芦丁和槲皮素的化学检识(课堂PPT)

30-40 50-65 0
B环有邻二酚羟基 A,B环皆有邻二酚羟基 A,B环皆无邻二酚羟基
实验原理
• 芦丁提取物含量的测定： • 在黄酮类化合物的紫外光谱图上主要有两个吸收带:
环肉桂酰系统引起的吸收带1 ( 300 ) 550nm)和环苯 酰系统引起的吸收带2 ( 240 ) 280nm) 。若加入铝 盐, 则铝离子与黄酮化合物形成稳定的配合物,带2 会明显向长波方向移动( 红移) ; 在NaNO2 的强碱 性溶液中, 其在500nm左右吸光度值最大, 从而为分 光光度法测定提供了可靠的依据
（3）
H O
O
O H O
O H
H O
O
O H
A lC l3
OO A l3+
O A l3+
O H O
O
H Cl/H 2O
OO A l3+
O H O H
形成络合物的能力：
黄酮醇3-OH >黄酮5-OH（二氢黄酮5-OH）> 邻二酚羟基 > 二氢黄酮醇5-OH 邻二酚羟基和二氢黄酮醇5-OH在酸性条件下不与AlCl3络合 ； 但不在酸性条件下，五者皆与Al3+络合； 形成络合物越稳定，红移越多。
带 I ， II 随 加 NaOMe 时
间延长，逐渐衰减
5-20
320-330nm 有吸收，成 苷后消失
在长波一侧 有明显的肩 峰
两峰强度基本相同，具体位置 与母核上电负性取代基(-OH, O多C，H越3)长有移关 ， -OH, -OCH3 越
有4’-OH，无3-OH 有3-OH，无4’- OH 有3,4’-OH或3,3’,4’-OH（衰减 更快） 7-OH
芦丁的鉴别及含量测定
小组成员：陈丽、陈惠渝、 黄雄、李钰川
实验目的
• 熟悉黄酮类化合物的化学检识的常用方法 • 掌握芦丁紫外吸收光谱测定的方法与原理 • 学习用紫外分光光度法测定芦丁提取物的含量
实验原理
芦丁和槲皮素的化学检识
1.对不同强度碱液的溶解度试验 2.浓硫酸和浓盐酸反应 3.Molish反应 4.盐酸-镁粉试验 5.FeCl3反应
7
O
R O
苯甲酰基
4'
7
O
R O
4'
O
O
桂皮酰基
黄酮类化合物结构中的交叉共轭
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱的测定
多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成： 带I在300-400nm区间，由B环桂皮酰系统的电子跃 迁引起。
O B
O B
O
O
实验原理
• 带II在240-285nm区间，由A环苯甲酰系统的电子跃 迁所引起。
实验原理
• 浓硫酸和浓盐酸反应：
γ-吡喃环上的1-氧原子，因有未共用的电子对，故 表现微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸 等生成盐，但生成的盐极不稳定，加水后即可分解。 另外，黄酮类化合物溶于浓硫酸中常常表现出特殊 的颜色，可用于鉴别。
实验原理
• Molish反应：
糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍 生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓 硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫环反应。 Molish反应可以鉴定单糖的存在。
影响不大 查耳酮2’-OH 使带I红移的
影响最大
加入诊断试剂后引起的位移及结构测定
加入试剂
带II
带I
说明
样品+甲醇 （黄酮类及 黄酮醇类）
+NaOMe
+NaOAc (未熔融)
250-285 304-385
A环有OH ， 红 移小， 无意义
40-60nm （不变或 增强） 50-60nm （下降）
（4） 根据只加AlCl3和加入AlCl3及盐酸的紫外 光谱吸收峰位相减的结果，可以判断邻二酚羟
基的取代情况。
带II(240285nm)（苯 甲酰系统）
250-285
245-270 270-295
220-270
带I(300400nm) 桂皮酰系统 304-350
328-357
352-385
300-400
6.AlC碱液的溶解度试验：
黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性， 可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺 中。由于酚羟基的数目及位置不同，酸性强弱也不 同。以黄酮为例，其酚羟基酸性强弱顺序依次为： 7,4‘-二OH>7-或4’-OH>一般酚OH>5-OH>3-OH 因此，酚羟基的数目及位置不同的黄酮类化合物酸 性不同，在不同强度碱液中的溶解度也不同。
340-390 或340-390(Ia)
300-320(Ib)
370-430(3-4 个小峰)
类型 黄酮类
黄酮醇类 (3-OR)
黄酮醇类 (3-OH) 异黄酮类 二氢黄酮 （醇） 查耳酮类
橙酮类
说明
-OH越多，带 I带II越红移
B环3’,4’有OH基，带II 为双峰（主 峰伴肩峰）
B环上有-OH, OCH3对带I
实验原理
• 盐酸-镁粉试验：
盐酸-镁粉反应的机制过去解释为由于生 成了花色苷元所致，现在认为是因为生成 了阳碳离子的缘故。
• FeCl3及AlCl3反应：
黄酮类化合物分子中常含有下列结构单元， 故常可与铝盐、铅盐、锆盐、镁盐等试剂 反应，生成有色络合物。
OH
O
O
OH
OH
OH
O
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱的测定：
7-OH
+NaOAc (熔融)
40~65 有4’-OH
+NaOAc/ 5- 12-30 有6,7-OH或7,8-OH (5,6-OH无)
H3BO3
10
B环有邻二酚羟基
AlCl3/ HCl
AlCl3 光 谱 AlCl3/ HCl光谱
60 50-60 35-55 17-20 0
有3-OH 有3,5-二OH 有5-OH，无3-OH 有6-OR 无3-OH, 5-OH
• 注意：用NaNO2 - Al(NO3 ) 3 - NaOH 体系分光光 度法测定总黄酮含量时, 必须严格保证稀释定容用乙 醇的浓度、试剂加入时间、显色时间等测试环节前 后完全一致, 否则会出现很大误差。
实验试剂及仪器
O
A
O
O
A
O
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱的测定：
7
O
R O
苯甲酰基
4'
7
O
R O
4'
O
O
桂皮酰基
黄酮类化合物结构中的交叉共轭
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱测定
说明： （1）+NaOMe或NaOAc, OHONa，变为离子化合物，
共轭系统中的电子云密度增加，红移 另 有 3,4’-OH 或 3,3’,4’-OH 时 ， 在 NaOMe 作 用 下 易氧化破坏，故峰有衰减。 （2）NaOAc为弱碱，仅使酸性较强者，如7,4’-OH解 离。