方法研究
柱前衍生化反应
PMP的优点： PMP与糖类物质衍生时反应条件温和,产
物无立体异构。两分子PMP 与一分子单糖 缩合，生成的衍生物与各单糖的定量关系 明确，线性关系良好。检测灵敏度较高,可 同时检测醛糖、酮糖及糖醛酸 PMP衍生物在 250 nm处有强烈的紫外吸收， 克服了单糖本身没有紫外吸收的特点，同 时使用紫外检测器克服了示差检测器灵敏 度低，不适用于梯度洗脱的缺点。
枸杞多糖检测方法研究
枸杞多糖相对分子量的检测方法
渗透压法 a
f HPLC
蒸汽压法 b
e 凝胶过滤法
光散射法 c
d 粘度法
枸杞多糖检测方法研究
分子量的测定方法
• 凝胶过滤法
1. 将已知分子量的葡聚糖标准品进行凝胶层 系，洗脱收集，用硫酸-蒽酮法检测多糖， 分别求得相应的洗脱体积Ve
枸杞子水提物中多糖含量的测定
312 讨 论
酚法显色测出多糖相当于葡萄糖的含量 ,这样可避免
(1) 苯酚2硫酸比色法测定枸杞多糖的原理是枸 直接用葡萄糖作为标准引起的系统误差 ,结果更准
杞多糖成分在浓 H2 SO4 的作用下 ,水解成单糖 ,并迅 速脱水生成糠醛衍生物 ,与苯酚缩合成有色化合物 , 再用分光光度法测定其枸杞多糖含量 。本法操作简
3 结果与讨论
311 精制枸杞多糖的得率
250 g 干燥的枸杞子按 211 方法制得的精制枸杞
多糖 5153 g ,得率 2121 % ( n = 3) 。
31112 换算因子
f = 3126 ( n = 5) 。
31113 枸杞子水提物的得率
50 g 枸杞子制得红色枸杞子水提物 34126 g ,得
吸光度 ,计算多糖的含量 。 216 稳定性试验
精密 吸 取 按 21411 方 法 制 备 的 样 品 溶 液 110 mL ,补水至 210 mL ,每隔 30 min 测定 1 次吸光度 ,连 续 4 h 考察其稳定性 。 217 回收率测定
精密称取精制的枸杞多糖 10 mg , 加水定容至 100 mL ,摇匀 ,得 100 μg/ mL 的多糖精品溶液 ,精密 吸取 6 份该溶液 015 mL ,并分别加入 21211 中配制 的葡萄糖贮备液 011 、012 、013 、014 、015 、016 mL ,补 水至 210 mL ,按照 21213 方法测定吸光度 ,计算加样 回收率 。
1 罗 琼 ,李瑾玮 ,张声华. 枸杞多糖 - X 组分对糖尿病家兔 降血糖的效果[J ] . 营养学报 ,1997 ,19 (2) :173～177
2 罗 琼 ,阎 俊 ,李瑾玮等. 枸杞及其枸杞多糖对家兔血脂 的影响[J ] . 营养学报 ,1997 ,19 (4) :415～417
枸杞中枸杞多糖的提取及其含量测定
枸杞中枸杞多糖的提取及其含量测定枸杞多糖的提取与含量测定2011级药学班A6组丁艺兰，冯霞枸杞中枸杞多糖的提取及其含量测定一、实验目的：1、解中药品种品质研究的思路和方法2、熟悉枸杞多糖的了化学性质和提取方法3、掌握查阅文献和数据处理的方法二、实验原理:枸杞为茄科植物枸杞的成熟果实，它既可以作为药材，又可以作为保健食品。
经研究发现其主要活性成分之一就是枸杞多糖。
枸杞多糖是一种水溶性糖系蛋白多糖，主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6种单糖成分组成。
现代医学研究证明：它具有抗氧化、抗肿瘤、调节免疫力、降血脂等作用，能改善老年人易疲劳、食欲缺乏和视力模糊等症状。
萃取是有机化学实验室中用来提取和纯化化合物的手段之一。
通过萃取，能从固体或液体混合物提取出所需的化合物。
它的基本原理是利用化合物在两种不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另一种溶剂中。
经过反复的多次萃取，将绝大部分的化合物提取出来。
萃取常见的有液-液萃取和液-固萃取。
在本次实验中，是利用水溶液从枸杞子粉末中提取出多糖类化合物，属于液-固萃取。
本实验使用水提醇沉法提取宁夏枸杞的枸杞多糖。
三、实验步骤1、枸杞多糖的提取称取干燥的枸杞80g，用研钵研成粉末状，放入烧杯内，加入一定料液比(1：8、1：10、1：12)的水溶液，放入微波搅拌器中放置30min，温度70-100摄氏度之间，功率300w，过滤，得滤渣，再加入一定料液比(1：8、1：10、1：12)的水溶液，放入微波搅拌器中放置30min，温度70-100摄氏度之间，功率300w，合并滤液，采用旋转蒸发器真空浓缩，得到的浓缩物用乙醇(乙醇终浓度大于80%)沉淀，滤布过滤，得滤渣用丙酮。
石油醚混合液(体积比1：1)于50～60℃回流0.5h，滤布过滤，得沉淀，烘干，得到枸杞粗多糖。
2、Sevage法脱蛋白取一定量的粗多糖，加蒸馏水完全溶解，使其浓度约为100mg/m L，用Sevage法脱蛋白，按枸杞多糖水溶液体积的20%加入三氯甲烷，再加入三氯甲烷体积的20%的正丁醇，剧烈振摇20min，使其充分混匀，1000r/min离心，倾出上清液，除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷，重复以上操作直至中间层无变性蛋白，得到脱蛋白多糖。
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申请科研资助项目申报书
项目或课题名称：枸杞多糖含量的准确检测
申请单位：宁夏瑞碧枸杞产业有限公司
联系者姓名：
联系者电话：
宁夏瑞碧枸杞产业有限公司
二00八年二月
一、申请单位的基本情况：
宁夏瑞碧枸杞产业有限公司是由陕西方舟健康产业集团投资，以枸杞汁﹑枸杞干果﹑枸杞冻干粉﹑枸杞提取物等枸杞系列产品为主的专业供应商。
目前，公司在宁夏枸杞原汁产业中属龙头企业。
公司注册资本1800万，员工63人，与南梁农场等通过有机认证的基地建立了稳定的鲜果原料供应关系，并建成目前国内最大的枸杞原汁加工线，每榨季产量可达2000吨以上。
公司严抓质量管理，已通过ISO 认证﹑HACCP认证及Kosher认证。
为加强公司技术力量，我们先后与中国科学院上海有机化学研究所、陕西师范大学生命科学院﹑北京食品研究所、西北大学生命科学学院、西安理工大学理学院、第四军医大学等建立了密切的合作关系，在科研开发上不断精进，以增强公司核心竞争力。
二、课题研究的目的及意义：
国内一些大专院校科研单位的科技工作者近几年来从事宁夏枸杞有效成份分析，认为枸杞多糖是宁夏枸杞最主要的生物活性物质。
科学试验证明，枸杞里的一种特有成份能使P—24抗体测值增加，促进T淋巴细胞增高。
所谓的一种特有成份就是指枸杞多糖(LBP)。
研究表明，枸杞多糖是由阿拉伯糖、鼠李糖、术糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖及半乳糖醛酸组成的酸性杂多糖的糖链与蛋白质的肽链以共价键的形式结合的含肽链多糖，分子量均大于1万。
北京医科大学、华中农业大学和中科院上海有机化学研究所等单位对枸杞多糖进行了分离纯化，并且对分子量、结构、基本性质进行
了深入的研究工作，但在枸杞多糖的准确测量方面研究很少，这为我们的市场开拓带来了很多困惑。
当客户要我们提供枸杞的活性成分以及检测方法时，我们并不能拿出令客户信服的数据，这在重视科学数据而又对枸杞知之甚少的欧美市场尤为明显，严重影响了我们扩大欧美市场。
因此本课题力图回答这些问题：得到枸杞多糖样品，用药理学实验证明我们所分离的枸杞多糖的活性，在此基础上建立枸杞多糖的准确检测方法。
这个项目完成后将大大增加公司核心竞争力，使我们站在新的高度开拓国内外市场，为公司进一步的发展打下坚实的科学基础。
三、主要研究开发内容及采用的工艺技术路线：
主要研究开发内容：枸杞粗多糖的获得和进一步分离纯化，枸杞多糖化学组成分析及进行药理学实验，枸杞多糖准确检测方法的建立。
采用的工艺路线为纯化出具有显著药理活性的枸杞多糖后，在对枸杞多糖进行结构、成分、紫外吸收特征等研究基础上，改进硫酸苯酚法以适合车间低成本准确检测。
四、本研究创新点及技术关键：
1 本研究创新点
（1）枸杞多糖提取方法选择膜分离，以避免常规提取方法对枸杞多糖的破坏；
（2）本研究在改进硫酸苯酚法时，将对样品提取过程中多糖降解、
小分子糖干扰、以多种组成单糖作对照进行研究。
2 技术关键
分离纯化介质直接关系到能否分离到枸杞多糖和枸杞多糖的纯度,而且在进行后期实验中需要大量枸杞多糖纯品，分离介质将直接影响到能否得到大量样品以供药理学实验，因此对分离纯化介质的选择是本项目的技术关键。
五、项目完成后需达到的主要技术指标：
本研究完成后得到枸杞多糖1000g，含量大于95%，得到药理学数据，建立枸杞多糖低成本准确检测方法。
六、研究进度：
（1）2008．2—2008．4 查阅资料；
（2）2008．5—2008．11 分离纯化得到枸杞多糖，并对工艺进行完善；
（3）2008．12—2009．1对枸杞多糖组成进行分析，建立枸杞多糖检测方法。
七、成果保护及年经济效益、社会效益：
本项目完成后将申请专利对本公司知识予以保护。
本项目的完成将增加公司枸杞汁产品的出口，每年可增加数百万元的利税效益，同时也为本地区的社会发展带来好处，对于宁夏经济的繁荣和健康产业的发展十分有益。
八、本项目研究的工作基础：
项目主持单位根据市场情况，已经调用相关人力物力进行前提研
究论证工作，但深感力量单薄，无法依靠自己的力量完成此项工作，迫切需要政府部门给予资助，不使此商机丧失。
九、经费预算及主要用途：
查阅资料：40000元，自己筹备；
实验设备：300000元，外部筹措；
人工费：50000元，自己筹备；
药理学实验费：200000元，外部筹措。
十、参加研究人员及分工：
在执行此项目过程中，本公司将投入研发部骨干人员，联合中国科学院有机化学研究所田庚元研究员、西安理工大学杜永峰博士、第四军医大学刘新医师以保证本项目的完成。