旋毛虫的几种检验检疫技术

１ 目检 法
程 比较 烦琐 ，检 测过 程花 时 间 长。
由于旋 毛 虫感 染 动 物后 ，大约 ２ １ ｄ ～７ 个 月 就会 形 成钙 化 ，这 ４ 酶联 免疫 吸附试验 （ Ｅ Ｌ ｌ Ｓ Ａ ） Ｓ Ｐ Ａ — Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 的原 理 是根 据葡 萄球 菌 蛋 白Ａ （ Ｓ Ｐ Ａ） 能 与人 和 多 样 只要 用 肉眼就 能将 其 检 出 。该 方法 一 般是 直 接在 肉尸 的左 右 横 ｇ Ｇ 结合 ，有 较 高 的敏感 性 ，而且 可以不 受种 属特 异 膈 肌脚 采取 不少 于 ３ ０ ｇ 的 肉样 ，然后 撕 去肌 膜 ，将肌 肉拉 平 ，观 察 种 哺乳 动 物 的Ｉ 肌 肉纤维 的表 面 。若 发现 有半 透 明露 滴 状 或乳 白色 、黄 白色点 状 性 的限 制 ，并且 具 有 制备 容 易 、性 质稳 定 、易 纯 化 ，使 用更 趋 方 Ｌ Ｉ Ｓ Ａ中的 酶标 第 二 抗体 来检 测 物 ，即可 判 定该 猪 肉为旋 毛 虫 肉 。这种 方 法 的检 出率 较 高 ，但 是 便 等 优 点 ，所 以 可用 以代 替 间 接Ｅ 需 要 在 自然 光线 好 的 条件 下进 行 ，而且 这 种方 法不 宜 单 独 用 ， 旋 毛 虫 的感 染情 况 。Ｄ Ｏ Ｔ — Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 是 以纤维 素 薄膜 为 同相 载 体 ，孑 Ｌ 冈 为其 检 率 的高 低 取 决 于 检验 人 员 的 经 验 ，漏 检 率 也 相 对 较 径 大 约 为０ ． ２～ ０ ． ４ ｍ，将 抗 原或 抗体 用 大头 针蘸 取 印滴 吸 附住 纤 高 ，有 时 可 以达 Ｎ ８ ｏ ． ５ ％。所 以 只能 用 作 初 次筛 选 ，结 合 显微 镜 维膜 表 面 ，然 后通 过 相应 的抗原 抗 体 反应 以及 加 入底 物 后 呈现 出 肉眼可 见 的颜 色斑 点 。这 种 方 法 的优 点是 敏感 性 高 、被 检 样 品用 检查 可 以有效 地提 高旋 毛虫 的检 ｆ ｆ ｊ 率。
［ 摘 性检 疫 的项 目。本 文就 旋毛 虫的几种 检验 检 疫技 术作 简要 的概 述 。
［ 关键 词］ 旋 毛 虫 检验 检 覆
４ ０ １ ４ ２ ０ ； ４ ０ ８ ３ ０ ０ ）
要 ］ 旋 毛 虫病是 一 个全球 性 的 疾 病 ，可 以导致 人 和 多种动 物 患 病 世 界各 国均 把屠 宰 动物 的旋 毛 虫作 为 首检 、必检 和 强制
量 少 ，而 且不 需 要 昂贵 的仪 器 ，只需 肉 眼 即可检 出 等 ，但 是它 的 镜检 是 检 验旋 毛 虫较 为 传统 的方 法 。主要 步 骤 是从 胴 体 两侧 缺点 是 难 以做 到 定量 检 测 ，而 且 只凭 肉眼观 察来 判 定结 果 ，存 在 的横 膈膜 肌 脚部 各 采样 一块 不小 于５ ０ ～１ ０ ０ ｇ 的肌 肉 ，然后 用 剪刀 很 大 的主观 性 。 顺 着 肌 肉纤 维 在 样 肉 的不 同部 位 剪 取 １ ２ 个 麦 粒 大 小 的 肉粒 （ ２ 块 ５ 快速免疫 层析法 （ Ｇ Ｉ ｃ Ａ ） 该 方 法 的原 理 是 先 选 取 一 个 同相 层 析 作 为 载 体 ，然 后 在 层 肉样 共 剪 取２ ４ 粒 ）。特 别 剪取 呈露 滴 状 或 呈乳 白色 脂 肪样 外 观 的 小 点病 灶 ，然 后 将 肉粒 依 次贴 附 于玻 片 上 ，盖 Ｅ另一 玻 片 。用 力 析 材 料上 包 被相 应 的抗 原 ，采 用 胶体 金 技 术将 处理 过 的 制剂 吸 附 压 扁 ，然 后将 压 片 置 于５ ０～ ７ ０ 倍 的低 倍 显 微镜 下 观察 ，要 从 玻 片 在 试 纸 条 Ｉ ，检 测 被 检 血清 中 的 相应 抗 体 。 女 ｕ 果抗 原 、抗 体 相 的一 端开 始 直 到另 一端 为 止 ，以减 少漏 检 率 。 当检查 形 成包 囊 的 对 应 ，则 发 生 高特 异 的免 疫 亲和 反 应 ，免 疫 复合 物被 截 留集 聚 在 旋 毛 虫时 ，可 以发 现 一 一 条 或 多条 毛状 蜷 曲于充 满 透 明液 体 的囊 腔 定 区域 （ 检测 带 ），通 过胶 体 金 而得 到 肉眼直 观 的 色带 ，即 中 。若是 没 有 形成 包 囊 的旋 毛虫 ，则会 发 现虫 体 在肌 纤 维之 间呈 可判 定检 测 结 果 。根 据实 验结 果 表 明该 方 法 的特 异性 和 敏感 性 与 直杆 状或 逐 渐 蜷 曲状 态 ，或 虫体 被 挤 于压 的肌 浆 中 。若 是钙 化 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 基 本 相 同 ，但 是 与Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ ￣ Ｈ 比具有 操 作简 便 、不需 特 殊仪 器 的旋 毛虫 ，则 需 要 向 肉片 巾稍 加 １ ０ ％的盐 酸溶 液 ，待 １ ｍ ｉ ｎ 后 ，再 设备 、检测 结 果 可长 期保 存 等优 点 ，是一 种较 理 想 的旋 毛 虫病 免 进 行 观 察 。该 方法 的优点 足 不需 要 复杂 的仪 器设 备 ，操 作 简便 ， 疫学 诊 断方 法 ，尤其 适 合于 存 基层 单 位和 现 场应 用 。对 于 乍猪 的 不需 要 很 专业 的 人才 ，而且 直 观性 强 ，容 易 定性 和 定趟 。但 是 也 肉品 生 检验 尤 其适 用 ，足 一 ¨全 新 的 实川 技术 ，可 以火 面积 的 有 一 定 的缺 点 ，那 就是 漏 枪 率 相 对较 高 ，仅 能 榆 出 １ ｇ 肌 肉含 ３ 条 推广 应用 。 以上 幼 虫 的样 品 。并 且 此法 需 要 的工作 量 大 ，无法 跟进 屠 宰 的速 ６ 分子生物学检验 日前 ，已经 开 发 了 多 种 可 用 于 旋 毛 虫 检 验 的分 子 生 物 学 度 ，同时容 易造 成检 疫员 眼睛 疲劳 。 方 法 。包 括有 Ｐ Ｃ Ｒ 检 测 、实 时荧 光 Ｐ Ｃ Ｒ 检测以及桀 凶 片 技 术 ３ 人 工 消 化 法 ｓ — ｒ Ｒ Ｎ Ａ 基 因设 计引 物 和 该 方法 是 利用 胃蛋 白酶 将 肌 肉组 织 消化 后 ，使 活 的旋 毛 虫幼 等 。宋锦 忻 等根 据 旋 毛虫 隔 离种 线 粒体 Ｌ 虫 从囊 包 中释放 “ ｊ 来 。 由于旋 毛 虫镜 的 敏感 性 低 以及 不 能枪 出所 Ｔ ａ ｑ Ｍ ａ ｎ Ｍ Ｇ Ｂ 探 针 ，建 立 了实 时荧 光Ｐ Ｃ Ｒ 可 以 同时检 测各 旋 毛虫 隔 有 的旋 毛 虫 的缺 点 ，所 以国 际旋 毛虫 病 委员 会 推荐 使 用 消化 法作 离 种 的方 法 。该 实 验证 明了该 厅法具 有 稳 定性 好 、敏 感性 强 、通 为旋 毛 虫检 疫 的首选 方法 。消化 法 的主要 操作 流程 足允 以５～１ ０ 头 量 高 等特 点 ，为旋 毛 虫 的检验 检 疫 以及 以 后制 作试 剂 盒 提供 良好 猪为ｌ 组 ，编 号 ，采 取膈 肌数 克 ；然后 将 肉样 置于搅 拌 器 中搅碎 ， 的实 用 技 术 和研 究 基础 。张 媛 等根 据 提 取 旋 毛虫 Ｓ Ｂ ２ 基 因 的可 变 加 入含 有 １ ％ 盐酸 的０ ． ３ ３ ％ 胃蛋 白酶溶 液 ，置 于４ ３ ： 的恒 温 中消化 区设 计 引物 及探 针 ，点样 于玻 片制 成基 芯 片 。该方 法 适应 于 大 ３ ０ ａ ｒ ｉ ｎ 以上 ，直 到肌 肉被 完全 消化 为止 ；用８ ０ 目的 筛子 过滤 至分 液 规模 、高通 量 的检 测 要求 ，尤 其适 应 于寄 生虫 病 现 场 的检测 及 监 漏 斗 中 ，并 用 温水 冲洗 筛 子 ，沉 淀 后将 漏 斗 中的 液体 放 到离 心 管 测 ，具 有广 泛 的应 用 前景 。不 过这 些分 子 生物 学 方 法 目前还 只停 中冉 沉淀 ，最 后吸 出 ＿ Ｌ 清 液 ，并 观 察位 于 离 心管 底部 的旋 毛虫 幼 留在 实验 室 阶段 ，想要 在文 际 Ｔ作 中应用 还 有很 长的 一段 路 。 虫 。消化 法 具 有特 异性 强 ，检 牢 高 ，直 观性 强 ，既能 定性 又能 参 考 文 献 定 量 、稳 定 可 靠 、操作 可 自动化 、成本 低 等优 点 ，适 合 于 生前 诊 ［ １ ］ 甘孟 侯 ，杨 汉 春 ． 巾 国猪病 学 【 Ｍ１ ． 巾 国农 业 ｆ Ｈ版 ，２ ０ ０ ５： ４１ ０ －４１ ３ 断或 宰前 检 疫 。缺 点 是检 查 过 程 中需要 的试 剂较 多 ，而 且操 作 过
临 床 兽 医
中国畜牧兽医文摘 ２ ０ １ ７ 年 ３ ３ 卷
第５ 期
旋毛虫 的几种检验检 疫技术
郑 欢’ 赵春艳 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ红秀’ 牛晓艺’ 张榆敏’
（ １ ． 重 庆 市綦 江 区动 物 卫 生监 督所 ， 重庆 ２ ． 重 庆 市 垫江 县 动物 卫 生 监 督 所 ，重 庆