酶联免疫吸附试验及其应用
酶联免疫吸附测定实验报告
酶联免疫吸附测定实验报告酶联免疫吸附测定实验报告酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析生物样本中特定分子的存在。
本实验旨在通过ELISA技术，对特定抗原在样本中的含量进行测定，并了解其原理及应用。
一、实验原理ELISA技术是一种基于免疫反应的实验方法，其原理主要包括固相吸附、特异性结合、酶标记和显色反应。
首先，在微孔板中固定特异性抗体，形成固相吸附。
然后，加入待测样本，样本中的目标抗原与固相抗体结合。
接着，加入酶标记的二抗与目标抗原结合，形成特异性结合。
最后，通过添加显色底物，酶催化反应产生可见的颜色变化，从而定量分析目标抗原的含量。
二、实验步骤1. 准备样本和试剂：收集待测样本，如血清、尿液或细胞培养上清液，并准备好ELISA试剂盒中的各种试剂。
2. 板洗涤：将微孔板放入洗板机中，加入洗板缓冲液，进行洗涤步骤，以去除未结合的物质。
3. 固相吸附：将特异性抗体加入微孔板孔中，孵育一段时间，使其与固相吸附。
4. 样本孵育：将待测样本加入各孔中，与固相抗体结合，在恒温条件下孵育。
5. 二抗结合：加入酶标记的二抗，与目标抗原结合形成特异性结合。
6. 洗涤：再次进行洗板步骤，去除未结合的物质。
7. 底物反应：加入显色底物，酶催化反应产生可见的颜色变化。
8. 反应终止：加入终止液，停止酶催化反应。
9. 测定吸光度：使用酶标仪测定各孔的吸光度值。
10. 数据分析：根据吸光度值，绘制标准曲线，通过比较待测样本的吸光度值，计算出目标抗原的浓度。
三、实验结果通过ELISA实验，我们成功测定了待测样本中目标抗原的含量。
根据标准曲线，我们计算出了各样本中目标抗原的浓度。
这些结果将有助于我们了解样本中特定分子的水平，从而进一步研究其生物学功能和相关疾病的发生机制。
四、实验应用ELISA技术具有广泛的应用领域，包括生物医学研究、临床诊断、药物开发等。
酶联免疫吸附试验实验报告
酶联免疫吸附试验实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测目标蛋白或抗原的存在与浓度，以及对特定抗体的识别和结合情况。
通过本实验，我们可以了解到酶联免疫吸附试验的原理和操作步骤，以及在生物医学研究和临床诊断中的应用。
二、实验原理。
酶联免疫吸附试验是一种利用酶和抗体的特异性结合来检测抗原或抗体的方法。
其原理是将待检测的抗原或抗体吸附在微孔板表面，然后加入特异性抗体，并通过酶标记的二抗或底物来检测特异性结合的信号。
当待测物与特异性抗体结合后，通过底物的酶反应产生可定量的颜色反应，从而测定待测物的浓度。
三、实验材料和方法。
1. 实验材料，微孔板、待测抗原或抗体、特异性抗体、酶标记的二抗、底物溶液等。
2. 实验步骤，将待测抗原或抗体加入微孔板孔中，加入特异性抗体，洗涤孔板，加入酶标记的二抗，再次洗涤孔板，加入底物溶液，停止反应，测定吸光度。
四、实验结果。
通过本次实验，我们成功检测出待测物的存在与浓度，并观察到特异性抗体与待测物的结合情况。
根据实验结果，我们可以得出待测物的浓度，并进一步分析其在生物学过程中的作用和意义。
五、实验结论。
酶联免疫吸附试验是一种高度敏感和特异性的实验方法，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域。
通过本次实验，我们深入了解了酶联免疫吸附试验的原理和操作步骤，掌握了实验技术和数据分析方法，为今后的科研工作和临床诊断提供了重要的参考和支持。
六、实验展望。
酶联免疫吸附试验作为一种重要的生物学实验方法，具有广阔的应用前景。
今后，我们将进一步深入研究酶联免疫吸附试验的原理和技术，开展更多的实验和应用，为生物医学研究和临床诊断提供更多的支持和帮助。
七、参考文献。
1. Smith, J. et al. (2010). Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Methods Mol Biol, 588, 89-94.2. Green, N. M. (2015). Avidin and streptavidin. Methods Enzymol, 184, 51-67.以上就是本次酶联免疫吸附试验的实验报告，谢谢阅读。
酶联免疫吸附技术的原理及应用
酶联免疫吸附技术的原理及应用引言酶联免疫吸附技术是一种常用的免疫学实验方法，通过标记酶的抗体来检测特定的抗原。
它具有高灵敏度、高特异性的优点，在生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域得到广泛应用。
本文将详细介绍酶联免疫吸附技术的原理和应用。
原理酶联免疫吸附技术是基于免疫反应的原理进行设计的。
主要原理包括免疫反应、酶标记和酶促反应三个方面。
1.免疫反应–酶联免疫吸附技术是基于抗原-抗体反应的原理，特异性抗原与其对应的抗体结合形成免疫复合物。
–免疫反应的特异性保证了酶联免疫吸附技术能够准确检测目标抗原。
2.酶标记–在酶联免疫吸附技术中，为了使免疫复合物形成可检测的信号，常用酶对抗体进行标记。
–常用的酶标记物包括辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等。
这些酶具有较高的特异性和灵敏度。
3.酶促反应–酶联免疫吸附技术利用标记酶的催化作用，将底物转化为可见的色素或荧光信号。
–常用的底物包括TMB（3,3’,5,5’-四甲基苯基亚硝基态苯胺）、ABTS（2,2’-氨基二乙基三甲基苯并噻唑磺酸盐）等。
应用酶联免疫吸附技术在生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域有着广泛的应用。
1.生物医学研究–酶联免疫吸附技术可以用于研究抗原与抗体的相互作用，进而研究疾病的发生机制。
–可以检测细胞因子、生长因子、蛋白质等生物分子的含量和表达水平。
2.临床诊断–酶联免疫吸附技术在临床诊断中常用于检测病原微生物、肿瘤标志物等。
–可以用于快速、准确地诊断疾病，对临床诊断起到重要作用。
3.药物开发–酶联免疫吸附技术在药物开发中可以用于筛选药物候选化合物的特异性和亲和性。
–可以评估药物的药效和毒性，加快药物研发的进程。
总结酶联免疫吸附技术是一种重要的实验方法，其原理简单、灵敏度高，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域。
随着科学技术的不断进步，酶联免疫吸附技术将继续发挥重要作用，为人类的健康和医学进步做出贡献。
酶联免疫吸附实验的原理和应用
酶联免疫吸附实验的原理和应用酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测特定抗原或抗体的存在与浓度。
ELISA原理基于抗原与抗体的特异性结合，通过标记抗体或抗原的酶，通过化学反应转化为颜色或荧光信号来定量检测分析物的含量。
ELISA实验分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和夹心ELISA。
以下是ELISA的原理和应用的详细介绍：一、直接ELISA的原理和应用：直接ELISA是最简单的ELISA形式，适用于检测抗原的存在和浓度。
其原理如下：1.在96孔板上固相化抗原，使抗原与孔壁结合。
2.加入待测物，若待测物中含有与抗原特异性结合的抗体，则抗体与抗原结合。
3.加入与特异性抗体结合的酶标记抗体，形成“抗原-特异抗体-酶标记抗体”复合物。
4.加入底物，在酶的作用下底物发生化学反应，产生可定量检测的颜色或荧光信号。
5.读取信号强度，与标准曲线对比，可以测定待测物的浓度。
直接ELISA常用于血清学疾病的诊断和流行病学研究，如HIV、HBV、HCV等的检测，以及检测细菌、病毒、感染性疾病的抗体水平。
二、间接ELISA的原理和应用：间接ELISA也是常用的ELISA形式，适用于检测抗体的存在和浓度。
其原理如下：1.在96孔板上固相化抗原，使抗原与孔壁结合。
2.加入待测物，若待测物中含有与抗原特异性结合的抗体，则抗体与抗原结合。
3.加入酶标记的二抗，该二抗与待测物中的抗体形成复合物。
4.加入底物，在酶的作用下底物发生化学反应，产生可定量检测的颜色或荧光信号。
5.读取信号强度，与标准曲线对比，可以测定待测物中抗体的浓度。
间接ELISA常用于检测其中一种病症患者的抗体水平，如检测自身免疫病、感染性疾病等。
三、竞争ELISA的原理和应用：竞争ELISA是基于抗原和抗原结合抗体之间的竞争关系。
其原理如下：1.在96孔板上固相化抗原，使抗原与孔壁结合。
酶联免疫吸附法及其在食品分析中的应用
实验方法
2、包被：将抗原溶液加入到聚苯乙烯板孔中，使其充分干燥。这样可以使得 后续加入的特异性抗体与抗原结合。
实验方法
3、封闭：向包被后的孔中加入封闭液，以阻断未结合的位点，避免非特异性 吸附。
结论
结论
本次演示介绍了酶联免疫吸附法在食品微生物检测中的应用。该方法具有特 异性强、灵敏度高、操作简便、测定速度快等优点，能够有效地检测出食品中的 目标微生物，缩短检测周期，提高检测效率。然而，该方法也存在一些不足之处， 如可能出现假阳性或假阴性结果以及成本较高等问题。随着科学技术的发展和自 动化技术的不断进步，相信酶联免疫吸附法在食品微生物检测中的应用将会得到 更加广泛的应用和推广。
原理
原理
酶联免疫吸附技术的原理基于抗原-抗体反应。抗原是指能够引发免疫反应的 物质，而抗体则是免疫系统针对特定抗原产生的蛋白质。在ELISA技术中，待测 样品中的抗原首先与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。然后将复合物固 定在固体支撑物上，并加入酶标记的二抗，与固定化的抗原-抗体复合物结合， 形成酶-抗原-抗体复合物。最后加入底物，酶催化底物反应产生颜色变化，通过 颜色深浅判断待测样品中抗原的含量。
酶联免疫吸附法及其在食品 分析中的应用
01 引言
03 实验方法
目录
02 原理 04 参考内容源自引言引言酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种 基于抗原-抗体反应的灵敏度高的免疫分析方法。在食品分析领域，ELISA作为一 种重要的检测手段，可用于食品质量检测、食品数量检测以及食品成分分析等多 个方面。本次演示将详细介绍ELISA的原理、实验方法及其在食品分析中的应用， 并通过实际案例分析该方法与传统方法的比较优势和不足。
酶联免疫吸附测定法ELISA在抗生素残留检测中的应用
加强国际合作与交流
加强与其他国家和地区的合作与交流，共同推进ELISA技术在抗生素 残留检测领域的发展和应用。
07 参考文献
参考文献
1 2
参考文献1
介绍了ELISA的基本原理和在抗生素残留检测中 的应用，强调了其高灵敏度和特异性。
抗生素残留的来源
畜牧业和农业中广泛使用抗生素，导致动物产品如肉类、蛋类和奶制品中存在 抗生素残留。
ELISA技术简介
01
酶联免疫吸附测定法（ELISA）
是一种基于抗原-抗体反应的检测方法，通过酶标记技术将免疫反应与
化学信号放大相结合，实现对目标物质的灵敏检测。
02
ELISA技术的优点
高灵敏度、特异性、操作简便、适合批量检测等。
03 ELISA在抗生素残留检测 中的应用
抗生素残留检测的重要性
保障食品安全
抗生素残留超标可能对人体健康造成危害， 如产生过敏反应、耐药性等，因此对抗生素 残留进行检测是保障食品安全的重要环节。
国际贸易标准
随着国际贸易的发展，各国对抗生素残留 的检测标准日益严格，符合国际标准的检 测方法对于出口农产品的企业至关重要。
酶联免疫吸附测定法（ELISA）在 抗生素残留检测中的应用
目录
• 引言 • ELISA技术原理 • ELISA在抗生素残留检测中的应用 • ELISA技术的实验流程 • 实验结果和数据分析 • 结论 • 参考文献
01 引言
抗生素残留问题
抗生素残留对人类健康的潜在威胁
长期摄入含有抗生素残留的食物可能增加人体内耐药菌株的形成，降低抗生素 在治疗疾病时的有效性。
03
ELISA技术的基本原理
常见酶联免疫吸附试验及注意事项
常见酶联免疫吸附试验及注意事项在医学诊断领域中，酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种非常常见的技术方法，用于检测体液中的特定物质，如抗体、抗原、蛋白质等。
ELISA技术的广泛应用使得它成为了医学研究和临床诊断中不可或缺的工具。
本文将探讨ELISA技术的原理、分类、应用、优缺点及在实验中的注意事项。
一、ELISA的原理ELISA技术通过酶标记的抗体、抗原或其他蛋白质与待检测物质发生特异性反应，然后通过酶底物的变色反应来定量检测待检测物质的浓度。
根据不同的酶标记物，ELISA技术可以分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接竞争ELISA等不同类型。
每种类型的ELISA 技术都有其特定的优点和适用范围，研究者需要根据具体的实验目的来选择合适的ELISA技术。
二、ELISA的分类1.直接ELISA直接ELISA是最简单的一种ELISA技术，它利用酶标记的抗体直接与待检测物发生特异性反应。
直接ELISA通常用来检测抗原或抗体，用于病原微生物和病原体的检测及特异性抗体的筛查。
2.间接ELISA间接ELISA利用待测抗体与被测物特异性结合后再加入酶标记的第二抗体结合，从而达到信号放大的目的，常用于病毒感染、免疫球蛋白筛查等领域。
3.竞争ELISA竞争ELISA通常用于检测浓度较低的抗原，其原理是待检测抗原与固定在板上的特异性抗体争夺酶标记抗体结合位点，由于酶标记的抗体数量一定，可根据酶底物底物的变色反应来计算出待检测抗原的浓度。
4.间接竞争ELISA间接竞争ELISA结合了间接ELISA和竞争ELISA的原理，可以用于检测抗体和病原微生物。
三、ELISA的应用ELISA技术在医学检验中具有广泛的应用，可以用于各种疾病的诊断、病原微生物的检测、血清学调查、感染性疾病的筛查等。
ELISA技术也被应用于生物医药领域，用于药物检测、蛋白质定量和特异性蛋白质筛查等。
四、ELISA的优缺点ELISA技术具有操作简便、灵敏度高、特异性强、多重自动化等优点，但也存在一些缺点，如试剂价格昂贵、结果受外界因素干扰、样本处理过程中易受污染等。
酶联免疫吸附实验的原理和应用
酶联免疫吸附实验的原理和应用原理酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的生物化学分析方法，它利用酶标记的抗体或抗原与待测物发生特异性的抗原-抗体反应，在固相载体上形成固定复合物，通过测定酶的活性来确定待测物的存在或浓度。
抗原-抗体反应ELISA的核心是利用抗原-抗体反应来检测待测物。
抗原是识别和结合特定抗体的分子，可以是蛋白质、多肽、糖蛋白等；抗体是由免疫系统产生的特异性蛋白质，可以识别并结合抗原。
当抗原与其相应的抗体结合时，形成稳定的抗原-抗体复合物。
酶标记在ELISA实验中，常常需要使用酶标记的抗体或抗原来进行检测。
酶标记是将特定的酶与抗体或抗原结合形成复合物，利用酶的催化作用来增强对待测物的检测灵敏度。
固相载体固相载体是将抗原、抗体或其他与待测物相关的分子固定在固体表面的材料。
常见的固相载体有96孔板、琼脂糖颗粒、纸条等。
固相载体的选择取决于实验的具体要求。
酶标记抗原-抗体复合物的测定ELISA实验通常分为间接法、直接法、竞争法和夹心法等多种方法，其中最常用的是间接法。
在间接法中，首先将被测物样品加入到固相载体上，待被测物与固相载体上的抗体结合后，通过添加酶标记抗原或抗体形成复合物。
最后，通过加入底物使酶催化反应发生，并通过测定底物的反应产物的产生量来确定待测物的存在或浓度。
应用酶联免疫吸附实验具有灵敏、特异性、快速、易于操作和高通量等优点，广泛应用于医学、生物研究、农业、环境监测等领域。
医学应用ELISA常用于生物医学研究和临床诊断中，用于检测细菌、病毒、蛋白质、抗体、激素、药物等。
例如，通过检测某种特定病毒的抗体水平，可以判断一个人是否感染了该病毒；通过检测血清中特定蛋白的浓度，可以评估疾病的进展和预后。
农业应用酶联免疫吸附实验在农业领域也有着广泛的应用。
例如，可以利用ELISA方法检测农作物中的农药残留、食品中的致敏物质、植物病原菌的存在等。
酶联免疫吸附技术在饲料及食品安全检测中的应用
经验交流空酶联免疫吸附技术在饲料及食品安全检测中的应用史艳艳(天津市农业生态环境监测与农产品质量检测中心300402)摘要：酶联免疫吸附技术是一种应用于饲料和食品安全检测的快速检测技术，可对农兽药残留、违禁药物使用、有害微生物、生物毒素和转基因食品安全等进行定量和定性检测，由于酶联免疫吸附技术既可以检测样本中的抗原，也可以检测抗体，因此，选择性高，检测结果的特异性和灵敏度也较高，其在饲料和食品安全检测应用前景广阔。
本文从技术原理、试验类型和技术优缺点对酶联免疫吸附技术进行系统概述，介绍酶联免疫吸附技术在饲料和食品安全检测中的应用，以期更好地普及和推广酶联免疫吸附技术应用。
关键词：ELISA；饲料安全；食品安全；应用酶联免疫吸附技术(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA)是基于抗原抗体反应的一种新型、快速的免疫测定技术。
由于ELISA检测技术的灵敏度高、特异性强、选择性好、实用性强，且不需要大型仪器设备，对工作人员的专业技能要求不高，被广泛应用于分析化学、生物药学、临床医学和食品安全等领域的检测。
ELISA检测技术不仅可以对饲料和食品中的药物残留、有害微生物和生物毒素等物质进行定性和定量分析，还能应用于转基因食品的安全检查，为饲料及食品安全提供参考依据。
1酶联免疫吸附技术概述1.1技术原理ELISA是基于抗原-抗体的特异性结合反应建立起来的一种快速检测技术，即首先通过固相状态的载体吸附已知的抗原或抗体，待测样本中对应的抗体或抗原与之结合形成特异性的抗原抗体复合物，通过洗涤的方法区分固相载体上的抗原抗体复合物和其他物质，再加入酶标记的抗原或抗体，也会岀现抗原和抗体特异性结合反应结合在固相载体上，加入酶反应的底物后，底物由酶催化为带颜色的产物(颜色变化为定性检测)，通过吸光度值计算待测样本的抗原(或抗体)量。
由于产物的量与标本中受检物质的量直接相关，ELISA还可以进行定量分析。
酶联免疫吸附试验实验报告
酶联免疫吸附试验实验报告酶联免疫吸附试验实验报告酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的生物化学实验技术，用于检测和定量分析抗原或抗体的存在与浓度。
本实验旨在通过ELISA技术，检测和定量分析一种特定抗原在不同样本中的浓度变化。
实验材料和方法：1. 样本制备：收集不同来源的样本，如血清、尿液等，并进行离心分离获得上清液。
2. 酶标板涂覆：将待测抗原溶液加入酶标板孔中，保持一定的温度和时间，使抗原均匀地附着在酶标板表面。
3. 阻断：加入阻断液，封闭未被抗原占据的酶标板孔，避免非特异性结合。
4. 抗体结合：加入特异性抗体，与抗原结合形成抗原-抗体复合物。
5. 酶标记抗体结合：加入酶标记抗体，与抗原-抗体复合物结合，形成二抗夹心复合物。
6. 显色反应：加入底物，使酶标记抗体催化底物发生颜色变化。
7. 反应停止：加入停止液，终止显色反应。
8. 测定吸光度：使用酶标仪测定酶标板孔中的吸光度。
实验结果：根据测定吸光度值，我们可以得到不同样本中抗原的浓度变化。
通过比较不同样本的吸光度值，可以了解抗原在不同条件下的表达情况以及不同样本中抗原的相对浓度。
实验讨论：ELISA技术在生物医学领域具有广泛的应用，尤其在疾病诊断和药物研发方面起到了重要的作用。
通过ELISA技术，可以检测和定量分析目标抗原的存在与浓度，从而判断疾病的发生与发展，为临床诊断提供依据。
在本次实验中，我们选择了特定抗原作为目标，通过ELISA技术对其进行检测和定量分析。
实验结果显示，不同样本中抗原的浓度存在差异，这可能与样本来源、处理方法等因素有关。
通过进一步的研究和分析，可以进一步探究这些差异的原因，并为临床诊断和治疗提供更准确的依据。
此外，ELISA技术还可以用于药物研发过程中的药物筛选和药效评价。
通过检测药物对特定抗原的影响，可以评估药物的疗效和安全性，为新药的研发提供重要的参考依据。
酶联免疫吸附试验
技术创新：新型的酶联免疫吸附试验技术不断涌现如荧光标记技术、量子点标记技术等提高了检测的灵敏度和特异性。
市场需求：随着生物技术的不断发展酶联免疫吸附试验在临床诊断、食品安全、生物医药等领域的需求不断增长。
发展趋势：随着检测技术的不断进步酶联免疫吸附试验将朝着更快速、更准确、更自动化的方向发展。
应用领域拓展：酶联免疫吸附试验的应用领域不断拓展如肿瘤标志物检测、病毒检测、食品安全检测等为各领域的发展提供了有力支持。
荧光标记技术：提高灵敏度降低背景干扰
磁珠分离技术：快速分离抗原抗体提高试验速度
酶联免疫吸附试验在交叉学科领域的应用前景
酶联免疫吸附试验在生物医学领域的应用
酶联免疫吸附试验在环境监测领域的应用
酶联免疫吸附试验在农业科技领域的应用
酶联免疫吸附试验在食品安全检测领域的应用
酶联免疫吸附试验的市场需求与发展趋势
联合检测：将酶联免疫吸附试验与其他检测方法相结合提高检测的灵敏度和特异性。
标准化和规范化：建立酶联免疫吸附试验的标准化和规范化操作流程确保试验结果的准确性和可靠性。
酶联免疫吸附试验的发展趋势
PRT SIX
酶联免疫吸附试验的技术创新与突破
自动化技术：提高试验效率降低人为误差
微孔板技术：简化操作减少样本用量
PRT TWO
酶联免疫吸附试验的定义
酶联免疫吸附试验是一种常用的免疫分析技术
通过酶与抗体或抗原的结合实现对目标分子的定量或定性检测
酶可以放大信号提高检测的灵敏度和特异性
酶联免疫吸附试验广泛应用于生物学、医学等领域
酶联免疫吸附试验的原理
洗涤去除未结合的成分后加入底物显色通过颜色反应判断待测物的浓度。
阻断酶联免疫吸附试验：将抗体先固定在固相载体上再用酶标记的抗原进行检测最后加入底物显色。
两种常见病毒检测方法的比较：酶联免疫吸附试验(ELISA)与聚合酶链式反应(PCR)
两种常见病毒检测方法的比较：酶联免疫吸附试验（ELISA）与聚合酶链式反应（PCR）病毒是以细胞为宿主，并以该宿主细胞的代谢作为生存依据的生物。
由于其微小的体型和嗜生特性，病毒常常会潜伏在人体内多年，甚至终身不愈。
而这种情况会带来许多的健康问题以及社会问题。
因此了解病毒的相关信息是非常重要的。
对于病毒检测来说，酶联免疫吸附试验（ELISA）和聚合酶链式反应（PCR）是常见的方法。
本文将分析这两种方法的优缺点，以此帮助我们更好地了解它们的应用及其适用范围。
一、酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA是一种常见的病毒检测实验方法，适用于多种病原微生物、细胞因子及荷尔蒙的检测。
其操作简单、灵敏度高、准确性较好，并且适用范围较广。
ELISA包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA等多种形式，其具体步骤如下：1.将待检物质加入到已知化合物（即抗原或抗体）涂覆的孔板上；2.孔板中的化合物与待检物质结合（如果是抗原与待测抗体结合），形成复合物；3.孔板洗涤去除未结合的化合物；4.添加检测标签（如酶）标记的二抗（即特异抗体），与复合物结合；5.孔板再次洗涤去除未结合的标记化抗体；6.加入显色试剂使结合的酶反应产生颜色。
ELISA方法包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA等。
ELISA的优点：1.ELISA方法灵敏度较高，能够检测到低浓度的病毒。
2.操作简单、快速、适用范围广泛。
3.具有良好的灵敏度和特异性。
4.ELISA试剂盒的制备和多孔板处理过程已成规模化生产，价格也逐渐变得负担得起。
ELISA的缺点：1.ELISA方法很难检测出病毒的亚型。
2.在复杂的样品里，ELISA方法可能出现假阴性或假阳性结果。
3.ELISA方法不适用于大型的病毒颗粒,或者是样品中含有被病毒感染的细胞。
二、聚合酶链式反应（PCR）PCR方法是在1983年由Mullis发明的一种可以扩增DNA序列的技术。
该技术对于病毒检测来说具有极高的灵敏度，能够在非常短的时间内扩增目标DNA序列，并对其进行探测和测量。
ELISA的原理技术及其在药物分析领域的应用
ELISA在临床医学中的应用
疾病诊断
ELISA可用于检测临床样本 中的特定生物标志物，帮助 医生进行疾病的早期诊断和 监测。
抗体检测
ELISA可用于测定人体内特 定抗体的水平，帮助评估免 疫系统功能和感染状态。
药物监测
ELISA可用于测定患者体内 药物的浓度，帮助医生进行 药物治疗的个体化调整。
总结与展望
ELISA的原理技术及其在 药物分析领域的应用
ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的生物化学分析技术，用于定量测 定或定性检测目标物质。本文将介绍ELISA的原理、技术流程以及在药物分 析领域的重要应用。
ELISA的定义和原理
酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种广泛应用于生物学和医学领域的免疫学 实验技术。通过将目标物质与特异性抗体结合并使用酶进行标记，ELISA实 现了对目标物质的高灵敏度和特异性检测。
药物相互作用研究
ELISA可用于研究药物与受体、酶或其他生 物分子的相互作用机制，为新药研发提供理 论基础。
药代动力学研究
ELISA可实现对药物在体内的代谢和清除过 程进行监测，为药物代谢动力学研究提供重 要数据。
药物稳定性评估
ELISA可用于评估药物在不同条件下的稳定 性，为药物质量控制提供重要参考。
ELISA的技术流程
1
涂层
将特异性抗体固定在试验板上，形成抗原涂层。
2
样品加入
加入待测样品，其中的目标物质与抗原结合。
3
洗涤
洗涤掉没有结合的物质，保留结合的目标物质。
4
检测
加入检测抗体，形成免疫复合物。
5
发色
加入底物，产生可测定的信号。
ELISA在药物分析中的应用
酶联免疫吸附试验(双抗夹心法)原理
酶联免疫吸附试验（ELISA），又称酶联免疫吸附测定法，是目前广泛用于生物化学和免疫学领域的一种重要实验方法。
该技术结合了免疫学和生物化学的原理，能够高灵敏、高特异地检测抗原或抗体的存在，对临床诊断、生物医学研究以及生物制药等领域有着广泛的应用。
在本文中，我们将深入探讨酶联免疫吸附试验的原理、方法和应用。
一、酶联免疫吸附试验原理酶联免疫吸附试验的原理主要是利用酶标记抗体、抗原和底物的相互作用来检测特定物质的存在。
在双抗夹心法中，试验基本步骤如下：1. 用待测抗原溶液在固相酶标记抗体包被的微孔板上，充分接触和结合。
2. 经洗涤后，底物溶液被加入，并与酶标记抗体包被的复合物结合。
3. 底物受酶催化分解后，生成有色产物，通过比色法测定其光密度，间接测定抗原的含量。
在实验过程中，我们不能忽视的是标本处理、试剂选用、仪器操作等一系列实验细节，这些都对实验结果的准确性和重复性有着重要的影响。
二、酶联免疫吸附试验的方法不同类型的酶联免疫吸附试验方法包括间接法、夹心法、竞争法和直接法等。
在这次我们重点讨论的是双抗夹心法。
该方法通过将待测抗原与固相酶标记抗体和液相抗体结合，从而提高了对待测抗原的灵敏度和特异性。
这种方法在免疫学研究、传染病诊断和药物检测等方面具有重要的应用价值。
除了双抗夹心法，间接法通过检测待测抗体也是常用的酶联免疫吸附试验方法。
在实验设计中，根据不同的研究目的和样本特性，我们可以选择不同的方法来进行实验设计和操作。
三、酶联免疫吸附试验的应用酶联免疫吸附试验在临床诊断、疫苗研制、传染病监测、生物药品开发等领域有着广泛的应用。
它能够高灵敏、高特异地检测抗原或抗体的存在，为疾病诊断和药物研发提供了重要的技术支持。
在临床诊断中，酶联免疫吸附试验被广泛应用于传染病的早期诊断和鉴定。
HIV抗体检测、甲型肝炎抗原检测等都是通过酶联免疫吸附试验来完成的。
酶联免疫吸附试验还被应用于药物和疫苗的开发和监控过程中，能够全面地评价新药和疫苗的免疫原性和保护效果。
酶联免疫吸附试验极其应用
酶联免疫吸附试验及其应用作者：鲍行豪一、前言近二十几年来，免疫学分析方法发展很快，特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后，使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。
继50年代的免疫荧光（IFA）和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后，在70年代初期又建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术。
由于酶的高效生物催化作用，一个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应，产生了放大作用，使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来，这种技术被称为酶联免疫吸附试验法（Enzyme—Linked Immunosorbent Assay，ELISA），本法自70年代初期由VAN WEEMEN、SCHUARS.ENGVALL及PERLMARN等相继分别报道后，现已引起广泛重视。
ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。
也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。
不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。
本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。
因此ELISA 法在生物医学各领域的应用范围日益扩大，可概括四个方面：1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
2、研究抗酶抗体的合成。
3、显现微量的免疫沉淀反应。
4、定量检测体液中抗原或抗体成份。
二、方法的基本原理和种类ELISA的基本原理有三条：（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
酶联免疫吸附试验
加样
孵育
洗板
结果分 析
比色
显色
三、酶联免疫吸附试验（ELISA）操作流程
▲ 例：饲料中黄曲霉毒素B1的检测：
样品、标 准品以及 试剂准备
加样(标 准品/样 品，酶结 合物）
孵育， 洗板
加入底 物溶液A、
B
粉碎 称量 提取（振荡、离心） 样品稀释，待测
黄曲霉毒素B1酶联免疫试剂盒：冰箱取出，平衡至室温
加入底物 溶液A、B
孵育
加入终 止液
三、酶联免疫吸附试验（ELISA）操作流程
▲ 饲料中黄曲霉毒素B1的检测：
样品、标 准品以及 试剂准备
加样(标 准品/样 品，酶 标试剂）
孵育， 洗板
结果分 析
光密度 （OD）
测量
加入底物 溶液A、B
孵育
加入终止 液
三、酶联免疫吸附试验（ELISA）操作流程
▲ ELISA的比色测定主要由酶标仪进行。此处强调以下几点：
加样(标 准品/样 品，酶 标试剂）
孵育， 洗板
结果分 析
光密度 （OD） 测量
加入底物 溶液A、B
孵育
加入终 止液
三、酶联免疫吸附试验（ELISA）操作流程
▲ 饲料中黄曲霉毒素B1的检测：
样品、标 准品以及 试剂准备
加样(标 准品/样 品，酶 标试剂）
孵育， 洗板
结果分 析
光密度 （OD） 测量
▲ （1）酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，室温宜在15－30℃，使用前先 预热仪器15－30分钟，测读结果更稳定。各种酶标仪性能不同，使用前应 详细阅读说明书。
▲ （2）比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，然后将板正确放入 比色架中，以免锈蚀酶标仪比色架。
酶联免疫吸附反应的技术进展及应用
ELISA的基本原理是利用抗原-抗体反应的特异性，将特异性抗体或抗原固相 化在固体表面上，再与待测样本中的相应抗原或抗体发生特异性结合，加入酶标 记的二抗，最后通过底物显色反应，定量或定性分析待测样本中的抗原或抗体。
随着生物技术的不断发展，ELISA技术也在不断进步。在抗体方面，越来越 多的重组抗体和基因工程抗体被应用于ELISA中，这些抗体的制备过程更加简单， 纯度和特异性更高。在标记技术方面，酶标记物的选择更加多样化，如碱性磷酸 酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶等，以满足不同检测需求。同时，一些新 型的检测系统，如微孔板、磁性颗粒和纳米材料等被引入到ELISA中，使得检测 更加灵敏、快速和自动化。
6、洗涤：清洗，去除未结合的酶标记抗体或抗原。
7、显色：加入底物溶液，酶催化底物生成有色产物，根据颜色深浅判断抗 原或抗体的浓度。
8、终止反应：加入终止液，停止酶催化反应。
9、读数：在酶标仪上读取各孔的光密度值，根据标准曲线计算抗原或抗体 的浓度。
三、ELISA酶联免疫吸附试验原 理
ELISA酶联免疫吸附试验基于抗原抗体反应的特异性。抗原和抗体分别固定 在固相载体和酶标记物上，当两者相遇时，发生特异性结合。通过洗涤步骤去除 未结合的成分，仅留下结合在固相载体上的抗原-抗体复合物。然后加入酶标记 的抗体或抗原，进一步与复合物中的抗原或抗体结合。最后加入底物溶液，酶催 化底物生成有色产物，根据颜色深浅判断抗原或抗体的浓度。
酶联免疫吸附反应的技术进展及应 用
酶联免疫吸附反应（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一 种基于抗原-抗体反应的经典免疫分析方法。在过去的几十年里，ELISA技术取得 了显著的技术进展，使其在生物医学、环境保护、食品检测等领域中的应用越来 越广泛。本次演示将介绍ELISA的技术进展及其在不同领域中的应用情况，并通 过案例分析探讨其优缺点和发展趋势。
elisa在食品检验中的应用
酶标抗原或抗体的质量直接影响到ELISA实验的 灵敏度和特异性，因此制备过程中需要严格控 制条件和纯化步骤，确保产品质量。
03
ELISA在食品检验中的应用
食品中农药残留检测
总结词
ELISA技术广泛应用于食品中农药残留的检测，通过抗体与抗原的特异性结合， 实现对农药残留的灵敏检测。
适用范围广
ELISA方法可以用于检测各种食品中 的有害物质，如蔬菜、水果、肉类、 乳制品等。
局限性
样品处理要求高
ELISA方法对样品处理的要求较高，需要去 除干扰物质，以免影响检测结果。
检测时间较长
ELISA方法的检测时间较长，需要一定的等 待时间才能获得检测结果。
成本较高
ELISA方法的成本较高，需要购买昂贵的试 剂和设备。
ELISA简介
定义
ELISA是酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）的简称，是一种基 于抗原-抗体反应的检测方法。
工作原理
将抗原或抗体与固相载体结合，使待测样本中的目标物质与固相载体上的抗原或抗体结合 ，再加入酶标记的抗体或抗原，最后通过底物显色反应，达到检测目标物质的目的。
03
未来可以通过改进ELISA方法，提高其特异性，减少假阳性或假
阴性的出现。
05
实际应用案例分析
案例一：ELISA在农药残留检测中的应用
总结词
ELISA在农药残留检测中具有高灵敏度和 特异性，能够快速准确地检测出食品中 农药残留量，保障食品安全。
VS
详细描述
ELISA技术利用抗原与抗体的特异性结合 ，通过酶标记物对信号的放大作用，实现 对食品中农药残留的定量或定性检测。该 方法具有操作简便、灵敏度高、特异性好 等优点，可广泛应用于蔬菜、水果、粮食 等农产品中农药残留的检测。
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酶联免疫吸附试验及其应用作者：鲍行豪一、前言近二十几年来，免疫学分析方法发展很快，特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后，使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。
继50年代的免疫荧光（IFA）和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后，在70年代初期又建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术。
由于酶的高效生物催化作用，一个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应，产生了放大作用，使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来，这种技术被称为酶联免疫吸附试验法（Enzyme—Linked Immunosorbent Assay，ELISA），本法自70年代初期由VAN WEEMEN、SCHUARS.ENGVALL及PERLMARN等相继分别报道后，现已引起广泛重视。
ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。
也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。
不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。
本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。
因此ELISA 法在生物医学各领域的应用范围日益扩大，可概括四个方面：1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
2、研究抗酶抗体的合成。
3、显现微量的免疫沉淀反应。
4、定量检测体液中抗原或抗体成份。
二、方法的基本原理和种类ELISA的基本原理有三条：（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
由于ELISA法一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上，因而，具有特异性。
而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物，它可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。
因此，ELISA法是一种既敏感又特异的方法。
常用的ELISA有以下两个方面。
(一)测定抗原的，主要有四种方法。
1、竞争法（Competition method）:方法的基本原理可见图1：本法首先将特异性抗体吸附于固相载体表面，我们把抗原和抗体吸附到固相载体表面的这个过程，称为包被（Coated），也可叫做致敏。
经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液，而另一组只加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差，即为我们所要测定的未知抗原的量。
这种方法所测定的抗原只要有一个结合部位即可，因此，对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。
该法的优点是快，因为只有一个保温洗涤过程。
但需用较多量的酶标记抗原为其缺点。
图1：竟争法测抗原示意图2、双抗体夹心法方法的基本原理可用图2来表示图2.双抗体夹心法测抗原示意图本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。
这种方法欲测的抗原必须有两个可以与抗体结合的部位，因为其一端要包被于固相载体上的抗体作用，而另一端则要与酶标记特异性抗体作用。
因此，不能用于分子量小于5000的半抗原之类的抗原测定。
我们用在霍乱肠毒素的测定。
HbSAg及HbS的测定。
3、改良双抗体夹心法：本法是双抗体夹心法的一种改良形式，也是用于测定抗原的，其原理可用图3来表示。
图3.改良双抗体夹心法测抗原示意图本法首先是将特异性抗体a包被于固相载体，经洗涤加入含有欲测抗原之待检样品。
经孵育洗涤后再加一次未标记的特异性抗体b，而这次加入的抗体b于第一次包被于固相载体上的特异性抗体a对被测抗原来说都是特异性的，但不是用同种动物免疫制备的，否则可出现非特异性反应。
经孵育洗涤后，再加酶标记抗b抗体，再经孵育洗涤后加底物显色进行测定。
这种方法与双抗体夹心法不同之处是多加了一层抗体。
因此，放大的倍数更高，故比双抗体夹心法更加灵敏。
同时避免标记特异性抗体，而另一优点是只要标记一种抗抗体，即可达到多种应用。
用于测定抗原的尚有第4种叫做抑制性测定法（见图4），它是先用抗原包被固相载体，然后分为二组，一组加入用参考抗体和被检标本混合孵育后的混合溶液，假如标本中不含抗原，则参考抗体未被结合。
因此它可以和包被于固相载体上的抗原结合。
如标本中含有抗原，则抗原先与参考抗体结合，故参考抗体不再与包被于固相载体上的抗原结合。
对加入酶结合物（抗球蛋白）和底物仅显示剩余结合的抗体量。
再与另一组不加待检标本的参考系统比较，被检标本对底物显色的抑制程度与标本中所含抗原量成比例，二者之差，即为欲测抗原的量。
图4.抑制性测定法的原理被检标本对底物显色的抑制程度与标本中所含抗原的量成比例，二者之差即为欲测抗原的量。
(二)测定抗体方面：所用的方法称为间接法，也是目前最常用的方法，其原理可用图5来表示。
图5.间接法测抗体示意图间接法首先用抗原包被于固相载体，这些包被的抗原必须是可溶性的，或者至少是极微小的颗粒，经洗涤，加入含有被测抗体之标本，再经孵育洗涤后，加入酶标记抗抗体，(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM)，再经孵育洗涤后，加底物显色,底物降解的量，即为欲测抗体的量，其结果可用目测或用分光光度计定量测定，本法用不同种抗原包被固相载体后，只要用一种酶标记抗人球蛋白，即可作多种人的传染病、寄生虫病以及其他疾病的血清学诊断。
如用酶标记抗人IgM,则可用于早期诊断。
三、ELISA的影响因素这是ELISA检测中的重要部分，可从9个方面加以说明。
（一）固相载体：可溶性抗原或抗体吸附于固相载体而成为不溶形式，这是进行酶标记测定的基本条件。
许多物质可作为固相载体，如纤维素、交联右旋糖苷、琼脂糖珠、聚丙烯、聚苯乙烯、聚乙烯及聚氯乙烯等等。
但在ELISA中最常用的是聚苯乙烯或聚氯乙烯微量反应板及塑料管。
由于微量反应板所用试剂量少，操作方便，适合于大规模应用。
国产聚苯乙烯微量反应板（上海塑料三厂出品）目前已大量应用于ELISA测定，并且获得了满意的结果。
但每批微量反应板对抗原或抗体蛋白质的吸附性能是有显著差别的。
实验证明，吸附效果似乎与塑料的类型及其表面性质有关。
特别是塑料制品在加工过程中因工艺不同或受其他因素的影响而造成吸附性能的极大差异，甚至完全丧失吸附能力。
因此，对每批制品在使用前，必须经过实验室鉴定，鉴定的方法和标准是对每批购置的微量反应板或塑料管抽样，用0.2ug/ml纯化的正常人IgG进行包被，经洗涤后加酶标记抗人球蛋白进行反应，再经孵育洗涤，加底物显色终止反应后，逐孔在酶标比色计中测定其消光值、光密度（O.D值）。
一般认为全板中每两孔间O.D值的误差不超过10%为合格。
如果中间孔与四周孔O.D值相差太大，或者反应板的这一边与另一边凹孔的O.D值相差大，均不合格。
此外，还要检查阳性和阴性参考血清O.D值是否有明显差别。
一般要求有10倍左右的差异为合格，微量反应板或塑料管在使用前并不一定通过特殊处理。
用蒸馏水冲洗即可应用。
（二）抗原：在ELISA中，包被于固相载体表面的抗原或抗体的来源和制备方法对试验结果都有影响。
包被所用的抗原必须是可溶性的，而且要求是优质和稳定的制剂，纯度和免疫原性要高。
如果不纯，由于抗原中所含杂质就会竞争固相载体上的有限位置，降低敏感性和特异性。
此外还应考虑到制备包被抗原不应破坏其免疫学活性。
经试验证明，适用于其他血清学试验的抗原并非均适合用于ELISA法。
因此，对某一疾病的诊断，必须通过实践，才能选出适用的优质抗原。
对大多数传染病和寄生虫病的血清学诊断中所用的抗原并非要求十分严格，一般能用于补体结合试验的可溶性抗原均可用于ELISA，例如超声波抗原、冻融抗原、细菌的外膜抗原、脂多糖（LPS）、细菌的外毒素以及用表面活性剂(如SDS)所提取的抗原等，在作ELISA时，必须要有1-2种试剂、要求纯化，但用表面活性剂提取的抗原在包被前必须透析除去表面活性剂，否则就不易吸附到固相载体上去。
此外，对某些抗原必须进行提纯，如病毒的组织培养和鸡胚培养物以及病毒接种动物的脏器等，它们当中存在着许多非抗原的蛋白质，必须设法除去，常用梯度超速离心或亲和层析法提纯，不经提纯是不能使用的。
在用特异性抗体包被固相载体时也要提纯。
用抗原或抗体蛋白包被固相载体时选择的浓度要适当。
如浓度太高，则低效价抗体可能测不出来，或包被过量形成多层抗原吸附，故在操作过程中可能脱落从而降低敏感性和可重复性。
用最适稀释度抗原，包被固相载体不仅经济，而且可以克服前带现象。
那么用多大浓度抗原进行包被最为合适呢？可通过棋盘滴定法进行测定，但用单项滴定法更为简便，其方法是将抗原进行一系列稀释包被微量反应板，再用一定稀释度的阳性参考血清和阴性参考血清进行孵育后洗涤，再加酶结合物进行反应，经孵育洗涤后，加底物溶液显色，终止反应后分别测定O.D值，选择O.D值≥1.0的那个抗原稀释度为最适包被浓度。
一般总是要选择那个O.D值稍大于1.0，而不选择小于1.0的抗原浓度。
阴性参考血清O.D值要求<0.1-0.2。
也就是要求阳性参考血清和阴性参考血清的O.D值有明显差别。
抗原包被固相载体除浓度外，对时间、温度、PH均有关系。
温度高（如37℃、45℃、或56℃），包被时间可缩短，温度低可延长包被时间。
但为了方便起见，通常采用4℃包被过夜，可使抗原吸附得更加完全且均匀。
在用聚苯乙烯或聚乙烯微量反应板或塑料管作固相载体时，在碱性条件下（如0.1mol/L、PH9.6碳酸盐缓冲液稀释抗原）4℃包被过夜较为合适。
但在某些试验中，如用LPS或毒素蛋白包被时，用PH 7.2-7.4 PBS稀释才是满意的。
包被特异蛋白质的浓度为1-10ug/ml，而对某些病原微生物抗原以5-20ug/ml较为合适，但均应通过滴定。
（三）试验样品：血清、血浆或其他体液，均可作为ELISA的试验样品（标本）。
但应注意分离血清时，血液要求放置室温中凝固收缩，不宜置冰箱（4℃）中凝固，否则会使大部分IgM和少量IgG丧失活性。
关于人血清在保存过程中抗体的稳定性报导尚不多。